本发明属于农业生物防治与微生物肥料
技术领域：
，具体涉及一种防治小麦全蚀病的复合微生物菌肥及其制备方法。
背景技术：
：小麦全蚀病是由子囊菌亚门顶囊壳属禾顶囊壳侵染引起的一种土传性、毁灭性病害，给人类带来严重的损失。该病在小麦整个生育期均可感病。幼苗期时发病后小麦苗株初生根部和地中茎部变为黑褐色，次生根上有许多病斑，严重时病斑连在一起，导致整个根系变黑死亡，发病较轻时表现为植株矮小，地上部叶色发黄，易于从根茎部易折断。分粟期地上部分无明显症状，只有重病植株表现为稍矮于正常植株，病株基部黄叶多，但拔除麦苗后用水冲洗干净麦根后，可以看见种子根与地下茎都变为黑褐色。拔节期时冬麦病苗返青迟缓、分粟较少，病株的根部大部分变黑，且在茎基部及叶鞘内侧出现了较明显的灰黑色菌丝层。抽穗后田间病株成簇或点片状发生早枯、白穗，病根变黑，且易于拔起。当环境潮湿时，在茎部表面及节叶鞘内侧会形成肉眼可见的黑褐色菌丝层称为“黑脚”，这是小麦全蚀病区别于其他根腐型病害的典型症状。当环境干燥时，该症状不出现。该病一旦发生，蔓延速度很快，一块地从零星发生到成片死亡只需3周，危害严重。发病地块轻者减产1-2成，重者减产5成以上，乃至绝收。目前，由于生产上尚缺乏小麦全蚀病的抗病品种，主要采用轮作、化学防治等措施进行病害防治。但轮作在小麦大面积种植地区受到了限制，且防治效果不稳定，而化学防治存在防治效果不理想、防治成本高、易造成环境污染等弊端，因此，生物防治受到人们的广泛关注。文才艺等在专利号2011103527817中公开了一种小麦全蚀病生防链霉菌及其发酵工艺，该微生物能产生一种广谱抗菌的代谢产物，对多种植物病原真菌具有抑制活性，可有效防治植物土传真菌病害，为符合环保的生防制剂。黄丽丽在专利号2009100211177中公开了一株芽抱杆菌((Bacillussp.)EDR4，该菌株于2007年8月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.2133;公开了该菌株的和及其所产生的抗菌活性物质在防治小麦全蚀病、促进小麦生长中的应用。由于病原菌的多样性和同步进化特性，现有的单一拮抗菌株由于其作用方式单一、防治效果不稳定、生产和使用也无法达到很理想的防治效果，因此，生防菌的很多生物功能需要依靠两株或两株以上的细菌间的协同作用，才能发挥出更好的作用。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供一种防治小麦全蚀病的复合微生物菌肥；该复合微生物菌肥的原料配比为：小串链霉菌菌粉20-40份，白长链霉菌菌粉10-30份，弯曲芽孢杆菌菌粉20-40份，阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉10-30份，短密木霉菌粉20-40份。在所述微生物菌肥中，小串链霉菌，白长链霉菌，弯曲芽孢杆菌，阿耶波多氏芽孢杆菌，短密木霉，五种菌是从500多株微生物菌株中筛选得到的能共生共存，能产生多种抗菌素如高霉素，新霉素E，小串菌素和二巴龙霉素等来抑制小麦全蚀病病原菌，有特别强大的效果；本发明的菌种能够全面的利用微生物种间或种内的抗生、竞争、重寄生、溶菌作用，或者通过次级代谢产物诱导小麦产生抗病性，增强其防病效果；再次，本发明中所使用的这5株菌株都是可从土壤中直接分离得到，具有固氮与根迹促生作用，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时，并定向植物根际分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长起到肥料的效果；本发明复合微生物菌肥对人、畜安全，属于环境友好型，利用本发明方法防治小麦全蚀病不易产生抗药性，本发明制备方法稳定、成本低、使用简单。本发明的第二目的在于提供一种防治小麦全蚀病的复合微生物菌肥的制备方法，该方法步骤简单，确保微生物菌肥的药肥效果突出。为了达到上述目的，该防治小麦全蚀病的复合微生物菌肥的制备方法，包括以下步骤：步骤一，小串链霉菌菌粉的制备取出小串链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为小串链霉菌种子液；二级种子扩培：将上述制备的小串链霉菌种子液以1%的接种量接种至灭菌的小串链霉菌液体二级种子培养基上，500L的发酵罐装液量为350L，通气量为每分钟液气比为1：0.8，28-30℃培养36-48小时，待菌体含量达到80g/L时，即可作为小串链霉菌二级种子液；发酵：将上述制备的小串链霉菌二级种子液以20%的接种量接种至灭菌的小串链霉菌固体发酵培养基上，菌种与小串链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的小串链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵3-5天，检测其孢子含量不低于40亿CFU/g，即可低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到小串链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的小串链霉菌二级液体种子培养基：棉粕粉2%，木薯粉2%，氯化钠0.2%，碳酸钙1%，硫酸镁0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的小串链霉菌固体发酵培养基：啤酒糟80%，棉粕2%，木薯粉1%，石粉9%，麸皮8%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤二，白长链霉菌菌粉的制备取出白长链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为白长链霉菌种子液；二级种子扩培：将上述制备的白长链霉菌种子液以2%的接种量接种至灭菌的白长链霉菌液体二级种子培养基上，500L的发酵罐装液量为350L，通气量为每分钟液气比为1：0.8，28-30℃培养36-48小时，待菌体含量达到60g/L时，即可作为白长链霉菌二级种子液；发酵：将上述制备的白长链霉菌二级种子液以20%的接种量接种至灭菌的白长链霉菌固体发酵培养基上，菌种与白长链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的白长链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵3-5天，检测其孢子含量不低于50亿CFU/g，即可低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到白长链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的白长链霉菌二级液体种子培养基：豆粕粉2%，玉米粉2%，氯化钠0.2%，碳酸钙1%，硫酸镁0.1%，磷酸氢二钾0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的白长链霉菌固体发酵培养基：甘蔗渣80%，豆粕2%，玉米粉1%，石粉9%，粗玉米皮8%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤三，弯曲芽孢杆菌菌粉的制备取出弯曲芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L弯曲芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min，24小时后通气量为300L/min，30℃培养32-48小时，待总菌数含量不低于25亿cfu/ml，即可作为弯曲芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的弯曲芽孢杆菌种子液以10%-20%的比例接种至弯曲芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于60亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到弯曲芽孢杆菌菌粉；其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；其中，所述弯曲芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10g/L，棉粕粉40g/L，硫酸镁0.4g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，碳酸钙10g/L，pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；弯曲芽孢杆菌固体培养基：甘蔗渣57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤四，阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉的制备取出阿耶波多氏芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前10小时通气量为200L/min，10小时后通气量为320L/min，30℃培养16-24小时，待总菌含量不低于30亿cfu/ml，即可作为阿耶波多氏芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的阿耶波多氏芽孢杆菌种子液以总接种量的10%-20%的接种量加至阿耶波多氏芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于80亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉；其中，所述所述营养肉汤固体培养基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述液体种子培养基：糖蜜35g/L，豆粕粉20g/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，碳酸钙5.0g/L，pH7.0；其中，阿耶波多氏芽孢杆菌固体发酵培养基：麸皮60%，DDGS32%，棉粕5%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤五，短密木霉菌粉的制备短密木霉种子液的制备：取出短密木霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养6天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养4-6天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为短密木霉种子液；发酵：将上述制备的短密木霉种子液以2%的接种量接种至灭菌的短密木霉固体发酵培养基上，菌种与短密木霉固体培养基混合均匀后，将接好种的短密木霉固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，湿度保持为60%-75%，发酵4-6天，检测其总孢子含量不低于40亿CFU/g，即可低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到短密木霉菌粉；其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；其中，所述的短密木霉固体发酵培养基：甘蔗渣85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤六、将上述步骤中的小串链霉菌菌粉20-40份，白长链霉菌菌粉10-30份，弯曲芽孢杆菌菌粉20-40份，阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉10-30份，短密木霉菌粉20-40份混匀，包装即为复合微生物菌肥。其中，该复合微生物菌肥在防治小麦全蚀病的方法为浇根，浇根的使用方法为：将复合微生物菌粉稀释100-200倍，每亩小麦浇根复合微生物菌粉的用量为2-5kg；其中，该复合微生物菌肥在防治小麦全蚀病的方法为底施：在翻地之前均匀施入本复合微生物菌肥5-10kg/亩。链霉菌是产生抗生素的主要微生物来源。链霉菌的抗生作用体现在次级代谢产物即抗生素对病原菌直接的抑制和致死作用。抗生素对病原菌细胞和大分子物质合成的影响表现在抑制蛋白质、核酸和质膜的合成，或者干扰病原菌的代谢系统，从而抑制其生长。对于抗生素作用于蛋白质合成系统的研究较多，本发明中的小串链霉菌与白长链霉菌，能产生高霉素，新霉素E，小串菌素和二巴龙霉素等抗菌素，对小麦全蚀病病原菌有特别强大的抑制效果。芽孢杆菌是一种较理想的生物肥料添加菌株，具有抗逆性强、营养简单、繁殖速度快，有效活菌数量高、性能稳定，储存期长等优势而成为近年来的研究热点。此外，多数菌种具有防病、促生、解磷、解钾、固氮作用，对于发展生态农业，具有重要的现实意义。本发明中含有的弯曲芽孢杆菌与阿耶波多氏芽孢杆菌，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时必定向植物根际分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长和抑制病菌等综合功能。阿耶波多氏芽孢杆菌能够防治植物病害源于其能够产生多种抗菌物质,包括脂肽类、肽类、磷脂类、多烯类、氨基酸类和核酸类等多种化合物,这些抗菌物质能抑制真菌、细菌、病毒和菌原体等的正常生长。阿耶波多氏芽孢杆菌在自然生长和发酵培养后期产生的脂肽类抗生素是其最重要的抗菌物质。脂肽类抗生素包括伊枯草菌素(iturins)、泛革素(fengycins)和表面活性素(surfactin),其中伊枯草菌素和泛革素具有很强的抗真菌活性，而表面活性素对病毒、肿瘤、支原体都有很高的抑制活性。长期以来，根瘤菌和自生固氮菌等虽具有较强的固氮能力，但抗逆性低，不耐贮存，不利于我国生物固氮菌肥的商品化和推广使用。自1958年Hin首次在口本分离得到一株具有高固氮活性的芽抱杆菌后，土壤中新发现的具有固氮作用的芽抱杆菌越来越多。具有固氮作用的芽孢杆菌添加到生物肥料中，可使生物肥料耐酸、耐盐、耐高温和耐高压，为生物固氮肥料的研发、推广和应用将起着重要作用。目前国际上认为需氧芽抱杆菌的固氮能力较高为固氮芽孢杆菌，本发明中的弯曲芽孢杆菌具有较强的固氮作用，并且具有明显的根迹促生作用。本发明中含有短密木霉，短密木霉在重寄生过程中产生立了一系列病原菌菌丝细胞壁的水解酶。木霉菌在侵入或穿透寄主菌丝细胞时，产生了几丁质酶(chitinases)、葡聚糖酶、纤维素酶(cellulases)、木聚糖酶(xylanaes)以及蛋白酶((proteinases)、脂酶等一系列水解酶类，来消解病原菌的细胞壁。它们大都由多糖和真菌细胞壁诱导，并受代谢降解物，如高浓度葡萄糖的阻遏。在这些细胞壁降解酶中，几丁质酶和葡聚糖酶被公认为是影响生防真菌重寄生能力的重要因子，并具有协同作用。几丁质酶包括内切酶和外切酶两类，其中外切酶为N一乙酰-氨基葡萄糖普酶(N-acetylglucosaminidase)和几丁二糖酶(chitobiosidase)。这两类酶对植物病原真菌的细胞壁有强烈的水解作用，从而抑制病原菌孢子萌发并引起菌丝以及抱子的消解，而且这两类酶之问具有协同作用，同时也具有与杀菌剂及细菌等生防因子协同作用的功效。许多木霉菌株产生挥发性或非挥发性的抗菌素类物质，如木霉素(trichoderlnin)、胶霉素(gliotoxin)、绿木霉素(viridin)、抗菌肤((peptideantibiotic)等。毛簇木霉可产生的多种抗生物质，这些物质包括抗生素和一些酶类。这些抗生物质的化学性质各不相同，包括了戊酮、辛酮、类菇、多肤和氨基酸衍生物等几大类。这些代谢物可以破坏菌丝细胞壁，使细胞内物质外渗，引起立枯丝核菌菌丝的原生质凝聚，菌丝断裂解体，对病原菌菌落有不同程度的抑制作用，由于抗生物质的种类，化学性质以及作用方式的差异，病原菌往往难以发展抗药性。本发明的有益效果：本发明中的小串链霉菌，白长链霉菌，弯曲芽孢杆菌，阿耶波多氏芽孢杆菌，短密木霉，五种菌是从500多株微生物菌株中筛选得到的能共生共存，能在植株的根，茎，叶以及土壤中能够生长繁殖，能产生多种抗菌素如高霉素，新霉素E，小串菌素和二巴龙霉素等来抑制小麦全蚀病病原菌，有特别强大的效果；本发明的菌种能够全面的利用微生物种间或种内的抗生、竞争、重寄生、溶菌作用，或者通过次级代谢产物诱导小麦产生抗病性，增强其防病效果；再次，本发明中所使用的这5株菌株都是可从土壤中直接分离得到，具有固氮与根迹促生作用，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时，并定向植物根际分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长起到肥料的效果；本发明复合微生物菌肥对人、畜安全，属于环境友好型，利用本发明方法防治小麦全蚀病不易产生抗药性，本发明制备方法稳定、成本低、使用简单。具体实施方式实施例1一种防治小麦全蚀病的复合微生物菌肥，该微生物菌肥的原料配比为：小串链霉菌菌粉30份，白长链霉菌菌粉20份，弯曲芽孢杆菌菌粉30份，阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉20份，短密木霉菌粉30份。为了达到上述目的，一种防治小麦全蚀病的复合微生物菌肥的制备方法，包括以下步骤：步骤一，小串链霉菌菌粉的制备取出小串链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为小串链霉菌种子液；二级种子扩培：将上述制备的小串链霉菌种子液以1%的接种量接种至灭菌的小串链霉菌液体二级种子培养基上，500L的发酵罐装液量为350L，通气量为每分钟液气比为1：0.8，28-30℃培养38小时，检测菌体含量为82g/L时，即作为小串链霉菌二级种子液；发酵：将上述制备的小串链霉菌二级种子液以20%的接种量接种至灭菌的小串链霉菌固体发酵培养基上，菌种与小串链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的小串链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵4天，检测其孢子含量为45亿CFU/g，低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到小串链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的小串链霉菌二级液体种子培养基：棉粕粉2%，木薯粉2%，氯化钠0.2%，碳酸钙1%，硫酸镁0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的小串链霉菌固体发酵培养基：啤酒糟80%，棉粕2%，木薯粉1%，石粉9%，麸皮8%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤二，白长链霉菌菌粉的制备取出白长链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为白长链霉菌种子液；二级种子扩培：将上述制备的白长链霉菌种子液以2%的接种量接种至灭菌的白长链霉菌液体二级种子培养基上，500L的发酵罐装液量为350L，通气量为每分钟液气比为1：0.8，28-30℃培养42小时，检测其菌体含量为62g/L时，即可作为白长链霉菌二级种子液；发酵：将上述制备的白长链霉菌二级种子液以20%的接种量接种至灭菌的白长链霉菌固体发酵培养基上，菌种与白长链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的白长链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵5天，检测其孢子含量为54亿CFU/g，低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到白长链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0﹒5克，氯化钠：0﹒5克，硫酸亚铁：0﹒01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的白长链霉菌二级液体种子培养基：豆粕粉2%，玉米粉2%，氯化钠0.2%，碳酸钙1%，硫酸镁0.1%，磷酸氢二钾0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的白长链霉菌固体发酵培养基：甘蔗渣80%，豆粕2%，玉米粉1%，石粉9%，粗玉米皮8%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤三，弯曲芽孢杆菌菌粉的制备取出弯曲芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L弯曲芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min，24小时后通气量为300L/min，30℃培养36小时，检测其总菌数含量为28亿cfu/ml，即作为弯曲芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的弯曲芽孢杆菌种子液以10%-20%的比例接种至弯曲芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵41小时，检测其芽孢含量为66亿cfu/g，晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到弯曲芽孢杆菌菌粉；其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；其中，所述弯曲芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10g/L，棉粕粉40g/L，硫酸镁0.4g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，碳酸钙10g/L，pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；弯曲芽孢杆菌固体培养基：甘蔗渣57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤四，阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉的制备取出阿耶波多氏芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前10小时通气量为200L/min，10小时后通气量为320L/min，30℃培养20小时，检测总菌含量为31亿cfu/ml，即作为阿耶波多氏芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的阿耶波多氏芽孢杆菌种子液以总接种量的10%-20%的接种量加至阿耶波多氏芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵46小时，检测芽孢含量为88亿cfu/g，晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉；其中，所述所述营养肉汤固体培养基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述液体种子培养基：糖蜜35g/L，豆粕粉20g/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，碳酸钙5.0g/L，pH7.0；其中，阿耶波多氏芽孢杆菌固体发酵培养基：麸皮60%，DDGS32%，棉粕5%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤五，短密木霉菌粉的制备短密木霉种子液的制备：取出短密木霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养6天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养4-6天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为短密木霉种子液；发酵：将上述制备的短密木霉种子液以2%的接种量接种至灭菌的短密木霉固体发酵培养基上，菌种与短密木霉固体培养基混合均匀后，将接好种的短密木霉固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-10cm，控温28-32℃，湿度保持为60%-75%，发酵5天，检测其总孢子含量为45亿CFU/g，低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到短密木霉菌粉；其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；其中，所述的短密木霉固体发酵培养基：甘蔗渣85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤六、将上述步骤中的小串链霉菌菌粉30份，白长链霉菌菌粉20份，弯曲芽孢杆菌菌粉30份，阿耶波多氏芽孢杆菌菌粉20份，短密木霉菌粉30份混匀，包装即为复合微生物菌肥。实施例2实施例1制备的复合微生物菌肥防治小麦全蚀病的田间小区试验采用随机区组分析，3个重复，每个小区面积为2m2，种5行，每行播种2.5g种子；试验组一：每m2接25g小麦全蚀病菌接种体，同时浇灌复合微生物菌肥的200倍稀释液1000mL；试验组二：不接种病原菌，只浇灌复合微生物菌肥；发病对照组：只接种全蚀病菌，不浇灌复合微生物菌肥；健康对照组：不接种病原菌，也不浇灌复合微生物菌肥。分别在小麦苗期、拔节期和乳熟期，调查发病株数，计算发病率和防治效果。同时在小麦乳熟期，调查穗数、穗粒数、白穗数、计算产量、千粒重等。试验结果：在小麦播种后l0d对试验小区麦田的出苗情况进行了调查，结果发现，没有接种全蚀病菌的健康对照组和接种过复合微生物菌肥的试验组一与试验组二，出苗都很好，麦苗生长健壮，叶色较绿，接种全蚀病菌的发病对照组出苗比健康对照稀疏，叶色有的发黄。在小麦拔节期对植株的生长情况进行调查发现，没有接种全蚀病菌的健康对照组和只接种复合微生物菌肥的试验组二明显比接种全蚀病菌的发病对照组和试验组一长势好，植株健壮。只接种菌肥的试验组二比健康对照明显高一些。试验组一的小区发病率较发病对照要小得多，其中浇灌复合微生物菌肥的试验组一防治效果达到83.16%表1复合微生物菌肥在小麦拔节期对植株的影响处理株高（cm）发病率（%）病情指数（kg）防治效果率（%）发病对照组66.3488.3446.98试验组一75.8923.567.9183.16健康对照组71.1445.7815.45试验组二77.865.762.6584.49从表2中可以看出复合微生物菌肥在小麦乳熟期对植株的株高、平均穗粒数、千粒重和产量都有不同的影响。试验组一与发病对照相比，平均株高、平均穗粒数、千粒重和产量都有不同程度的增加，产量也有明显的增产，增产达到了19.73%；只接种复合微生物菌肥的试验组二和健康对照组相比，小麦乳熟期对植株的株高、平均穗粒数、千粒重和产量都有明显增加，增产率也达到了15.02%，效果相当显著。表2复合微生物菌肥在小麦乳熟期对植株的影响处理株高（cm）平均穗粒数千粒重(g)产量(g)增产率（%）发病对照组66.8433.732.21128.9试验组一76.2139.634.51351.619.73健康对照组71.6239.433.91301.3试验组二77.9940.535.21496.715.02当前第1页1 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