本发明属于药物领域，具体涉及一种4-氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐、其制备方法、以及它们作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂的用途。
技术背景
布鲁顿酪氨酸激酶(btk)是非受体酪氨酸蛋白激酶tec家族的一员，由659个氨基酸组成，内含多个结构域，如pleckstrinhomology(ph)结构域、techomology(th)结构域、srchomology3(sh3)结构域、sh2和sh1结构域(futuremedchem,2014,6(6):675-695)。研究表明，btk作为b细胞受体(bcr)信号转导通路的重要组成部分，在b细胞的发育、成熟、分化和增殖等诸多生理过程中发挥极其重要的作用(nature,1993,361(6409):226-233)。
btk的精确调控对维持b细胞的正常生理功能至关重要(anticanceragentsmedchem,2007,7(6):624-632)。btk的过度活化会引起b细胞凋亡减慢，并且易发生自体免疫反应，从而诱导b细胞淋巴瘤和炎症等疾病的发生和发展(intrevimmunol,2012,31(2):119-132)。
研究表明，btk在多种b细胞淋巴瘤中均过度表达(blood,2011,117(23):6287-6296；leukres,2013,37(10):1271-1277；nature,2010,463(7277):88-92；clinpharmacolther,2015,97(5):469-477)。如在慢性淋巴性白血病小鼠模型中，btk的过度表达导致肿瘤发生率和死亡率增加(amjbloodres,2013,3(1):71-83)；在套细胞淋巴瘤细胞中，btktyr223出现持续自动磷酸化，从而导致btk过度活化(blood,2013,122(14):2412-2424)。btk功能获得型突变导致的过度活化也在急性淋巴细胞白血病(leuklymphoma,2003,44(6):1011-1018)、急性髓性白血病(expertopintherpatents,2010,20(11):1457-1470)和慢性髓性白血病(biochembiophysrescommun,2002,299(3):510-515)中得到确证。通过抑制btk的活性能降低抗凋亡蛋白bcl-2、bcl-xl和mcl-1的水平，从而促进b细胞淋巴瘤凋亡(leukres,2013,37(10):1271-1277)。
此外，btk与自身免疫性疾病密切相关。除bcr信号通路外，btk还参与调控体内的其他信号通路，如fcγ受体信号通路(natchembiol,2011,7(1):4-5)和toll样(tlr)信号通路(jleukocbiol,2014,95(2):243-250)。fcγ受体信号通路的激活最终导致tnfα、il-1β和il-6等炎症因子的释放(drugdiscovtoday,2014,19(8):1200-1204)，而tlr信号通路的活化与转录因子nf-κb的激活、促炎/抗炎细胞因子的释放密切相关(jclinoncol,2014,32(17):1830-1839)。实验证明，在胶原蛋白诱导关节炎的小鼠模型中，btk抑制剂可降低自身抗体水平，有效控制疾病的发生与发展；在小鼠mrl/lpr系统性红斑狼疮模型中，btk抑制剂可减少抗体的产生，并且能降低肾损害的风险；大鼠嗜碱性白血病细胞模型经小分子干扰核糖核酸(sirna)和lfm-a13处理后，组胺的含量减少了20-25％(procnatlacadsciusa,2010,107(29):13075-13080；natchembiol,2011,7(1):41-50)。
文献还报道了btk和异种免疫性疾病、血栓栓塞疾病的联系(expertopintherpatents,2010,20(11):1457-1470)。在骨髓移植的小鼠模型中，移植物抗宿主病(gvhd)预防处方添加btk抑制剂可以显著改善异体骨髓移植的存活率。而x-连锁无丙种球蛋白血症(一种由btk突变失活导致的先天性免疫缺陷疾病)患者体内，血小板响应于胶原或胶原相关肽的聚集、分泌能力明显降低。
综上所述，btk已成为目前b细胞淋巴瘤和炎性疾病治疗领域中的一个有效靶标。目前已有多个btk抑制剂(如bms-986142、m-2951、cc-292、gdc-0853)开展治疗b细胞淋巴瘤、类风湿性关节炎、
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于提供了一种4-氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐、其制备方法、药物组合物及应用。本发明的化合物具有良好的btk抑制活性，可以用于治疗和/或预防btk过度激活所引起的相关疾病。
本发明公开通式(i)所示的4-氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
l代表c(o)或c(o)nh(ch2)m；
m代表0～5的整数；
各个r1各自独立地代表卤素、氰基、硝基、羟基、氨基、三氟甲基、or3、nhr3或(c1-c8)烷基；
n代表0～5的整数；
r2任选自：nh(c1-c8)烷基nhr4，
r3代表(c1-c8)烷基、(c1-c8)烷氧基(c1-c8)烷基、(c6-c10)芳基或(c1-c10)芳杂环基；其中所述的芳杂环基团可任选地包含一个或多个选自o、s或n的其它杂原子；所述的芳基和芳杂环基可任选地用一个至五个以下基团取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、(c1-c8)烷基、(c1-c8)烷氧基或(c3-c6)环烷基；
r4代表丙酰基、丙烯酰基或2-氯乙酰基；
其中，下式(a-d)化合物除外：
进一步地，具有通式(i)的4-氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
l代表c(o)或c(o)nh(ch2)m；
m代表0～2的整数；
各个r1各自独立地代表卤素、(c1-c5)烷基、(c1-c5)烷氧基或苯氧基；
n为0～2的整数；
r2任选自：nh(c1-c8)烷基nhr4，
r4代表丙酰基、丙烯酰基或2-氯乙酰基。
更进一步地，具有通式(i)的4-氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
l代表c(o)或c(o)nh(ch2)m；
m代表0～2的整数；
各个r1各自独立地代表卤素、(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷氧基或苯氧基；
n为0～2的整数；
r2任选自：nh(c1-c5)烷基nhr4，
r4代表丙酰基、丙烯酰基或2-氯乙酰基。
具体来说，通式(i)所示的4-氨基嘧啶类化合物优选自下列化合物：
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-1)；
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-2)；
1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-3)；
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-4)；
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-5)；
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-6)；
(r)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-7)；
1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]氮杂环丁烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-8)；
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-9)；
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-10)；
n-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]乙基]丙烯酰胺(a-11)；
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]丙烷-1-酮(a-12)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-1)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-溴苯基)甲酰胺(b-2)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-异丙基苯基)甲酰胺(b-3)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(b-4)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-5)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-6)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(2-氟苯基)甲酰胺(b-7)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-氟苯基)甲酰胺(b-8)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-氟苯基)甲酰胺(b-9)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苄基甲酰胺(b-10)；
(r)-[4-[(1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-11)；
(s)-[4-[[(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基]氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-12)；
(r)-[4-[(1-丙酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-13)。
下面药理实验中涉及的化合物代号等同于此处代号所对应的化合物。
本发明的另一目的在于提供通式(i)所示化合物的制备方法，其特征在于：
a)当l为c(o)时，通式(i)所示化合物的制备方法为：以4,6-二羟基嘧啶为原料，经vilsmeier-haack反应和氯代反应制得4,6-二氯-5-嘧啶甲醛1，1经亚氯酸钠氧化制得4,6-二氯-5-嘧啶羧酸2，2与草酰氯反应制得酰氯后与芳烃进行friedel-crafts酰基化反应制得(4,6-二氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮3，3与氨水反应制得(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮4，4与胺类化合物(nh2y-boc或nh2yh)反应制得5-1或5-2，5-1脱boc保护基后与酰氯反应，或5-2直接与酰氯反应制得通式(i)化合物：
其中，r1和r2的定义如前所述。
b)当l为c(o)nh(ch2)m时，通式(i)所示化合物的制备方法为：中间体2与草酰氯反应制得酰氯后与胺类化合物缩合生成酰胺6，6与氨水反应制得中间体7，7与胺类化合物(nh2y-boc)反应制得8，8经浓盐酸处理脱boc后制得9，最后9与酰氯反应制得通式(i)化合物：
其中，m、n、r1和r2的定义如前所述。
所述通式(i)化合物的药学上可接受的盐可通过一般的化学方法合成。
一般情况下，盐的制备可以通过游离碱或酸与等化学当量或过量酸(无机酸或有机酸)或碱(无机碱或有机碱)在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。
本发明还提供了一种药物组合物，其由治疗上有效量的活性组分和药学上可接受的辅料组成；所述的活性组分包括通式(i)化合物和其药学上可接受的盐中的一种或多种。所述药物组合物中，所述的辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
根据治疗目的可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液和悬浮液)等，优选片剂、胶囊、液体、悬浮液、和针剂(溶液和悬浮液)。
为了使片剂、丸剂或栓剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋形剂。
为了制备针剂形式的药物组合物，可将溶液或悬浮液消毒后(最好加入适量的氯化钠，葡萄糖或甘油)，制成与血液等渗压的针剂。在制备针剂时，也可以使用本领域内任何常用的载体。例如：水、乙醇、丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、聚乙氧基化的异硬脂醇和聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，还可以加入通常溶解剂和缓冲剂等。
本发明所述的组合物在药物组合物中的含量无特殊限制，可在很宽的范围内进行选择，通常可为质量百分比的5～95％，优先为质量百分比的30～85％。
本发明所述的药物组合物的给药方法没有特殊限制。可根据患者年龄、性别和其它条件及症状，选择各种剂型的制剂给药。
本发明另外提供了所述通式(i)化合物、其药学上可接受的盐或所述药物组合物在制备btk抑制剂中的应用。所述的btk抑制剂用于治疗血栓栓塞、华氏巨球蛋白血症、炎性病症、自身免疫性疾病和b细胞淋巴瘤。
所述的炎性或自身免疫性疾病包括但不限于：异种免疫性疾病、哮喘、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫介导的溶血性贫血、免疫复合体介导的脉管炎和银屑病中的一种或多种。
所述的b细胞淋巴瘤包括但不限于：慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和b细胞非霍奇金淋巴瘤中的一种或多种。
具体实施方式
为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1
4,6-二氯-5-嘧啶甲醛(1)的制备
将dmf(5.50ml,71.34mmol)于冰浴下缓慢滴入pocl3(17.00ml,185.71mmol)，搅拌反应1h，撤去冰浴，加入4,6-二羟基嘧啶(4.00g,35.68mmol)，升温回流3h，冷却至室温，倒入冰水中，二氯甲烷萃取，减压浓缩，石油醚-乙酸乙酯(p:e＝4:1(v:v))重结晶，得黄色固体4.74g，收率75.4％，mp68-70℃。esi-ms:177[m+h]+；1hnmr(300mhz,cdcl3)：δ(ppm):8.89(s,1h),10.43(s,1h)。
4,6-二氯-5-嘧啶羧酸(2)的制备
1(4.00g,22.72mmol)和nah2po4(9.55g,79.58mmol)溶于60ml叔丁醇和10ml水混合溶剂中，冰浴下加入naclo2(7.66g,84.69mmol)，反应1h，减压蒸去叔丁醇，倒入水中，盐酸调ph至5，乙酸乙酯萃取减压浓缩，得黄色固体3.12g，收率71.5％，mp131-133℃。esi-ms:190.9[m-h]-；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.00(s,1h).
(4,6-二氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮(3)的制备
2(3.00g,15.63mmol)溶于20ml无水thf中，滴加草酰氯(4.00ml,46.87mmol)和2滴dmf，室温反应4h，减压蒸去溶剂和剩余的草酰氯，无水ch2cl2溶解，移至恒压滴液漏斗，冰浴下滴加至二苯醚(12.40ml,8.31mmol)和alcl3(3.12g,23.46mmol)的无水ch2cl2中，滴毕，回流反应3h，倒入冰水，浓盐酸调ph至2，ch2cl2萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[石油醚:乙酸乙酯(p:e)＝5:1(v:v)]，得白色固体3.82g，收率71.1％，mp91-93℃。esi-ms:345[m+h]+；1hnmr(300mhz,cdcl3):δ(ppm):7.07(d,j＝8.97hz,2h),7.13(d,j＝9.72hz,2h),7.26(t,j＝6.27hz,1h),7.44(t,j＝7.53hz,2h),7.80(d,j＝9.72hz,2h),8.91(s,1h).
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)(4-苯氧苯基)甲酮(4)的制备
3(1.0g,2.91mmol)加入25ml乙醇和氨水(8ml,52.0mmol)，室温反应24h，冰浴冷却，抽滤，干燥，得白色固体0.51g，收率53.9％，mp264-266℃。esi-ms:324[m-h]-；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):7.07(d,j＝8.82hz,2h),7.16(d,j＝7.68hz,2h),7.28(t,j＝7.35hz,1h),7.35(s,2h),7.49(t,j＝7.86hz,2h),7.84(d,j＝8.79hz,2h),8.32(s,1h).
(s)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5a)的制备
4(0.30g,0.92mmol)溶于20ml乙醇中，加入(s)-1-boc-3-氨甲基哌啶(0.26g,1.20mmol)和dipea(0.18ml,1.01mmol)，回流反应48h，乙酸乙酯溶解，抽滤，柱层析纯化[p:e＝1:1(v:v)]，得淡黄色固体0.24g，收率51.8％。esi-ms:504[m+h]+.
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-1)的制备
5a(0.20g,0.40mmol)溶于20mlch2cl2中，冰浴下加入浓盐酸(0.33ml,4.0mmol)，滴毕室温反应12h，减压浓缩后重新溶于四氢呋喃-水(thf:h2o＝5:1(v:v))混合体系，加入nahco3(0.10g,1.20mmol)，冰浴条件下滴加丙烯酰氯(0.04ml,0.46mmol)，室温反应过夜，减压蒸馏除去thf，剩余反应液加入适量水，ch2cl2萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[乙酸乙酯(ea)]，得黄色固体0.04g，收率17.6％。esi-ms:458[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.01(s,1h),7.69(d,j＝8.2hz,2h),7.44(t,j＝7.7hz,2h),7.22(t,j＝7.4hz,1h),7.10-6.99(m,4h),6.79-6.52(m,3h),6.02(d,j＝17.0hz,1h),5.59(t,j＝13.1hz,1h),4.20-3.69(m,3h),3.23(s,2h),3.08-2.95(m,1h),2.79(s,1h),1.61(s,3h),1.20(d,j＝31.9hz,2h).
实施例2
(r)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5b)的制备
参照5a的制备方法，由4和(r)-1-boc-3-氨甲基哌啶反应得淡黄色固体，收率56.2％。esi-ms:504[m+h]+.
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-2)的制备
参照a-1的制备方法，由5b脱boc保护基后与丙烯酰氯反应制得黄色固体，收率17.2％。esi-ms:458[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):7.97(s,1h),7.65(d,j＝8.2hz,2h),7.39(d,j＝8.7hz,2h),7.19(s,1h),7.09-6.94(m,4h),6.64(s,3h),5.99(d,j＝16.7hz,1h),5.57(s,1h),4.20-3.62(m,3h),3.18(s,2h),2.98(s,1h),2.74(s,1h),1.57(s,3h),1.16(d,j＝24.2hz,2h).
实施例3
[4-氨基-6-[(哌啶-2-甲基)氨基]嘧啶-5-基](4-苯氧苯基)甲酮(5c)的制备
参照5a的制备方法，由4和2-氨甲基哌啶反应得淡黄色固体，收率45.8％。esi-ms:404[m+h]+.
1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-3)的制备
5c(0.23g,0.57mmol)溶于18ml四氢呋喃-水(thf:h2o＝5:1(v:v))混合体系，加入nahco3(0.14g,1.71mmol)，冰浴条件下滴加丙烯酰氯(0.06ml,0.68mmol)，室温反应过夜，减压蒸馏除去thf，剩余反应液加入适量水，ch2cl2萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化[乙酸乙酯(ea)]，得黄色固体0.04g，收率16.0％。esi-ms:458[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.04(s,1h),7.65(d,j＝8.3hz,2h),7.45(t,j＝7.9hz,2h),7.25(q,j＝8.6,7.4hz,2h),7.11(d,j＝8.0hz,2h),7.00(d,j＝8.4hz,2h),6.65(dd,j＝16.4,10.6hz,1h),6.50(s,2h),5.92(d,j＝16.3hz,1h),5.46(d,j＝11.0hz,1h),4.33(s,1h),3.62(s,2h),2.72(t,j＝13.1hz,1h),1.64-1.47(m,5h),1.23(s,2h).
实施例4
(r)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5d)的制备
参照5a的制备方法，由4和(r)-1-boc-3-氨基吡咯烷反应得淡黄色固体，收率57.1％。esi-ms:476[m+h]+.
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-4)的制备
参照a-1的制备方法，由5d脱boc保护基后与丙烯酰氯反应制得黄色固体，收率19.5％。esi-ms:430[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.06(s,1h),7.64(dd,j＝8.8,2.5hz,2h),7.45(t,j＝7.8hz,2h),7.27-7.19(m,1h),7.11(td,j＝7.3,1.3hz,2h),6.99-6.79(m,5h),6.49(ddd,j＝16.8,10.3,3.6hz,1h),6.11(dt,j＝16.8,2.5hz,1h),5.63(ddd,j＝10.3,4.4,2.5hz,1h),4.57(dq,j＝37.8,5.8hz,1h),3.66(ddd,j＝67.6,11.7,6.4hz,2h),3.21(dq,j＝9.5,5.9,5.4hz,1h),2.15-1.91(m,1h),1.75(ddt,j＝33.0,12.9,6.0hz,1h),1.31-1.12(m,1h).
实施例5
(s)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5e)的制备
参照5a的制备方法，由4和(s)-1-boc-3-氨基吡咯烷反应得淡黄色固体，收率52.8％。esi-ms:476[m+h]+.
(s)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-5)的制备
参照a-1的制备方法，由5e脱boc保护基后与丙烯酰氯反应制得黄色固体，收率13.0％。esi-ms:430[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.59(s,1h),7.82-7.71(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.22-7.05(m,3h),7.05-6.93(m,2h),6.62(dd,j＝10.0,16.8hz,1h),6.28(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.67(dd,j＝13.8,16.7hz,1h),4.09(s,2h),3.88(dd,j＝6.9,9.4hz,1h),3.62-3.37(m,3h),3.30(p,j＝6.9hz,1h),2.24-2.06(m,1h),1.92-1.74(m,1h),0.93(s,1h).
实施例6
(s)-2-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5f)的制备
参照5a的制备方法，由4和(s)-1-boc-2-氨甲基吡咯烷反应得淡黄色固体，收率47.9％。esi-ms:490[m+h]+.
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-6)的制备
参照a-1的制备方法，由5f脱boc保护基后与丙烯酰氯反应制得黄色固体，收率18.6％。esi-ms:444[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.08(s,1h),7.69(dd,j＝8.7,11.5hz,3h),7.49-7.42(m,3h),7.24(dd,j＝1.5,7.5hz,2h),7.09(dq,j＝1.1,7.5hz,3h),7.05-6.99(m,3h),6.66-6.47(m,3h),6.11(ddd,j＝2.6,16.7,19.1hz,1h),5.65(dt,j＝3.1,10.2hz,1h),4.15(s,1h),1.76(d,j＝13.6hz,2h),1.69(s,2h).
实施例7
(r)-2-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5g)的制备
参照5a的制备方法，由4和(r)-1-boc-2-氨甲基吡咯烷反应得淡黄色固体，收率56.1％。esi-ms:490[m+h]+.
(r)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-7)的制备
参照a-1的制备方法，由5g脱boc保护基后与丙烯酰氯反应制得黄色固体，收率18.9％。esi-ms:444[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.08(s,1h),7.69(dd,j＝8.5,11.3hz,3h),7.48-7.42(m,3h),7.24(d,j＝6.8hz,2h),7.12-7.08(m,3h),7.02(dd,j＝5.3,8.6hz,3h),6.64-6.47(m,3h),6.18-6.04(m,1h),5.67-5.62(m,1h),4.16(s,1h),1.77(d,j＝14.2hz,2h),1.70(s,2h).
实施例8
3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨甲基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(5h)的制备
参照5a的制备方法，由4和1-boc-3-氨甲基氮杂环丁烷反应得淡黄色固体，收率59.7％。esi-ms:476[m+h]+.
1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]氮杂环丁烷-1-基]-2-丙烯-1-酮(a-8)的制备
参照a-1的制备方法，由5h脱boc保护基后与丙烯酰氯反应制得黄色固体，收率16.9％。esi-ms:430[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.41(s,1h),7.84-7.73(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.22-7.05(m,3h),7.05-6.93(m,2h),6.62(dd,j＝10.0,16.8hz,1h),6.27(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.69(dd,j＝13.8,16.8hz,1h),5.07(s,1h),4.53(s,2h),3.99(dd,j＝7.0,11.2hz,2h),3.61(dd,j＝7.0,11.2hz,2h),3.24(d,j＝7.0hz,2h),2.88(hept,j＝6.9hz,1h).
实施例9
(r)-3-[[6-氨基-5-(4-苯氧基苯甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5i)的制备
参照5a的制备方法，由4和(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率67.5％，mp68-70℃。esi-ms:512[m+na]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):1.16(t,j＝6.96hz,2h),1.22～1.24(m,2h),1.32(s,9h),1.49～1.51(m,1h),1.70～1.72(m,1h),2.24～2.26(m,1h),4.00～4.02(m,1h),6.76(s,2h),7.01(d,j＝8.70hz,2h),7.16(d,j＝7.68hz,3h),7.22(t,j＝7.41hz,1h),7.44(t,j＝8.19hz,2h),7.65(d,j＝8.64hz,2h),8.02(s,1h).
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-9)的制备
参照a-1的制备方法，由5i脱boc保护基后与氯乙酰氯反应制得黄色固体，收率19.7％。esi-ms:466[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.58(s,1h),7.82-7.72(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.18-7.04(m,3h),7.05-6.93(m,2h),4.51(d,j＝12.3hz,1h),4.43-4.23(m,2h),4.05(s,2h),3.86(dd,j＝6.8,12.3hz,1h),3.34-3.08(m,2h),2.89(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),2.13-1.95(m,1h),1.80-1.47(m,3h),1.07(s,1h).
实施例10
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]-2-氯乙烷-1-酮(a-10)的制备
参照a-1的制备方法，由5f脱boc保护基后与氯乙酰氯反应制得黄色固体，收率20.2％。esi-ms:466[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.54(s,1h),7.82-7.71(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.19-7.05(m,3h),7.05-6.93(m,2h),5.07(s,1h),4.74(d,j＝12.4hz,1h),4.17(d,j＝12.4hz,1h),4.16-3.97(m,1h),3.93(s,2h),3.90-3.66(m,3h),3.35(dt,j＝6.8,9.4hz,1h),2.20-1.85(m,3h),1.90-1.69(m,1h).
实施例11
[4-氨基-6-[(2-氨基乙基)氨基]嘧啶-5-基](4-苯氧苯基)甲酮(5j)的制备
参照5a的制备方法，由4和乙二胺反应得淡黄色固体，收率49.7％。esi-ms:350[m+h]+.n-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]乙基]丙烯酰胺(a-11)的制备
参照a-3的制备方法，由5j和丙烯酰氯反应得黄色固体，收率18.2％。esi-ms:404[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.57(s,1h),7.74-7.63(m,2h),7.41-7.27(m,2h),7.12(ddt,j＝2.1,6.3,8.3hz,3h),7.05-6.93(m,2h),6.62(s,1h),6.48(dd,j＝10.1,16.7hz,1h),6.07(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.79(dd,j＝13.8,16.6hz,1h),5.07(s,1h),3.96-3.82(m,4h),3.51(t,j＝4.9hz,2h).
实施例12
(s)-1-[2-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-基]丙烷-1-酮(a-12)的制备
参照a-1的制备方法，由5f脱boc保护基后与丙酰氯反应制得黄色固体，收率19.8％。esi-ms:446[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.01(d,j＝8.8hz,1h),7.69(dd,j＝8.7,10.2hz,2h),7.50-7.41(m,2h),7.23(t,j＝7.6hz,1h),7.17-7.08(m,2h),7.02(dd,j＝4.3,8.7hz,2h),6.66(s,1h),6.59(s,1h),4.01(d,j＝8.7hz,1h),3.45(dq,j＝6.0,7.0,12.7hz,4h),2.43(dd,j＝5.3,7.5hz,1h),2.23-2.13(m,1h),1.77(s,1h),1.66(s,1h),1.25-1.15(m,2h),1.02-0.88(m,4h).
实施例13
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-苯基甲酰胺(6a)的制备
2(2.0g,10.36mmol)溶于20ml无水thf中，滴加草酰氯(2.65ml,31.09mmol)和2滴dmf，室温反应4h，减压蒸去溶剂和剩余的草酰氯，无水ch2cl2溶解，移至恒压滴液漏斗，冰浴下滴加至苯胺(1.04ml,11.39mmol)和三乙胺(3.14g,31.07mmol)的无水ch2cl2中，滴毕，室温反应过夜，反应液倒入适量水中，ch2cl2萃取，无水硫酸镁干燥，减压浓缩，抽滤，少量ch2cl2洗涤，滤饼烘干后得到白色固体1.47g，收率52.9％。esi-ms:268[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-苯基甲酰胺(7a)的制备
6a(1.0g,3.72mmol)加入25ml乙酸乙酯和氨水(10ml,67.1mmol)，室温反应24h，冰浴冷却，抽滤，干燥，得白色固体0.74g，收率79.8％。esi-ms:249[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-(苯氨基甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8a)的制备
参照5a的制备方法，由7a与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率57.9％。esi-ms:413[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-1)的制备
参照a-1的制备方法，由8a脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率18.9％。esi-ms:367[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.93(s,1h),7.98(s,1h),7.70–7.62(m,2h),7.31(t,j＝7.8hz,2h),7.06(t,j＝7.4hz,1h),6.62(s,3h),6.05(dd,j＝2.4,16.8hz,1h),5.62(dd,j＝2.4,10.4hz,1h),4.31–3.75(m,2h),3.15(s,3h),1.91(s,1h),1.75-1.37(m,3h),1.24(s,1h).
实施例14
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(4-溴苯基)甲酰胺(6b)的制备
参照6a的制备方法，由2和4-溴苯胺反应得白色固体，收率53.8％。esi-ms:346[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(4-溴苯基)甲酰胺(7b)的制备
参照7a的制备方法，由6b反应得白色固体，收率80.1％。esi-ms:327[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(4-溴苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8b)的制备
参照5a的制备方法，由7b与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率53.3％。esi-ms:491[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-溴苯基)甲酰胺(b-2)的制备
参照a-1的制备方法，由8b脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率17.5％。esi-ms:445[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.50(s,1h),8.07(s,1h),7.72-7.61(m,2h),7.55-7.45(m,2h),6.62(dd,j＝10.1,16.8hz,1h),6.17(dd,j＝10.1,13.8hz,1h),5.66(dd,j＝13.8,16.8hz,1h),4.50(s,2h),4.28(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),3.69(dd,j＝6.9,12.4hz,1h),3.32(dd,j＝7.0,12.4hz,1h),3.16(p,j＝6.9hz,1h),2.94(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),2.15-1.96(m,1h),1.81-1.46(m,3h),1.23(s,1h).
实施例15
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(4-异丙基苯基)甲酰胺(6c)的制备
参照6a的制备方法，由2和4-异丙基苯胺反应得白色固体，收率62.3％。esi-ms:310[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(4-异丙基苯基)甲酰胺(7c)的制备
参照7a的制备方法，由6c反应得白色固体，收率83.1％。esi-ms:291[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(4-异丙基苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8c)的制备
参照5a的制备方法，由7c与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率66.5％。esi-ms:455[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-异丙基苯基)甲酰胺(b-3)的制备
参照a-1的制备方法，由8c脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率19.2％。esi-ms:409[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.88(d,j＝14.8hz,1h),7.97(s,1h),7.56(d,j＝8.5hz,2h),7.17(d,j＝8.5hz,2h),6.96(d,j＝30.9hz,1h),6.80-6.53(m,3h),6.04(dd,j＝2.4,16.8hz,1h),5.62(dd,j＝2.5,10.5hz,1h),3.91(d,j＝37.9hz,3h),3.14(dt,j＝8.1,19.1hz,2h),2.89-2.80(m,1h),1.91(s,1h),1.59(dd,j＝10.3,18.0hz,2h),1.50-1.40(m,1h),1.18(d,j＝6.9hz,6h).
实施例16
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(6d)的制备
参照6a的制备方法，由2和3-甲氧基-4-甲基苯胺反应得白色固体，收率49.9％。esi-ms:312[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(7d)的制备
参照7a的制备方法，由6d反应得白色固体，收率81.8％。esi-ms:293[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3-甲氧基-4-甲基苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8d)的制备
参照5a的制备方法，由7d与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率53.9％。esi-ms:457[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-甲氧基-4-甲基苯基)甲酰胺(b-4)的制备
参照a-1的制备方法，由8d脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率20.1％。esi-ms:411[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.11(s,1h),8.01(s,1h),7.50(d,j＝9.4hz,1h),7.41(d,j＝8.1hz,2h),7.21(d,j＝8.1hz,2h),6.55(dd,j＝10.6,17.0hz,1h),6.16(dd,j＝16.7,43.1hz,1h),5.60(d,j＝10.2hz,1h),5.45(d,j＝12.7hz,2h),4.00(d,j＝14.0hz,1h),3.30-3.13(m,2h),2.88(p,j＝6.9hz,1h),2.02(s,1h),1.61(dq,j＝7.3,8.1,16.6hz,3h),1.23(s,3h),1.21(s,3h).
实施例17
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(6e)的制备
参照6a的制备方法，由2和3,4-二甲氧基苯胺反应得白色固体，收率57.4％。esi-ms:328[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(7e)的制备
参照7a的制备方法，由6e反应得白色固体，收率81.0％。esi-ms:309[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8e)的制备
参照5a的制备方法，由7e与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率64.2％。esi-ms:473[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,4-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-5)的制备
参照a-1的制备方法，由8e脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率17.9％。esi-ms:427[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):9.80(d,j＝18.6hz,1h),7.98(s,1h),7.40(s,1h),7.18-7.13(m,1h),7.04-6.87(m,2h),6.58(s,3h),6.05(dd,j＝2.5,16.7hz,1h),5.63(d,j＝10.3hz,1h),3.90(d,j＝43.9hz,3h),3.73(d,j＝2.0hz,6h),3.18(d,j＝36.3hz,1h),1.95(d,j＝23.7hz,1h),1.66(s,2h),1.46(s,1h),1.21(d,j＝18.8hz,1h).
实施例18
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(6f)的制备
参照6a的制备方法，由2和3,5-二甲氧基苯胺反应得白色固体，收率63.0％。esi-ms:328[m+h]+.
(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(7f)的制备
参照7a的制备方法，由6f反应得白色固体，收率78.4％。esi-ms:309[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8f)的制备
参照5a的制备方法，由7f与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率52.3％。esi-ms:473[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3,5-二甲氧基苯基)甲酰胺(b-6)的制备
参照a-1的制备方法，由8f脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率19.3％。esi-ms:427[m+h]+；1hnmr(300mhz,chloroform-d):δ(ppm):8.43(s,1h),8.22(s,1h),6.82(d,j＝2.0hz,2h),6.62(dd,j＝10.0,16.7hz,1h),6.19(dd,j＝10.0,13.8hz,1h),6.02(t,j＝2.0hz,1h),5.67(dd,j＝13.8,16.7hz,1h),4.84(s,2h),4.39(dt,j＝7.0,12.6hz,1h),3.80(s,6h),3.75(dd,j＝7.0,12.5hz,1h),3.45(dd,j＝7.0,12.5hz,1h),3.16(p,j＝6.9hz,1h),2.90(dt,j＝7.0,12.5hz,1h),2.15-1.97(m,1h),1.81-1.46(m,3h),1.26(s,1h).
实施例19
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(2-氟苯基)甲酰胺(6g)的制备
参照6a的制备方法，由2和2-氟苯胺反应得白色固体，收率68.6％。esi-ms:286[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(2-氟苯基)甲酰胺(7g)的制备
参照7a的制备方法，由6g反应得白色固体，收率82.3％。esi-ms:267[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(2-氟苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8g)的制备
参照5a的制备方法，由7g与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率52.2％。esi-ms:431[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(2-氟苯基)甲酰胺(b-7)的制备
参照a-1的制备方法，由8g脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率16.9％。esi-ms:385[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.69(s,1h),7.95(d,j＝23.4hz,3h),7.69(s,1h),7.18(s,3h),6.73(s,2h),6.03(d,j＝16.5hz,1h),5.62(s,1h),4.25-4.16(m,1h),3.98(s,1h),3.79(s,1h),1.91(s,1h),1.62(s,2h),1.43(s,1h),1.21(s,1h),0.93-0.85(m,1h).
实施例20
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(3-氟苯基)甲酰胺(6h)的制备
参照6a的制备方法，由2和3-氟苯胺反应得白色固体，收率66.4％。esi-ms:286[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(3-氟苯基)甲酰胺(7h)的制备
参照7a的制备方法，由6h反应得白色固体，收率80.2％。esi-ms:267[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(3-氟苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8h)的制备
参照5a的制备方法，由7h与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率50.7％。esi-ms:431[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(3-氟苯基)甲酰胺(b-8)的制备
参照a-1的制备方法，由8h脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率18.4％。esi-ms:385[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):7.97(s,1h),7.65(dd,j＝4.8,9.4hz,3h),7.14(t,j＝8.7hz,2h),6.62(d,j＝15.9hz,2h),6.03(d,j＝16.6hz,1h),5.61(d,j＝10.4hz,1h),4.21(t,j＝6.6hz,1h),3.89(d,j＝42.3hz,3h),1.90(s,1h),1.67-1.58(m,2h),1.37(dt,j＝8.6,14.7hz,2h),1.19(d,j＝21.8hz,1h),0.90(t,j＝7.5hz,1h).
实施例21
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-(4-氟苯基)甲酰胺(6i)的制备
参照6a的制备方法，由2和4-氟苯胺反应得白色固体，收率67.5％。esi-ms:286[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-(4-氟苯基)甲酰胺(7i)的制备
参照7a的制备方法，由6i反应得白色固体，收率79.6％。esi-ms:267[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-[(4-氟苯基)氨基甲酰基]嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8i)的制备
参照5a的制备方法，由7i与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率60.4％。esi-ms:431[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-(4-氟苯基)甲酰胺(b-9)的制备
参照a-1的制备方法，由8i脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率19.0％。esi-ms:385[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ7.98(s,1h),7.75-7.57(m,2h),7.40-7.26(m,2h),6.87(t,j＝8.3hz,1h),6.65(d,j＝17.0hz,2h),6.04(dd,j＝2.4,16.7hz,1h),5.62(d,j＝10.3hz,1h),4.21(t,j＝6.5hz,1h),4.06-3.75(m,3h),1.90(s,1h),1.64(q,j＝7.1,7.6hz,2h),1.41-1.32(m,1h),1.15(d,j＝7.1hz,2h),0.90(t,j＝7.4hz,1h).
实施例22
(4,6-二氯嘧啶-5-基)-n-苄基甲酰胺(6j)的制备
参照6a的制备方法，由2和苄胺反应得白色固体，收率54.4％。esi-ms:282[m+h]+.(4-氨基-6-氯嘧啶-5-基)-n-苄基甲酰胺(7j)的制备
参照7a的制备方法，由6j反应得白色固体，收率80.9％。esi-ms:263[m+h]+.
(r)-3-[[6-氨基-5-(苄氨基甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(8j)的制备
参照5a的制备方法，由7j与(r)-1-boc-3-氨基哌啶反应得淡黄色固体，收率55.6％。esi-ms:427[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苄基甲酰胺(b-10)的制备
参照a-1的制备方法，由8j脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率17.7％。esi-ms:381[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.51(s,1h),7.95(s,1h),7.70(d,j＝8.6hz,1h),7.32(d,j＝4.7hz,4h),7.25(s,1h),7.08-6.57(m,2h),6.48(s,1h),6.06(d,j＝16.7hz,1h),5.63(s,1h),4.41-4.38(m,1h),4.23(t,j＝6.5hz,1h),3.94(s,1h),3.75(d,j＝12.9hz,1h),3.24(d,j＝10.6hz,1h),1.89(s,1h),1.65(t,j＝7.4hz,2h),1.43-1.34(m,1h),1.21(d,j＝21.3hz,1h),0.92(t,j＝7.4hz,1h)
实施例23
(r)-3-[[6-氨基-5-(苯氨基甲酰基)嘧啶-4-基]氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8k)的制备
参照5a的制备方法，由7a与(r)-1-boc-3-氨基吡咯烷反应得淡黄色固体，收率59.8％。esi-ms:399[m+h]+.
(r)-[4-[(1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-11)的制备
参照a-1的制备方法，由8k脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率18.6％。esi-ms:353[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):10.00(s,1h),8.00(s,1h),7.69-7.64(m,2h),7.30(t,j＝7.8hz,2h),7.07(d,j＝7.8hz,1h),6.64(s,2h),6.60-6.47(m,1h),6.12(dt,j＝2.7,16.9hz,1h),4.69-4.51(m,1h),4.23(t,j＝6.5hz,1h),3.68(td,j＝6.4,13.7,15.0hz,1h),2.14(dq,j＝6.7,18.7hz,1h),1.68-1.62(m,1h),1.44-1.33(m,2h),0.91(d,j＝7.4hz,2h).
实施例24
(s)-2-[[6-氨基-5-(苯氨基甲酰基)嘧啶-4-基]氨甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8l)的制备
参照5a的制备方法，由7a与(s)-1-boc-2-氨甲基吡咯烷反应得淡黄色固体，收率54.1％。esi-ms:413[m+h]+.
(s)-[4-[[(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)甲基]氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-12)的制备
参照a-1的制备方法，由8l脱boc保护基后与丙烯酰氯反应得黄色固体，收率19.4％。esi-ms:367[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.04(d,j＝6.1hz,1h),7.70(d,j＝7.7hz,2h),7.32(t,j＝7.9hz,3h),7.20(t,j＝5.6hz,1h),7.07(t,j＝7.4hz,1h),6.53(d,j＝5.3hz,2h),6.20-5.99(m,1h),5.71-5.59(m,1h),4.23(t,j＝6.5hz,2h),1.83(s,2h),1.68-1.61(m,1h),1.38(q,j＝6.5,7.4hz,1h),1.21(d,j＝20.9hz,2h),0.92(t,j＝7.4hz,2h).
实施例25
(r)-[4-[(1-丙酰基哌啶-3-基)氨基]-6-氨基嘧啶-5-基]-n-苯基甲酰胺(b-13)的制备
参照a-1的制备方法，由8a脱boc保护基后与丙酰氯反应制得黄色固体，收率21.1％。esi-ms:369[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):9.99(d,j＝3.7hz,1h),7.98(d,j＝9.1hz,1h),7.66(d,j＝8.0hz,2h),7.31(t,j＝7.8hz,2h),7.05(d,j＝7.1hz,1h),6.63(d,j＝19.9hz,2h),4.26-3.54(m,4h),2.86(dt,j＝11.3,48.2hz,1h),2.35-2.24(m,2h),1.90(d,j＝11.2hz,1h),1.68-1.55(m,2h),1.42-1.33(m,1h),1.18(t,j＝7.1hz,1h),1.00-0.94(m,3h).
实施例26
(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(b)的制备
参照a-1的制备方法，由5i脱boc保护基后与丙烯酰氯反应制得黄色固体，收率23.7％。esi-ms:444[m+h]+；1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ(ppm):8.04(s,1h),7.64(d,j＝6.21hz,2h),7.45(t,j＝6.48hz,2h),7.22(t,j＝7.08hz,1h),7.09(d,j＝6.75hz,2h),7.00(d,j＝8.34hz,2h),6.76(s,2h),6.55(dd,j＝6.96,15.38hz,1h),6.03(d,j＝16.32hz,1h),5.62(d,j＝9.23hz,1h),4.14-4.15(m,2h),3.74-3.76(m,1h),3.67-3.69(m,1h),1.77-1.79(m,1h),1.43-1.46(m,3h),1.23-1.25(m,2h).
实施例27
btk激酶活性的测试
采用放射性同位素p33-atp标记方法检测本发明化合物以及(r)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(化合物b)对btk激酶的抑制活性。放射性同位素检测方法的灵敏度很高，测试结果非常准确，因此被认为是蛋白激酶生化活性检测的“金标准”。
具体由reactionbiologycorp(malvempa)公司通过hotspot法测试。首先将8nm重组人源btk激酶(invitrogen,cat#pv3363)和0.2mg/ml底物pey在缓冲液中(20mmhepesph7.5,10mmmgcl2,1mmegta,0.02％brij35,0.02mg/mlbsa,0.1mmna3vo4,2mmdtt,1％dmso)室温下混合，然后化合物溶解于指示剂量的100％dmso中(从10μm不断稀释3倍)并通过acoustic技术(echo550；nanoliterrange)递送到激酶反应的混合液中，接着于室温下保持20min。随后加入10μm的33p-atp(specificalactivity10μci/μl)，反应开始，监测反应120min。激酶活性通过filter-binding法测定，ic50值和曲线拟合由prism(graphpadsoftware)实现。实验结果如表1所示。
表1本发明化合物对btk的抑制活性
实验结果表明，本发明的部分化合物对btk激酶的活性具有显著的抑制作用。其中，化合物a-1、a-2、a-8、a-9、a-10、b-2、b-9对btk的抑制活性与化合物b相当，而化合物a-4、a-6、b-1、b-7、b-8、b-11的活性则优于化合物b，尤其是化合物a-6和b-1的活性更是显著强于化合物b。另外，本发明化合物不同的立体异构体显示出各自不同的活性。例如，化合物a-1和a-2分别是s构型和r构型，前者(s构型)对btk的抑制活性略强于后者(r构型)；对于化合物a-4(r构型)和a-5(s构型)来说，r构型的活性则显著强于s构型235倍；而对于化合物a-6(s构型)和a-7(r构型)而言，s构型的活性比r构型强1800倍。此外，化合物b-1的活性显著比化合物b强150倍，然而化合物b-12的活性却无法意料地比化合物a-6下降2600倍。