一种小颗粒活性脂肪组织的处理方法与流程

本发明涉及脂肪组织处理技术领域，特别是指一种小颗粒活性脂肪组织的处理方法。

背景技术：

软组织缺损是一类造成人体形态与功能障碍的常见疾病，但由于人工合成材料的安全性和有效性不佳等原因，软组织缺损的重建一直是亟需解决的难题。近年来随着医学的进步，人们发现自体脂肪组织是软组织修复的最佳材料，具有来源充足，无生物排异等优点，但既往传统的脂肪提取技术获取的脂肪组织颗粒较大，从自身提取后一般采用2-3mm的注射针进行脂肪的移植注射操作，因此一般只在组织较为疏松的皮下、脂肪组织内、肌肉间等组织间隙进行填充；而且传统方法提取的脂肪组织颗粒较粗，不能通过直径1mm以内的注射针，也难以在皮肤内等组织较为致密的部位进行移植注射操作，但在临床实际操作中，往往需要0.6-0.8mm的精细注射来实现皮肤内填充，矫正精细的软组织缺损问题。因此目前传统的脂肪移植技术尚不能在临床中得到广泛应用。

既往为获取细小颗粒的脂肪需要采用直径1mm的定制脂肪抽吸管来抽吸脂肪，这种方法非常耗时，获取效率低，且由于脂肪组织在细小针管内收到挤压，其活性会显著受到影响。因此高效地获得细小颗粒的脂肪目前仍存在技术上的难度。

技术实现要素：

本发明提出一种小颗粒活性脂肪组织的处理方法，解决了现有技术中制取小颗粒脂肪过程中活性下降的技术问题，并提高了获取的效率。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种小颗粒活性脂肪组织的处理方法，包括：

取大颗粒脂肪组织；

将所述大颗粒脂肪组织置于低频超声仪探头下作用1-1.5分钟；所述低频超声仪的工作条件为功率80-95w，脉冲间断工作模式；

过滤上述超声处理后的脂肪组织，去除纤维组织，即得小颗粒活性脂肪组织。

作为优选的技术方案，所述脉冲间断工作模式中，作用时间为1.5-3秒。更优选的是2秒。

作为优选的技术方案，所述脉冲间断工作模式中，暂停时间为2.5-5秒。更优选的是3秒。

作为优选的技术方案，所述过滤使用的滤网为金属滤网，孔径为1mm。

作为优选的技术方案，所述低频超声仪的频率为20khz。

作为优选的技术方案，上述制得的小颗粒活性脂肪组织能通过0.6mm直径的注射针。

上述制得的小颗粒活性脂肪组织应用于精细注射。

有益效果

(1)本发明使用超声仪设备，采用脉冲间断工作模式，在引入的间隔时间可避免超声处理时产生的热效应对组织造成损伤，从而在处理脂肪组织时仍保留原组织的活性。在组织消化和体外培养后可见活细胞增殖参见图1所示。由于保留了原组织的活性，因此在实现了细针皮内注射的同时不影响移植后的脂肪存活率。

(2)本发明的方法简单、可重复性高，适合于大规模推广应用。

(3)本发明方法制得的脂肪颗粒，其粒径更细小，组织更加匀质，可通过孔径为0.6mm的注射针，脂肪组织的细胞大小约为传统方法获取的脂肪细胞的1/3-1/2，更大的满足了临床的需求。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施方案或现有技术中的技术方案，下面将对实施方案或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施方案，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为实施例1的小颗粒活性脂肪组织通过消化离心后获取的活细胞培养图。

图2为实施例1的大颗粒脂肪组织通过消化离心后获取的活细胞培养图。

图3为实施例1的小颗粒活性脂肪组织切片染色图。

图4为传统方法获取的大颗粒脂肪组织切片染色图。

图5为实施例1的脂肪培养细胞的成脂染色结果图；其中a：传统脂肪培养细胞的成脂染色结果；b：小颗粒活性脂肪培养细胞的成脂染色结果。

图6为实施例1的脂肪培养细胞的成骨染色结果；其中a：传统脂肪培养细胞的成骨染色结果；b：小颗粒活性脂肪培养细胞的成骨染色结果。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实施例中所用的超声仪为医学与生物学实验室较常规的一般设备(市售)，该设备简易便于携带且成本低廉。仪器操作简便，可重复性高。

实施例1

一种小颗粒活性脂肪组织的处理方法，包括：

(1)收集传统脂肪抽吸方法获取的大颗粒脂肪组织15ml；

(2)置于20khz超声仪探头下作用1分钟，功率为95w，工作模式为脉冲间断模式，作用2s暂停间隔3s；

(3)将超声仪处理后脂肪通过金属滤网去除脂肪组织内的纤维组织，金属滤网孔径为1mm；即得小颗粒活性脂肪组织，该组织更加匀质，可通过孔径为0.6mm的注射针。

验证组织内细胞的活性：

具体实验方法：收集小颗粒活性脂肪组织5ml，加入浓度为1％的胶原酶溶液5ml，置入37摄氏度恒温摇床中作用60min，置入离心机内以800g离心5min，收集细胞沉淀，用细胞培养液重悬后接种于培养皿进行体外细胞培养。培养后可见细胞生长，参见图1。

对照实验方法：收集传统方法获取的脂肪组织5ml，加入浓度为1％的胶原酶溶液5ml，置入37摄氏度恒温摇床中作用60min，置入离心机内以800g离心5min，收集细胞沉淀，用细胞培养液重悬后接种于培养皿进行体外细胞培养。培养后可见细胞生长，参见图2。

参见图1所示：本实施例获得的小颗粒活性脂肪组织通过消化离心后获取的活细胞培养结果，证实细小颗粒脂肪组织内具有增殖能力的活细胞。

通过图1和图2可知，本实施例的小颗粒活性脂肪组织与传统方法提取的大颗粒脂肪相比，超声处理方法并不破坏组织内细胞的活性。由于保留了原组织的活性，因此在实现了细针皮内注射的同时不影响移植后的脂肪存活率。

另外：

本实施例获得的小颗粒活性脂肪组织和传统方法所得脂肪组织的培养所得细胞进行了细胞诱导成脂实验及成骨实验，成脂诱导后行油红染色；成骨诱导后行茜素红染色，在显微镜下观察染色结果。实验镜检图请见图5-6。由这些附图可知：利用本方法所述方法所获得的细小颗粒匀质脂肪的培养所得细胞和传统方法获得脂肪组织的培养所得细胞，在成脂和成骨能力上无明显差异。

获取时间比较：

传统方法通过直径2-3mm脂肪抽吸管从患者皮下抽吸出15ml大颗粒脂肪的时间为3-5分钟，将大颗粒脂肪通过超声处理来获取15ml细小颗粒脂肪的时间为2-3分钟，总时间为5-8分钟。通过定制的直径1mm脂肪抽吸管虽然也能获得细小颗粒脂肪，但从患者皮下抽吸出15ml细小颗粒脂肪需要15-20分钟。

上述制得的小颗粒活性脂肪组织应用于精细注射。

实施例2

一种小颗粒活性脂肪组织的处理方法，包括：

(1)收集传统脂肪抽吸方法获取的大颗粒脂肪组织25ml；

(2)置于20khz超声仪探头下作用1.5分钟，功率为80w，工作模式为脉冲间断模式，作用2s暂停间隔5s；

(3)将超声仪处理后脂肪通过金属滤网去除脂肪组织内的纤维组织，金属滤网孔径为1mm。；即得小颗粒活性脂肪组织，该组织更加匀质，可通过孔径为0.6mm的注射针。脂肪组织的细胞大小约为传统方法获取的脂肪细胞的1/3-1/2，更大的满足了临床的需求。

在其它的实施例中，本领域技术人员可以根据需要在脉冲间断工作模式中，选用功率为80-95w，作用时间为1.5-3秒，暂停时间为2.5-5秒。这些数据组合均能满足本发明的要求。得到组织更加匀质，可通过孔径为0.6mm的注射针。脂肪组织的细胞大小约为传统方法获取的脂肪细胞的1/3-1/2。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。