用微生物高水平生产长链二羧酸的制作方法

技术特征：

1.一种包含工程化的LCDA生产途径的重组微生物细胞，所述LCDA生产途径包括编码长链酰基辅酶A合成酶(ACoS酶)的多核苷酸序列的上调，

其中所述微生物细胞可以从含有长链脂肪酸的底物生产一种或多种长链二羧酸(LCDA)产物。

2.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中所述ACoS酶包含与SEQ ID NO：44、49、36、33或34具有至少90％同一性的氨基酸序列。

3.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中所述ACoS酶具有长链酰基辅酶A合成酶活性和香豆酰辅酶A合成酶活性两者。

4.如权利要求3所述的重组微生物细胞，其中所述ACoS酶包含与SEQ ID NO：44或49具有至少90％同一性的氨基酸序列。

5.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中所述工程化的LCDA生产途径进一步包括以下特征中的一种或多种：

(i)编码细胞色素P450单加氧酶(CYP酶)的多核苷酸序列的上调

(ii)编码细胞色素P450还原酶(CPR酶)的多核苷酸序列的上调，

(iii)编码脂肪醇氧化酶(FAO酶)的多核苷酸序列的上调，

(iv)编码脂肪醇脱氢酶(FADH酶)的多核苷酸序列的上调，和/或

(v)编码脂肪醛脱氢酶(FALDH酶)的多核苷酸序列的上调。

6.如权利要求5所述的重组微生物细胞，其中编码所述CYP酶的多核苷酸序列和编码所述CPR酶的多核苷酸序列之一或两者被上调。

7.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中所述微生物细胞进一步包括编码过氧化物酶体生物合成因子的内源多核苷酸序列的下调。

8.如权利要求7所述的重组微生物细胞，其中所述过氧化物酶体生物合成因子是过氧化物酶体生物合成因子-3。

9.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中所述微生物细胞进一步包括编码过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶的内源多核苷酸序列的下调。

10.如权利要求9所述的重组微生物细胞，其中所述过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶是过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶-2、-3和/或-4。

11.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中所述微生物细胞具有降低的脂质合成和/或储存能力。

12.如权利要求11所述的重组微生物细胞，其中所述降低的脂质合成和储存能力是由于至少一种编码二酰基甘油酰基转移酶(DGAT酶)的内源多核苷酸序列的下调。

13.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中所述微生物细胞是酵母细胞。

14.如权利要求13所述的重组微生物细胞，其中所述酵母细胞是耶氏酵母属(Tarrowia)细胞。

15.如权利要求1所述的重组微生物细胞，其中：

所述LCDA产物具有10至24个碳原子的链长度，和/或

所述含有长链脂肪酸的底物包含游离的长链脂肪酸或酯化的长链脂肪酸。

16.一种生产长链二羧酸(LCDA)的方法，所述方法包括：

a)使权利要求1所述的重组微生物细胞与含有长链脂肪酸的底物接触，其中所述微生物细胞从所述底物合成LCDA；并且

b)任选地回收步骤(a)的LCDA。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述微生物细胞是酵母细胞，并且任选地其中所述酵母细胞是耶氏酵母属细胞。