本发明属于多糖药物技术领域，具体涉及一种垂丝海棠花多糖及其提取方法和在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
背景技术：
功能性便秘（functional constipation，FC）是一种功能性疾病，是指症状起源于中、下胃肠道的功能性胃肠病。由于不良生活习惯、社会与心理、药物作用等因素所致的便秘，例如不良排便习惯、饮食习惯，生活规律改变，服用抗胆碱等药物，情绪抑郁等因素影响，多会出现便秘，这种便秘则属于功能性便秘。其临床表现为排便困难、次数减少、排便时间延长等，便秘对患者的生活质量造成了极大的影响。目前，市场上用于治疗功能性便秘的药物多存在疗效不佳、有毒副作用等缺陷。
技术实现要素：
本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种可用于治疗功能性便秘的垂丝海棠花多糖，其治疗效果显著，且无毒副作用，不会引起耐药性。
本发明还提供了上述垂丝海棠花多糖的提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种垂丝海棠花多糖的提取方法，其将干燥的垂丝海棠花用石油醚加热回流，然后取残渣用乙醇浸泡，浸泡结束后取出残渣并加水煎煮，煎煮结束后过滤，滤液加95%乙醇至终浓度为70―85%，静置，取沉淀物，分别用无水乙醇、丙酮、石油醚淋洗，淋洗后所得沉淀即为垂丝海棠花多糖。
进一步优选的，上述垂丝海棠花多糖的提取方法，具体为：将干燥的垂丝海棠花用石油醚加热回流2―4次，每次加热回流时间为1―4 h；然后取残渣用60―80%乙醇浸泡2―4次，每次浸泡24 ±12h；浸泡结束后取出残渣并加水煎煮2―4次，每次煎煮2―4h，煎煮结束后过滤，合并滤液并加入95%乙醇至终浓度为70―85%，静置，取沉淀物，分别用无水乙醇、丙酮、石油醚淋洗，用水复溶，复溶液浓缩后经冷冻干燥即得垂丝海棠花多糖。
本发明提供了采用上述提取方法制备得到的垂丝海棠花多糖。
本发明还提供了上述垂丝海棠花多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。垂丝海棠花多糖的具体用量可以是：800 mg/kg、1000 mg/kg等。
垂丝海棠( Malus halliana Koehne)为蔷薇科苹果属落叶乔木，别名海棠、海棠花和垂枝海棠，是中国的特有植物，分布于四川、安徽、陕西、江苏、浙江和云南，主要为观赏植物栽培，有重瓣、白花等变种。其味淡、苦， 性平，入肝经，具有调经和血的功效，主治血崩。目前， 国内外对垂丝海棠化学及生物活性的研究报道极少，未见垂丝海棠多糖生物活性的报道。
目前，尚无垂丝海棠花多糖对大鼠功能性便秘治疗的报道。本发明通过测定垂丝海棠花多糖对大鼠功能性便秘各项生化指标，考察其治疗功能性便秘的效果。试验结果证明：垂丝海棠花多糖治疗功能性便秘疗效显著，且无毒副作用。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。下述实施例中，如无特殊说明，乙醇均指的是体积百分比浓度。
实施例1
一种垂丝海棠花多糖的提取方法，具体为：将960g干燥的垂丝海棠花，用2 L石油醚加热回流3次（每次加热回流时间为2 h）；然后取残渣用20L 70%乙醇浸泡3次（每次浸泡24 h）。浸泡结束后捞出残渣并加入25L蒸馏水，煎煮3次每次煎煮3 h，煎煮结束后过滤，合并滤液并加入95%乙醇至终浓度为80%左右。静置24 h，取沉淀物，分别用无水乙醇、丙酮、石油醚各淋洗3次，阴凉处放至无有机试剂气味，蒸馏水复溶，复溶液浓缩后经冷冻干燥即得到垂丝海棠花多糖，约114 g。
应用试验。
一、试验动物。
SPF级Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠，体重200-220g。动物购买于河南省实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2015-0004。
二、试验试剂。
盐酸洛哌丁胺：2mg/粒，西安杨森制药有限公司，批号：170421860；麻仁丸：武汉太福制药有限公司，批号：20170203；氯化钠注射液：辰欣药业股份有限公司，批号：1707182703；阿拉伯树胶粉：天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：1612301383；活性炭，4%多聚甲醛，大鼠胃动素（MTL）ELISA试剂盒，大鼠胃泌素（GAS）ELISA试剂盒，大鼠P物质（SP）ELISA试剂盒，大鼠生长抑素（SS）ELISA试剂盒，批号：201709，均由南京罗奇特生物科技有限公司提供。石蜡，无水乙醇，二甲苯，石油醚，乙醇，丙酮，均购买于天津市富宇精细化工有限公司。
三、 统计学处理。
采用SPSS19.0软件单因素方差分析法(One-Way ANOVA)对数据进行统计处理。
四、大鼠功能性便秘模型的建立。
将48只SPF级Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠适应性饲养1周（温度25±2℃，光照12h/d，湿度40-45%），喂养标准饲料，自由饮水。给药前一天称量每只大鼠的体重，按体重随机分组，共分为6组，每组8只，即：空白组，模型组，阳性对照组，垂丝海棠花多糖高、中、低剂量组。按照分组分笼饲养。
盐酸洛哌丁胺以3 mg/kg·d与生理盐水2 mL/只配制成混悬液进行灌胃。除空白组外，其余各组每天以2 mL混悬液灌胃造模，2次/d，空白组每天以2 mL生理盐水进行灌胃。在大鼠便秘模型建立期间，每隔一天定时地收集大鼠的24 h的便粒，称取便粒的湿重，放入电热干燥箱中，在50℃下干燥8 h，称取便粒的干重，造模进行14 d。期间观察各组大鼠的便粒形状与大鼠活动情况。造模期间，空白组大鼠饮食、活动均为正常，各个造模组大鼠活动、饮食量均减少，毛色暗淡，易脱毛。造模组大鼠的便粒与空白组相比，排便量减少。表1中可以看出，与空白组相比，模型组（p＜0.001）24 h便粒重量均极显著降低，表明便秘模型成功。
表1 造模药物对大鼠24h便粒重的影响（n=8）
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五、 垂丝海棠花多糖给药治疗。
大鼠功能性便秘模型建立成功后，将造模成功的大鼠进行给药治疗。空白组与模型组：每天以1 mL/100 g生理盐水进行灌胃；阳性对照组：每天采用麻仁丸0.6 g/kg，以1 mL/100 g进行灌胃；垂丝海棠花多糖高剂量组：采用1200 mg/kg，垂丝海棠花多糖中剂量组1000 mg/kg，垂丝海棠花多糖低剂量组800 mg/kg，每天均以1 mL/100g进行灌胃给药。
大鼠给药治疗期间，每天定时收集6 h便粒，称取重量，记录数据。给药7 d后，每组大鼠禁食不禁水12 h，用10%的水合氯醛进行麻醉，腹主动脉取血，室温下放置30 min，3000r/min离心10 min，得到大鼠血清，测定MTL、GAS、SS和P物质的含量；距盲肠2cm处剪取结肠2cm，生理盐水清洗干净，滤纸吸干水分，放入恒温干燥箱，50℃下干燥24h。
表2对大鼠排便量的影响（n=8）
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表2中可以看出：与空白组相比，模型组(p＜0.001) 6 h便粒重量极显著的低于治疗组和空白组，表明模型组便秘症状没有减轻。与模型组相比，阳性对照组(p＜0.001)、垂丝海棠花多糖高、中和低剂量组(p＜0.001)6 h便粒重量显著升高。与阳性对照组相比，垂丝海棠花多糖高、中剂量组的6 h便粒重量与其相近，垂丝海棠花多糖低剂量（0.01<p<0.001）组6 h便粒重量显著升高。
表3对大鼠结肠含水率的影响（n=8）
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表3中可以看出：与空白组相比，模型组(p＜0.001) 结肠含水率极显著的降低，表明模型组便秘症状没有减轻。与模型组相比，阳性对照组(0.001﹤p＜0.01)、垂丝海棠花多糖低剂量组(p＜0.001)结肠含水率极显著升高，垂丝海棠花多糖高、中剂量组结肠含水率显著升高。与阳性对照组相比，垂丝海棠花多糖高、中、低剂量组的结肠含水率与其相近。
表4大鼠胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)的含量
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表5、生长抑素(SS)和P物质的含量（n=8）
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表4、表5中可以看出：与空白组相比，模型组大鼠GAS、MTL、P物质的含量非常显著的降低(p＜0.001)，SS含量非常显著的升高。与模型组相比，阳性对照组、垂丝海棠花多糖中剂量组、低剂量组的GAS、MTL含量非常显著的升高(p＜0.001)，高剂量组GAS含量非常显著的升高、MTL含量极显著升高，阳性对照组、垂丝海棠花多糖中剂量组P物质含量极显著升高，低剂量组非常显著的升高，高剂量组显著升高；与模型组相比，阳性对照组、垂丝海棠花多糖高、中、低剂量组SS含量非常显著的降低。
结论：垂丝海棠花多糖高、中、低剂量组对便秘均具有治疗作用，是治疗功能性便秘的理想药物。