本发明涉及微生物技术领域，更具体地，涉及一种产γ-氨基丁酸的戊糖乳杆菌。
背景技术：
γ-氨基丁酸（GABA）有许多重要的生理功能，如抗焦虑、降血压、降血糖、改善睡眠、修复皮肤（抑制炎症，刺激表皮细胞再生）、调节激素等。现阶段随着对GABA生理和药理功能的不断研究和开发，已经作为一种新型的功能性因子应用于食品和药品等行业中。
在早期，富集生产γ-氨基丁酸主要以化学合成、植物富集和通过大肠杆菌发酵为主，但存在着安全性差，成本高，环境污染严重，富集含量低和食用安全性等问题，所以寻找可利用的食用级安全性菌株在微生物法富集γ-氨基丁酸方面具有潜在的意义和价值。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种产γ-氨基丁酸的戊糖乳杆菌。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：
一种产γ-氨基丁酸的戊糖乳杆菌SS6，所述戊糖乳杆菌SS6保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址是广东省微生物研究所（广州市先烈中路中路100号大院59号楼5楼），保藏日期为2016年10月13日，保藏编号为GDMCC No：60086。
本发明戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）SS6的16s rDNA的序列如SEQ ID NO：1所示，通过16S rDNA序列比对分析，与序列号为JN415155.1的戊糖乳杆菌PIS23菌株的16S rDNA序列的同源性最高，相似性为99%，通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定戊糖乳杆菌SS6属于乳杆菌属（Lactobacillus），为戊糖乳杆菌亚种（Lactobacillus pentosus）。
所述戊糖乳杆菌SS6为革兰氏阳性菌，杆状，无鞭毛，无菌膜，无荚膜；长1.5～3.0μm，宽0.7～0.8μm，菌落呈圆形，颜色为乳白色，表面光滑不透明，边缘整齐。
戊糖乳杆菌SS6为厌氧菌，接触酶试验呈阴性，氧化酶试验呈阴性，明胶液化试验呈阴性，硫化氢试验呈阴性，吲哚试验呈阴性，酪素水解试验呈阴性，精氨酸产氨试验呈阴性，脲酶试验呈阴性，七叶苷水解试验呈阳性。
戊糖乳杆菌SS6可在MRS培养基上生长，其最适生长温度为35℃，最适生长环境的pH值为5.8～6.5。
本发明所述戊糖乳杆菌SS6能发酵桑叶粉转化生产γ-氨基丁酸，试验结果表明添加戊糖乳杆菌SS6对桑叶粉进行发酵的γ-氨基丁酸产量是空白桑叶粉对照组的387.5%，为开发富含γ-氨基丁酸的食品提供依据。
本发明还提供含有所述戊糖乳杆菌SS6的微生物制剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种产γ-氨基丁酸的戊糖乳杆菌SS6，所述戊糖乳杆菌SS6保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址是广东省微生物研究所（广州市先烈中路中路100号大院59号楼5楼），保藏日期为2016年10月13日，保藏编号为GDMCC No：60086；戊糖乳杆菌SS6发酵产γ-氨基丁酸的产量达3.09mg/mL，具有较高的产γ-氨基丁酸的能力，为开发新型的富含γ氨基丁酸的食品提供了基础。
附图说明
图1为戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）SS6和相近菌株的16s rDNA序列进行同源性比对构建的系统发育树。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改或替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
乳酸菌分离培养基（1000mL）由10g酵母膏、10g牛肉膏、10g蛋白胨、5g葡萄糖、1ml吐温-80、20g碳酸钙、200g西红柿汁、0.1g溴甲酚绿、15g琼脂粉和余量的蒸馏水组成，调节pH至5.8～6.5，于121℃高压灭菌30min。
MRS培养基（1000mL）由10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母膏、2g柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]、20g葡萄糖、1mL吐温-80、5g乙酸钠（CH3COONa-3H2O）、2g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）、0.58g硫酸镁（MgSO4.7H2O）、0.25g硫酸镁（MnSO4·H2O）、15g琼脂粉和余量的蒸馏水组成，调节pH至5.8～6.5，于121℃高压灭菌30min。
MRS液体培养基（1000mL）由10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母膏、2g柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]、20g葡萄糖、1mL吐温-80、5g乙酸钠（CH3COONa-3H2O）、2g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）、0.58g硫酸镁（MgSO4.7H2O）、0.25g硫酸镁（MnSO4·H2O）和余量的蒸馏水组成，调节pH至5.8～6.5，于121℃高压灭菌30min。
发酵培养基TYG（1000mL）由5g酵母提取物、5g胰蛋白胨、10g葡萄糖、5g丁二酸钠、20mg L-Glu和余量的蒸馏水组成，调节pH至5.8～6.5，于121℃高压灭菌30min。
实施例1 菌株的分离、筛选与鉴定
菌株分离：选取健康生长桑树上的成熟桑葚果实，于无菌超净台内用无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分，切成1cm小片段置于研砵研磨出汁，吸取100μL果汁于MRS液体培养基中，于30℃恒温培养箱培养2d，待液体培养基变得浑浊按梯度稀释法稀释菌液，吸取稀释度为10-5和10-6的菌体稀释液100μL于乳酸菌分离培养基中，30℃恒温培养箱培养2～3d，待乳酸菌分离培养基中长出菌落（出现圆形乳白或黄色菌落），周围培养基变为黄色者初步确定为菌株SS6，挑取变色圈最大的菌落于MRS培养基培养。
对筛选得到的菌株SS6进行分子鉴定，委托生工生物工程(上海)股份有限公司对筛选得到的SS6的16S rDNA进行测序。
菌株SS6的16S rDNA序列长度为1472bp，其序列如SEQ ID NO：1所示，将测序结果与GenBank中的16S rDNA序列进行同源性比对，然后用软件构建系统发育树（如图1所示），以确定菌株的种属关系。同源性分析结果表明，该序列与序列号为JN415155.1的戊糖乳杆菌PIS23菌株的16S rDNA序列的同源性最高，相似性为99%，通过委托广东省微生物分析检测中心结合菌体形态、生长条件、生理生化鉴定结果确定菌株SS6属于乳杆菌属（Lactobacillus），戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）亚种，因此称为戊糖乳杆菌SS6。
菌株菌落形态鉴定：戊糖乳杆菌SS6为革兰氏阳性菌，杆状，无鞭毛，无荚膜；在MRS固体培养基上培养，菌落呈圆形，颜色为乳白色，表面光滑不透明，边缘整齐。
参照《伯杰细菌鉴定手册》第九版和《常见细菌系统鉴定手册》（东秀珠主编 科学出版社）对戊糖乳杆菌SS6进行生理生化鉴定：戊糖乳杆菌SS6为厌氧菌，接触酶试验呈阴性，氧化酶试验呈阴性，明胶液化试验呈阴性，硫化氢试验呈阴性，吲哚试验呈阴性，酪素水解试验呈阴性，精氨酸产氨试验呈阴性，脲酶试验呈阴性，七叶苷水解试验呈阳性，结果见表1。
以幼龄斜面培养物穿刺接种于休和利夫森二氏（半固体）培养基中，37℃恒温培养72h后观察。如指示剂变黄，表示产酸，为阳性；不变或变蓝（紫）则为阴性，结果如表2。
戊糖乳杆菌SS6可在MRS培养基上生长，其最适生长温度为35℃，最适生长环境的pH值为5.8～6.5。
戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）SS6，保藏在广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），保藏地址是广东省微生物研究所，广州市先烈中路中路100号大院59号楼5楼，保藏日期为2016年10月13日，保藏编号为GDMCC No：60086。
实施例2 菌株的培养
1、戊糖乳杆菌SS6的活化：在超净工作台中无菌操作，用接种环挑取戊糖乳杆菌SS6，在平板培养基（MRS培养基）上用接种环划线，在30℃培养箱中静置培养2d。
2、戊糖乳杆菌SS6发酵样品的制备：将分离得到的戊糖乳杆菌SS6接种于50mL发酵培养基TYG中，30℃培养箱中静置培养2d，将发酵混合物沸水浴10min，以10000r/min离心10min，取上层液体即得发酵液。
3、γ-氨基丁酸标准曲线的绘制：分别取1.0mL蒸馏水、浓度为1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL的γ-氨基丁酸的标准样品溶液，加入120μL 1mol/L LaCL3溶液，混匀震荡反应15min，12 000 r/min离心5 min，取上清0.5 mL于1.5mL离心管中，加入300 µL 1mol/L的KOH，振荡反应5 min，12 000 r/min离心5 min。分别取上清液600 µL置于15mL具塞试管中，加pH 10.0的碳酸盐缓冲液400 µL，60%的重蒸酚200 µL，混匀后再加入1mL 7.5% NaClO溶液，充分混匀。静置3 min，于沸水浴中加热10 min，后置冰浴中10 min，待溶液出现蓝绿色后，加入4.0 mL 60%乙醇溶液，以0号管为对照，于645 nm波长处测吸光值。以吸光值为纵坐标，GABA浓度（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线。
4、取1mL待测戊糖乳杆菌SS6的发酵液，按上述步骤加入试剂后测定波长645nm处的吸光值，作3个重复，根据标准曲线计算样品γ-氨基丁酸的含量。
试验结果表明：戊糖乳杆菌SS6发酵产γ-氨基丁酸的产量达3.09mg/mL，具有较高的产γ-氨基丁酸的能力，为开发新型的富含γ氨基丁酸的食品提供了依据。
SEQUENCE LISTING
<110> 华南农业大学
<120> 一种产γ-氨基丁酸的戊糖乳杆菌
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1472
<212> DNA
<213> 戊糖乳杆菌SS6的16S rDNA序列
<400> 1
cccgtggcgg gctgccctat acatgcaagt cgaacgaact ctggtattga ttggtgcttg 60
catcatgatt tacatttgag tgagtggcga actggtgagt aacacgtggg aaacctgccc 120
agaagcgggg gataacacct ggaaacagat gctaataccg cataacaact tggaccgcat 180
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ctggtgagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc 1200
ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggatggta caacgagttg cgaactcgcg 1260
agagtaagct aatctcttaa agccattctc agttcggatt gtaggctgca actcgcctac 1320
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cttttaggaa ccagccgcta agtgacagat gg 1472