重组羟腈裂解酶及其用于制备光学纯手性氰醇的应用的制作方法

技术特征：

1.一种重组羟腈裂解酶，其特征在于，其是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)：氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示；

(b)：在保持该羟腈裂解酶催化活力的前提下，插入、缺失，或替换如序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列中至少一个氨基酸而得到的变异的氨基酸序列。

2.一种分离的核酸，其特征在于，所述的核酸是编码如权利要求1所述的重组羟腈裂解酶的核酸分子。

3.一种重组表达载体，其特征在于：包含如权利要求2所述的核酸。

4.一种重组表达转化体，其特征在于：包含如权利要求3所述重组表达载体。

5.如权利要求4所述的重组表达转化体，其特征在于：其为将如权利要求3所述的重组表达载体转化至宿主微生物中制得的基因工程菌株，所述的宿主微生物为毕赤酵母。

6.一种如权利要求1所述重组羟腈裂解酶的制备方法，其特征在于：包括以下形式：

(a)培养如权利要求5所述的重组表达转化体，分离培养清液，浓缩后获得酶液；

(b)将(a)中的酶液冷冻干燥后制备得到的冻干粗酶粉。

7.一种如权利要求1所述重组羟腈裂解酶的应用，其特征在于，所述重组羟腈裂解酶作为催化剂催化潜手性芳香醛与氢氰酸加成的不对称羟氰化反应，制备光学纯手性氰醇。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的不对称羟氰化反应在水-有机溶剂两相体系中进行。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述潜手性芳香醛为结构如式1-5所示的潜手性芳香醛类化合物：

式1中，R为-H；

或者R为-Cl，其取代的位置在苯基的邻位或间位；

或者R为-OMe，其取代的位置在苯基的邻位、间位或对位；

或者R为-OPh，其取代的位置在苯基的间位；

或者R为-SMe，其取代的位置在苯基的对位；

或者R为-Me，其取代的位置在苯基的对位；

或者R为-F，其取代的位置在苯基的对位；

式2中，取代基在1-位，或者2-位；

式4中，n为1或2；

式5中，X为O或者S。

10.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述不对称羟氰化反应条件为：重组羟腈裂解酶的浓度为12～300U/mL，潜手性芳香醛浓度为0.1～0.5M，反应温度为4～25℃，氢氰酸的浓度为1～2M，反应液水相pH为4–6；所述的不对称羟氰化反应的时间以反应转化率停止增长的时间为准。