检测大豆脲酶活性的方法及检测管与流程

本发明属于酶活性检测的方法，尤其是涉及一种检测大豆脲酶活性的方法及检测管。

背景技术：

大豆中含有胰蛋白酶抑制因子使得大豆制品的应用受到限制，动物食用后，易引起拉稀或软便等症状，尤其对于仔猪更容易引起仔猪腹泻。由于胰蛋白酶抑制因子难以检测，而大豆中的脲酶与胰蛋白酶抑制剂的性质相近，通常采用测定脲酶活性的方法来判定大豆的生熟程度。实验室定量测定脲酶活性的方法比较复杂，有滴定法和ph增值法。这两种方法测定的结果十分准确，但要求有一定的设备条件及娴熟的操作技术，并且检测时间长，因此很难用于现场检测，因此对于饲料厂、港口等豆粕及大豆制品原料接收的检验十分不便，不能满足现场的简便、快速检测大豆脲酶活性的需要。

为了解决以上存在的问题，人们一直在寻求一种理想的技术解决方案。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测大豆脲酶活性的方法及检测管，以解决上述问题。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种大豆脲酶活性检测管，包括尿素甲酚红钠盐提取液管、样品定量管和瓶盖，所述样品定量管螺纹连接在所述尿素甲酚红钠盐提取液管和所述瓶盖之间；

所述尿素甲酚红钠盐提取液管内盛装有尿素甲酚红钠盐提取液；所述尿素甲酚红钠盐提取液是由浓度为0.01％～0.1％的甲酚红钠盐乙醇溶液与浓度为1.3％～10.5％的尿素水溶液按照体积比为(1～5)：2混合制取的。

基于上述，所述样品定量管的容量为0.01g、0.02g、0.03g或0.05g。

基于上述，所述瓶盖的一端和所述尿素甲酚红钠盐提取液管的顶部分别设置有外螺纹，所述样品定量管的开口两端上分别活动设置有密封圈。

本发明还提供一种利用上述大豆脲酶活性检测管检测大豆脲酶活性的方法，具体包括以下步骤：

提供待测样品：对大豆粉分别进行烘焙处理不同时间，得到n份不同脲酶活性大豆粉；

检测待测样品：利用上述大豆脲酶活性检测管分别对所述n份不同脲酶活性大豆粉进行检测，得到n份尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值；

建立拟合方程：首先采用gb/t8622-2006国标法依次对n份所述不同脲酶活性大豆粉进行大豆脲酶活性测定，得到n份大豆脲酶活性标准值，然后根据n份所述大豆脲酶活性标准值和n份所述尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值，建立尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值与待测样品中大豆脲酶活性标准值之间的拟合方程。

基于上述，所述检测待测样品步骤包括：首先采用相同容量的所述样品定量管将n份所述不同脲酶活性大豆粉置于n份同等体积的所述尿素甲酚红钠盐提取液管中混合、静置，计算所述尿素甲酚红钠盐提取液开始变色至颜色稳定时所需时间，得到n份所述尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值，其中n为大于等于2的自然数。

基于上述，所述检测待测样品步骤中，每10ml所述尿素甲酚红钠盐提取液中加入所述不同脲酶活性大豆粉的质量为0.02g。

基于上述，当每10ml所述尿素甲酚红钠盐提取液中加入0.02g所述不同脲酶活性大豆粉时，建立的尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值与大豆脲酶活性标准值之间的拟合方程为：

y＝1.583ln(t)+7.4486，

其中：t为尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值，单位为s；y为大豆脲酶活性标准值，单位为u，大豆脲酶活性标准值是以每分钟每克大豆粉释放氨的毫克量来表示的。

基于上述，所述制备待测样品步骤中，对n份大豆粉分别进行烘焙处理的温度为110℃～150℃。

本发明相对现有技术具有突出的实质性特点和显著的进步，具体的说，本发明所提供的检测管结构简单、取样质量稳定不会产生较大波动，携带方便适于现场取样检测。本发明所述提供的大豆脲酶活性检测方法，检测步骤简单、检测过程耗时短，对操作人员娴熟度和设备要求不高，且检测结果与国标法检测结果一致。该方法不仅适用于饲用大豆粉及豆粕等，还适用于含有大豆的食品中脲酶活性的快速检测。

附图说明

图1为本发明所提供的大豆脲酶活性检测管整体结构示意图。

图2为本发明所提供的大豆脲酶活性检测管拆分结构示意图。

图3为本发明所提供的大豆脲酶活性检测管剖视结构示意图。

图4为本发明所提供的检测大豆脲酶活性的方法工艺流程图。

图中：1、尿素甲酚红钠盐提取液管；2、样品定量管；3、瓶盖；4、密封圈；5、外螺纹。

具体实施方式

下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

本实施例提供一种大豆脲酶活性检测管，如图1、图2和图3所示，它包括尿素甲酚红钠盐提取液管1、样品定量管2和瓶盖3。所述尿素甲酚红钠盐提取液管1的顶部开口、所述样品定量管2的两端开口。所述瓶盖3的一端和所述尿素甲酚红钠盐提取液管1的顶部分别设置有外螺纹5，所述样品定量管2的两端分别活动设置有密封圈4。所述样品定量管2底部螺纹连接在所述尿素甲酚红钠盐提取液管1的顶部，所述瓶盖3螺纹连接在所述样品定量管2的顶部，其中所述样品定量管的容量为0.02g。

所述尿素甲酚红钠盐提取液管1内盛装有10ml的尿素甲酚红钠盐提取液；所述尿素甲酚红钠盐提取液是由浓度为0.01％的甲酚红钠盐乙醇溶液与浓度为1.3％的尿素水溶液按照体积比为3：2混合制取的。

本发明还提供一种利用上述大豆脲酶活性检测管检测大豆脲酶活性的方法，如图4所示，该方法具体包括以下步骤：

制备待测样品：将大豆研磨成50目的大豆粉然后在120℃温度下对所述大豆粉分别进行10个时间段烘焙处理，得到10份不同脲酶活性大豆粉；

检测待测样品：首先分别采用所述样品定量管从10份所述不同脲酶活性大豆粉中称取0.02g并添加至10个容量均为10ml所述尿素甲酚红钠盐提取液管中进行混合、静置，计算所述尿素甲酚红钠盐提取液管开始变色至颜色稳定时所需时间，得到10份尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值；

建立拟合方程：首先采用gb/t8622-2006国标法依次对10份所述不同脲酶活性大豆粉进行大豆脲酶活性测定，得到10份大豆脲酶活性标准值，然后根据所述10份大豆脲酶活性标准值与检测待测样品步骤中得到的10份相应的尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值，建立尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值与待测样品中大豆脲酶活性标准值之间的拟合方程。所建立的拟合方程为：

y＝1.583ln(t)+7.4486，

其中：t为尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值，单位为s；y为大豆脲酶活性标准值，单位为u。

需要说明的是，在具体检测待大豆样品时，该大豆脲酶活性检测管的操作步骤如下：首先将所述瓶盖3旋拧在所述样品定量管2的顶端开口上，然后用该样品定量管2选取0.02g的待测大豆粉样本，然后将其通过所述密封圈4旋拧在容量为10ml的所述尿素甲酚红钠盐提取液管1的顶部，最后上下反复翻转该大豆脲酶活性检测管，使得位于所述样品定量管2内的样本与所述尿素甲酚红钠盐提取液完全接触，混合均匀后静置并记录颜色变化时间得到样品尿素甲酚红钠盐提取液变色耗时数值，将其代入上述拟合方程计算大豆粉样品的脲酶活性值。

最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。