本发明涉及药物合成领域，具体地涉及一种依诺肝素钠粗品的制备方法。
背景技术：
依诺肝素钠由世界第四大制药公司赛诺菲-安万特(Sanofi-Aventis)首次研发，于1993年3月29日获美国FDA批准上市，成为赛诺菲-安万特公司最畅销的药物。依诺肝素钠为低分子肝素钠的一种，系由猪小肠粘膜提取的肝素经苄基酯化后，碱降解获取的硫酸氨基葡聚糖片段的钠盐，为多糖混合物，重均分子量为4500D。其主要作用机制为通过与抗凝血酶Ⅲ及其复合物结合，抑制凝血因子Xa、Ⅱa、Ⅸa、Ⅺa、Ⅻa的活性，其中主要通过抑制Xa发挥抗凝作用。低分子肝素的抗Xa、Ⅱa活性主要与分子链长度相关，依诺肝素的分子链大多小于18个糖单位，灭活Xa的作用更强而对Ⅱa的作用更小。依诺肝素抗Xa/Ⅱa比值为4：1，显著高于普通肝素1：1，因此具有更强的抗血栓作用。
现有依诺肝素钠的制备方法，主要是CN100582123C、CN102050888B及CN102585037A中所公开的工艺，均是以肝素钠为起始原料，经过盐化、酯化、碱液中β-消除得到产物，但现有工艺存在酯化物降解不均匀、产品颜色深、澄清度差、收率低、质量不稳定等问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种依诺肝素钠粗品的制备方法，可有效克服目前依诺肝素钠制备工艺中的问题，提高产品效价和收率，降低生产成本，改善产品质量。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得本发明技术方案，该技术方案包括以下步骤：
1)将苄索氯铵水溶液缓慢加入肝素钠水溶液中，在室温下搅拌反应2-4小时后将反应液抽滤、纯化水洗涤、真空干燥得肝素季铵盐；
2)将步骤1)所得肝素季铵盐溶于二氯甲烷中，加入氯化苄，在30-40℃下反应21-25小时后降至室温，加入10％乙酸钠甲醇溶液，搅拌反应20-40分钟后静置沉降3小时，抽滤，所得滤饼在室温下真空干燥得肝素苄酯盐；
3)将步骤2)所得肝素苄酯盐溶于水配成肝素苄酯盐溶液，加热至60-65℃，然后加入与肝素苄酯盐溶液等体积60-65℃的0.2M的氢氧化钠溶液，搅拌反应1小时后降温至0-5℃，抽滤后调节反应液PH为6.5-6.8，加氯化钠配成盐溶液，以2.5-4倍甲醇沉降3小时后抽滤，滤饼在40℃下真空干燥得依诺肝素钠粗品。
4)将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5后，加入1.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.0，之后向药液中逐步加入3.0倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品。
5)将依诺肝素钠成品加入到纯化水中，搅拌溶解形成45％浓度(质量百分数)的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥。
其中，步骤1)中肝素钠水溶液是将1重量份的肝素钠溶于12-14重量份的纯化水中而得，苄索氯铵水溶液是将2.2-2.8重量份的苄索氯铵溶于4.5-5.5重量份的纯化水中而得，真空干燥的温度为45-55℃。
步骤2)中是将1重量份的肝素季铵盐溶于9-13倍体积份的二氯甲烷中，氯化苄的用量为肝素季铵盐质量的2倍，乙酸钠的用量为肝素季铵盐质量的2倍。
步骤3)中肝素苄酯盐溶液是将1重量份的肝素苄酯盐溶于10-14重量份的水中，氯化钠用量为肝素苄酯盐的1.5-3.0倍。
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
a、溶剂残留极低；
b、脱色效果好(经12个月长期试验后，产品溶液依旧澄清，且颜色浅于黄色1号)，杂质少，产品稳定性高；
c、效价高，且效价比适宜(FXa/FIIa在3.8-4.5之间)，产品抗栓活性高，降低了生产成品，提高了产品质量。
d、肝素苄酯盐降解均匀，分子量范围更适宜。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。本发明产品检测均按欧洲药典相关标准执行。
实施例1
将2.5重量份的苄索氯铵溶于5重量份的纯化水中配成苄索氯铵溶液；将1重量份的肝素钠溶于13重量份的纯化水中配成肝素钠溶液，搅拌下缓慢将苄索氯铵溶液加入到肝素钠溶液中，温度为室温。加完后，室温下搅拌反应3h，抽滤，滤饼用水洗涤3次后抽干，50℃下真空干燥，得到肝素季铵盐固体。
将1重量份的肝素季铵盐溶于11倍体积份的二氯甲烷，加入2重量份的氯化苄，在40℃下反应25h，冷至室温，搅拌下加入2重量份的乙酸钠配成的10％的乙酸钠甲醇溶液，搅拌40分钟后，静置沉降3h，抽滤，滤饼在室温下真空干燥，得到肝素苄酯盐。
将1重量份的肝素苄酯盐溶于14倍水中，与等体积的已升温至65℃的0.2M氢氧化钠在65℃下控温搅拌反应1h后，降温至0℃，过滤，调节滤液PH为6.7，再加入2重量份的氯化钠，完全溶解后，加入4倍体积甲醇，沉降3h，抽滤，滤饼在40℃下真空干燥，得到依诺肝素钠粗品。
将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5后，加入1.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.0，之后向药液中逐步加入3.0倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品。将依诺肝素钠成品加入到纯化水中，搅拌溶解形成45％浓度(质量百分数)的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥得依诺肝素钠精制品。
所得依诺肝素钠经12个月的长期试验后进行检测，结果如下：
实施例2
将2.2重量份的苄索氯铵溶于4.5重量份的纯化水中配成苄索氯铵溶液；将1重量份的肝素钠溶于12重量份的纯化水中配成肝素钠溶液，搅拌下缓慢将苄索氯铵溶液加入到肝素钠溶液中，温度为室温。加完后，室温下搅拌反应2h，抽滤，滤饼用水洗涤3次后抽干，45℃下真空干燥，得到肝素季铵盐固体。
将1重量份的肝素季铵盐溶于9倍体积份的二氯甲烷，加入2重量份的氯化苄，在30℃下反应21h，冷至室温，搅拌下加入2重量份的乙酸钠配成的10％的乙酸钠甲醇溶液，搅拌20分钟后，静置沉降3h，抽滤，滤饼在室温下真空干燥，得到肝素苄酯盐。
将1重量份的肝素苄酯盐溶于10倍水中，与等体积的已升温至65℃的0.2M氢氧化钠在60℃下控温搅拌反应1h后，降温至5℃，过滤，调节滤液PH为6.8，再加入1.5重量份的氯化钠，完全溶解后，加入2.5倍体积甲醇，沉降3h，抽滤，滤饼在40℃下真空干燥，得到依诺肝素钠粗品。
将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5后，加入1.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.0，之后向药液中逐步加入3.0倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品。将依诺肝素钠成品加入到纯化水中，搅拌溶解形成45％浓度(质量百分数)的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥得依诺肝素钠精制品。
所得依诺肝素钠经12个月的长期试验后进行检测，结果如下：
实施例3
将2.8重量份的苄索氯铵溶于5.5重量份的纯化水中配成苄索氯铵溶液；将1重量份的肝素钠溶于14重量份的纯化水中配成肝素钠溶液，搅拌下缓慢将苄索氯铵溶液加入到肝素钠溶液中，温度为室温。加完后，室温下搅拌反应4h，抽滤，滤饼用水洗涤3次后抽干，55℃下真空干燥，得到肝素季铵盐固体。
将1重量份的肝素季铵盐溶于13倍体积份的二氯甲烷，加入2重量份的氯化苄，在35℃下反应23h，冷至室温，搅拌下加入2重量份的乙酸钠配成的10％的乙酸钠甲醇溶液，搅拌30分钟后，静置沉降3h，抽滤，滤饼在室温下真空干燥，得到肝素苄酯盐。
将1重量份的肝素苄酯盐溶于12倍水中，与等体积的已升温至65℃的0.2M氢氧化钠在63℃下控温搅拌反应1h后，降温至3℃，过滤，调节滤液PH为6.5，再加入3重量份的氯化钠，完全溶解后，加入3倍体积甲醇，沉降3h，抽滤，滤饼在40℃下真空干燥，得到依诺肝素钠粗品。
将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5后，加入1.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.0，之后向药液中逐步加入3.0倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品。将依诺肝素钠成品加入到纯化水中，搅拌溶解形成45％浓度(质量百分数)的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥得依诺肝素钠精制品。
所得依诺肝素钠经12个月的长期试验后进行检测，结果如下：