本发明涉及一种桑蚕卵蛋白的制备方法。
背景技术：
蚕业生产中每年都会有一些桑蚕种因相关质量指标不合格而被淘汰销毁，而对废弃蚕卵资源开发利用的研究目前还不多见。经检测，桑蚕卵中蛋白质含量超过了干物质的50%。卵蛋白存在于一切卵生动物中，含有大量高密度糖脂蛋白，对生物体具有相当重要的生理功能。此外，蛋白多肽比大分子的蛋白质更易于吸收利用，且对生物体更具有生理活性，近几年人们利用生物技术不断获得具有多种生物活性功能的多肽类产品，如免疫活性肽、抗氧化肽等。发明者利用蛋白质碱溶酸沉的性质从桑蚕卵中提取制备了蚕卵蛋白，检测了其相关的特性指标，并经过碱性蛋白酶水解得到了以三肽为主的多肽类物质。该研究可为废弃桑蚕种卵资源的开发利用奠定实践基础，并为进一步开发新产品提供理论依据。
技术实现要素：
本发明提出一种桑蚕卵蛋白的制备方法。
一种桑蚕卵蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将废弃鲜蚕卵置于电热鼓风恒温干燥箱，35-65 ℃干燥至水分低于5%，用多功能粉碎机粉碎，过60目筛；
（2）将此干蚕卵粉用滤纸筒包好置于索氏提取装置中，以石油醚进行回流脱脂5h左右，观察到抽提筒中溶剂无颜色、滴在滤纸上挥干后无油斑时，取出打开滤纸包，倒出脱脂蚕卵粉，室温挥干残留溶剂，备用；
（3）称取干燥的脱脂蚕卵粉20g，加入200 mL 蒸馏水中，以数显pH计监测，用1 mol/ L 的NaOH 溶液调节并保持pH(10.50 ±0. 10)，在5℃水浴恒温搅拌溶解蛋白3h左右，当pH不再下降时，停止搅拌，静置2h；
（4）用双层筛网过滤，滤渣洗涤后再过滤，2 次滤液合并，3 000r/ min离心10 min，上清液经滤纸过滤；
（5）滤液在室温、数显pH计监测、磁力搅拌下，以1 mol/ L 的盐酸溶液缓慢调节pH 至出现大量沉淀时(此为蚕卵蛋白的等电点)，停止搅拌，于4 ℃静置过夜；
（6）次日，弃去上清液，以蒸馏水洗涤沉淀物数次至上清液pH 5 ~6，沉淀经真空冷冻干燥后制成蚕卵蛋白粉。
优选地，所述石油醚沸程30 ~60 ℃。
优选地，所述步骤（1）干燥温度为50 ℃。
本发明所述方法制备的桑蚕卵蛋白氨基酸组成很丰富，含有多种人体必需氨基酸，本发明所述方法步骤简单，可工业化生产，实用性强。
具体实施方式
实施例1。
一种桑蚕卵蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将废弃鲜蚕卵置于电热鼓风恒温干燥箱，35-65 ℃干燥至水分低于5%，用多功能粉碎机粉碎，过60目筛；
（2）将此干蚕卵粉用滤纸筒包好置于索氏提取装置中，以石油醚进行回流脱脂5h左右，观察到抽提筒中溶剂无颜色、滴在滤纸上挥干后无油斑时，取出打开滤纸包，倒出脱脂蚕卵粉，室温挥干残留溶剂，备用；
（3）称取干燥的脱脂蚕卵粉20g，加入200 mL 蒸馏水中，以数显pH计监测，用1 mol/ L 的NaOH 溶液调节并保持pH(10.50 ±0. 10)，在5℃水浴恒温搅拌溶解蛋白3h左右，当pH不再下降时，停止搅拌，静置2h；
（4）用双层筛网过滤，滤渣洗涤后再过滤，2 次滤液合并，3 000r/ min离心10 min，上清液经滤纸过滤；
（5）滤液在室温、数显pH计监测、磁力搅拌下，以1 mol/ L 的盐酸溶液缓慢调节pH 至出现大量沉淀时(此为蚕卵蛋白的等电点)，停止搅拌，于4 ℃静置过夜；
（6）次日，弃去上清液，以蒸馏水洗涤沉淀物数次至上清液pH 5 ~6，沉淀经真空冷冻干燥后制成蚕卵蛋白粉。
实施例2。
一种桑蚕卵蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将废弃鲜蚕卵置于电热鼓风恒温干燥箱，35-65 ℃干燥至水分低于5%，用多功能粉碎机粉碎，过60目筛；
（2）将此干蚕卵粉用滤纸筒包好置于索氏提取装置中，以石油醚进行回流脱脂5h左右，观察到抽提筒中溶剂无颜色、滴在滤纸上挥干后无油斑时，取出打开滤纸包，倒出脱脂蚕卵粉，室温挥干残留溶剂，备用；
（3）称取干燥的脱脂蚕卵粉20g，加入200 mL 蒸馏水中，以数显pH计监测，用1 mol/ L 的NaOH 溶液调节并保持pH(10.50 ±0. 10)，在5℃水浴恒温搅拌溶解蛋白3h左右，当pH不再下降时，停止搅拌，静置2h；
（4）用双层筛网过滤，滤渣洗涤后再过滤，2 次滤液合并，3 000r/ min离心10 min，上清液经滤纸过滤；
（5）滤液在室温、数显pH计监测、磁力搅拌下，以1 mol/ L 的盐酸溶液缓慢调节pH 至出现大量沉淀时(此为蚕卵蛋白的等电点)，停止搅拌，于4 ℃静置过夜；
（6）次日，弃去上清液，以蒸馏水洗涤沉淀物数次至上清液pH 5 ~6，沉淀经真空冷冻干燥后制成蚕卵蛋白粉；
（7）所述石油醚沸程30 ~60 ℃。
实施例3。
一种桑蚕卵蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将废弃鲜蚕卵置于电热鼓风恒温干燥箱，35-65 ℃干燥至水分低于5%，用多功能粉碎机粉碎，过60目筛；
（2）将此干蚕卵粉用滤纸筒包好置于索氏提取装置中，以石油醚进行回流脱脂5h左右，观察到抽提筒中溶剂无颜色、滴在滤纸上挥干后无油斑时，取出打开滤纸包，倒出脱脂蚕卵粉，室温挥干残留溶剂，备用；
（3）称取干燥的脱脂蚕卵粉20g，加入200 mL 蒸馏水中，以数显pH计监测，用1 mol/ L 的NaOH 溶液调节并保持pH(10.50 ±0. 10)，在5℃水浴恒温搅拌溶解蛋白3h左右，当pH不再下降时，停止搅拌，静置2h；
（4）用双层筛网过滤，滤渣洗涤后再过滤，2 次滤液合并，3 000r/ min离心10 min，上清液经滤纸过滤；
（5）滤液在室温、数显pH计监测、磁力搅拌下，以1 mol/ L 的盐酸溶液缓慢调节pH 至出现大量沉淀时(此为蚕卵蛋白的等电点)，停止搅拌，于4 ℃静置过夜；
（6）次日，弃去上清液，以蒸馏水洗涤沉淀物数次至上清液pH 5 ~6，沉淀经真空冷冻干燥后制成蚕卵蛋白粉；
（7）所述步骤（1）干燥温度为50 ℃。