本发明属于多糖提取工艺技术领域，具体涉及一种茯苓多糖的提取方法。
背景技术：
茯苓多糖为我国传统中药茯苓的主要有效成分，主要存在于茯苓细胞壁中，按照溶解度的不同又分为水溶性茯苓多糖和碱溶性茯苓多糖，具有抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫力、抗氧化、降血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于医疗、保健等领域，具有广阔的开发应用前景。
自从20世纪60年代研究发现酵母细胞壁多糖（zymosan）具有免疫增强以及抗肿瘤作用以来，人们对多糖的研究产生了极大的兴趣，尤其是其生物活性方面的研究。茯苓多糖（pachyman）是近年来研究较多的一种真菌多糖，来源于多孔菌科真菌茯苓的菌核，约占整个茯苓菌核干重的70%～90%，其化学组成为（1→3）-β-D- 葡聚糖。茯苓多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、增强机体免疫力、保肝、催眠、抗炎、消石等作用，可广泛应用于医疗保健、食品等领域。茯苓多糖可用于抗肿瘤药物的研发，从而为肿瘤、癌症的治疗提供新的方法，还可作为免疫增强剂，用于保健品的开发与研制。另外，羧甲基茯苓多糖具有水溶性及增稠性，可配制成各种保健食品。因此，茯苓多糖的提取及开发意义重大。
近些年，随着医药、化学以及生物学的不断发展，茯苓多糖的提取纯化、药理学以及应用研究取得了很大进展。酶+热水浸提法显著提高了茯苓多糖的提取率，同时，缩短了提取时间。然而，水溶性多糖的提取率仍较低，一般不超过6%，因此，有必要进一步改进茯苓多糖的提取工艺，提高提取率。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明提供一种茯苓多糖的提取方法。
本发明的目的是以下述方式实现的：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入30-50倍量的水，搅拌均匀，浸泡1-3h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为30-50kV的条件下处理3-5min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3-4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在60-80℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的10-20%，得茯苓多糖浓缩液，再在4-25℃的乙醇溶液中沉降24h以上，再离心10-20min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复7次以上，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
所述步骤（1）中加入40.5倍量的水，浸泡2h。
所述步骤（2）中脉冲放电电压为40.3kV，处理时间为4.1min。
所述步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
相对于现有技术，本发明提供一种利用脉冲放电等离子体辅助提取茯苓多糖的方法，工艺步骤简单，消耗时间短，多糖提取率高，成本低，满足大规模工业化生产的需要，并且具有推广应用价值。
具体实施方式
所述脉冲放电等离子体处理系统由进料泵、高压 脉冲发生装置和处理室组成，其中处理室内设置两个平行的不锈钢电极，其中一个不锈钢电极与高压脉冲发生装置的高压脉冲发生端连接作为放电电极，另一个不锈钢电极接地作为接地电极，进料泵与处理室底部的进料口相连，处理室上部设置出料口。
实施例1：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入30-50倍量的水，搅拌均匀，浸泡1-3h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为30-50kV的条件下处理3-5min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3-4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在60-80℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的10-20%，得茯苓多糖浓缩液，再在4-25℃的乙醇溶液中沉降24h以上，再离心10-20min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复7次以上，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（1）中加入40.5倍量的水，浸泡2h。
步骤（2）中脉冲放电电压为40.3kV，处理时间为4.1min。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例2：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入30倍量的水，搅拌均匀，浸泡1h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为30kV的条件下处理3min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在60℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的10%，得茯苓多糖浓缩液，再在4℃的乙醇溶液中沉降24h，再离心10min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例3：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入32倍量的水，搅拌均匀，浸泡1.2h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为32kV的条件下处理3.2min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在62℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的11%，得茯苓多糖浓缩液，再在6℃的乙醇溶液中沉降26h，再离心11min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例4：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入34倍量的水，搅拌均匀，浸泡1.4h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为34kV的条件下处理3.4min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在64℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的12%，得茯苓多糖浓缩液，再在8℃的乙醇溶液中沉降28h，再离心12min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例5：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入36倍量的水，搅拌均匀，浸泡1.6h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为36kV的条件下处理3.6min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在66℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的13%，得茯苓多糖浓缩液，再在10℃的乙醇溶液中沉降30h，再离心13min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例6：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入38倍量的水，搅拌均匀，浸泡1.8h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为38kV的条件下处理3.8min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在68℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的14%，得茯苓多糖浓缩液，再在12℃的乙醇溶液中沉降32h，再离心14min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例7：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入40倍量的水，搅拌均匀，浸泡2h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为40kV的条件下处理4min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在70℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的15%，得茯苓多糖浓缩液，再在15℃的乙醇溶液中沉降34h，再离心15min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例8：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入42倍量的水，搅拌均匀，浸泡2.2h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为42kV的条件下处理4.2min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在72℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的16%，得茯苓多糖浓缩液，再在18℃的乙醇溶液中沉降36h，再离心16min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例9：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入44倍量的水，搅拌均匀，浸泡2.4h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为44kV的条件下处理4.4min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在74℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的17%，得茯苓多糖浓缩液，再在20℃的乙醇溶液中沉降38h，再离心17min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例10：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入46倍量的水，搅拌均匀，浸泡2.6h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为46kV的条件下处理4.6min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在76℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的18%，得茯苓多糖浓缩液，再在22℃的乙醇溶液中沉降40h，再离心18min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例11：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入48倍量的水，搅拌均匀，浸泡2.8h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为48kV的条件下处理4.8min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在78℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的19%，得茯苓多糖浓缩液，再在24℃的乙醇溶液中沉降45h，再离心19min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例12：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入50倍量的水，搅拌均匀，浸泡3h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为50kV的条件下处理5min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在80℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的20%，得茯苓多糖浓缩液，再在25℃的乙醇溶液中沉降50h，再离心20min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
实施例13：
一种茯苓多糖的提取方法，具体步骤如下：
（1）将选取好的茯苓用万能粉碎机粉碎，加入40.5倍量的水，搅拌均匀，浸泡2h；
（2）将步骤（1）得到的混合物输入到脉冲放电等离子体处理系统中，在脉冲放电电压为40.3kV的条件下处理4.1min，得到浆液；
（3）将步骤（2）得到的浆液进行离心分离，收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取3次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
（4）采用旋转蒸发仪在80℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的20%，得茯苓多糖浓缩液，再在25℃的乙醇溶液中沉降50h，再离心20min，得茯苓多糖沉淀物；
（5）依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤茯苓多糖沉淀物，savage法脱蛋白，重复脱蛋白，直至在 280 nm 光谱处检测不到蛋白质为止，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
步骤（4）中乙醇溶液为体积分数为95%的乙醇。
多糖得率（%）=多糖质量/子实体干质量×100%
单位质量多糖提取能量消耗（J/g）=（功率×处理时间）/多糖质量
脉冲放电等离子体作用条件单因素试验：
使用脉冲放电电压、液料比、处理时间 3 个因素作为单因素，进行脉冲放电等离子体提取茯苓多糖的单因素试验，根据试验结果设计正交试验的水平值。
响应面法优化提取工艺条件：
根据单因素试验结果，以脉冲放电电压、液料比、处理时间3 个因素为自变量，茯苓多糖得率为响应值，进行 3 因素 3 水平正交试验，使用 MINITABL15 软件，根据 Box-Benhnken 的中心组合试验设计原理，采用响应面法对脉冲放电等离子体提取茯苓多糖的条件进行优化。试验因素与水平设计见表 1。
根据正交试验结果可知，脉冲放电等离子体提取茯苓多糖的最佳提取工艺参数为：脉冲放电电压为 40.3kV，液料比为 1：40.5，处理时间为4.1 min，在此条件下多糖得率达8.80%。
本发明提供的茯苓多糖的提取方法，大大提高了茯苓多糖的提取率，降低了生产成本，从而在市场上起到了领先优势。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明整体构思前提下，还可以作出若干改变和改进，这些也应该视为本发明的保护范围。