本发明属医药合成领域，涉及一种大环内酯的制备方法。
背景技术：
众所周知，大环内酯可用于治疗各种感染性疾病，能够有效治疗和预防由广谱细菌和原生动物病原体引起的感染，它们还适用于治疗呼吸道感染和软组织感染。大环内酯化合物的特征在于存在大的内酯环，其一般是14元、15元或16元大环内酯，一种或多种糖可连接于其上，包括脱氧糖，如克拉定糖和德糖胺。红霉素是首个引入临床实践的此类化合物，其分子结构包括两个糖部分的14元大环内酯，其分子内包含酮内酯环部分。因此，酮内酯代表一类较新类别的大环内酯类抗生素，因其酸稳定性和优良的用药性而引起许多关注。
索利霉素(solithromycin，又称cem-101，opt-1068，casno.：760981-83-7)是cempra制药公司开发的第三代大环内酯类抗生素药物，用于治疗社区获得性细菌肺炎(cabp)，目前处于关键的iii期临床试验中。索利霉素是进入临床的第一个含氟取代的大环内酯药物，也是继阿奇霉素之后又一可口服和静脉注射给药的大环内酯类抗生素，其结构如下式ia所示：
现有技术中关于索利霉素的合成路线报道比较多。wo2009055557a1公开了一条以克拉霉素为起始原料制备索利霉素ia的合成路线，参看下述路线1，其中克拉霉素首先通过酰基(如苯甲酰基bz)保护糖羟基，再与具有空间位阻的羟基活化剂羰基二咪唑(cdi)反应生成中间体cl-1；然后与叠氮丁胺生成含叠氮的噁唑环中间体cl-2；之后在酸性条件下脱除其中一个糖基，形成中间体cl-3；接着使用氧化剂将脱除糖基后形成的羟基氧化，形成中间体cl-4；然后通过氟化反应在邻位进行f取代，形成中间体cl-5；最后与芳香炔形成三氮唑，并且脱去糖羟基保护基，形成目标索利霉素ia。wo2010048599a1对该路线进行了一定调整，即在从cl-1制备cl-2过程中，采用4-氨基丁醇为原料，然后将羟基转化成叠氮基团，再按原路线反应。然而该工艺路线仍然由于反应步骤较长，并且对含叠氮中间体进行脱糖、氧化等反应都是危险操作(叠氮化合物都是容易爆炸且有毒的化合物)；同时叠氮中间体与炔类通过关环产生五元环三氮唑的步骤中副反应较多，因而不适合工业化大规模生产。
wo2014145210a1为了减少反应步骤，对上述路线进行了优化，如路线2所示，其采用了直接引入自带侧链五元环三氮唑的原料方式。具体的合成步骤包括：由克拉霉素制备中间体cl-1，然后与五元环三氮唑侧链对接，形成噁唑环中间体(其中cp为氨基、保护氨基，或者硝基)，再依次经过脱糖、氧化、氟化等步骤，最后根据cp基团采取相应的方法使其形成氨基，得到索利霉素ia。该路线虽然无需引入叠氮基、再与炔进行关环步骤，减少了反应步骤，但是随着反应原料及部分中间体分子量的加大，降低了反应原料及部分中间体在有机反应中的溶解度，影响了反应后处理，而且侧链五元环三氮唑需要经受脱糖、氧化等步骤，容易产生较多的副反应，因而很难大规模生产。
cn104650166a公开了另一种索利霉素的制备方法，如下路线3所示，其采用先脱糖氧化后制备得到中间体ii，然后采用上述路线2相同的方式，与五元环三氮唑侧链对接形成噁唑环，最后经氟代、脱糖羟基保护基后，形成索利霉素ia。该方法避免了侧链五元环三氮唑经受脱糖、氧化步骤，减少了副反应的发生。但是由于脱糖、氧化后的化合物中间体ii比中间体cl-1溶解度差，导致反应困难，转化率低；而且，裸露氨基在脱保护基的时候，会产生下式1、式2杂质，这两个杂质是氨基三氮唑侧链与苯甲酸甲酯(或乙酸甲酯)发生酰化副反应时所产生的，不但由于多消耗氨基侧链导致成本上升，而且该副产物较难纯化影响最终产品索利霉素ia的成品质量。
技术实现要素：
为了减少现有大环内酯类化合物(特别是索利霉素)合成路线中的危险和/或毒害操作步骤，减少副反应的发生，提高目标产物的品质和反应效率，降低生产成本，实现工业化大规模生产，本发明提供一条新的大环内酯的合成工艺路线，以弥补现有技术的不足。
本发明采用以下技术方案来实现上述目的。
具体是，本发明提供一种改进的大环内酯的制备方法，其合成路线如下所示，其中首先使式iii化合物脱糖羟基保护，获得式iv化合物，然后再经侧链对接关环反应，即获得如式i所示的大环内酯。该反应避免了现有技术中对接关环后再脱糖羟基保护发生副反应，产生难以脱除和纯化的杂质的缺陷。因此，根据本发明方法获得的大环内酯化合物(特别是索利霉素ia)产品纯度更高，副反应更少，后处理方便，操作安全，适合大规模生产。
其中r为糖羟基保护基，例如酰基保护基，如取代或未取代的烷基酰基、芳基酰基、杂芳基酰基、芳烷基酰基或杂芳烷基酰基，所述取代基为c1-c4烷基或卤素，r优选为苯甲酰基或乙酰基。
x为h；y为or1，其中r1是h、单糖、二糖、多糖或烷基，例如包含保护或未保护的2’-羟基的单糖，其中的保护基为空间位阻酰基，例如取代或未取代的烷基酰基、芳基酰基、杂芳基酰基、芳烷基酰基或杂芳烷基酰基，所述取代基为c1-c4烷基或卤素；或者x、y与所连接的碳一起形成羰基-c＝o。
w为h、卤素或oh，优选卤素，例如f、cl、br、i，更优选为f或cl。
a、b一起形成-(ch2)n，其中n为1～10的整数，优选为1～4的整数，更优选为1、2、3或4；或者a、b一起形成包含2～10个碳、优选2～5个碳的不饱和烃基。
c为取代或未取代的氨基芳基、氨基芳基烷基或烷基氨基芳基，所述取代基为c1-c4烷基或卤素，c优选为氨基苯基、氨基苄基、甲氨基苯基。
所述脱糖羟基保护是指，脱除糖单元片段上的羟基保护基，可以采取糖化学中的一些常规脱糖保护基的方式进行，例如将式iii化合物在醇溶剂、室温至回流条件下脱去糖羟基保护基，得到式iv化合物。所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇。
在侧链对接关环反应中，式iv化合物可通过与式va化合物经侧链对接关环反应来制备式i化合物。
其中cp为氨基、氨基保护基或硝基，所述氨基保护基选自boc、bsmoc、trityl或meotrityl，a、b如上文定义。
当cp为氨基时，式iv化合物与式va化合物进行侧链对接关环反应直接获得式i大环内酯。
当cp为氨基保护基时，式iv化合物与式va化合物经侧链对接关环反应后，再脱氨基保护基，即得式i大环内酯。其中一般采用酸解反应脱除氨基保护基，其中反应温度为20℃～50℃，反应时间为约0.5h～10h。所述酸解反应的酸选自盐酸、硫酸、三氟乙酸或氢溴酸；实现本申请的脱氨基保护基的方法也可以是本领域人员能够轻易完成本发明的其他方法，并不局限于此。
当cp为硝基时，式iv化合物与式va化合物经侧链对接关环反应后，催化加氢还原硝基为氨基，即得式i大环内酯。其中式iv化合物与式va化合物的摩尔比为1:1～3。优选1:1～2。所述催化加氢的催化剂选自钯碳或雷尼镍，优选钯碳，用量为式iv化合物的10wt％，加氢压力为常压至10mpa，优选常压；反应溶剂选自醇类、酯类或醚类，优选醇类，其中醇类溶剂选自甲醇、乙醇或异丙醇优选甲醇，酯类溶剂选自乙酸乙酯或乙酸异丙酯优选乙酸乙酯，醚类溶剂选自乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃或2-甲基四氢呋喃优选四氢呋喃。反应温度为20℃～80℃，反应时间1h～10h。实现本申请的硝基还原也可以是本领域人员能够轻易完成本发明的其他还原硝基法，并不局限于此。
或者，式iv化合物可与式vb化合物反应先形成噁唑环中间体，然后再与炔化合物(例如3-氨基苯乙炔)进行关环反应，获得式i大环内酯。
其中r2为叠氮基，a、b如上文定义。
所述对接关环反应可在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自四氢呋喃、乙腈、n,n-二甲氨基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、甲苯，优选乙腈。
所述对接关环反应也可在上述有机溶剂与水的混合体系中反应，所述有机溶剂与水的体积比为1～10:1，优选2:1；优选所述混合体系为乙腈/水的混合体系，二者的体积比为1～10:1，优选2:1。
所述对接关环反应时间为0.5h～16h，优选2～8h；，反应温度50℃～100℃，优选50℃～80℃。
所述对接关环反应可在有机碱的促进下进行，所述有机碱选自1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(dbu)、二环己基碳二亚胺(dcc)、n,n-二甲基吡啶胺(dmap)、三亚乙基二胺(dabco)或1,5-二氮杂双环[4.3.0]-5-壬烯(dbn)中的一种或多种，优选dbu。
式iii化合物可根现有技术获得，例如包括但不限于：式ii化合物经卤代反应生成式iii化合物，反应式如下：
其中r、x、y、w如上所定义。
所述卤代反应包括但不限于氟代反应，使用的氟代试剂可选自：n-氟代双苯磺酰胺、n-氟-苯二磺酰胺或1-氟-4-羟基-1,4-二氮二环[2,2,2]辛烷双四氢硼酸盐，优选n-氟代双苯磺酰胺。氟代试剂与式ii化合物的摩尔比为1:1～2，优选1:1.2～1.5。所述氟代反应在-78℃～30℃温度下进行，优选-20～0℃；反应时间0.5h～4h，优选2～3h。
所述氟代反应使用的有机溶剂选自四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、甲苯、1,4-二氧六环、n,n-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯或乙酸异丙酯中的一种或多种，优选n,n-二甲基甲酰胺与四氢呋喃的混合体系。
所述氟代反应优选在碱性条件下进行，例如在选自碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯、叔丁醇钾、叔丁醇锂、甲醇钠、乙醇钠、钠氢或二(三甲基硅基)氨基钠(nahmds)，1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(dbu)中的一种或多种碱性物质的存在下进行，优选叔丁醇钾。
上述反应的式ii化合物可根现有技术获得，例如包括但不限于：以克拉霉素为起始物料，经糖羟基保护后，在羰基二咪唑(cdi)的作用下形成式ii化合物。合成路线如下所示：
其中r、x、y如上文所定义。当w＝h时，式ii化合物即为式iii化合物，然而，为了方便起见，在本发明中仍然以式ii化合物表示。
在本发明的一个实施方案中，所述式i化合物的合成任选的还包括脱糖、氧化反应。所述脱糖、氧化反应是指在酸性条件下脱去中间体分子中的一糖单元，然后采用氯铬酸吡啶盐(pcc)或斯文氧化进行氧化反应，将大环内酯上的羟基氧化为羰基。所述脱糖、氧化反应可在反应开始阶段，例如将克拉霉素糖羟基保护后进行，经脱糖、氧化后，在羰基二咪唑(cdi)的作用下形成式ii化合物。或者，所述脱糖、氧化反应还可在反应中期或后期进行，例如合成式ii化合物之后，或者合成式iii化合物之后进行，或者合成式iv化合物之后进行，例如包括但不限于以下反应路线：
上述化合物再进一步经脱糖、氧化，氟代反应后生成式ia索利霉素。
此外，所述卤代(氟代)反应并不限于在脱糖羟基保护反应之前进行，任选的，还可在脱糖羟基保护反应或侧链对接关环反应之前、之后，或它们之间进行，只要能够实现本发明的技术方案，获得目标式i化合物(特别是式ia索利霉素)即可。
本发明通过先脱羟基保护基，再对接关环的方式合成式i大环内酯(特别是索利霉素ia)，避免了现有技术中最后一步脱羟基保护基时产生难以纯化和脱除的杂质。根据本发明方法获得的目标产物大环内酯i(特别是索利霉素ia)纯度更高，收率更好，且副反应少，后处理方便，操作安全，适合大规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于举例说明目的，而不是对本发明的限制。此外应理解，在阅读了本发明的构思之后，本领域技术人员对其作出的各种改变或调整，均应落入本发明的保护范围内，这些等价形式同样属于本申请所附权利要求书所限定的范围。
除注明的具体条件之外，实施例中的各试验方法均可按照常规方法来进行。
本文中涉及到多种物质的添加量、含量和浓度，其中所示百分含量，除特别说明外，皆指质量百分含量。
本文实施例中，如果对于反应温度或操作温度没有做出具体说明，则该温度通常指室温(20～25℃)。
在本文中，为了简要起见，有时将式ii化合物称作“化合物ii”、“式ii所示的化合物”、“式ii所示中间体”，或者“中间体ii”，它们都是指编号为ii的化合物，其中ii指化合物编号/代码，如i、ii、iii、iv、v、vi，a、b、c、d等。类似地，本文有时将大环内酯成为大环内酯i，或式i大环内酯，它们均表示相同的含义。
除非另有说明，术语“芳基”单独或与其他基团共同使用时，是指任选取代或未取代的芳族环系统。术语芳基包括单环芳环和多芳环。芳基的实例包括但不限于苯基、联苯基、萘基和蒽基环系统。
除非另有说明，术语“杂芳基”单独或与其他基团共同使用时，是指包含一个或多个杂原子例如氧、氮、硫、硒和磷的芳环系统。术语杂芳基可包含5-或6-元杂环、多环杂芳环系统和多杂环系统。
如本文所述，术语“芳烷基”等同于术语芳基烷基，且表示连接于烷基部分的一个或多个取代或未取代的单环或多环芳环；示例性的实例包括但不限于苄基、二苯基甲基、三苯甲基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、2-吡啶基甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基等。
除非另有说明，术语“糖”包括任选被取代或未取代的单糖、二糖和多糖，例如包括任选被氨基、酰胺基、ureyl、卤素、腈或叠氮基取代的糖和脱氧糖。示例性的实例包括葡糖胺、n-乙酰基葡糖胺、德糖胺、forosamine、唾液酸等。
除非另有说明，术语“烷基”是指具有1-20(例如1～10，优选1～4)个碳原子的直链、支链和/或环状(“环烷基”)的烃基，其中具有1～4个碳的烷基部分被称为“低级烷基”。烧基的实例包括但不局限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戍基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲戊基、辛基、2，2，4-三甲基苯基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。环烷基部分可以是单环的或多环的，并且包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基和金刚烷基。烷基部分的其它实例包括具有支链、支链和/或环状部分的烷基，例如1-乙基-4-甲基-环己基。此外，术语“烷基”包括饱和烃基以及烯基和炔基部分。
实施例1式iii-1化合物的制备(r＝-aco)
将2.05g乙酰基保护的式ii-1化合物(2.90mmol)溶解在20mldmf/thf的混合溶液中(9:1)，-20℃条件下，分批加入0.39g叔丁醇钾(3.48mmol)，完毕后，将该混合物在-20℃下搅拌0.5小时，然后加入1.01gnfsi(n-氟代双苯磺酰胺)(3.19mmol)，加毕，继续-20℃反应两个小时。取样hplc检测反应完毕后，加入少量水淬灭反应，用50ml乙酸乙酯稀释反应液，然后用饱和食盐水洗涤多次(50ml/次)，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到粗品(可直接用于下一步)。粗品经过柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l乙酸乙酯为洗脱剂，得到1.57g泡沫状白色固体iii-1(收率74.7％)。
esi(m+1)＝724
实施例2式iv-1化合物的制备
将7.23g化合物iii-1(0.01mol)溶于100ml甲醇中，室温搅拌过夜。取样检测反应完全后，蒸除反应液的溶剂，得到白色固体7g，粗品可直接用于下一步。粗品经柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到5.78g泡沫状白色固体iv-1(收率85％)。
esi(m+1)＝682。
实施例3式ia索利霉素的制备(cp＝-nh2)
将6.82g式iv-1化合物(0.01mol)和6.93g式va-1化合物(0.03mol)混合于100ml乙腈:水＝9:1中，上述混合液加热回流过夜。取样检测反应完全后，停止加热，待反应液冷却至室温后，蒸除有机溶剂，加50ml水稀释，二氯甲烷20ml*3萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，柱层析纯化，(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到6.34g泡沫状白色固体，即索利霉素ia(收率75％)。
esi(m+1)/2＝423。
实施例4式iii-2化合物的制备(r＝-bzo)
将式ii-2化合物(3.84g，0.005mol)溶于dmf(20ml)中，氮气置换，反应液冷却至-25℃。加入叔丁醇钾(0.84g，0.0075mol，1.5eq)，完毕后，于-20～-25℃反应1h。分批加入nfsi(2.5g，0.0075mol，1.5eq)，完毕后，于-20～-25℃反应1h。取样检测原料反应完全后，滴加冰水60ml，控温不超过10℃，有固体析出。滴加完毕后，搅拌15min，抽滤，冰水淋洗。滤饼溶于50ml乙酸乙酯中，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤，旋干，柱层析纯化，得到3.14g白色固体iii-2(收率80％)。
ms＝786。
实施例5式iv-1化合物的制备
将7.86g式iii-2化合物(0.01mol)溶于100ml甲醇中，室温搅拌过夜。取样检测反应完全后，蒸除反应液的溶剂，得到白色固体7g，粗品可直接用于下一步。粗品经柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到5.44克泡沫状白色固体iv-1(收率80％)。
esi(m+1)＝682。
实施例6式ia索利霉素的制备(cp＝氨基保护基-nhboc)
将化合物iv-1(3.4g，0.005mol)、boc保护氨基侧链va-2(4.96g,0.015mol，3eq)、乙腈(20ml)、水(2ml)混合，在氮气保护下，于55-60℃下加热反应6h。取样检测反应完全，旋干反应液，柱层析纯化。(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到3.3g泡沫状白色固体，即vi-1化合物，收率70％。
将上述3.3g的vi-1化合物固体溶于50ml的二氯甲烷dcm中，加入三氟醋酸(1.14g，0.01mol，3eq)，20～25℃下搅拌反应4h。旋干反应液，加水稀释，调节ph＝8～9，dcm(30ml*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，柱层析纯化，得到ia索利霉素白色固体1.97g，收率70％。
ms＝423[(m+2)/2]。
实施例7式ia索利霉素的制备(cp＝-nh2)
于反应瓶中加入化合物iv-1(6.81g，0.01mol)、叠氮丁胺(2.28g，0.02mol，2eq)、乙腈:水＝1:1(40ml)，55～65℃下反应过夜。取样检测化合物iv-1反应完全后，减压蒸除溶剂，残留物加水(50ml)稀释，乙酸乙酯(50ml*2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，柱层析纯化，得到白色固体5.46g，即式vi-2化合物，收率75％，ms(m+1)＝728。
于反应瓶中加入中间体vi-2(6.4g，0.0088mol)，溶于30ml乙酸乙酯中，加入间氨基苯乙炔(1.24g，0.0106mol，1.2eq)、水30ml、抗坏血酸钠(0.87g，0.0044mol，0.5eq)，搅拌溶清，滴加硫酸铜的水溶液(五水硫酸铜，0.44g，0.00176mol，0.2eq，25ml水)。滴毕，室温搅拌过夜。取样检测中间体iv-2反应完全后，将反应液经硅藻土过滤，滤液分液，水相乙酸乙酯(30ml*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到5.2克泡沫状白色固体，即索利霉素ia(收率70％)。
esi(m+1)/2＝423。
实施例8式ia索利霉素的制备(cp＝-no2)
将化合物iv-1(3.4g，0.005mol)、硝基侧链va-3(4.96g，0.015mol，3eq)、乙腈(20ml)，水(2ml)混合，在氮气保护下，于55-60℃下加热反应6h。取样检测反应完全，旋干反应液，经柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到2.62g泡沫状白色固体，即式vi-3化合物，收率60％。
将上述式vi-3化合物2.62g固体溶于100mlthf中，加入10％钯碳(200mg)，氢气置换，于20～25℃搅拌反应6h。取样检测反应完全，滤除钯碳，旋干反应液，粗品用甲醇重结晶，得到ia索利霉素白色固体1.26g。
ms＝423[(m+1)/2]。
实施例9式iv-2化合物的制备
将7g化合物ii-1(0.01mol)溶于50ml甲醇中，室温搅拌过夜。取样检测反应完全后，蒸除反应液的溶剂，粗品经柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到4.77g泡沫状白色固体，即式iv-2(收率72％)。
esi(m+1)＝664。
实施例10式iv-1化合物的制备
将6.6g式iv-2化合物(0.01mmol)溶解在20mldmf/thf的混合溶液中(9:1)，-20℃条件下，分批加入1.34g叔丁醇钾(0.012mmol)，完毕后，将该混合物在-20℃下搅拌0.5h。然后滴加3.47gnfsi(0.011mmol)溶于20mldmf的混合液，加毕，继续-20℃反应两个小时。取样hplc检测反应完毕，加入少量水淬灭反应，用50ml乙酸乙酯稀释反应液，然后用饱和食盐水洗涤多次(50ml/次)，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到粗品(可直接用于下一步)。粗品经过柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷：甲醇＝30：1为洗脱剂，得到4.56g泡沫状白色固体iv-1(收率67％)。
lc-msm+1＝664。
实施例11式ia索利霉素的制备
将6.63g式iv-2化合物(0.01mol)和6.93g式va-1化合物(0.03mol)混合于100ml乙腈:水＝9:1中，上述混合液加热回流过夜。取样检测反应完全后，停止加热，待反应液冷却至室温后，蒸除有机溶剂，加50ml水稀释，二氯甲烷20ml*3萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1和1％三乙胺为洗脱剂，得到5.78克泡沫状白色固体(收率70％)。lc-ms(m+1)/2＝414。
将上述获得的5.78g泡沫状白色固体(0.007mmol)溶解于20mldmf溶液中，-20℃条件下，加入0.94g叔丁醇钾(0.0084mmol)，完毕后，将该混合物在-20℃下搅拌1小时。然后滴加2.65gnfsi(0.0084mmol)溶于20mldmf的混合液，控温小于-20℃。加毕，继续-20℃反应两个小时。取样hplc检测反应完毕，加入少量水淬灭反应，用50ml乙酸乙酯稀释反应液，然后用饱和食盐水洗涤多次(50ml/次)，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到粗品(可直接用于下一步)。粗品经过柱层析纯化(硅胶200-300目，青岛黄海)，4l二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，得到4.26g泡沫状白色固体，即索利霉素ia(收率72％)。
esi(m+1)/2＝423。