本项发明属于医药应用领域，具体涉及一种抗耐两性霉素b白色念珠菌的抗菌肽rf3及应用。
背景技术：
临床上由于广谱抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤药物、肾上腺皮质激素的广泛应用，引起免疫抑制患者的逐渐增多，伴随而来的是致病性真菌耐药菌株的日渐增加。目前，在国内临床分离出的致病性真菌中，80％是白色念珠菌，而因其耐药菌株的感染引发的问题得到极大关注。治疗真菌感染的药物本就相对较少，而且，真菌药物的发展大大落后，最主要的原因是真菌是真核生物，通过扰乱真菌蛋白质、dna和rna合成起到杀菌效果的药物，同时会对人体健康细胞产生影响。因此开发一种既可以杀灭已对现有真菌药物产生耐药性的白色念珠菌菌株，同时又对人体无毒副作用的真菌药物是亟待解决的问题。
抗菌肽是一类广泛存在于生物体内的小分子功能多肽，具有广谱的抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性，是生物非特异性防御系统的重要组成部分。目前的研究结果表明，抗菌肽是通过破坏真菌细胞膜发挥抗真菌效果，因此，真菌不易对其产生耐药性。开发抗菌肽类真菌药物成为一种可行的方式。
技术实现要素：
基于以上不足之处，本发明的目的是提供一种抗耐两性霉素b白色念珠菌的抗菌肽rf3及应用，该抗菌肽能够治疗耐两性霉素b的白色念珠菌感染，且无毒副作用。
本发明所采用的技术如下：一种抗耐两性霉素b白色念珠菌的抗菌肽rf3，序列如序列表seqidno.1所示。
本发明还具有如下技术特征：如上所述的一种抗耐两性霉素b白色念珠菌的抗菌肽rf3，在制备用于治疗耐两性霉素b的白色念珠菌感染性疾病药物中的应用。
本发明得到的抗菌肽可杀灭对两性霉素b产生耐药性的白色念珠菌，且对人血红细胞毒性极小。具有开发成抗真菌药物的潜力。
具体实施方式
实施例1
1、抗菌肽的设计合成
使用多肽合成仪，利用固相合成法合成抗菌肽，抗菌肽的氨基酸序列如下：
argileglyargpheleuleupheargglyileargargileglyargpheleu-nh2。
2、抗菌肽的抑菌和溶血活性
2.1、抑菌活性
将肽配置成为一定储存液以备使用。以0.01％乙酸(含0.2％bsa)作为稀释液，使用二倍稀释法依次配置系列梯度的抗菌肽溶液。取上述溶液50μl置于96孔细胞培养板中，然后分别添加等体积的待测菌液于各孔中。分别设置阳性对照(含有菌液而不含有抗菌肽)和阴性对照(既不含菌液也不含肽)。28℃恒温培养36h，以肉眼未见孔底部有混浊现象的即为最小抑菌浓度。c.albicans56452和c.albicans56214为耐两性霉素b的白色念珠菌。
2.2、溶血活性
采集人的新鲜血液1ml，肝素抗凝后溶解到2mlpbs溶液中，1000g离心5min，收集红细胞；用pbs洗涤3遍，再用10mlpbs重悬；取100μl红细胞悬液与100μl用pbs溶解的不同浓度的抗菌肽溶液混合均匀，在37℃培养箱内恒温孵育1h；lh后取出，4℃、1000g离心5min；取出上清液用酶标仪在540nm处测光吸收值；每组取平均值，并比较分析。其中100μlpbs作为阴性对照；100μl0.2％tritonx-100作为阳性对照。
表1rf3的抗真菌活性及溶血活性
由表1可看出，rf3可以杀灭白色念珠菌，对耐药菌株也具有较强的作用，对人血红细胞没有毒性，因此具有开发成抗绿脓杆菌药物的潜力。
＜110＞东北农业大学
＜120＞一种抗耐两性霉素b白色念珠菌的抗菌肽rf3及应用
＜160＞1
＜210＞1
＜211＞18
＜212＞prt
＜213＞人工序列
＜400＞1
argileglyargpheleuleupheargglyileargargileglyargpheleu-nh2
15101518