本发明属于生物芯片技术领域,具体涉及一种生物芯片用清洗液。
背景技术:
目前常用的洗涤液为磷酸盐缓冲液(PBS)溶液,配方为称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。
洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号,从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留,在最后一步产生信号。而不充分的洗涤会导致差异和高背景,从而带来不理想的结果。PBS溶液作为洗涤液,会引起洗涤不充分,常常出现高背景,引起检测结果差异。
技术实现要素:
本发明的目的是克服现有技术中常用磷酸盐缓冲溶液中生物芯片洗涤不充分导致背景高,引起检测结果差异的问题,提供一种生物芯片用清洗液,所述清洗液具有能使芯片膜面背景信号低,分析信噪比高的优点。
本发明提供了一种生物芯片用清洗液,按重量百分比计,由以下组分构成:
50%1.25X TBE缓冲液,10%硫酸铵溶液,2%的非离子型表面活性剂,0.02%Proclin300,余量为去离子水;
所述1.25X TBE缓冲液由下述制备方法制备:
1)准确称量135g Tris,倒入5000ml烧杯中;
2)准确称量68.75克硼酸,倒入5000ml烧杯中;
3)用量筒加入2000ml去离子水倒入5000ml烧杯中,混匀;
4)向步骤3)溶液中加入50ml 0.5M的EDTA二钠溶液,混匀;
5)步骤4)中溶液倒入3000ml量筒定容至2500ml,再倒入5000ml烧杯,混匀即可。
所述0.5M的EDTA溶液通过下述步骤配制:
1)准确称量46.53g乙二胺四乙酸二钠,到入500ml烧杯;
2)用量筒加入200ml去离子水至500ml烧杯中,磁力加热搅拌器搅拌溶解;
3)加NaOH调pH值至8.0,定容至250ml即可。
所述非离子型表面活性剂为吐温20;
所述Proclin300由2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮组成;
所述硫酸铵溶液为饱和水溶液;
根据本发明的另一个方面,本发明提供了一种生物芯片用清洗液制备方法:包括以下步骤
1)称取1.25X TBE缓冲液置于混合容器中;
2)称取硫酸铵溶液置于步骤1)混合容器中搅拌混匀;
3)称取非离子型表面活性剂置于步骤2)中搅拌混匀;
4)向步骤3)溶液中加入Proclin300;
5)补充去离子水至所需量,搅拌混匀后得生物芯片用清洗液。
本发明所述清洗液含有50%1.25X TBE缓冲液可稳定溶液酸碱度在PH7-8,使芯片检测反应中抗原抗体反应体系稳定。10%硫酸铵溶液有利于蛋白的沉淀吸附,使抗原抗体反应更加充分。2%Tween20为非离子型表面活性剂(去污剂),更加有效地去除反应体系中未参与反应的部分。0.02%Proclin300为防腐剂,有利于洗涤液的长期保存使用。
本发明具有如下优点:
本发明所述清洗液采用TBE缓冲液,而非PBS缓冲液,缓冲能力优于PBS缓冲液。本发明缓冲液增加的10%硫酸铵溶液有利于蛋白的沉淀吸附,抗原抗体反应优于PBS缓冲液。本发明缓冲液增加的2%Tween20为非离子型表面活性剂(去污剂),更加有效地去除反应体系中未参与反应的部分,能使芯片膜面背景信号低,分析信噪比高,使清洗液的清洗效果优于PBS缓冲液。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了,下面结合具体实施方式,对本发明进一步详细说明。应该理解,这些描述只是示例性的,而并非要限制本发明的范围。
本发明未特指说明的溶液均为水溶液,所用试剂为常规生化试剂。
实施例
一、首先配制0.5M的EDTA溶液:
1)准确称量46.53g乙二胺四乙酸二钠,到入500ml烧杯;
2)用量筒加入200ml去离子水至500ml烧杯中,磁力加热搅拌器搅拌溶解;
3)加NaOH调pH值至8.0,定容至250ml即可。
二、然后配制1.25X TBE缓冲液:
1)准确称量135g Tris,倒入5000ml烧杯中;
2)准确称量68.75克硼酸,倒入5000ml烧杯中;
3)用量筒加入2000ml去离子水倒入5000ml烧杯中,混匀;
4)向步骤3)溶液中加入50ml 0.5M的EDTA二钠溶液,混匀;
5)步骤4)中溶液倒入3000ml量筒定容至2500ml,再倒入5000ml烧杯,混匀即可。
三、配制生物芯片用清洗液
按以下重量百分比配制:50%1.25X TBE缓冲液,10%硫酸铵溶液,2%的非离子型表面活性剂,0.02%Proclin300,余量为去离子水;
具体制备过程如下:
1)称取1.25X TBE缓冲液置于混合容器中;
2)称取硫酸铵溶液置于步骤1)混合容器中搅拌混匀;
3)称取吐温20置于步骤2)中搅拌混匀;
4)向步骤3)溶液中加入Proclin300;
5)补充去离子水至所需量,搅拌混匀后得生物芯片用清洗液。
尽管已经详细描述了本发明的实施方式,但是应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围的情况下,可以对本发明的实施方式做出各种改变、替换和变更。