本发明属于精细化学品合成领域，尤其是涉及一种6-蝶呤基叶酸的合成方法。
背景技术：
叶酸又名碟酰谷氨酸，b族维生素之一，是氨基酸、嘧啶和嘌呤代谢中单碳转移的载体，对核蛋白的合成起辅酶作用；同时，叶酸也是许多细胞内酶反应的辅酶；叶酸的缺乏，会导致dtmp的合成受到限制，使dna合成受阻，而产生巨幼细胞贫血。目前的研究已经证实，妇女孕前或妊娠早期缺乏叶酸是神经管畸形发生的重要病因之一。叶酸与同型半胱氨酸代谢关系密切，对预防心脑血管疾病的发生具有重要的生物学意义。而且，也有研究表明，叶酸与许多癌症的发生、预防以及治疗相关。
植物和微生物可在体内从头合成叶酸，而动物则不能，对人类而言，植物是人类最主要的叶酸来源。研究表明，世界上大多数国家的人群叶酸的摄入量都不理想，因此，利用基因工程改造植物，使其体内叶酸含量显著提高，就成为解决世界范围内叶酸缺乏症的最新选择。
四氢叶酸(thf)及其衍生物通常都称为叶酸，叶酸分子由喋呤、对氨基苯甲酸(paba)和谷氨酸三部分组成。在不同的氧化条件下一碳单位连接于喋呤的n-5位置或是对氨基苯甲酸的n-10位置,或是连接在二者之间。通常人们所说的叶酸为l-构型(l-folicacid)，叶酸杂质包括d-叶酸(d-folicacid)、叶酸杂质-e(6-蝶呤基叶酸，6-pterinylfolicacid)、高叶酸(homofolicacid)、异高叶酸(isohomofolicacid)等，在检测叶酸时要确定含有哪些杂质，以及准确的测量出叶酸中的杂质和每种杂质的含量，因此，必须要提供杂质标准品。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明旨在提出一种6-蝶呤基叶酸的合成方法，制得一种叶酸杂质的高纯度标准品，以便准确、有效的检测出叶酸中该种杂质的含量。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种6-蝶呤基叶酸的合成方法，包括如下步骤：
(1)将化合物1蝶酸与化合物2谷氨酸二叔丁酯盐酸盐加入到二甲基甲酰胺(dmf)中，加入缩合剂和辅助试剂，在室温搅拌过夜，将反应液倒入蒸馏水中，析出的固体经过滤，用蒸馏水洗涤，得到固体粗品，滤液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶剂，得到固体粗品，将两部分固体合并，真空干燥，得粗品化合物3；
(2)将所述的粗品化合物3加入到二甲基甲酰胺(dmf)和n-甲基吡咯烷酮(nmp)的混合液中，然后加入化合物4蝶呤甲基溴化物，混合物于室温至60℃搅拌4-48小时，反应液冷却至室温后倒入蒸馏水中，析出的固体经过滤，蒸馏水洗涤，干燥得棕色固体化合物5；
(3)将所述的棕色固体化合物5溶于三氟乙酸(tfa)和二氯甲烷(dcm)的混合溶剂中，混合物于室温搅拌1-12小时，脱去叔丁基保护基团，将溶剂浓缩至约5ml，在搅拌下缓慢加入蒸馏水，析出棕色固体，固体经过滤，蒸馏水洗涤，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中，再次加入蒸馏水，析出的固体经过滤、蒸馏水洗涤，真空干燥后得到棕色固体6-蝶呤基叶酸；
其化学方程式为：
进一步，所述的步骤(1)中的缩合剂为o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(hbtu)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(hctu)、二环己基碳二亚胺(dcc)、n,n'-二异丙基碳二亚胺(dic)或(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺)(edci)中的至少一种。
进一步，所述的步骤(1)中的辅助试剂为1-羟基苯并三唑(hobt)、二异丙基乙基胺(dipea)、三乙胺(tea)或4-二甲氨基吡啶(dmap)中的至少一种
进一步，所述的缩合剂为hbtu，所述的辅助试剂为dipea与hobt的混合物；其中，所述的hbtu的用量为1-10当量，所述的hobt的用量为1-10当量，所述的dipea用量为1-50当量。
进一步，所述的步骤(1)中化合物1与化合物2的摩尔比为1：(1-10)；所述的二甲基甲酰胺的用量为每毫摩尔化合物1加二甲基甲酰胺1-100ml。
进一步，所述的步骤(2)中化合物3与dmf和nmp的质量体积比为1g:(1-100)ml；其中，所述的混合液中dmf和nmp的体积比为100：(1-100)。
进一步，所述的步骤(3)中化合物5与三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂的质量比为1：(1-100)；其中，所述的混合溶剂中三氟乙酸的体积含量为20-100％。
进一步，所述的步骤(3)中得到的棕色固体6-蝶呤基叶酸的纯度为70-80％。
所述的合成方法制备得到的6-蝶呤基叶酸的用途，所述的6-蝶呤基叶酸用于叶酸的质谱检测杂质标准品。
相对于现有技术，本发明所述的6-蝶呤基叶酸的合成方法具有以下优势：
本发明所述的6-蝶呤基叶酸的合成方法可用于大量制备叶酸杂质6-蝶呤基叶酸的标准品，纯度可达70-80％；该方法简单，可准确、有效的检测出叶酸中杂质6-蝶呤基叶酸的含量。
附图说明
图1为本发明实施例所述的6-蝶呤基叶酸的制备路线。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例及附图来详细说明本发明。
实施例1
一种6-蝶呤基叶酸的合成方法，包括如下步骤：
(1)化合物3的合成：将化合物1蝶酸(4g，12.8mmol)和化合物2谷氨酸二叔丁酯盐酸盐(4.9g，16.6mmol)，加入到二甲基甲酰胺(100-200ml)中，加入hbtu(7.3g，19.2mmol)、hobt(2.6g，19.2mmol)和二异丙基乙基胺(6.5g，50mmol)，该混合物在室温搅拌过夜，将反应液倒入蒸馏水中(1000ml)，析出固体，经过滤、用蒸馏水洗涤，得到固体粗品。滤液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶剂，得到固体粗品，将两部分固体合并，真空干燥，得粗品化合物3(5g)，收率70.5％；
(2)化合物5的合成：将化合物3(2.6g，4.7mmol)加入到dmf(40ml)和nmp(5ml)混合液中，然后加入蝶呤甲基溴化物(3.2g，9.4mmol)，混合物于室温至60℃搅拌24小时，反应液冷却至室温后倒入蒸馏水中，析出固体，经过滤，蒸馏水洗，干燥得棕色固体化合物5，3.2g；
(3)化合物6的合成：将化合物5溶于三氟乙酸(30ml)和二氯甲烷(15ml)的混合溶剂中，混合物于室温搅拌4小时，将溶剂浓缩至约5ml，搅拌下慢慢加入蒸馏水(50ml)，析出棕色固体，固体过滤，蒸馏水洗涤，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中(5ml)，再次加入蒸馏水，析出的固体经过滤、蒸馏水洗涤，真空干燥后的得棕色固体6-蝶呤基叶酸化合物，157mg，收率5.4％。质谱检测结果显示分子离子峰[m+h]+＝617，纯度约70-80％。该产品溶解性极差，经过酸碱处理和hplc纯化均不能得到更高纯度的产品。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。