喹唑啉衍生物或其盐和包含其的药物组合物的制作方法

本发明涉及对磷脂酰肌醇3-激酶δ亚基具有选择性抑制活性的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法、包含其的药物组合物及其用途。

背景技术

已知磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)是一种脂质激酶，其使肌醇环的3-羟基残基处的脂质磷酸化，在细胞的增殖、存活、运动等方面发挥关键作用。i类pi3k(pi3kα、pi3kβ、pi3kδ和pi3kγ)被受体酪氨酸激酶或gpcr(g蛋白偶联受体)激活以产生pip3(磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸)，从而激活akt。已知激活的akt使tsc2、gsk3β、mdm2、foxo、bad等磷酸化，从而控制细胞增殖或存活、血管生成等(naturerev.cancer,5,921-929(2005))。

i类pi3k是由p110催化亚基和调节亚基组成的异二聚体，并且基于调节配偶体(partner)和调节机制将该族进一步分为ia类和ib类酶。ia类酶由三个催化亚基(p110α、p110β和p110δ)组成，它们与五个调节亚基(p85α、p55α、p50α、p85β和p55γ)二聚化，其中所有催化亚基能够与所有调节亚基相互作用形成各种异二聚体。通常响应于受体酪氨酸激酶的生长因子刺激通过调节亚基sh2结构域与激活受体或诸如irs-1的衔接蛋白的特定磷酸-酪氨酸残基的相互作用而使ia类pi3k激活。p110α和p110β均在所有类型细胞中表达，而p110δ表达更受限于包括白细胞和一些上皮细胞的炎性细胞。唯一的ib类酶由与p101调节亚基相互作用的p120γ催化亚基(通常也称为'p110γ')组成(cell,vol.89,105-114(1997))。此外，据报道，ib类酶被g蛋白偶联受体系统(gpcr)激活，并主要在包括白细胞和巨噬细胞以及心肌细胞的炎症细胞中表达(curr.opin.pharmacol.3(4),426-434(2003)；thrombhaemost99:279-285(2008))。

pi3k/akt/mtor途径对于癌症的形成和发展是重要的，并且在癌症中经常观察到表达p110α的pik3ca基因以及pten的突变。因此，已经开发了pi3kα和pi3kβ抑制剂或非特异性i类抑制剂作为过表达pi3k的特定亚基的癌症的治疗剂。尽管所述抑制剂最初似乎显示出一些功效，但已显示由于剂量相关的副作用和激活替代信号的抗性机制而具有有限的治疗效果。

pi3k抑制剂可作为抗癌剂通过激活抗肿瘤免疫反应来攻击癌症。这已经通过多项研究表明，在某研究中pi3kδ亚基的功能通过转基因小鼠被遗传抑制，或者在某研究中将pi3kδ亚基特异性抑制剂施用于小鼠(nature2014,510:407-411)。在肺癌、乳腺癌和胰腺癌的小鼠模型中的pi3kδ亚基功能的抑制能够抑制调节性t细胞(tregs)的功能以及tregs向肿瘤的迁移。已经证明，动物模型中pi3kδ亚基的抑制能够抑制调节性t细胞，从而产生可以通过宿主免疫抑制癌症增殖的抗肿瘤免疫环境。因此，已经确定特异性抑制pi3kδ亚基的方法可以是诱导针对癌症的免疫力的免疫抗癌剂的机制。

为了鉴定pi3kδ和pi3kγ(其是免疫细胞功能的重要亚基)的作用，已经对缺乏这两种基因的小鼠模型进行了研究(blood,2007,110:2940-2947)。根据该研究，缺乏这两个亚基的敲除小鼠显示出胸腺中胸腺细胞发育的严重损害，这导致与淋巴细胞减少相关的炎症反应。而且，另一项研究还报道了缺乏pi3kδ和pi3kγ亚基的小鼠在t细胞发育中具有严重阻滞(j.immunol.,2005,175:2783-2787)。因此，考虑到正常t细胞分化对于炎症反应以及抗癌免疫是重要的，预期仅对pi3kδ亚基的选择性抑制(即，不同时抑制pi3kδ和pi3kγ亚基)在免疫副作用方面是更安全的方法。

技术实现要素：

技术问题

本发明人发现某些喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐对pi3kδ亚基具有选择性抑制活性，因此可有效地用于预防或治疗癌症，同时避免诸如与淋巴细胞减少相关的炎症反应的副作用。

因此，本发明提供上述喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法、包含其的药物组合物及其用途。

解决问题的方案

根据本发明的一个方面，提供了含喹唑啉的稠环化合物及其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，提供了制备所述含喹唑啉的稠环化合物及其药学上可接受的盐的方法。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含所述含喹唑啉的稠环化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

根据本发明的另一个方面，提供了一种治疗方法，其包括施用所述含喹唑啉的稠环化合物或其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，提供了所述含喹唑啉的稠环化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗癌症的药物中的用途。

发明的有益效果

本发明化合物即含喹唑啉的稠环化合物或其药学上可接受的盐对pi3kδ亚基具有选择性抑制活性，因此可有效地用于预防或治疗癌症，同时避免诸如与淋巴细胞减少相关的炎症反应的副作用。并且，本发明的化合物或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂例如t淋巴细胞激活的负调节抗体(例如，抗pdl1抗体)的共同施用可以表现出协同抗癌活性。

附图说明

图1显示通过在鼠同系肿瘤模型中评估本发明化合物和/或免疫检查点抑制剂的抗肿瘤功效获得的结果。

具体实施方式

如本文所用，术语“烷基”是指直链或支链脂肪族烃基。例如，c1-6烷基是指具有1-6个碳原子的直链或支链脂肪族烃，例如甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、新戊基和异戊基。

术语“羟基”是指“-oh”基团。术语“烷氧基”是指通过用烷基取代羟基中的氢原子而形成的基团。例如，c1-c6烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、正丁氧基、正戊氧基、异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基和异戊氧基。

术语“卤素”是指氟、溴、氯或碘。

术语“氨基”是指“-nh2”基团。术语“烷基氨基”是指被单烷基或二烷基取代的氨基。例如，c1-6烷基氨基包括被单-c1-6烷基或二-c1-6烷基取代的氨基。

术语“烷硫基”是指“-sr”基团，其中r为烷基。术语“氰基”是指“-cn”。

本发明提供对pi3kδ亚基具有选择性抑制活性的化合物或其药学上可接受的盐，即式1的化合物或其药学上可接受的盐：

<式1>

其中，

w为n或ch，

r2为氢、c1-6烷基、c3-8环烷基、c3-8杂环烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的杂芳基，

r3为氢、c1-6烷基、c3-8环烷基或c3-8杂环烷基，

cy为以下式a或式b的基团，其中式a和式b中的*表示与式1的化合物连接的位置：

如本文所用，表述“对pi3kδ亚基具有选择性抑制活性”是指对pi3kα、pi3kβ、pi3kδ和pi3kγ亚基中的pi3kδ亚基具有显著更高的抑制活性。在一个实施方案中，表述“对pi3kδ亚基显著更高的抑制活性”是指从体外酶测定中获得的对pi3kδ亚基的ic50比由其获得的对pi3kγ亚基的ic50低至少3倍。在另一个实施方案中，表述“对pi3kδ亚基显著更高的抑制活性”是指从体外酶测定中获得的对pi3kδ亚基的ic50比由其获得的对pi3kα亚基的ic50低至少25倍，比由其获得的对pi3kβ亚基的ic50低至少200倍，以及比由其获得的对pi3kγ亚基的ic50低至少3倍。

在式1的化合物或其药学上可接受的盐中，r2可以为c3-8环烷基或任选被卤素取代的苯基。

而且，在式1的化合物或其药学上可接受的盐中，r3可以为c1-6烷基或c3-8环烷基。

在本发明的一个实施方案中，提供了式1a的化合物或其药学上可接受的盐，其中w为n：

<式1a>

其中，r1、r2、r3和cy与上述定义相同。

在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，r1可以为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、氨基、c1-6烷基氨基、c1-6烷硫基或卤素基团。优选地，r1可以为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、氨基、c1-6烷硫基或卤素基团。更优选地，r1可以为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基或氨基。特别优选地，r1可以为c1-6烷氧基或氨基。在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，r2可以为c3-8环烷基或苯基。优选地，r2可以为苯基。在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，r3可以为c1-6烷基或c3-8环烷基。

在一个实施方案中，在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，r1为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、氨基、c1-6烷基氨基、c1-6烷硫基或卤素基团，r2为c3-8环烷基或苯基，r3为c1-6烷基或c3-8环烷基。在另一个实施方案中，在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，r1为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、氨基、c1-6烷硫基或卤素基团，r2为c3-8环烷基或苯基，r3为c1-6烷基或c3-8环烷基。在另一个实施方案中，在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，r1为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基或氨基，r2为c3-8环烷基或苯基，r3为c1-6烷基或c3-8环烷基。在优选实施方案中，在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，r1为c1-6烷氧基或氨基，r2为苯基，r3为c1-6烷基或c3-8环烷基。

在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，优选的化合物包括选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

(s)-4-((1-(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-甲基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-(二甲基氨基)嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-(甲基巯基)嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-甲基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)-2-甲基丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((环丙基(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((环丙基(5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((环丙基(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-4-氧代-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-4-氧代-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-3-环丙基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氟嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-5-(2-甲基嘧啶-5-基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(环丙基((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)甲基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；和

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(环丙基((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)甲基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮。

在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，更优选的化合物包括选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

(s)-4-((1-(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-甲基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-(甲基巯基)嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-甲基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)-2-甲基丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((环丙基(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((环丙基(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-4-氧代-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-4-氧代-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氟嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-5-(2-甲基嘧啶-5-基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；和

(s)-2-(环丙基((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)甲基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮。

在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，更优选的化合物包括选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

(s)-4-((1-(5-(2-甲基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((环丙基(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-4-氧代-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-5-(2-甲基嘧啶-5-基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；和

(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮。

在式1a的化合物或其药学上可接受的盐中，特别优选的化合物包括选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

(s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((环丙基(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮；和

(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮。

式1a的化合物可以为(s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

式1a的化合物可以为(s)-4-((环丙基(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

式1a的化合物可以为(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮或其药学上可接受的盐。

式1a的化合物可以为(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮或其药学上可接受的盐。

在本发明的另一个实施方案中，提供了式1b的化合物或其药学上可接受的盐，其中w为ch：

<式1b>

其中，r1、r2、r3和cy与上述定义相同。

在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，r1可以为氢、c1-6烷基、c3-8环烷基、c1-6烷氧基、氨基、c1-6烷基氨基或卤素基团。优选地，r1可以为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、氨基或卤素基团。更优选地，r1可以为c1-6烷基或c1-6烷氧基。在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，r2可以为任选被卤素取代的苯基。优选地，r2可以为苯基。在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，r3可以为c1-6烷基。

在一个实施方案中，在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，r1为氢、c1-6烷基、c3-8环烷基、c1-6烷氧基、氨基、c1-6烷基氨基或卤素基团，r2为任选被卤素取代的苯基，r3为c1-6烷基。在另一个实施方案中，在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，r1为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、氨基或卤素基团，r2为苯基，r3为c1-6烷基。在优选实施方案中，在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，r1为c1-6烷基或c1-6烷氧基，r2为苯基，r3为c1-6烷基。

在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，优选的化合物包括选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

(s)-4-((1-(1-氧代-2-苯基-8-(嘧啶-5-基)-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-(二甲基氨基)嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-环丙基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(2-(4-氟苯基)-8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(1-氧代-2-苯基-8-(嘧啶-5-基)-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-8-(2-氨基嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮；

(s)-8-(2-氟嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮；

(s)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-2-苯基-8-(嘧啶-5-基)异喹啉-1(2h)-酮；

(s)-8-(2-氨基嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮；和

(s)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-8-(2-甲基嘧啶-5-基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮。

在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，更优选的化合物包括选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-8-(2-氟嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮；

(s)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-2-苯基-8-(嘧啶-5-基)异喹啉-1(2h)-酮；

(s)-8-(2-氨基嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮；和

(s)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-8-(2-甲基嘧啶-5-基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮。

在式1b化合物或其药学上可接受的盐中，特别优选的化合物包括选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：

(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；

(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈；和

(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈。

式1b化合物可以为(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

式1b化合物可以为(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

式1b化合物可以为(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

式1的化合物或其药学上可接受的盐可具有含有不对称碳的取代基(例如，取代基r3)，因此可以是外消旋混合物(rs)的形式或光学异构体的形式，例如(r)或(s)异构体。式1的化合物或其药学上可接受的盐包括外消旋混合物(rs)和光学异构体，例如(r)或(s)异构体。

本发明的式1的化合物可以是药学上可接受的盐形式。盐可以为常规的酸加成盐形式，其包括但不限于：例如衍生自诸如以下酸的无机酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸或碳酸；以及衍生自诸如以下酸的有机酸的盐：柠檬酸、乙酸、乳酸、酒石酸、马来酸、富马酸、乳糖酸、水杨酸、丙二酸、甲酸、丙酸、草酸、三氟乙酸、苯甲酸、葡萄糖酸、甲磺酸、乙醇酸、琥珀酸、4-甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸。而且，盐包括常规的金属盐形式，例如衍生自碱金属(例如锂、钠或钾)的盐；衍生自碱土金属(例如钙或镁)的盐；或铬盐。

可以根据各种方法制备式1的化合物或其药学上可接受的盐。例如，可以根据以下示例性反应方案1-3制备式1的化合物或其药学上可接受的盐，但不限于此。

<反应方案1>

在上述反应方案1中，x为卤素，boc为氨基保护基团(例如，叔丁氧基羰基)，r2和r3与上述定义相同。

式3的化合物可以通过在约70℃下在亚磷酸三苯酯和吡啶的存在下使式2化合物与氨基酸(例如n-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸等)偶合，然后用适当的苯胺衍生物脱氢来制备。式3的化合物中的保护基团可以通过与诸如盐酸或三氟乙酸的酸反应除去，从而得到酸加成盐形式的式4的化合物。反应方案1的反应可以参考例如bioorganic&medicinalchemistry,vol16,issue5,2008,2570-2578中公开的方法进行。

<反应方案2>

在上述反应方案2中，x为卤素，boc为氨基保护基团(例如，叔丁氧基羰基)，r2和r3与上述定义相同。

式6的化合物可以通过在三乙胺的存在下使式5的化合物(例如，s-异构体)与n,o-二甲基羟胺偶联，以及使用羟基苯并三唑(hobt)和1-乙基-3-(3'-二甲基氨丙基)碳二亚胺(edc)来制备。式8的化合物可以通过在碱(例如三乙胺)的存在下使式7的化合物与氯化剂反应，然后与r2-nh2反应来制备。可以在-78℃在氩气氛下通过使用溶解在己烷中的正丁基锂使式8的化合物脱氢。向其中加入式6的化合物后，将反应混合物的温度控制在-50℃。将反应混合物用水淬灭以分离式9的化合物。在一个实施方案中，式6的化合物的镁阴离子可以通过在加入二价阴离子之前使用诸如异丙基氯化镁的弱亲核有机镁物质来制备。式10的化合物可以通过使式9的化合物与酸(例如盐酸)在溶剂(例如甲醇)中反应，然后用碳酸钠或氢氧化铵溶液碱化来制备。

<反应方案3>

在上述反应方案3中，x为卤素，r1、r2、r3和cy与上述定义相同。

式1的化合物可以通过在诸如三乙胺、n,n-二异丙基乙胺或氨的碱的存在下，使式4或式10的化合物与4-氯喹唑啉-6-甲腈或4-氯-5-氟喹唑啉偶联以产生式12化合物，然后使用r1-嘧啶-5-硼酸进行suzuki反应来制备。

并且，使式3的化合物(即，具有氨基保护基的化合物)或通过将氨基保护基引入式10的化合物而获得的化合物进行suzuki反应，然后除去氨基-保护基团以制备式11的化合物。并且，式1的化合物可以按照与上述相同的方法，通过在碱存在下使式11的化合物与4-氯喹唑啉-6-甲腈或4-氯-5-氟喹唑啉偶合来制备。可以通过在诸如三乙胺的碱的存在下使用诸如二碳酸二叔丁酯的氨基保护基来向式10的化合物中引入氨基保护基团。

suzuki反应通常可以通过使用钯催化剂进行。钯催化剂包括四(三苯基膦)钯(0)、乙酸钯(ii)、二氯{1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁}钯(ii)等。碱包括无机碱，例如碳酸铯(cs2co3)、碳酸钠(na2co3)、碳酸钾(k2co3)、磷酸三钾(k3po4)。反应可在非极性有机溶剂(例如甲苯)中或在极性有机溶剂(例如1,4-二噁烷、四氢呋喃、乙腈、1,2-二甲氧基乙烷或n,n-二甲基甲酰胺)中，在50℃-150℃下进行，优选在80℃-110℃下进行。其他反应条件，包括反应时间，可以根据关于suzuki反应的已知方法进行。

本发明的喹唑啉衍生物，即式1的化合物或其药学上可接受的盐对pi3kδ亚基具有选择性抑制活性，因此可有效地用于预防或治疗pi3kδ亚基介导的疾病，例如，呼吸系统疾病、炎症性疾病或增殖性疾病，同时避免诸如与淋巴细胞减少相关的炎症反应等副作用。

因此，本发明在其范围内包括用于选择性抑制磷脂酰肌醇3-激酶δ亚基的药物组合物，该组合物包含治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

例如，本发明在其范围内包括用于预防或治疗呼吸系统疾病、炎性疾病或增殖性疾病的药物组合物。呼吸系统疾病和炎性疾病包括例如哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)、特发性肺纤维化、过敏(或过敏反应)、银屑病、类风湿性关节炎和自身免疫疾病。增殖性疾病包括癌症，例如乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌癌症、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病和淋巴瘤。

在一个实施方案中，本发明提供用于预防或治疗增殖性疾病的药物组合物。在另一个实施方案中，本发明提供用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。癌症包括乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病、淋巴瘤等。

并且，本发明还发现，式1的化合物或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂(例如t淋巴细胞激活的负调节抗体)的共同施用显示出协同抗癌活性。免疫检查点抑制剂包括抗pdl1抗体、抗pd1抗体、抗ctla4抗体等。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐与治疗有效量的免疫检查点抑制剂的组合，其中所述组合显示出协同抗癌活性。癌症包括乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病、淋巴瘤等。在药物组合物中，式1的化合物或其药学上可接受的盐和免疫检查点抑制剂可以配制成具有单个隔室(即，配制成相同剂型)或具有两个或更多个隔室的剂型(即，配制成相同的剂型或不同的剂型)。两个或更多个隔室可以为通过相同的给药途径或通过不同的给药途径施用的剂型。例如，两个或更多个隔室可以分别为口服给药或肠胃外给药的剂型。

本发明的药物组合物可包含药学上可接受的载体，例如稀释剂、崩解剂、甜味剂、润滑剂或调味剂。药物组合物可以配制成口服剂型，例如片剂、胶囊、粉末、颗粒、悬浮液、乳液或糖浆；或肠胃外剂型，例如外用溶液、外用悬浮液、外用乳液、凝胶(例如软膏)、吸入剂、雾化剂、注射剂。剂型可以是各种形式，例如单次给药或多次给药的剂型。

本发明的药物组合物可包含，例如稀释剂(例如乳糖、玉米淀粉等)、润滑剂(例如硬脂酸镁)、乳化剂、悬浮剂、稳定剂和/或等渗剂。如果需要，组合物还包含甜味剂和/或调味剂。

本发明的组合物可以口服或胃肠外给药，包括吸入、静脉内、腹膜内、皮下、直肠和局部给药途径。因此，本发明的组合物可以配制成各种形式，例如片剂、胶囊、水溶液或悬浮液。在用于口服给药的片剂的情况下，通常使用诸如乳糖、玉米淀粉的载体和诸如硬脂酸镁的润滑剂。在用于口服给药的胶囊的情况下，乳糖和/或干燥的玉米淀粉可用作稀释剂。当口服给药需要含水性悬浮液时，可将活性成分与乳化剂和/或悬浮剂结合。如果需要，可以使用某些甜味剂和/或调味剂。对于肌肉内、腹膜内、皮下和静脉内给药，通常制备活性成分的无菌溶液，并且应适当调节和缓冲溶液的ph。对于静脉内给药，应控制溶质的总浓度以使制剂等渗。本发明的组合物可以是含有药学上可接受的载体的水溶液形式，例如ph值为7.4的生理盐水。可以通过局部推注注射将溶液引入患者的肌肉内血流中。

喹唑啉衍生物，即式1的化合物或其药学上可接受的盐可以以约0.0001mg/kg/天至约100mg/kg/天的治疗有效量施用至受试体患者。当然，剂量可以根据患者的年龄、体重、易感性、症状或化合物的活性而改变。并且，免疫检查点抑制剂可以以相应抗体的已知的治疗有效量施用，该量可以由本领域技术人员适当地控制。

本发明在其范围内包括用于选择性抑制哺乳动物中磷脂酰肌醇3-激酶δ亚基的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐。

例如，本发明在其范围内包括用于治疗呼吸系统疾病、炎性疾病或增殖性疾病的方法。呼吸系统疾病和炎性疾病包括例如哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)、特发性肺纤维化、过敏(或过敏反应)、银屑病、类风湿性关节炎和自身免疫疾病。增殖性疾病包括癌症，例如乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌癌症、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病和淋巴瘤。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗哺乳动物中的增殖性疾病优选癌症的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐。癌症包括乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病、淋巴瘤等。

并且，本发明还提供了用于治疗哺乳动物癌症的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的式1的化合物或其药学上可接受的盐与治疗有效量的免疫检查点抑制剂的组合。其中组合显示出协同抗癌活性。在组合给药中，各活性成分可以同时给药或分开给药；并通过相同的给药途径或通过不同的给药途径。癌症包括乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病、淋巴瘤等。

本发明还提供式1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于选择性抑制哺乳动物中磷脂酰肌醇3-激酶δ亚基的药物中的用途。

例如，本发明在其范围内包括式1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗呼吸系统疾病、炎性疾病或增殖性疾病的药物中的用途。呼吸系统疾病和炎性疾病包括例如哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)、特发性肺纤维化、过敏(或过敏反应)、银屑病、类风湿性关节炎和自身免疫疾病。增殖性疾病包括癌症，例如乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌癌症、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病和淋巴瘤。

在一个实施方案中，本发明提供式1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗增殖性疾病，优选癌症的药物中的用途。癌症包括乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病、淋巴瘤等。

而且，本发明提供式1的化合物或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂组合用于制备用于预防或治疗癌症的药物的用途。在组合中，各活性成分可以同时给药或分开给药；并通过相同的给药途径或通过不同的给药途径。癌症包括乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、黑色素瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、食道癌、前列腺癌、脑癌、胆管癌、卵巢癌、结节性硬化症、肺泡横纹肌肉瘤、白血病、淋巴瘤等。

提供以下实施例和实验例仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。

按如下方法对在以下制备和实施例中制备的化合物进行分析：使用bruker400mhz光谱仪进行核磁共振(nmr)光谱分析，并以ppm分析其化学位移。柱色谱法在硅胶(默克(merck)，70-230目)上进行。除非另有说明，否则所有起始原料均为商业购得并且无需进一步纯化即可使用。通过薄层色谱(tlc)在250nm硅胶板上分析所有反应和色谱馏分，并用紫外线或碘(i2)染色显现。通过快速层析或反相hplc纯化产物和中间体。

制备1.(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐

步骤1.(1-(5-氯-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯

向2-氨基-6-氯苯甲酸(1.00g，7.29mmol)、n-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(1.28g，7.29mmol)的无水吡啶(4ml)溶液中缓慢加入三苯基亚磷酸酯(4.8ml，18.2mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌2小时，并向其中加入苯胺(798ml，8.95mmol)。将反应混合物在相同温度下搅拌4小时，然后减压浓缩。将所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(正己烷/乙酸乙酯＝10/1，v/v)纯化所得残余物，得到450mg为白色固体的标题化合物。

步骤2.(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐

向步骤1中制备的(1-(5-氯-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(450mg，1.07mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中缓慢加入盐酸的1,4-二噁烷(4m，2ml)溶液。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩。向所得残余物中加入乙酸乙酯。将混合物在室温下搅拌1小时，然后减压过滤。干燥所得固体，得到490mg为白色固体的标题化合物。产物无需进一步纯化即可用于后续反应。

制备2-4

按照与制备1相同的方法，分别使用(s)-2-(n-(叔丁氧基羰基)-氨基)丁酸、n-(叔丁氧基羰基)-l-正缬氨酸和(s)-n-boc-环丙基甘氨酸代替n-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸，从而制备(s)-2-(1-氨基丙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐(制备2)、(s)-2-(1-氨基丁基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐(制备3)和(s)-2-(氨基(环丙基)甲基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐(制备4)。

制备5.(s)-2-(1-氨基-2-甲基丙基)-5-溴-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐

按照与制备1相同的方法，使用2-氨基-6-溴苯甲酸和n-(叔丁氧基羰基)-l-缬氨酸代替2-氨基-6-氯苯甲酸和n-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸制备标题化合物。

制备6.(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-环丙基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐

按照与制备1相同的方法，用环丙胺代替苯胺制备标题化合物。

制备7.(s)-2-(1-氨基丙基)-5-氯-3-环丙基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐

按照与制备2相同的方法，用环丙胺代替苯胺制备标题化合物。

制备8.(s)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

步骤1.2-氯-6-甲基苯甲酰氯

将2-氯-6-甲基苯甲酸(171mg，1mmol)、草酰氯(254mg，2mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(5μl)的二氯甲烷(3ml)溶液在室温下搅拌2个小时。减压浓缩反应混合物，得到黄色液体残余物。残余物无需进一步纯化即可用于后续反应。

步骤2.2-氯-6-甲基-n-苯基苯甲酰胺

将苯胺(93mg，1.1mmol)、三乙胺(202mg，2mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液在室温下搅拌10分钟。将步骤1中制备的2-氯-6-甲基苯甲酰氯(202mg，2mmol)缓慢加入该溶液中，然后在室温下搅拌1小时。将水(3ml)加入到反应混合物中，然后用二氯甲烷萃取。将所得萃取物用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。向所得残余物中加入正庚烷。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后减压过滤。干燥所得固体，得到214mg为白色固体的标题化合物。(收率：87％)

步骤3.(s)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃下搅拌n-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(1g，5.3mmol)、三乙胺(2.9ml，21.1mmol)和羟基苯并三唑(135mg，5.3mmol)于无水二氯甲烷(20ml)中的混合物的同时，在30分钟内向其中缓慢加入1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(384.3mg，10.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后向其中加入n,o-二甲基羟胺盐酸盐(568.7mg，5.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌20小时，然后用水(100ml)淬灭。用水(2×1l)和盐水(500ml)洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤，然后减压浓缩。将所得残余物在石油醚(200ml)中浆化，在室温下搅拌10分钟，然后过滤。将所得固体真空干燥，得到1.1g为白色固体的标题化合物。

步骤4.(s)-(4-(3-氯-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯

将步骤2中制备的2-氯-6-甲基-n-苯基苯甲酰胺(246mg，1mmol)的无水四氢呋喃(3ml)溶液冷却至-78℃，然后在20分钟内向其中缓慢加入正丁基锂的己烷溶液(2.5m，1ml)。将反应混合物在相同温度下搅拌2小时。在-78℃下向反应混合物中加入步骤3中制备的(s)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(370mg，1.5mmol)的无水四氢呋喃(5ml)溶液。然后，在20分钟内将异丙基氯化镁的四氢呋喃(0.9ml)溶液缓慢加入至反应混合物中。将反应混合物在相同温度下搅拌2小时，然后将其反应温度升至-50℃。将反应混合物用水(3ml)淬灭，然后用乙酸乙酯萃取。萃取液用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所得残余物通过硅胶柱色谱法(正己烷/乙酸乙酯＝2/1，v/v)纯化，得到185mg为无色液体的标题化合物。产物无需进一步纯化即可用于后续反应。

步骤5.(s)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

在室温下向步骤4中制备的(s)-(4-(3-氯-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(390mg，0.9mmol)的甲醇(3ml)溶液中缓慢加入盐酸(1ml)。将反应混合物在60℃下搅拌3小时，用饱和的氢氧化铵溶液控制在ph为9-10，然后用二氯甲烷萃取。萃取液用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝20/1，v/v)纯化所得残余物，得到189mg为白色固体的标题化合物。(收率：67％)

制备9.(s)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-(4-氟苯基)异喹啉-1(2h)-酮

按照与制备8相同的方法，使用4-氟苯胺代替苯胺制备标题化合物。

制备10和制备11

按照与制备8相同的方法，分别使用(s)-2-(n-(叔丁氧基羰基)-氨基)丁酸和n-(叔丁氧基羰基)-l-缬氨酸代替n-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸制备(s)-3-(1-氨基丙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮(制备10)和(s)-3-(1-氨基-2-甲基丙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮(制备11)。

制备12.(s)-4-((1-(5-氯-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

向制备1中制得的(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐(16.9mg，0.052mmol)和4-氯喹唑啉-6-甲腈(10mg，0.052mmol)的异丙醇(1ml)溶液中缓慢加入n,n-二异丙基乙胺(28μl，0.16mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时，冷却至室温，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(正己烷/乙酸乙酯＝1/1，v/v)纯化黄色液体中的残余物，得到14mg为白色固体的标题化合物。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.63(s,1h),8.27(s,1h),7.88(s,2h),7.64～7.57(m,5h),7.50(m,2h),7.40(m,1h),7.29(m,1h),5.24(m,1h),1.52(d,3h)。

制备13-18

按照与制备12相同的方法，分别使用制备2-7中制得的化合物代替(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐制备下述制备13-18的标题化合物。

制备13.(s)-4-((1-(5-氯-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.61(s,1h),8.30(s,1h),7.90(s,2h),7.63(m,5h),7.55(m,1h),7.48(m,2h),7.04(d,1h),5.27(m,1h),2.03(m,1h),1.85(m,1h),0.86(t,3h)。

制备14.(s)-4-((1-(5-氯-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.63(s,1h),8.32(s,1h),7.90(s,2h),7.64～7.57(m,5h),7.50(m,2h),7.39(d,1h),6.97(d,1h),5.35(m,1h),1.86(m,2h),1.36(m,1h),1.24(m,1h),0.68(t,3h)。

制备15.(s)-4-(((5-氯-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)(环丙基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.60(s,1h),8.27(s,1h),7.90(s,2h),7.63(d,2h),7.58(m,3h),7.50(m,2h),7.46(m,1h),6.97(d,1h),4.98(m,1h),1.36(m,1h),0.58(m,2h),0.35(m,1h),0.12(m,1h)。

制备16.(s)-4-((1-(5-溴-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)-2-甲基丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.59(s,1h),8.26(s,1h),7.91(s,2h),7.74(m,2h),7.61(m,4h),7.39(m,1h),7.30(m,1h),6.77(d,1h),5.44(m,1h),2.26(m,1h),0.99(d,3h),0.83(d,3h)。

制备17.(s)-4-((1-(5-氯-3-环丙基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.74(s,1h),8.28(s,1h),7.93(s,2h),7.62(d,2h),7.47(m,1h),7.42(m,1h),6.33(m,1h),3.09(m,1h),1.71(d,3h),1.48(m,2h),1.12(m,1h),1.01(m,1h)。

制备18.(s)-4-((1-(5-氯-3-环丙基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.73(s,1h),8.36(s,1h),7.92(s,2h),7.57(m,2h),7.46(m,1h),7.26(m,1h),6.39(m,1h),3.10(m,1h),2.19(m,1h),2.00(m,1h),1.49(m,2h),1.06(t,3h),0.88(m,2h)。

制备19-22

按照与制备12相同的方法，分别使用4-氯-5-氟喹唑啉代替4-氯喹唑啉-6-甲腈，使用制备1、2、4和5中制得的化合物代替(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐制备下述制备19-22的标题化合物。

制备19.(s)-5-氯-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.49(s,1h),7.83(m,1h),7.61(m,7h),7.49(m,2h),7.38(m,1h),7.13(m,1h),5.21(m,1h),1.48(d,3h)。

制备20.(s)-5-氯-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),7.66～7.57(m,7h),7.48(m,2h),7.37(m,1h),7.14(m,1h),5.22(m,1h),1.97(m,1h),1.77(m,1h),0.87(t,3h)。

制备21.(s)-5-氯-2-(环丙基((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)甲基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.46(s,1h),7.68～7.51(m,9h),7.48(m,1h),7.43(m,1h),7.20(m,1h),4.97(m,1h),1.32(m,1h),0.53(m,2h),0.37(m,1h),0.21(m,1h)。

制备22.(s)-5-溴-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.58(s,1h),7.72(m,1h),7.71～7.45(m,6h),7.36(m,2h),7.15(m,2h),7.14(m,1h),5.39(m,1h),2.21(m,1h),0.99(d,3h),0.82(d,3h)。

制备23-25

按照与制备12相同的方法，分别使用制备8-10中制得的化合物代替(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐制备下述制备23-25的标题化合物。

制备23.(s)-4-((1-(8-氯-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),8.35(s,1h),7.85(m,2h),7.31(m,3h),7.10(m,1h),7.05(m,4h),6.78(br,1h),6.62(s,1h),5.06(m,1h),1.50(d,3h)。

制备24.(s)-4-((1-(8-氯-2-(4-氟苯基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.57(s,1h),8.44(s,1h),7.95～7.80(m,2h),7.48～7.39(m,3h),7.33～7.29(m,2h),7.20(m,1h),6.91(m,1h),6.73(d,1h),6.62(s,1h),5.06～5.01(m,1h),1.52(d,3h)。

制备25.(s)-4-((1-(8-氯-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,meod)δ8.85(s,1h),8.47(s,1h),8.02(d,1h),7.81(d,1h),7.62～7.43(m,9h),6.83(s,1h),4.94(m,1h),2.18(m,1h),1.94(m,1h),0.90(t,3h)。

制备26和制备27

按照与制备12相同的方法，分别使用4-氯-5-氟喹唑啉代替4-氯喹唑啉-6-甲腈，使用制备8和11中制得的化合物分别代替(s)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮盐酸盐制备下述制备26和制备27的标题化合物。

制备26.(s)-8-氯-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.50(s,1h),7.64(m,2h),7.50(m,2h),7.44(m,2h),7.37～7.30(m,4h),7.17～7.12(m,1h),6.67(m,1h),6.60(s,1h),5.06(m,1h),1.50(d,3h)。

制备27.(s)-8-氯-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),7.66(m,3h),7.57(m,2h),7.48(m,1h),7.35(m,2h),7.20(m,2h),7.15(m,1h),6.88(m,1h),6.45(s,1h),4.97(m,1h),1.00(d,3h),0.88(d,3h)。

实施例1.(s)-4-((1-(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

向制备12中制得的(s)-4-((1-(5-氯-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈(15mg，0.03mmol)、嘧啶-5-硼酸(5.6mg，0.045mmol)、2n碳酸钠溶液(400μl)和四(三苯基膦)钯(0)(1.9mg，5mol％)的混合物中缓慢加入1,4-二噁烷(1ml)。将反应混合物在96℃下在搅拌下回流过夜，然后冷却至室温。向反应混合物中加入蒸馏水，然后用二氯甲烷萃取。萃取液用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩，得到黄色液体残余物。将残余物用硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝9/1，v/v)纯化，得到8.9mg为淡黄色固体的标题化合物。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.14(s,1h),8.71(s,2h),8.64(s,1h),8.29(s,1h),7.88(m,3h),7.85(s,1h),7.57(m,2h),7.50(m,2h),7.33(m,3h),5.26(m,1h),1.58(d,3h)。

实施例2-47

按照与实施例1相同的方法，使用制备12-27中制得的化合物，相应的取代或未取代的嘧啶-5-硼酸制备实施例2-47的标题化合物。

实施例2.(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.64(s,1h),8.29(s,3h),7.86(s,2h),7.80(m,2h),7.60～7.52(m,4h),7.47(m,2h),7.29(m,1h),5.24(m,1h),5.07(s,2h),1.55(d,3h)；(产率:54％)。

实施例3.((s)-4-((1-(5-(2-甲基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.64(s,1h),8.60(s,2h),8.29(s,1h),7.87(m,4h),7.59(m,3h),7.45(m,1h),7.30(m,3h),5.26(m,1h),2.73(s,3h),1.53(d,3h)；(产率:52％)。

实施例4.(s)-4-((1-(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.69(s,2h),8.63(s,1h),8.30(s,1h),7.92(s,2h),7.90～7.82(m,2h),7.62～7.53(m,3h),7.43～7.35(m,1h),7.34～7.28(m,2h),6.99(d,1h),5.32～5.24(m,1h),2.04～1.98(m,1h),1.89～1.75(m,1h),0.88(t,3h)；(产率:65％)。

实施例5.(s)-4-((1-(5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),8.46(s,2h),8.34(s,1h),7.91(s,2h),7.84～7.81(m,2h),7.62～7.53(m,3h),7.43～7.37(m,1h),7.32～7.27(m,2h),7.12(d,1h),5.29～5.24(m,1h),4.00(s,3h),2.05～1.96(m,1h),1.89～1.76(m,1h),0.88(t,3h)；(产率:51％)。

实施例6.((s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),8.45(s,2h),8.32(s,1h),7.91(s,2h),7.85～7.80(m,2h),7.61～7.52(m,3h),7.40(d,1h),7.34～7.27(m,2h),7.06(d,1h),5.31～5.25(m,1h),4.41(q,2h),2.05～1.98(m,1h),1.85～1.78(m,1h),1.42(t,3h),0.88(t,3h)；(产率:67％)。

实施例7.(s)-4-((1-(5-(2-(二甲基氨基)嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.61(s,1h),8.31(s,1h),8.29(s,2h),7.91(s,2h),7.83～7.74(m,2h),7.60～7.51(m,3h),7.38～7.34(m,1h),733～7.27(m,2h),7.13(d,1h),5.30～5.26(m,1h),3.17(s,6h),2.05～1.96(m,1h),1.83～1.76(m,1h),0.88(t,3h)；(产率:60％)。

实施例8.(s)-4-((1-(5-(2-(甲基巯基)嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),8.48(s,2h),8.35(s,1h),7.91(s,2h),7.83(d,2h),7.60～7.52(m,3h),7.43～7.39(m,1h),7.31～7.26(m,2h),7.14(d,1h),5.28～5.24(m,1h),2.55(s,3h),2.04～1.95(m,1h),1.88～1.77(m,1h),0.88(t,3h)；(产率:44％)。

实施例9.(s)-4-((1-(5-(2-甲基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.64(s,1h),8.59(s,2h),8.33(s,1h),7.91(s,2h),7.82(m,2h),7.61(m,3h),7.56(m,1h),7.30(m,2h),6.98(d,1h),5.38(m,1h),2.73(s,3h),1.84(m,2h),1.34(m,1h),1.13(m,1h),0.69(t,3h)；(产率:51％)。

实施例10.(s)-4-((1-(5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.64(s,1h),8.46(s,2h),8.30(s,1h),7.91(s,2h),7.80(m,2h),7.59(m,3h),7.46(m,1h),7.30(m,2h),6.94(d,1h),5.37(m,1h),4.00(s,3h),1.84(m,2h),1.36(m,1h),1.24(m,1h),0.69(t,3h)；(产率:74％)。

实施例11.(s)-4-((1-(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.64(s,1h),8.44(s,2h),8.31(s,1h),7.91(s,2h),7.80(m,2h),7.62～7.55(m,3h),7.45(d,1h),7.30(m,2h),6.93(d,1h),5.38(m,1h),4.42(q,2h),1.84(m,2h),1.42(t,3h),1.36(m,1h),1.26(m,1h),0.69(t,3h)；(产率:51％)。

实施例12.(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.65(s,1h),8.35(s,1h),8.28(s,2h),7.91(s,2h),7.78(m,2h),7.63～7.55(m,3h),7.45(d,1h),7.33(m,2h),7.00(d,1h),5.38(m,1h),5.04(s,2h),1.85(m,2h),1.36(m,1h),1.24(m,1h),0.68(t,3h)；(产率:54％)。

实施例13.(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)-2-甲基丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.59(s,1h),8.29(s,1h),8.26(s,2h),7.91(s,2h),7.83～7.80(m,2h),7.59～7.51(m,3h),7.35～7.26(m,3h),6.88(d,1h),5.47～5.43(m,1h),5.14(brs,2h),2.34～2.23(m,1h),1.01(d,3h),0.84(d,3h)；(产率:53％)。

实施例14.(s)-4-((环丙基(4-氧代-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.70(s,2h),8.60(s,1h),8.32(s,1h),7.89(s,2h),7.86(m,2h),7.57(m,2h),7.49(m,2h),7.30(m,1h),7.13(d,1h),4.95(m,1h),1.39(m,1h),0.60(m,2h),0.40(m,1h),0.18(m,1h)；(产率:51％)。

实施例15.(s)-4-((环丙基(5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.59(s,1h),8.47(s,2h),8.39(s,1h),7.86(m,2h),7.80(m,2h),7.67(m,3h),7.53(m,1h),7.48(m,1h),7.36(m,1h),7.27(m,1h),4.91(m,1h),3.99(s,3h),1.42(m,1h),0.58(m,2h),0.39(m,1h),0.19(m,1h)；(产率:65％)。

实施例16.(s)-4-((环丙基(5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.45(s,1h),8.31(s,2h),7.90(s,1h),7.81(m,2h),7.80(m,2h),7.56(m,3h),7.47(m,1h),7.35(m,1h),7.27(m,1h),7.13(d,1h),4.97(m,1h),4.42(q,2h),1.40(t,3+1h),0.58(m,2h),0.40(m,1h),0.19(m,1h)；(产率:51％)。

实施例17.(s)-4-((1-(3-环丙基-4-氧代-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.23(s,1h),8.74(s,1h),8.71(s,2h),8.33(s,1h),7.92(s,2h),7.82(m,2h),7.53(m,1h),7.28(m,1h),6.37(m,1h),3.04(m,1h),1.74(d,3h),1.44(m,2h),1.13(m,1h),0.89(m,1h)；(产率:61％)。

实施例18.(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.74(s,1h),8.49(s,2h),8.34(s,1h),7.91(s,2h),7.78(d,2h),7.61(d,1h),7.27(m,1h),6.36(m,1h),4.08(s,3h),3.04(m,1h),1.74(d,3h),1.42(m,2h),1.14(m,1h),0.90(m,1h)；(产率:34％)。

实施例19.(s)-4-((1-(3-环丙基-5-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.74(s,1h),8.47(s,2h),8.34(s,1h),7.91(s,2h),7.77(s,2h),7.62(d,1h),7.27(m,1h),6.36(m,1h),4.50(q,2h),3.04(m,1h),1.74(d,3h),1.47(t,3h),1.41(m,2h),1.14(m,1h),0.90(m,1h)；(产率:56％)。

实施例20.(s)-4-((1-(3-环丙基-4-氧代-5-(嘧啶-5-基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.23(s,1h),8.73(s,1h),8.70(s,2h),8.38(s,1h),7.93(s,2h),7.79(s,2h),7,27(m,1h),6.23(m,1h),3.05(m,1h),2.21(m,1h),2.07(m,1h),1.45(m,2h),1.18(m,1h),1.09(t,3h),0.85(m,1h)；(产率:51％)。

实施例21.(s)-4-((1-(5-(2-氨基嘧啶-5-基)-3-环丙基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.73(s,1h),8.37(s,1h),8.29(s,2h),7.93(d,2h),7.71(m,2h),7.41(m,1h),7.26(m,1h),6.41(m,1h),5.22(s,2h),3.05(m,1h),2.22(m,1h),2.04(m,1h),1.44(m,2h),1.16(m,1h),1.08(t,3h),0.86(m,1h)；(产率:50％)。

实施例22.(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.15(s,1h),8.65(s,2h),8.46(s,1h),7.83(m,3h),7.63(m,2h),7.55(m,3h),7.45(m,1h),7.31(m,1h),7.18(m,1h),5.23(m,1h),1.52(d,3h)；(产率:61％)。

实施例23.(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.48(s,1h),8.28(s,2h),7.95(m,1h),7.79(m,2h),7.64(m,2h),7.55(m,3h),7.43(m,1h),7.31(d,1h),7.26(m,1h),7.17(m,1h),5.24(m,1h),5.07(s,2h),1.50(d,3h)；(产率:69％)。

实施例24.(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.69(s,2h),8.48(m,1h),7.86(m,2h),7.64(m,3h),7.55(m,3h),7.44(m,1h),7.28(m,2h),7.17(m,1h),5.22(m,1h),2.04(m,1h),1.82(m,1h),0.90(t,3h)；(产率:64％)。

实施例25.(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),8.28(s,3h),7.77(m,1h),7.64(m,3h),7.56(m,3h),7.45(m,1h),7.32(m,1h),7.27(m,1h),7.18(m,1h),5.23(m,1h),5.19(s,2h),2.00(m,1h),1.81(m,1h),0.88(t,3h)；(产率:70％)。

实施例26.(s)-5-(2-氟嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),8.20(br,1h),7.79(m,2h),7.65～7.55(m,6h),7.45(m,1h),7.30(m,1h),7.24(m,2h),7.15(m,1h),5.23(m,1h),1,99(m,1h),1.79(m,1h),0.88(t,3h)；(产率:64％)。

实施例27.(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)丙基)-5-(2-甲基嘧啶-5-基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.59(s,2h),8.48(s,1h),7.82(m,2h),7.65(m,2h),7.54(m,4h),7.44(m,1h),7.27(m,2h),7.15(m,1h),5.23(m,1h),2.72(s,3h),2.04(m,1h),1.79(m,1h),0.89(t,3h)；(产率:51％)。

实施例28.(s)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.69(s,2h),8.46(s,1h),7.88～7.78(m,2h),7.70～7.60(m,2h),7.60～7.47(m,4h),7.39(d,1h),7.31～7.24(m,2h),7.20～7.14(m,1h),5.41～5.37(m,1h),2.28～2.19(m,1h),1.03(d,3h),0.84(d,3h)；(产率:65％)。

实施例29.(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.45(s,1h),8.26(s,2h),7.80～7.73(m,2h),7.67～7.60(m,2h),7.59～7.51(m,4h),7.38～7.34(m,1h),7.32～7.28(m,1h),7.25～7.23(m,1h),7.19～7.13(m,1h),5.41～5.37(m,1h),5.26(brs,2h),2.27～2.18(m,1h),1.02(d,3h),0.83(d,3h)；(产率:50％)。

实施例30.(s)-2-(环丙基((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)甲基)-3-苯基-5-(嘧啶-5-基)喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.70(s,2h),8.50(s,1h),7.82(m,2h),7.65(m,3h),7.53(m,4h),7.34(m,1h),7.26(m,1h),7.18(m,1h),4.97(m,1h),1.37(m,1h),0.55(m,2h),0.42(m,1h),0.22(m,1h)；(产率:64％)。

实施例31.(s)-5-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-(环丙基((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)甲基)-3-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.45(s,1h),8.28(s,2h),7.75(m,2h),7.62(m,2h),7.53(m,3h),7.47(m,1h),7.35(m,1h),7.24(m,2h),7.16(m,1h),5.07(s,2h),4.99(m,1h),1.36(m,1h),0.54(m,2h),0.42(m,1h),0.22(m1h)；(产率:54％)。

实施例32.(s)-4-((1-(1-氧代-2-苯基-8-(嘧啶-5-基)-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.35(s,1h),9.06(s,1h),9.00(s,2h),8.67(s,1h),8.56(s,1h),8.28(m,1h),7.89(m,1h),7.68～7.62(m,2h),7.34(m,1h),7.24(m,4h),6.74(s,1h),6.30(d,1h),5.09(m,1h),1.55(d,3h)；(产率:58％)。

实施例33.(s)-4-((1-(8-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.52(s,1h),8.41(s,2h),8.27(s,1h),7.88(d,2h),7.66(m,1h),7.55(m,1h),7.46(m,1h),7.30(m,3h),7.20(m,1h),7.10(m,1h),6.71(s,1h),6,37(d,1h),5.15(m,1h),3.96(s,3h),1.54(d,3h)；(产率:55％)。

实施例34.(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),8.43(s,1h),8.40(s,2h),7.86(m,2h),7.66(m,2h),7.55(m,1h),7.33(m,1h),7.23(m,1h),7.17(m,2h),6.94(d,1h),6.70(s,1h),5.10(m,1h),4.34(m,2h),1.50(d,3h),1.25(t,3h)；(产率:71％)。

实施例35.(s)-4-((1-(8-(2-(二甲基氨基)嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),8.24(d,3h),7.85(m,2h),7.61(m,1h),7.45(m,2h),7.32(m,3h),7.21(m,1h),7.14(m,1h),6.63(s,1h),6.40(m,1h),5.04(m,1h),3.03(s,6h),1.49(d,3h)；(产率:54％)。

实施例36.(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(s,3h),8.34(s,1h),7.88(m,2h),7.69(m,1h),7.60(m,1h),7.57(m,1h),7.47(m,2h),7.31(m,2h),6.69(s,1h),6.56(d,1h),5.03(m,1h),2.61(s,3h),1.50(d,3h)；(产率:63％)。

实施例37.(s)-4-((1-(8-(2-环丙基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.53(s,1h),8.46(s,2h),8.32(s,1h),7.85(m,2h),7.66(m,1h),7.58(m,1h),7.47(m,1h),7.31(m,3h),7.21(m,2h),6.68(s,1h),6.57(d,1h),5.02(m,1h),2.08(m,1h),1.49(d,3h),1.00(m,2h),0.95(m,2h)；(产率:51％)。

实施例38.(s)-4-((1-(2-(4-氟苯基)-8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.61(s,1h),8.56(s,2h),8.43(s,1h),7.91(q,2h),7.68(t,1h),7.58(d,1h),7.47～7.43(m,1h),7.30～7.16(m,3h),6.99(t,1h),6.70(s,1h),6.62(d,1h),5.01(m,1h),2.65(s,3h),1.52(d,3h)；(产率:54％)。

实施例39.(s)-4-((1-(1-氧代-2-苯基-8-(嘧啶-5-基)-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.07(s.1h),8.67(s,2h),8.59(s,1h),8.35(s,1h),7.91(m,1h),7.69(m,1h),7.61(m,1h),7.51(m,1h),7.39(m,1h),7.31～7.21(m,4h),6.69(s,1h),6.26(m,1h),4.94(br,1h),2.05～1.95(m,1h),1.88～1.84(m,1h),0.91(t,3h)；(产率:59％)。

实施例40.(s)-4-((1-(8-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.56(s,1h),8.43(s,2h),8.29(s,1h),7.91(m,2h),7.65(m,1h),7.55～7.49(m,2h),7.37(m,2h),7.26～7.22(m,2h),7.20(d,1h),6.67(s,1h),6.10(m,1h),4.98(m,1h),3.97(s,3h),1.98(m,1h),1.86(m,1h),0.92(t,3h)；(产率:65％)。

实施例41.(s)-4-((1-(8-(2-乙氧基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.57(s,1h),8.42(s,2h),8.31(s,1h),7.90(m,2h),7.65(m,1h),7.55(m,2h),7.37(m,2h),7.24～7.21(m,2h),7.20(d,1h),6.67(s,1h),6.24(d,1h),4.96(m,1h),4.13(q,2h),1.97(m,1h),1.85(m,1h),1.39(t,3h),0.92(t,3h)；(产率:51％)。

实施例42.(s)-4-((1-(8-(2-甲基嘧啶-5-基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)丙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.85(s,1h),8.58(d,3h),8.28(s,1h),7.92(m,2h),7.67(m,1h),7.58(m,1h),7.52(m,1h),7.40(m,2h),7.32(m,1h),7.23(m,1h),6.68(s,1h),6.11(m,1h),4.96(m,1h),2.69(s,3h),1.99(m,1h),1.84(m,1h),0.92(t,3h)；(收率:53％)。

实施例43.(s)-8-(2-氨基嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.46(s,1h),8.25(s,2h),7.65(m,3h),7.52(m,1h),7.45(m,2h),7.28～7.12(m,5h),6.70(s,1h),6.60(m,1h),5.08(m,3h),1.52(t,3h)；(收率:58％)。

实施例44.(s)-8-(2-氟嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)乙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),8.17(br,1h),7.65(m,3h),7.55(m,1h),7.46(m,2h),7.34(m,1h),7.28(m,3h),7.24(m,1h),7.21(m,1h),6.69(s,1h),6.66(m,1h),5.09(m,1h),1.53(d,3h)；(收率:50％)。

实施例45.(s)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-2-苯基-8-(嘧啶-5-基)异喹啉-1(2h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.09(s,1h),8.68(s,2h),8.55(s,1h),7.66(m,4h),7.61(m,1h),7.58(m,2h),7.46(m,1h),7.27(m,2h),7.21(m,1h),6.92(m,1h),6.58(s,1h),4.98(m,1h),2.06(m,1h),1.05(d,3h),0.80(d,3h)；(收率:61％)。

实施例46.(s)-8-(2-氨基嘧啶-5-基)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),8.25(s,2h),7.67～7.59(m,4h),7.52(m,4h),7.49(m,1h),7.20(m,2h),6.92(m,1h),6.54(s,1h),4.98(m,1h),4.96(s,2h),2.06(m,1h),1.04(d,3h),0,80(d,3h)；(收率:63％)。

实施例47.(s)-3-(1-((5-氟喹唑啉-4-基)氨基)-2-甲基丙基)-8-(2-甲基嘧啶-5-基)-2-苯基异喹啉-1(2h)-酮

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.59(s,2h),8.54(s,1h),7.70～7.60(m,4h),7.56～7.42(m,4h),7.28(m,1h),7.20(m,2h),6.93(m,1h),6.57(s,1h),4.98(m,1h),2.71(s,3h),2.06(m,1h),1.03(d,3h),0.79(d,3h)；(收率:53％)。

实验例1.磷脂酰肌醇3-激酶δ(pi3kδ)活性的测定

通过使用pi3k酶-均相时间分辨荧光(pi3k-htrf)试剂盒测试本发明化合物的磷脂酰肌醇3-激酶δ(pi3kδ)的活性，该试剂盒可以在upstate^tm试剂盒购得(密里博有限公司(milliporeco),比勒利卡,马萨诸塞州,美国)。该试剂盒系统通过检测荧光复合物形成的竞争性抑制来间接测量通过pi3k产生的pip3的量。

使用三种缓冲溶液，即反应缓冲液、终止溶液和检测溶液。通过用蒸馏水稀释反应缓冲液(在update^tm试剂盒中提供)4倍并加入dtt至5mm的浓度来制备反应缓冲液。通过将stopa溶液和stopb溶液(在update^tm试剂盒中提供)以3:1的比例合并制备终止溶液。通过将检测溶液a、b和c(在update^tm试剂盒中提供)以1:1:18的比例合并制备检测溶液。通过用反应缓冲液分别将1mmpip2(磷脂酰肌醇4,5-二磷酸)储备溶液(在update^tm试剂盒中提供)和10mmatp(西格玛奥德里奇公司(sigma-aldrichco.),圣路易斯,密苏里州,美国)储备溶液稀释至20μm和40μm的浓度制备底物溶液和atp溶液。通过用底物溶液将pi3kδ(#14-604；upstate^tm试剂盒)稀释至0.2μg/ml的浓度(最终反应浓度：0.1μg/ml)制备酶溶液。

通过将每种化合物以最终浓度的40倍浓度溶解在100％dmso中，然后用反应缓冲液稀释10倍制备测试组。将5μl每种稀释的测试组溶液转移到384孔低凸缘白色平底微孔板(#3572,康宁生命科学有限公司(corninglifesciences),洛厄尔,马萨诸塞州,美国)。在该实验中的每个溶液添加步骤之后进行离心(1分钟，1000rpm)并振荡2分钟。接下来，向每个孔中加入10μl酶溶液。将底物溶液(10μl)与5μl不含测试化合物的100％dmso稀释溶液(即10％dmso溶液)的混合溶液用作阴性对照。并且，将酶溶液(10μl)与5μl不含测试化合物的100％dmso稀释溶液(即10％dmso溶液)的混合溶液用作阳性对照。将该板在25℃培养箱中预孵育10分钟。预孵育后，通过加入5μlatp溶液诱导磷酸化反应，并将平板在25℃培养箱中孵育30分钟。通过5μl终止溶液终止该酶反应，然后向其中加入5μl检测溶液。为了获得足够的荧光响应，将板在25℃的避光培养箱中孵育2小时。

通过使用flexstation3酶标仪(分子仪器有限公司(moleculardevices),美国)测量时间分辨荧光共振能量转移(tr-fret)率(发射波长：665nm，620nm，激发波长：313nm)。基于等式1计算tr-fret率，并且使用这些tr-fret率，基于等式2计算每种化合物的抑制率％。通过softmax程序(分子仪器有限公司,美国)产生ic50值，即在体外抑制50％pi3kδ活性的测试化合物的浓度。结果如下表1所示。

<等式1>

tr-fret率＝(在665nm发射波长的信号/在620nm发射波长的信号)×10000

<等式2>

抑制率％＝[(试验组的tr-fret率-阳性对照组的tr-fret率)/(阴性对照组的tr-fret率-阳性对照组的tr-fret率)]×100

实验例2.磷脂酰肌醇3-激酶α、β和γ(pi3kα、pi3kβ和pi3kγ)活性的测定

使用与实验例1中相同的方法测定本发明化合物的pi3k亚型，即pi3kα、pi3kβ和pi3kγ的活性。使用pi3kα(磷脂酰肌醇3-激酶α，#14-602；upstate^tm试剂盒)、pi3kβ(磷脂酰肌醇3-激酶β，#14-603；upstate^tm试剂盒)和pi3kγ(磷脂酰肌醇3-激酶γ，#14-558；upstate^tm试剂盒)代替pi3kδ用于测试。为了测试化合物在相同条件下对每种酶的敏感性，测量每种酶的ec65值(最终反应浓度)。分别测得pi3kα的ec65值为0.1μg/ml，pi3kβ的ec65值为0.4μg/ml，pi3kγ的ec65值为0.4μg/ml。制备酶溶液至最终浓度的2倍。通过与实验例1中相同的方式计算ic50值。结果显示在下表1中。

<表1>

实验例3.小鼠结肠直肠癌模型中的抗肿瘤活性的评价

在鼠同系肿瘤模型中评价本发明化合物的抗肿瘤功效。评价方法包括：将ct26细胞(已知具有高免疫原性的鼠结肠癌细胞)皮下植入至小鼠右侧腹以诱导肿瘤生长和对其的免疫应答；并通过肿瘤生长抑制确认化合物的抗肿瘤功效。

为了建立ct26鼠同系结肠肿瘤模型，制备6周龄balb/c雌性小鼠(购自hanlim实验动物实验室)并在动物饲养设施中适应1周。ct26肿瘤细胞(no.80009)从韩国细胞系银行(koreacelllinebank,kclb,韩国)获得，并根据标准哺乳动物细胞培养方案培养。用磷酸盐缓冲盐水稀释肿瘤细胞至1×10⁷个细胞/ml的浓度。将肿瘤细胞悬浮液(100μl/小鼠)皮下植入小鼠的右侧腹中。为了监测肿瘤生长，使用数显卡尺在两个维度上每周两次测量肿瘤体积。使用计算方法“肿瘤体积＝1/2×长轴×短轴²”计算肿瘤体积。根据肿瘤体积和体重将携带ct26肿瘤的小鼠随机分成几个试验组。当试验组的平均肿瘤体积约为100mm³时进行药物治疗。作为阴性对照，使用同种型大鼠igg。作为阳性对照，使用抗pd-l1抗体(bioxcell)。对照抗体用磷酸盐缓冲盐水稀释。将本发明的化合物(化合物a，即实施例25的化合物)悬浮于含有0.5％甲基纤维素和0.2％吐温80的溶液中，然后施用。对照抗体以5ml/kg的剂量腹膜内施用，总共施用三次(即，在开始施用起的第0天、第4天和第7天)。实施例25的化合物(化合物a)以10ml/kg的剂量每天口服施用两次(即，在上午/下午每日两次(bid)施用)。

随着给药进程每周两次测量肿瘤体积和体重，并通过上述方法测量肿瘤体积。单独施用化合物和组合施用化合物与抗pd-l1抗体的抗肿瘤功效示于图1中。从图1的结果可以看出本发明化合物不仅表现出优异的抗肿瘤功效，而且当与免疫检查点抑制剂组合时还表现出协同的抗肿瘤功效。