本发明涉及的是荧光探针领域，涉及一种检测cys的荧光探针的制备与应用。
背景技术：
cys(半胱氨酸)作为生物硫醇的一种，在生物体的许多生理病理过程中有着重要的作用。研究表明生物体内cys的含量不正常会导致一些疾病的发生，如：神经中毒、生长缓慢、头发脱色、水肿、嗜睡、肝脏损伤、肌肉脂肪萎缩无力。
用于检测cys的常规方法有色谱法、电化学方法、气质联用法。但是常规方法方法具有一些弊端如：需要昂贵的仪器设备、复杂的操作过程、样品前处理繁琐等。荧光探针作为一种新型的分析方法，具有高高灵敏性、选择性、的优点。比值型荧光探针由于可以检测两个发射峰的荧光强度，可以避免由于探针浓度、仪器因素、环境因素造成的误差，从而提高检测的准确性。但是关于检测cys的荧光探针的报道数量有限，比值型检测cys的荧光探针数量更是甚少。
技术实现要素：
本发明目的之一是提供一种检测cys的荧光探针合成方法；目的之二是提供一种检测cys的荧光探针。
本发明解决问题采取的技术方案为，一种可以特异性识别cys的荧光探针，其分子结构式如下：
具体成方法如下：
(1)将405mg化合物2、305mg化合物5溶于10ml甲苯中，回流反应24小时，抽滤，用10ml正己烷洗涤滤饼，烘干得到210mg灰白色粉末为化合物4，产率，54.1％。(2)将102.8mg化合物4溶于10ml无水二氯甲烷中，加入70μl三乙胺，氩气保护冰水浴30分钟，再加入40μl丙烯酰氯，继续保持冰水浴90分钟。旋干溶剂，柱层析得到72mg黄色粉末为化探针，产率57.8％。
本发明的荧光探针测试方法如下，将探针分子溶解在pbs(ph＝7.4，10mm)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，室温下进行测试。具体实施方法在实施实例中详细介绍。
本发明的荧光探针的响应机理如下：cys与探针分子响应后，cys的巯基首先与丙烯酰酯的双键发生迈克尔加成反应，随后cys的氨基进攻酯基形成一个七元环，释放出染料分子(化合物2)溶液的荧光由绿色变成蓝色。从而实现了荧光比值型检测cys过程。探针分子的响应过程如下：
本发明的荧光探针的发射峰在500nm，与cys响应后的荧光发射峰在425nm处。探针与cys完全响应后425nm处荧光强度与500nm处荧光强度的比值(i425/i500)由0.14变成2.06。
本发明所述的探针分子合成路线简单，操作简单，成本较低，可以识别cys的。
附图说明
图1为本发明化合物2在氘代氯仿中氢谱，横坐标为化学位移(ppm)，纵坐标为强度。
图2为本发明探针在氘代氯仿中氢谱，横坐标为化学位移(ppm)，纵坐标为强度。
图3为本发明的荧光探针(1.0×10-5mol/l)在pbs(ph＝7.4，10mm)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/lcys响过程荧光光谱，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。
图4为本发明的荧光探针(1.0×10-5mol/l)在pbs(ph＝7.4，10mm)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/lcys响过程500nm处与425nm处荧光强度，横坐标为时间，纵坐标为荧光强度。
图5为本发明的荧光探针(1.0×10-5mol/l)在pbs(ph＝7.4，10mm)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/lcys响应过程500nm处与425nm处荧光强度比值(i425/i500)，横坐标为时间，纵坐标为荧光强度比值i425/i500)。
图6为本发明的荧光探针(1.0×10-5mol/l)在pbs(ph＝7.4，10mm)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/lcys响应过程500nm处与425nm处荧光强度比值(i425/i500)与时间关系的线性拟合，横坐标为时间，纵坐标为荧光强度比值(i425/i500)。
具体实施实例
实施例1：中间产物4的合成
将405mg化合物2、305mg化合物5溶于10ml甲苯中，回流反应24小时，抽滤，用10ml正己烷洗涤滤饼，烘干得到210mg灰白色粉末为化合物4，产率，54.1％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.74(s，1h)，7.15(s，1h)，5.21(s，1h)，3.23(dd，j＝11.1，5.5hz，4h)，2.71(dd，j＝8.9，6.1hz，4h)，1.87(dd，j＝11.9，6.2hz，4h).13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ167.06，163.29，151.47，146.46，120.35，117.78，105.83，103.57，86.28，49.69，40.43，40.22，40.01，39.80，39.59，27.43，21.49，20.62，20.58。
实施例2：探针的合成
将102.8mg化合物4溶于10ml无水二氯甲烷中，加入70μl三乙胺，氩气保护冰水浴30分钟，再加入40μl丙烯酰氯，继续保持冰水浴90分钟。旋干溶剂，柱层析得到72mg黄色粉末为化探针，产率57.8％。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ6.86(d，j＝39.1hz，1h)，6.69(d，j＝17.3hz，1h)，6.36(dd，j＝17.2，10.5hz，1h)，6.14(d，j＝10.4hz，1h)，6.01(s，1h)，3.27(dd，j＝11.2，5.8hz，4h)，2.87(t，j＝6.2hz，2h)，2.74(t，j＝6.1hz，2h)，1.96(d，j＝4.1hz，4h).
实施例3：本发明:荧光探针检测cys的应用
将探针溶于ph在pbs(ph＝7.4，10mm)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，向溶液中加其它10倍当量的cys，385nm波长激发，每间隔1分钟测一次荧光。发现探针与半管干山响过程500nm处与425nm处荧光强度比值(i425/i500)由0.14变成2.06。说明本发明探针可以用于检测cys。