一技术领域
本申请属于心脑血管药物领域，具体地，本申请提供了一种新型磷酸川芎嗪衍生化合物以及包含该化合物的药物组合物。
二
背景技术：
心脑血管疾病是严重危害人类健康的常见多发疾病。据世界卫生组织统计，心脑血管疾病占据了全世界人口死亡原因的第一位，而且其治疗或其后遗症的治疗/护理也带来了公共卫生费用的沉重负担。新型心脑血管药物己成为全球制药企业和科研机构的研发重点。
川芎嗪(ligustrazine,lig；tetramethylpyrazine，tmp)是20世纪70年代从中药伞形科植物川芎(ligusticumchuanxiong)的根茎中提取的有效成分,化学结构为四甲基吡嗪，其也存在于姜科植物温荻术根茎及大戟科植物通风麻风树茎中，目前生产方式主要为合成。
川芎嗪是一种钙通道拮抗剂,其吸收迅速，分布广泛，可以在肝内迅速消除，具有扩张血管、抑制血小板聚集、防止血栓形成、改善脑缺血等多种作用，在临床上广泛的用于治疗冠状动脉粥样硬化性疾病和缺血性心脑血管疾病。川芎嗪的缺点主要在于药效较差，体内生物利用度低，半衰期短(不足3小时)，临床上为保持有效的药物治疗浓度必须频繁给药，使用不便而且易造成体内积蓄中毒，使其应用受到很大限制。
三
技术实现要素：
本发明筛选到两种新型磷酸川芎嗪衍生化合物，其对血管内皮细胞的保护活性略强于川芎嗪，同时，其半衰期延长到接近5小时以上，给川芎嗪的更广泛临床应用提供了新的途径。
一方面，本发明提供了一种磷酸川芎嗪衍生化合物，其化学式为：
其中r选自h、c1-c4烷基、c3-c6环烷基-c1-c4烷基、苄基。
进一步的方面，该磷酸川芎嗪衍生化合物化学式为：
进一步的方面，该磷酸川芎嗪衍生化合物化学式为：
另一方面，本发明提供了包含前述磷酸川芎嗪衍生化合物的药物组合物。
进一步的方面，该药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
进一步的方面，该药物组合物还包含其他的心脑血管疾病药物。
进一步的方面，该药物组合物用于心脑血管疾病的治疗。
进一步的方面，该药物组合物用于冠状动脉粥样硬化和缺血性心脑血管疾病的治疗。
进一步的方面，该药物组合物为片剂、颗粒剂、散剂或注射剂。
另一方面，本发明提供了制备前述化合物的方法，包括步骤：
将0.1mol2,3,5,6-四甲基哌嗪溶于乙腈，加热至回流，避光条件下滴加碘甲烷和磷酸，反应8小时后，冷却至室温，滴加乙醚至不再有沉淀析出，过滤，滤饼丙酮洗涤，乙醇-乙醚重结晶，干燥得固体。
进一步的方面。该制备方法具体为：
将0.1mol2,3,5,6-四甲基哌嗪溶于50ml乙腈，加热至回流，避光条件下滴加0.4mol碘甲烷和0.2mol磷酸，反应8小时后，冷却至室温，滴加乙醚至不再有沉淀析出，过滤，滤饼丙酮洗涤，乙醇-乙醚重结晶，干燥得固体17.3g，产率69.7％。
另一方面，本发明提供了制备前述化合物的方法，包括步骤：
将2,3,5,6-四甲基哌嗪溶于乙腈，加热至回流，避光条件下滴加环丙基溴甲烷和磷酸，反应12小时后，冷却至室温，滴加乙醚至不再有沉淀析出，过滤，滤饼丙酮洗涤，乙醇-乙醚重结晶，干燥得固体。
进一步的方面。该制备方法具体为：
将0.1mol2,3,5,6-四甲基哌嗪溶于50ml乙腈，加热至回流，避光条件下滴加0.11mol环丙基溴甲烷和0.12mol磷酸，反应12小时后，冷却至室温，滴加乙醚至不再有沉淀析出，过滤，滤饼丙酮洗涤，乙醇-乙醚重结晶，干燥得固体13.6g，产率47.2％。
四具体实施方式
实施例1本发明磷酸川芎嗪衍生化合物的制备
原料：
分析纯2,3,5,6-四甲基哌嗪湖北远程药业有限公司。
分析纯环丙基溴甲烷购于sigma。
分析纯乙腈、磷酸、乙醚、丙酮、乙醇购于上海国药集团。
式ii化合物制备过程：
将0.1mol2,3,5,6-四甲基哌嗪溶于50ml乙腈，加热至回流，避光条件下滴加0.4mol碘甲烷和0.2mol磷酸，反应8小时后，冷却至室温，滴加乙醚至不再有沉淀析出，过滤，滤饼丙酮洗涤，乙醇-乙醚重结晶，干燥得固体17.3g，产率69.7％。
式iii化合物制备过程：
将0.1mol2,3,5,6-四甲基哌嗪溶于50ml乙腈，加热至回流，避光条件下滴加0.11mol环丙基溴甲烷和0.12mol磷酸，反应12小时后，冷却至室温，滴加乙醚至不再有沉淀析出，过滤，滤饼丙酮洗涤，乙醇-乙醚重结晶，干燥得固体13.6g，产率47.2％。
产物送至四川大学分析测试中兴进行分析(brukeravii-600mhz、api4000)，结果为：c9h17n2o4p,ms(esi-ms):m/z＝248.09，1hnmr(600mhz，dmso)，,4.40(3h)，2.92(6h)，2.44(6h)；13cnmr(dmso)δ，155.0,151.2,38.8,20.2，16.4
c12h21n2o4p,ms(esi-ms):m/z＝288.12，1hnmr(600mhz，dmso)，,4.97(2h)，2.88(6h)，2.39(6h)，1.01(1h)，0.1-0.4(4h)；13cnmr(dmso)δ，155.1,151.3,143.6,58.8,16.7,16.5,4.6,4.2。
相应结构为本申请中的式ii和式iii。
实施例2本发明磷酸川芎嗪衍生化合物对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用。
主要实验材料：
ecv-304血管内皮细胞由四川大学馈赠提供。
mtt购自sigma。
过氧化氢购自上海国药集团。
磷酸川芎嗪片剂由丽珠集团利民制药厂生产。
磷酸川芎嗪衍生化合物按照实施例1的方法自行制备。
实验过程：
以含10％新生小牛血清、青霉素和链霉素的rpmi-1640培养基,37摄氏度下在5％co2中培养传代3次至状态稳定。在96孔板中，每孔加入4x103个ev-304，加入含10％小牛血清的rpmi-1640培养基，置于37摄氏度下在5％co2中培养24h。
之后,在对照组中加入不含过氧化氢和药物的正常培养液,在模型组中加入浓度为0.15mmol/l过氧化氢的培养液,在保护组中加入含不同浓度药物以及0.15mmol/l过氧化氢的培养液，继续培养24h。
然后每孔加入0.01mlmtt溶液(5mg/ml),37摄氏度培养4h，倾去上清液，每孔加入二甲基亚矾0.lml，放置10min，30min内在全自动酶标仪上测定od570nm，记录结果,计算化合物对过氧化损伤的ecv-304的增殖百分率(p＝保护组od-模型组od/对照组od-模型组od)。将p转换为ec50(mmol/l),(lgec50＝-pec50＝lgcmax-xi*(σp-0.75+0.25*pmax+0.25*pmin)。实验结果：
表1：各化合物ec50
此外，发明人还使用家兔血浆进行了体外抗血小板凝集实验，本申请式ii和式iii的化合物有明显的抗血小板凝集效果，在1mg/ml浓度下达到25.4±2.9和27.8±3.2，与磷酸川芎嗪(29.3±1.5)类似，此部分实验规模较小，不再做详细陈述。
从上述实验结果可以看出，本发明磷酸川芎嗪衍生化合物在保护血管内皮和抑制血小板凝集这两个与心脑血管疾病治疗关联最密切的性能上均与磷酸川芎嗪类似甚至更好。
实施例3体内药代动力学实验
主要实验材料：
实验用犬：8只，雌雄各半，10±1.5kg，购自四川大学动物实验中心。
磷酸川芎嗪片剂由丽珠集团利民制药厂生产(以无菌水配制成溶液)。
磷酸川芎嗪衍生化合物按照实施例1的方法自行制备(以无菌水配制成溶液)。
实验过程：
实验犬前禁食12h,空腹采血一次,然后静脉注射20mg/kg药物，给药后立即，15和30分，1、1.5、2、2.5、3、5、8和12小时各采血一次,肝素抗凝,离心,血浆贮存于冰盒中备用。
间隔1个月后,进行自身交叉实验,在同样条件下,静脉注射20mg/kg药物,给药后立即，15和30分，1、1.5、2、2.5、3、5、8和12小时各采血一次,分离出血浆供测定用。
萃取并紫外测定(经验证，三种化合物在278nm有特征峰，其与浓度的线性关系良好)。每次测定时均作标准浓度曲线,按回归统计求得各样品中的药物浓度。根据实测的曲线,按一级消除动力学,一房室开放模型进行求得药物的药代动力学参数。
数据表明，本发明磷酸川芎嗪衍生化合物在半衰期上相比磷酸川芎嗪进步明显，提高幅度达到50％以上，生物利用度也高于磷酸川芎嗪。这两种化合物均有用于临床的进一步研究价值。