本发明中药提取技术领域，涉及一种丹参酮ⅡA的提取方法，尤其涉及一种丹参药材中目标成分丹参酮ⅡA的提取方法。
背景技术：
丹参作为中药具有活血调经，祛瘀止痛，养心安神的功效，其制剂在临床上应用非常广泛。丹参酮是从丹参中萃取的总酮类，为其主要有效成分，其中丹参酮IIA是中国药典规定必须检测的有效成分之一。丹参酮IIA广泛应用于医药、化妆品等工业领域。
丹参酮IIA又称丹参醌Ⅱ或丹参醌ⅡA，其呈桔红色针状结晶结构，其结构式如下：
丹参酮IIA易溶于乙醇，丙酮，乙醚，苯等有机溶剂，微溶于水。其在医药中领域中应用广泛，可以治疗冠心病，改善冠状动脉循环，抑制血栓疾病发生；能显著延长小鼠耐缺氧时间，减轻缺氧引起的心肌损伤，同时，改善心肌收缩力，促进心肌再生；能扩张动物微动脉，使毛细管网开放数量增多，加快血液流速和流量，从而改善微循环障碍；有抑制ADP诱导血小板凝集、抑制血小板TXA2的合成与释放缩血管物质及促进纤维蛋白降解作用；可降低冠心病、脑缺血中风及心肌梗塞病人的全血和血浆粘度，减少红细胞压积，通过抗凝降粘的作用使患者血液流变学指标恢复正常；对低密度指蛋白引起牛血管内皮细胞损伤有保护作用；具有抗氧化作用，可防止LDL的氧化，从而保护EC，维持其分泌PGL2的正常功能，抗AS形成；具有抗感染，可用于化脓性和外科感染，治疗宫颈糜烂，治疗某些皮肤病及痤疮以及治疗肝炎及麻风病等等。
长期以来，在丹参酮ⅡA的提取、纯化和精制领域，大多是采用不同浓度的乙醇通过优化不同的提取条件(如乙醇浓度、乙醇量、提取温度、提取时间和提取次数等)来提取丹参酮ⅡA，尽管通过优化不同的提取条件，但仍存在很多问题：如在乙醇作为提取溶媒的过程中乙醇容易挥发，挥发后加重了溶媒内水分的含量，使水溶性成分溶出多，丹参酮ⅡA的纯度大大降低；并且，醇提取对设备设施防爆要求等要求均较高，操作安全系数低；此外，醇提取次数多，乙醇用量大，生产成本高。
目前，超临界CO2提取丹参的脂溶性成分已得到广泛的重视，并获得工业化应。如CN 1548430A公开了一种超临界二氧化碳萃取精制丹参药材中丹参酮ⅡA的方法，所述方法将丹参药材粉碎后，与适量的夹带剂搅拌均匀，投入萃取釜中，在35～60℃以及明显低于现有同类技术所使用的压力之下(9～25MPa)先进行静态浸泡20～50分钟，然后在同样的温度和压力条件下进行动态萃取，在35～60℃，4～8MPa条件下分离并接出萃取液，经过过滤、真空浓缩和真空干燥等工艺，可得到10～60％不同规格的丹参酮IIA，再经过重结晶等技术可得到纯度达90％以上丹参酮IIA。虽然所述方法可以得到纯度90％以上丹参酮IIA，但整个过程中需要先进行静态浸泡再进行动态萃取，并且萃取后还需经过滤、真空浓缩和真空干燥等工艺，工艺过程复杂，生产成本较高。
技术实现要素：
针对上述现有丹参酮ⅡA的提取、纯化以及精制工艺中乙醇易挥发、提取次数多、乙醇用量大、设备设施防爆要求高以及生产安全系数低等问题，以及现有超临界二氧化碳萃取精制丹参酮ⅡA的方法工艺过程复杂，生产成本较高等问题，本发明提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法。本发明所述方法以浓度为90～95wt％的乙醇，通过超临界CO2萃取将丹参药材内的丹参酮ⅡA一次性的最大限度萃取出来。所述方法大大减少了提取分离步骤，操作简单，可节约大量的有机溶媒，有效的避免了由于纯化精制工序多，过程复杂及除杂不彻底，造成的丹参酮ⅡA含量低，提取率低，乙醇用量大，生产操作安全系数低，生产成本高等问题。并且，本发明所述方法无溶剂残留，天然活性成分和热敏性成分不易被分解破坏，能最大限度地保持提取物的天然特征。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法，所述方法为：
(1)将经过预处理后的丹参药材送入超临界CO2萃取装置，以浓度为90～95wt％的乙醇作为夹带剂进行超临界萃取，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液进行旋蒸浓缩，得到丹参酮ⅡA。
其中，步骤(1)中所述乙醇的浓度可为90wt％、91wt％、92wt％、93wt％、94wt％或95wt％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
本发明以浓度为90～95wt％的乙醇作为夹带剂，通过优化超临界萃取过程中各工艺参数，可以将丹参药材内的丹参酮ⅡA成分一次性的最大限度萃取出来，减少了提取分离步骤，后续仅通过旋蒸浓缩即可得到丹参酮ⅡA，工艺简单，能耗低。
以下作为本发明优选的技术方案，但不作为本发明提供的技术方案的限制，通过以下技术方案，可以更好的达到和实现本发明的技术目的和有益效果。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)中所述预处理为：将丹参药材进行研磨处理至其过5目筛，且水分含量＜5wt％。
本发明中，由于丹参酮ⅡA在丹参药材中的含量很低，不经预处理的丹参药材在超临界CO2萃取装置很难有效的将有效成分萃取出来，故丹参药材需进行研磨处理至一定粒径，以保证其具有较高的萃取率。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)中所述超临界CO2萃取装置包括萃取釜、第一分离釜和第二分离釜。
本发明中，所述超临界CO2萃取装置为现有技术中已有装置，典型但非限制性的实例有：SFE330-50-72型高效超临界CO2萃取装置。
作为本发明优选的技术方案，所述萃取釜的压力为30～35MPa，例如30MPa、31MPa、32MPa、33MPa、34MPa或35MPa等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为33～35MPa。
优选地，所述萃取釜的温度为40～60℃，例如40℃、43℃、45℃、47℃、50℃、53℃、55℃、57℃或60℃等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为45～50℃。
优选地，所述第一分离釜的压力为5～15MPa，例如5MPa、7MPa、9MPa、10MPa、13MPa或15MPa等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为10～13MPa。
优选地，所述第一分离釜的温度为40～50℃，例如40℃、42℃、44℃、46℃、48℃或50℃等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为43～45℃。
优选地，所述第二分离釜的压力为6～10MPa，例如6MPa、7MPa、8MPa、9MPa或10MPa等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为7～9MPa。
优选地，所述第二分离釜的温度为40～45℃，例如40℃、41℃、42℃、43℃、44℃或45℃等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为43～45℃。
本发明中，所述超临界CO2萃取在高压低温的条件下进行，利用压差梯度和温差梯度的综合作用，并结合对萃取过程中工艺参数的优化，可最大限度的将丹参酮ⅡA等成分有效的萃取出来。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)中所述超临界CO2萃取装置中以CO2作为萃取剂，所述萃取剂的流量为10～30L/h，例如10L/h、13L/h、15L/h、17L/h、20L/h、23L/h、25L/h、27L/h或30L/h等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为15～20L/h。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)中所述乙醇的浓度为95w％。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)中所述夹带剂与溶剂的质量体积比为1:(5～10)，例如1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为1:6。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)中所述超临界萃取的时间为30～90min，例如30min、40min、50min、60min、70min、80min或90min等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为45～50min。
优选地，步骤(1)中所述超临界萃取的次数为1次。
作为本发明优选的技术方案，步骤(2)中所述旋蒸浓缩的温度为45～55℃，例如45℃、47℃、50℃、53℃或55℃等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，进一步优选为50℃。
作为本发明优选的技术方案，所述方法为：
(1)将丹参药材进行研磨处理至其过5目筛，且水分含量＜5wt％后，送入超临界CO2萃取装置，以浓度为95wt％的乙醇作为夹带剂进行超临界萃取45～50min，其中，以CO2作为萃取剂，萃取剂的流量为15～20L/h，萃取釜的压力为33～35MPa，萃取温度为45～50℃，第一分离釜的分离压力为10～13MPa，分离温度为43～45℃，第二分离釜的分离压力为7～9MPa，分离温度为43～45℃，夹带剂与溶剂的质量体积比为1:6，超临界萃取的次数为1次，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液于50℃下进行旋蒸浓缩，得到丹参酮ⅡA。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明以浓度为90～95wt％乙醇作为夹带剂，通过超临界CO2萃取将丹参药材内的丹参酮ⅡA成分一次性的最大限度萃取出来，优化超临界萃取过程中各工艺参数，使本发明具有较高的提取率(可达90～95％)。
(2)本发明所述的提取方法，无溶剂残留毒性，所述方法仅需一次萃取过程即可将丹参酮ⅡA萃取出来，大大减少了提取分离步骤，避免了多次提取过程中带来的杂质多，纯化精制工序多，过程复杂以及除杂不彻底，丹参酮ⅡA含量低，乙醇用量大，生产操作安全系数低，生产成本高等问题，操作简单，加工工序少，适用于工业化大生产。
(3)本发明所述萃取方法温度低，天然活性成分和热敏性成分不易被分解破坏，能最大限度地保持提取物的天然特征，可实现针对性分离。
具体实施方式
为更好地说明本发明，便于理解本发明的技术方案，下面对本发明进一步详细说明。但下述的实施例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明保护范围以权利要求书为准。
本发明具体实施例部分提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法，所述方法为：
(1)将经过预处理后的丹参药材送入超临界CO2萃取装置，以浓度为90～95wt％的乙醇作为夹带剂进行超临界萃取，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液进行旋蒸浓缩，得到丹参酮ⅡA。
以下为本发明典型但非限制性实施例：
实施例1：
本实施例提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法，所述方法为：
(1)将丹参药材进行研磨处理至其过5目筛，且水分含量＜5wt％，制成丹参药粉；取经过预处理的丹参药粉8kg，送入SFE330-50-72型高效超临界CO2萃取装置的料筒内，量取浓度95wt％的乙醇作为夹带剂，夹带剂的用量为1:6(W/V)，选用CO2作为萃取剂，设定设备参数为：萃取釜压力为32MPa，温度为60℃；第一分离釜的分离压力为13MPa，温度为50℃；第二分离釜的分离压力为6MPa，温度为45℃；萃取剂流量为26L/h；萃取时间为90min；进行1次超临界萃取，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液于50℃下进行旋蒸浓缩，得到丹参酮ⅡA。
测定所得丹参酮ⅡA的含量及其收率如表1所示。
对比例1：
本对比例提供了一种丹参酮ⅡA的制备方法，所述方法为回流法：
取丹参药粉200g，加入浓度为95wt％的乙醇，80℃回流提取2次，每次2小时(第一次加入1600mL的浓度为95wt％乙醇，第二次加入1200mL的浓度为95wt％的乙醇)，过滤，合并提取液，50℃旋蒸浓缩至无水，称重，测定丹参酮ⅡA的含量，计算收率，如表1所示。
表1：实施例1和对比例1中测试结果表
实施例2：
本实施例提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法，所述方法为：
(1)将丹参药材进行研磨处理至其过5目筛，且水分含量＜5wt％，制成丹参药粉；取经过预处理的丹参药粉8kg，送入SFE330-50-72型高效超临界CO2萃取装置的料筒内，量取浓度95wt％的乙醇作为夹带剂，夹带剂的用量为1:5(W/V)，选用CO2作为萃取剂，设定设备参数为：萃取釜压力为30MPa，温度为58℃；第一分离釜的分离压力为12MPa，温度为48℃；第二分离釜的分离压力为6MPa，温度为43℃；萃取剂流量为16L/h；萃取时间为90min；进行1次超临界萃取，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液于50℃下进行旋蒸浓缩，得到丹参酮ⅡA。
测定所得丹参酮ⅡA的含量及其收率如表2所示。
对比例2：
本对比例提供了一种丹参酮ⅡA的制备方法，所述方法为回流法：
取丹参药粉200g，加入浓度为95wt％的乙醇，80℃回流提取2次，每次2小时(第一次加入1600mL的浓度为95wt％乙醇，第二次加入1200mL的浓度为95wt％的乙醇)，过滤，合并提取液，50℃旋蒸浓缩至无水，称重，测定丹参酮ⅡA的含量，计算收率，如表2所示。
表2：实施例2和对比例2中测试结果表
实施例3：
本实施例提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法，所述方法为：
(1)将丹参药材进行研磨处理至其过5目筛，且水分含量＜5wt％，制成丹参药粉；取经过预处理的丹参药粉8kg，送入SFE330-50-72型高效超临界CO2萃取装置的料筒内，量取浓度95wt％的乙醇作为夹带剂，夹带剂的用量为1:10(W/V)，选用CO2作为萃取剂，设定设备参数为：萃取釜压力为30MPa，温度为55℃；第一分离釜的分离压力为10MPa，温度为45℃；第二分离釜的分离压力为6MPa，温度为40℃；萃取剂流量为23L/h；萃取时间为90min；进行1次超临界萃取，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液于50℃下进行旋蒸浓缩，得到丹参酮ⅡA。
测定所得丹参酮ⅡA的含量及其收率如表3所示。
对比例3：
本对比例提供了一种丹参酮ⅡA的制备方法，所述方法为回流法：
取丹参药粉200g，加入浓度为95wt％的乙醇，80℃回流提取2次，每次2小时(第一次加入1600mL的浓度为95wt％乙醇，第二次加入1200mL的浓度为95wt％的乙醇)，过滤，合并提取液，50℃旋蒸浓缩至无水，称重，测定丹参酮ⅡA的含量，计算收率，如表3所示。
表3：实施例3和对比例3中测试结果表
实施例4：
本实施例提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法，所述方法处理步骤(1)中所用乙醇浓度为93wt％，萃取釜压力为35MPa，温度为40℃；第一分离釜的分离压力为15MPa，温度为40℃；第二分离釜的分离压力为8MPa，温度为43℃；萃取剂流量为30L/h；萃取时间为60min；步骤(2)中旋蒸浓缩温度为45℃外，其他物料用量与制备方法均与实施例1中相同。
所制得丹参酮ⅡA的含量为0.5861mg/g，提取率为91.3％。
实施例5：
本实施例提供了一种丹参酮ⅡA的提取方法，所述方法处理步骤(1)中所用乙醇浓度为90wt％，第一分离釜的分离压力为5MPa，温度为45℃；第二分离釜的分离压力为10MPa，温度为43℃；萃取剂流量为10L/h；萃取时间为30min；步骤(2)中旋蒸浓缩温度为55℃外，其他物料用量与制备方法均与实施例2中相同。
所制得丹参酮ⅡA的含量为0.5561mg/g，提取率为90.5％。
综合实施例1-5和对比例1-3的结果可以看出，本发明以浓度为90～95wt％乙醇作为夹带剂，通过超临界CO2萃取将丹参药材内的丹参酮ⅡA成分一次性的最大限度萃取出来，优化超临界萃取过程中各工艺参数，使本发明具有较高的提取率(可达90～95％)。
同时，本发明所述的提取方法，无溶剂残留毒性，所述方法仅需一次萃取过程即可将丹参酮ⅡA萃取出来，大大减少了提取分离步骤，避免了多次提取过程中带来的杂质多，纯化精制工序多，过程复杂以及除杂不彻底，丹参酮ⅡA含量低，乙醇用量大，生产操作安全系数低，生产成本高等问题，操作简单，加工工序少，适用于工业化大生产。
并且，本发明所述萃取方法温度低，天然活性成分和热敏性成分不易被分解破坏，能最大限度地保持提取物的天然特征，可实现针对性分离。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。