一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法与流程

文档序号:12712109阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法,包括如下步骤:

(1)、乙醇浸泡小球藻:称取原料小球藻2g,加入40 ml的乙醇室温25℃浸泡24 h,后离心去除用水冲洗3-4次离心;

(2)、保留步骤(1)得到的离心上清液和离心沉淀;

(3)、纤维素酶处理:取步骤(1)的离心沉淀加入20ml水,用NaH2PO3 缓冲溶液调整pH5.0-5.5,加入纤维素酶1%,在水浴50℃中酶解3h,后100℃灭酶10min;

(4)、超声处理:往步骤(3)的产物中加入50ml水后,经超声破碎蛋白核小球藻细胞;

(5)、剪切处理:将步骤(4)的产物用超高速细胞剪切仪剪切,破碎蛋白核小球藻细胞;

(6)、取步骤(5)的产物,离心用水冲洗3-4次后收集离心上清液;

(7)、合并步骤(2)和步骤(6)获得的离心上清液。

2.根据专利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中的乙醇浓度为75%。

3.根据专利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)和步骤(6)中离心时的离心转速为5000r/min,时间为10min。

4.根据专利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(4)中超声处理的超声功率为1000W,时间为24min。

5.根据专利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(5)中剪切处理的剪切速度为8000r/min,时间为10min。

6.根据权利要求1~5中任一权利要求所述的方法,其特征在于:所述方法还包括对步骤(1)和步骤(6)中所得的离心上清液用微量法96孔板测定蛋白的提取率和用BCA试剂盒测蛋白含量的步骤。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,对步骤(1)和步骤(6)中所得的离心上清液用BCA试剂盒测蛋白含量的具体过程为:将上清液稀释20倍,取10μL稀释液用BAC试剂盒在562nm波长下测其中的蛋白含量,及全波扫描吸光度。

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