1.一组基于悬浮微珠阵列系统检测遗传性耳聋的探针,其特征在于,所述的探针序列如下所示:
GJB2-512N:5’-ACAAGGCCAGGCGTTGCACTT-3’;
GJB2-512M:5’-AAGGCCAGGCGTTCGTTGCAC-3’;
GJB2-299N:5’-CTTCTTCTCATGTCTCCGGTA-3’;
GJB2-299M:5’-TCTTCTTCTCGTCTCCGGTAG-3’;
GJB2-235N:5’-ATCAGCTGCAGGGCCCATAGC-3’;
GJB2-235M:5’-TCAGCTGCAGGCCCATAGC-3’;
GJB2-176N:5’-TAGCACACGTTCTTGCAGCCT-3’;
GJB2-176M:5’-TAGTGATCGTAGCTGGCTGCA-3’;
GJB2-109N:5’-CAGCCACAACGAGGATCAT-3’;
GJB2-109M:5’-CAGCCACAATGAGGATCAT-3’;
GJB2-35N:5’-TTAGTTCACACCCCCCAGGA-3’;
GJB2-35M:5’-TTAGTTCACACCCCCAGGAT-3’;
GJB3-538N:5’-TACATTGCCCGACCTACCG-3’;
GJB3-538M:5’-TACATTGCCTGACCTACCG-3’;
SLC-754N:5’-GGAGTTCTCTCTATTATCT-3’;
SLC-754M:5’-GGAGTTCTCCCTATTATCT-3’;
SLC-7-2N:5’-GTTTTATTTCAGACGATAATT-3’;
SLC-7-2M:5’-GTTTTATTTCGGACGATAATT-3’;
SLC-1174N:5’-GGGATCAGCAACATCTTCT-3’;
SLC-1174M:5’-GGGATCAGCTACATCTTCT-3’;
SLC-1226N:5’-GCTCTTTCCCGCACGGCCGTC-3’;
SLC-1226M:5’-GCTCTTTCCCACACGGCCGTC-3’;
SLC-1229N:5’-CTTTCCCGCACGGCCGTCCAG-3’;
SLC-1229M:5’-TTTCCCGCATGGCCGTCCA-3’;
SLC-1692N:5’-CGATGGTTTTAAAAAATGTAT-3’;
SLC-1692M:5’-GATGGTTTTAAAAAAATGTAT-3’;
SLC-15+5N:5’-TCCACAGTAAGTATTTTATCC-3’;
SLC-15+5M:5’-TCCACAGTAAATATTTTATCC-3’;
SLC-1975N:5’-CCATAGCCTTGTGCTTGACTG-3’;
SLC-1975M:5’-CCATAGCCTTCTGCTTGACTG-3’;
SLC-2027N:5’-TGAGATCACTGCGGGTG-3’;
SLC-2027M:5’-TGAGATCACAGCGGGTG-3’;
SLC-2086N:5’-TGCATCACTTCAAGGTAAATA-3’;
SLC-2086M:5’-TGCATCACTTTAAGGTAAATA-3’;
SLC-2168N:5’-TGACGGTCCATGATGCTAT-3’;
SLC-2168M:5’-TGACGGTCCGTGATGCTAT-3’;
12S-1494N:5’-GCCCGTCACCCTCCTCAAG-3’;
12S-1494M:5’-GCCCGTCACTCTCCTCAAG-3’;
12S-1555N:5’-ATAGAGGAGACAAGTCGTA-3’;
12S-1555M:5’-ATAGAGGAGGCAAGTCGTA-3’;
其中,N表示野生型探针;M表示突变型探针;探针的5’端连接有连接臂。
2.根据权利要求1所述的基于悬浮微珠阵列系统检测遗传性耳聋的探针,其特征在于,所述的连接臂为NH2-C18连接臂。
3.一组基于悬浮微珠阵列系统检测遗传性耳聋的引物,其特征在于,所述的引物序列如下所示:
deaf-1F:5’-GACACAAAGCAGTCCACA-3’,deaf-1R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCTTCTATGTCATGTACGACGG-3’;
deaf-2F:5’-TTTTGATCTCCTCGATGTCCT-3’,deaf-2R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCCCGACTTTGTCTGCAACAC-3’;
deaf-13F:5’-TTTTGATCTCCTCGATGTCCT-3’,deaf-13R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCCGCTCCTAGTGGCCATGC-3’;
deaf-3F:5’-CTCATCTCCCCACACCTCCT-3’,deaf-3R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCGCCCAGAGTAGAAGATGGAT-3’;
deaf-4F:5’-CACTCTCTGGCATGGCTT-3’,deaf-4R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCATGAGGTAGCAGAGCTCACA-3’;
deaf-5F:5’-TTGCAGATTGGATTCATAGTGAG-3’,deaf-5R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCAATGAACAGTGACCCATC-3’;
deaf-6F:5’-AGTTCAGCATTATTTGGTTGACA-3’,deaf-6R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCGGAACACCACACTCACCC-3’;
deaf-7F:5’-TGAAATACTCAGCGAAGGTCT-3’,deaf-7R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCTCTGTTGCCATTCCTCGAC-3’;
deaf-8F:5’-CCTCTGAGCAACTGTGAC-3’,deaf-8R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCGGCCTATTCCTGATTGGAC-3’;
deaf-9F:5’-GTGCCAATCCATAGCCTT-3’,deaf-9R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCACCCACATCATTTTACTATTGC-3’;
deaf-10F:5’-TGCTACTGAATTATGGGCAGA-3’,deaf-10R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCCCCAGATAGGAGAAAGGGCTT-3’;
deaf-11F:5’-TGATAGAAAAGCTGGAGCAAT-3’,deaf-11R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCAAAATGGAACCTTGACCCTC-3’;
deaf-12F:5’-CCCCAGAAAACTACGATAGCC-3’,deaf-12R:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCCCAGGTTTCAATTTCTATCGCCTA-3’;
deaf-Tag:5’-GTGGCCAAGCGCTGTATCCCGAGTATCTCC-3’;
在与权利要求1所述的探针的互补序列的引物的5’端进行生物素修饰。
4.一种基于悬浮微珠阵列系统检测遗传性耳聋的检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的基于悬浮微珠阵列系统诊断遗传性耳聋的探针和权利要求3所述的基于悬浮微珠阵列系统诊断遗传性耳聋的引物。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒,其特征在于,还包括多重PCR反应液、DNA聚合酶和微珠。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒,其特征在于,所述的微珠为荧光编码微珠或者二维编码微珠。
7.一种基于悬浮微珠阵列系统检测遗传性耳聋的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)悬浮微珠阵列的制备:将权利要求1所述的探针分别与不同编码的微珠偶联,然后根据检测目的将偶联探针的微珠混合,得到悬浮微珠阵列;
2)样本PCR扩增:提取待测样本基因组DNA,利用权利要求3所述的引物对样本基因组DNA进行多重PCR扩增,得到PCR产物;
3)将PCR产物与悬浮微珠阵列进行杂交,得到杂交产物,再用链霉亲和素R-藻红蛋白对杂交产物进行标记,通过悬浮微珠阵列读取仪读取检测结果,判断样本中的基因突变位点。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述的多重PCR扩增,其PCR反应体系为25μL;包括1×PCR缓冲液、dNTPs 0.2mM、Mg2+2mM、1U Taq DNA聚合酶,基因组DNA25ng,权利要求3所述的引物各0.2μM;PCR扩增程序为:37℃10min;95℃10min;
95℃30s,52℃60s,65℃60s,30次循环;95℃30s,65℃45s,72℃45s,25次循环;
72℃5min。