本发明属于药物开发领域，具体涉及一种吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂的纯化方法。
背景技术：
吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,简写ido)是一种与色氨酸代谢有关的蛋白酶。吲哚胺2,3-双加氧酶在体内不仅可以通过调节色氨酸，来参与调节神经系统和生理过程。还参与色胺等的代谢，5-羟色胺在吲哚胺2,3-双加氧酶的催化作用下可转化为5-羟吲哚乙酸，5-羟色胺在体内含量的减少很很可能导致抑郁症的发生。
当今对吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂的研究还处于早期阶段，在医药领域方面的应用前景广阔。newlink公司的nlg-919，indoximod，incyte公司的epacadostat(incb024360)，以及bms，flexus，iomet,iteos,curadev等公司已经对ido或tdo抑制剂展开深入的研究。吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂作为具有新药靶、新机制的药物，可应用于治疗肿瘤、阿尔茨海默病、抑郁症、白内障等多种重大疾病。
cn1074304191a公开了一种吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂，其中代表性化合物化学名称为：(z)-n-(3-溴-4-氟-苯基)-4-((2-(n-(环丙基磺酰基)-甲基亚磺酰亚胺)乙基)氨基)-n'-羟基-1，2，5-噁二唑-3-甲脒，结构如下：
该化合物或其光学异构体对ido具有很高的抑制活性，能够有效抑制ido活性，也可用于抑制患者的免疫抑制。cn1074304191a还公开了用手性色谱柱拆分该化合物的方法。式(i)化合物是上述吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂的光学异构体，
式(ⅰ)化合物通过析晶、打浆等纯化方法很难达到纯化异构体的效果，因此急需开发一种式(ⅰ)化合物的纯化方法。
技术实现要素：
为解决式(ⅰ)化合物的纯化问题，本发明提供了一种式(ⅰ)化合物纯化方法，具体包括以下步骤：
a、将式(i)化合物反应环合得到式(ⅱ)化合物；
b、式(ⅱ)化合物在有机溶剂和不良溶剂的混合溶剂中纯化；
c、式(ⅱ)化合物经水解反应得到式(i)化合物。
步骤a中，式(i)化合物在乙酸乙酯中和n,n'-羰基二咪唑反应环合得到式(ⅱ)化合物。
步骤a中式(ⅰ)化合物手性异构体含量小于30％。
步骤b中，所述不良溶剂选自甲基叔丁基醚、异丙醚、正己烷或正庚烷，优选甲基叔丁基醚；有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙脂、乙酸丁酯或乙酸异丁酯；式(ⅱ)化合物、有机溶剂和不良溶剂的投料比为1g：2～10ml：2～30ml，优选投料比为1g：2～5ml：3～10ml；纯化方法是式(ⅱ)化合物加热溶于有机溶剂，加入不良溶剂降温析晶；纯化方法还可以是式(ⅱ)化合物加热回流溶于有机溶剂，加入不良溶剂降温析晶。
步骤c中，所述水解反应是指式(ⅱ)化合物溶于四氢呋喃中，缓慢滴加氢氧化钠水溶液水解，经萃取，再干燥浓缩有机相得到式(i)化合物。
本发明还提供一种式(ⅱ)化合物的纯化方法，包括式(ⅱ)化合物在有机溶剂和不良溶剂中析晶纯化；所述不良溶剂选自甲基叔丁基醚、异丙醚、正己烷或正庚烷，优选甲基叔丁基醚；有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙脂、乙酸丁酯或乙酸异丁酯；式(ⅱ)化合物、有机溶剂和不良溶剂的投料比为1g：2～10ml：2～30ml，优选投料比为1g：2～5ml：3～10ml；纯化方法是式(ⅱ)化合物加热溶于有机溶剂，加入不良溶剂降温析晶；纯化方法还可以是式(ⅱ)化合物加热回流溶于有机溶剂，加入不良溶剂降温析晶。其中，式(ⅱ)化合物手性异构体含量小于30％。
本发明工艺操作简单，能够高收率的纯化异构体含量小于30％的式(i)或式(ⅱ)化合物,并且具有显著的异构体纯化效果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。
本发明的化合物ⅰ的异构体检测方法是通过高效液相色谱仪来确定的。手性纯度的分析方法为：
柱型号：chiralpakic，
柱尺寸：0.46cmi.d.×25cml×5μm，
流动相：n-hexane/ipa/diethylamine＝70/30/0.1，
流速：0.8ml/min，
波长：254nm，
柱温：35℃，
进样量：10μl，
进样浓度；1.0mg/mlindcm10％etoh20％hexane70％。
实施例一
将异构体纯度为13.890％的式(ⅰ)化合物(20mmol，10.5g)加入21ml乙酸乙酯中，加热溶解，回流条件下缓慢滴加甲基叔丁基醚31.5ml，回流搅拌2小时，自然降温析晶12小时，抽滤，甲基叔丁基醚洗涤，得到纯化的式(ⅰ)化合物9g，摩尔收率为85.7％，式(ⅰ)化合物异构体含量11.58％。
实施例二
将异构体纯度为1.700％的式(ⅰ)化合物(20mmol，10.5g)加入30ml无水乙醇，回流打浆2小时，自然降温析晶12小时，抽滤，无水乙醇洗涤，得到纯化的式(ⅰ)化合物9.5g，摩尔收率为90％，式(ⅰ)化合物异构体含量1.450％。
实施例三
将异构体纯度为13.153％的式(ⅰ)化合物(10mmol，5.25g)加入10.5ml丙酮溶解，回流条件缓慢加入25ml无水乙醇，回流搅拌2小时，自然降温析晶12小时，抽滤，无水乙醇洗涤，得到纯化的式(ⅰ)化合物3.7g，摩尔收率为70％，式(ⅰ)化合物异构体含量10.570％。
实施例四
第一步：式(ⅱ)化合物的合成和纯化。
将异构体纯度为12.891％的式(ⅰ)化合物(20mmol，10.5g)加入160ml乙酸乙酯中，常温(15℃～30℃)条件下，加入n,n'-羰基二咪唑(30mmol，4.8g)，搅拌反应1.5小时，tlc检测反应完全，向反应液中加入1n盐酸洗涤，分液，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽率，减压浓缩得白色固体式(ⅱ)化合物。式(ⅱ)化合物加入21ml的乙酸乙酯加热回流溶解，在回流的条件下加入甲基叔丁基醚31.5ml回流2小时自然降温析晶12小时，在10℃条件下搅拌2小时，抽滤，甲基叔丁基醚洗涤白色固体得到纯化的式(ⅱ)化合物(9.0g)。式(ⅱ)化合物异构体含量0.583％。
第二步：式(i)化合物的合成。
式(ⅱ)化合物(9.0g)溶于90ml四氢呋喃溶液中，搅拌降温至0℃左右，控温0～10℃缓慢滴加氢氧化钠水溶液，约1小时滴加完毕，tlc检测反应完全，加入45ml饱和氯化钠水溶液，搅拌、分液，水相加入180ml乙酸乙酯萃取，合并有机相，180ml饱和氯化钠盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到式(ⅰ)化合物(8.2g)，摩尔收率89.66％。式(ⅰ)化合物异构体含量0.563％。
实施例五
第一步：式(ⅱ)化合物的合成和纯化
将异构体纯度为12.891％的式(ⅰ)化合物(20mmol，10.5g)加入160ml乙酸乙酯中，常温(15℃～30℃)条件下，加入n,n'-羰基二咪唑(30mmol，4.8g)，搅拌反应1.5小时，tlc检测反应完全，向反应液中加入1n盐酸洗涤，分液，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽率，减压浓缩得式(ⅱ)化合物。式(ⅱ)化合物加入21ml的乙酸乙酯加热回流溶解，在回流的条件下加入异丙醚31.5ml回流2小时自然降温析晶12小时，在10℃条件下搅拌2小时，抽率，异丙醚洗白色固体得到式(ⅱ)化合物(8.6g)。式(ⅱ)化合物异构体含量1.072％。
第二步：式(i)化合物的合成。
纯化的式(ⅱ)化合物(8.6g)溶于84ml四氢呋喃溶液中，搅拌降温至0℃左右，控温0～10℃缓慢滴加氢氧化钠水溶液，约1小时滴加完毕，tlc检测反应完全，加入42ml饱和氯化钠水溶液，搅拌、分液，水相加入170ml乙酸乙酯萃取，合并有机相，170ml饱和氯化钠盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到式(ⅰ)化合物(7.7g)，摩尔收率84.2％。式(ⅰ)化合物异构体含量1.045％。
实施例六
第一步：式(ⅱ)化合物的合成和纯化
将异构体纯度为21.473％的式(ⅰ)化合物(20mmol，10.5g)加入160ml乙酸乙酯中，常温(15℃～30℃)条件下，加入n,n'-羰基二咪唑(30mmol，4.8g)，搅拌反应1.5小时，tlc检测反应完全，向反应液中加入1n盐酸洗涤，分液，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽率，减压浓缩得式(ⅱ)化合物。式(ⅱ)化合物加入21ml的乙酸乙酯加热回流溶解，在回流的条件下加入甲基叔丁基醚31.5ml回流2小时自然降温析晶12小时，在10℃条件下搅拌2小时，抽率，甲基叔丁基醚洗白色固体得到式(ⅱ)化合物(8.2g)。式(ⅱ)化合物异构体含量1.890％。
第二步：式(i)化合物的合成
纯化的式(ⅱ)化合物(8.2g)溶于82ml四氢呋喃溶液中，搅拌降温至0℃左右，控温0～10℃缓慢滴加氢氧化钠水溶液，约1小时滴加完毕，tlc检测反应完全，加入41ml饱和氯化钠水溶液，搅拌、分液，水相加入165ml乙酸乙酯萃取，合并有机相，165ml饱和氯化钠盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到式(ⅰ)化合物(6.7g)，摩尔收率81.31％。式(ⅰ)化合物异构体含量1.853％。
实施例七
第一步：式(ⅱ)化合物的合成和纯化
将异构体纯度为21.473％的式(ⅰ)化合物(20mmol，10.5g)加入160ml乙酸乙酯中，常温(15℃～30℃)条件下，加入n,n'-羰基二咪唑(30mmol，4.8g)，搅拌反应1.5小时，tlc检测反应完全，向反应液中加入1n盐酸洗涤，分液，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽率，减压浓缩得式(ⅱ)化合物。式(ⅱ)化合物加入21ml的乙酸乙酯加热回流溶解，在回流的条件下加入正己烷31.5ml回流2小时自然降温析晶3小时，抽率，正己烷白色固体得到式(ⅱ)化合物(7.5g)。式(ⅱ)化合物异构体含量2.345％。
第二步：式(i)化合物的合成
纯化的式(ⅱ)化合物(7.5g)溶于80ml四氢呋喃溶液中，搅拌降温至0℃左右，控温0～10℃缓慢滴加氢氧化钾水溶液，约1小时滴加完毕，tlc检测反应完全，加入80ml饱和氯化钠水溶液，搅拌、分液，水相加入160ml乙酸乙酯萃取，合并有机相，160ml饱和氯化钠盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到式(ⅰ)化合物(6.3g)，摩尔收率76.45％。式(ⅰ)化合物异构体含量2.320％。
实施例八
第一步:式(ⅱ)化合物的合成和纯化
将异构体纯度为12.891％的式(ⅰ)化合物(40mmol，21g)加入320m乙酸乙酯中，常温(15℃～30℃)条件下，加入n,n'-羰基二咪唑(60mmol，9.6g)，搅拌反应1.5小时，tlc检测反应完全，向反应液中加入1n盐酸洗涤，分液，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽率，减压浓缩得式(ⅱ)化合物。式(ⅱ)化合物加入210ml的乙酸乙酯加热回流溶解，在回流的条件下加入甲基叔丁基醚420ml回流2小时自然降温析晶3小时，抽率，甲基叔丁基醚洗白色固体得到式(ⅱ)化合物(13.5g)。式(ⅱ)化合物异构体含量0.439％。第二步：式(i)化合物的合成
纯化的式(ⅱ)化合物(13.5g)溶于135ml四氢呋喃溶液中，搅拌降温至0℃左右，控温0～10℃缓慢滴加氢氧化钠水溶液，约1小时滴加完毕，tlc检测反应完全，加入65ml饱和氯化钠水溶液，搅拌、分液，水相加入270ml乙酸乙酯萃取，合并有机相，270ml饱和氯化钠盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到式(ⅰ)化合物(10.3g)，摩尔收率56.3％。式(ⅰ)化合物异构体含量0.415％。
实施例九
第一步:式(ⅱ)化合物的合成和纯化
将异构体纯度为12.891％的式(ⅰ)化合物(40mmol，21g)加入320ml乙酸乙酯中，常温(15℃～30℃)条件下，加入n,n'-羰基二咪唑(60mmol，14.4g)，搅拌反应1.5小时，tlc检测反应完全，向反应液中加入1n盐酸洗涤，分液，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽率，减压浓缩得式(ⅱ)化合物。式(ⅱ)化合物加入42ml的乙酸乙酯加热回流溶解，在回流的条件下加入甲基叔丁基醚210ml回流2小时自然降温析晶3小时，抽率，甲基叔丁基醚洗白色固体得到式(ⅱ)化合物(15.2g)。式(ⅱ)化合物异构体含量0.764％第二步：式(i)化合物的合成
纯化的式(ⅱ)化合物(15.2g)溶于152ml四氢呋喃溶液中，搅拌降温至0℃左右，控温0～10℃缓慢滴加氢氧化钠水溶液，约1小时滴加完毕，tlc检测反应完全，加入80ml饱和氯化钠水溶液，搅拌、分液，水相加入304ml乙酸乙酯萃取，合并有机相，304ml饱和氯化钠盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到式(ⅰ)化合物(12.4g)，摩尔收率67.75％。式(ⅰ)化合物异构体含量0.737％。