AIMP1蛋白的新片段和包含该片段的用于保护皮肤的组合物的制作方法

本申请要求2016年7月28日提交的韩国专利申请no.10-2016-0096240的优先权和权益，其全部内容通过引用如同在此完全阐述一样并入本文。

本发明涉及aimp1蛋白的新片段和包含其作为活性成分的用于预防皮肤老化、抗皱纹和改善皮肤柔韧性或弹性的组合物，更具体地说，涉及由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽，或由与该多肽具有70％或更多的序列同源性的氨基酸序列组成的多肽；编码多肽的多核苷酸；以及一种包含该多肽作为活性成分的用于抗皱、防止皮肤老化、改善皮肤柔韧性和弹性的组合物。

背景技术：

制药业正在从过去的天然产品或化学合成药物的开发转向蛋白质或肽类药物的开发。蛋白质是生命功能和结构的基本物质，据估计，构成人体的蛋白质超过一百万。它与疾病直接相关，已成为治疗药物开发的重要研究课题。使用它们的蛋白质或肽药物已经被评估为药物的创新所在，因为它们具有较少的副作用并且比合成药物更有效。目前，生物药物在主要制药公司的管道中的重要性正在日益增加，但在某些生物药物如肽的推出之前存在重大的技术问题。具体而言，递送技术的改进、具有增加的稳定性和半衰期的肽的开发以及长链肽合成是商业化的障碍。肽由约50个氨基酸或更少的氨基酸组成。已知作为肽药物是成功的，重要的是找到具有短序列和活性的肽。如果肽长度长，合成成本高并且不易生产，并且已知在人体中存在吸收问题。

人体皮肤由表皮和真皮两层组成。表皮是位于皮肤最外层的最薄层，在保湿和保护皮肤方面起着重要作用。更具体地，表皮防止我们体内的物质从身体中逸出，并防止从外部进入的有害物质如紫外线、病毒和细菌进入。此外，表皮自然乳化皮脂腺和汗腺水，形成弱酸性皮脂，防止有害物质，并杀菌。

皮肤中的真皮滋养表皮，支持表皮，保护身体免受外部伤害，保存水分的功能，以及调节体温。真皮由成纤维细胞及其细胞外基质组成，它包含神经、血管、淋巴管、肌肉和皮脂腺、皮肤附属物如大汗腺和外分泌腺。成纤维细胞是真皮的主要成分，合成细胞外基质，如胶原蛋白、蛋白多糖和其他结构糖蛋白。其中，胶原蛋白是占真皮70％的纤维蛋白，起到皮肤的机械紧致性(弹性)，结缔组织的抵抗力和组织的结合力，细胞粘附的支持，并诱导细胞分裂和增殖的作用(vanderm.rest等，biometerials.，11：28-31，1990；shimokomakim.等，ann.n.y.acad.sci.，580：1-7，1990；vanderrestm.等，biochimie.，72(6-7)：473-484，1990)。

通过衰老过程，人体皮肤有各种物理和化学变化。皮肤老化根据原因分为两种类型，作为其中皮肤的结构和生理功能随着老化而不断恶化的自然老化现象的内在老化，以及由紫外线、药物的副作用或环境因素等外部因素引起的外在老化。当人体皮肤经历衰老过程时，细胞成分(例如细胞膜中的脂质)被皮肤细胞或紫外线代谢产生的活性氧物质氧化，并且它们的活性和生物合成受到抑制。因此，随着皮肤老化，皮肤整体变薄，皮肤变得脱水和干燥，并且更多地产生细皱纹并且皱纹逐渐变深。另外，占据大部分真皮的胶原蛋白量减少，合成胶原蛋白的成纤维细胞的活性也降低，因此新胶原蛋白的合成也减少。随着真皮中胶原蛋白的量减少，真皮的厚度也减小，导致皮肤皱纹和柔韧性和弹性差。因此，通过促进皮肤中成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成来刺激胶原代谢，对副作用少并且抗皱、改善弹性和弹性、防止皮肤老化效果好的安全皮肤材料的需求持续增加。

同时，ars相互作用的多功能蛋白1(aimp1)是由312个氨基酸组成的蛋白质，并与多trna合成酶复合物结合，从而提高多trna合成酶复合物的催化活性。关于aimp1蛋白质的活性，本发明的发明人发现aimp1蛋白质的第6位至第46位氨基酸区域具有促进胶原合成的活性(参见韩国专利登记号10-0903984，2009年6月15日)。然而，尚未研究在aimp1蛋白的第6至第46氨基酸区域中对增加胶原合成和成纤维细胞增殖有效的活性位点。

技术实现要素：

技术问题

因此，本发明人已经证实，aimp1蛋白的第6至第46氨基酸区域基本上显示出防止皮肤老化、抗皱纹和改善皮肤柔韧性和弹性的效果，从而完成了本发明。

因此，本发明的一个方面是要提供一种由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽，或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

本发明的另一个方面是要提供一种由seqidno：2或seqidno：3的氨基酸序列组成的多肽，或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成。

本发明的另一个方面是要提供一种编码所述多肽的多核苷酸。

本发明的另一个方面是要提供用于抗皱纹和改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其包含作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

还要提供用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其由作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

还要提供用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其由作为活性成分的基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明的另一个方面是要提供用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其包含作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

还要提供用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其由作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

还要提供用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其由作为活性成分的基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明的另一个方面是要提供用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其包含来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

还要提供用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

还要提供用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明的另一个方面是要提供用于预防皮肤老化的食品组合物，其包含来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

还要提供用于预防皮肤老化的食品组合物，其由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

还要提供用于预防皮肤老化的食品组合物，其基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明的另一方面是要提供所述多肽用于制备抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的药剂的用途。

本发明的另一个方面是要提供一种用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的方法，该方法包括给需要的受试者施用有效量的所述多肽。

本发明的另一个方面是要提供所述多肽用于制备用于预防皮肤老化的药剂的用途。

本发明的另一方面是要提供一种用于预防皮肤老化的方法，该方法包括给有此需要的受试者施用有效量的所述多肽。

技术方案

因此，根据本发明的一个方面，提供了一种由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽，或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

根据本发明的一个方面，提供了一种由seqidno：2或seqidno：3的氨基酸序列组成的多肽，或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

根据本发明的一个方面，提供了一种编码所述多肽的多核苷酸。

根据本发明的一个方面，提供了用于抗皱纹和改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其包含作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其由作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其由作为活性成分的基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

根据本发明的一个方面，提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其包含作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其由作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其由作为活性成分的基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

根据本发明的一个方面，提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其包含由作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

本发明还提供了预防皮肤老化的化妆品组合物，其包含来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

本发明还提供了用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明还提供了用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

根据本发明的另一个方面，提供了用于预防皮肤老化的食品组合物，其包含来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

本发明还提供了用于预防皮肤老化的食品组合物，其由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

本发明还提供了用于预防皮肤老化的食品组合物，其基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。

根据本发明的一个方面，提供了所述多肽用于制备抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的药剂的用途。

根据本发明的一个方面，提供了一种抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的方法，该方法包括给需要的受试者施用有效量的所述多肽。

根据本发明的一个方面，提供了所述多肽用于制备用于预防皮肤老化的药剂的用途。

根据本发明的一个方面，提供了一种预防皮肤老化的方法，该方法包括给有此需要的受试者施用有效量的所述多肽。

在下文中，将详细描述本发明。

本发明中的术语“kgae残基”、“kgae序列”或“kgae区域”能够互换使用并且是指由seqidno：5表示的aimp1蛋白的全长氨基酸序列中的第14位至第17位氨基酸区域。并且该区域对应于seqidno：1的多肽中的第9位至第12位氨基酸残基(或称为“neo-pep”)，其是由本发明提供的促进毛发生长的活性片段的实例。

下文中，本发明提供的多肽是衍生自aimp1蛋白的片段，其包含seqidno：1的氨基酸序列中的第9位至第12位氨基酸(kgae)区域，并且对抗皱纹、促进皮肤柔韧性和弹性和预防皮肤老化具有非常优异的效果。本发明首次公开了aimp1的kgae区域对于抗皱纹、促进皮肤柔韧性和弹性和预防皮肤老化是必需的。

因此，本发明提供一种由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽，或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成。优选地，所述多肽由10至15个连续氨基酸组成。

优选地，本发明的多肽是一种由seqidno：2或seqidno：3的氨基酸序列组成的多肽，或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。

如本文所用，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换使用，是指天然状态蛋白质中常见的氨基酸残基聚合物。

本文使用的单字母(三联体)氨基酸是指根据生物化学中的标准缩写的下列氨基酸：a(ala)：丙氨酸；c(cys)：半胱氨酸；d(asp)：天冬氨酸；e(glu)：谷氨酸；f(phe)：苯丙氨酸；g(gly)：甘氨酸；h(他的)：组氨酸；i(iie)：异亮氨酸；k(lys)：赖氨酸；l(leu)：亮氨酸；m(met)：甲硫氨酸；n(asn)：天冬酰胺；o(ply)：吡咯赖氨酸；p(pro)：脯氨酸；q(gln)：谷氨酰胺；r(精氨酸)：精氨酸；s(ser)：丝氨酸；t(thr)：苏氨酸；u(sec)：硒代半胱氨酸，v(val)：缬氨酸；w(trp)：色氨酸；y(tyr)：酪氨酸。

在本发明中，“aimp1(ars-相互作用的多功能蛋白1)蛋白质”首先被称为p43蛋白并且更名为aimp1(kimsh等，trendsinbiochemicalsciences，30：569-574，2005)。aimp1与多trna合成酶复合物结合以增强多trna合成酶的催化活性。本发明的aimp1蛋白的特定序列没有特别限制，只要它是本领域已知的并且可以优选是人aimp1。已知aimp1蛋白的三个snp(参见ncbisnp数据库)：全长aimp1(本说明书中的seqidno：7)的氨基酸序列中的第79位丙氨酸(ala)被脯氨酸(pro)取代(snp登录号rs3133166，seqidno：11)；第104苏氨酸(thr)被丙氨酸(ala)取代(snp登录号rs17036670，seqidno：12)；第117苏氨酸(thr)被丙氨酸(ala)取代(snp登录号rs2230255，seqidno：13)。

本发明的多肽，即由seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成的多肽，其中所述多肽包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)，包括其功能等同物。功能等同物是指与本发明的多肽具有至少70％或更多(70.0％至99.9％)、优选80％或更多(80.0％至99.9％)、更优选90％或更多(90％至99.9％)序列同源性(或同一性)的多肽。更优选地，功能等同物是指与本发明多肽具有至少70％或更多、优选80％或更多、更优选90％或更多序列同源性(或同一性)且具有恒定(未改变)kgae区域(序列)的多肽。例如，这些包括具有70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同源性并表现出与本发明多肽基本上相同的生理活性的多肽。这里，术语“基本上”是指表示某种性质的性质为整体或几乎相同程度的状态。因此，在本发明中，“基本上相同的生理活性”是指促进毛发生长的活性，例如，通过促进胶原蛋白合成和/或成纤维细胞增殖的作用，预防皮肤老化，抗皱纹，和改善皮肤柔韧性和弹性。

在本发明中，“同源性或同一性”是指聚合物分子(例如多肽分子)之间的总体相关性。例如，可以通过对准两个序列用于最佳比较来进行两个多肽序列之间的同源性/同一性(％)的计算。优选地，为比较目的而排列的序列的长度为参考序列的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或基本上100％。然后，将相应氨基酸位点的氨基酸相互比较。如果位于第一序列的氨基酸与第二序列的相应位点处的氨基酸相同，则两个序列在该位点是相同的。两个序列的同一性(％)是考虑了为了两个序列之间的最佳对准而引入的缺口的数量和长度而具有两个序列共有的氨基酸的位点数的函数。能够通过数学算法进行两个序列之间的比较和同一性的确定(％)。例如，clustalw(thompson等，1994)可用于使用以下参数测量序列同一性值：配对阵列参数-方法：准确，矩阵：pam，缺口开放罚分：10.00，缺口延伸罚分：0.10；多个阵列参数-矩阵：pam，缺口开放罚分：10.00，延迟同一性：30，惩罚末端缺口：开，缺口分离距离：0，负矩阵：否，缺口延伸罚分：0.20，残基特定缺口罚分：开，亲水缺口罚分：开，亲水残基：gpsndqekr。特定残基中的序列同一性包括简单衍生化的相同残基。

在本发明中，术语“基本上”是指表示某种性质的性质为整体或几乎相同程度的状态。本发明中的术语“基本上相同”用于与氨基酸或核酸序列之间的比较有关。对于本发明所属领域的普通技术人员而言，如果两个序列在相应位点具有相同的残基，则它们将被理解为“基本上相同”。如本领域众所周知的，能够使用多种算法比较氨基酸或核酸序列，例如，能够使用计算机程序如用于核酸序列比较的blastn、用于氨基酸序列比较的blastp、缺口blast或psi-blast。在以下参考文献中描述了这种计算机程序的实例：altschul等，basiclocalalignmentsearchtool，j.mol.biol.，215(3)：403-410，1990；altschul等，methodsinenzymology；altschul等，nucleicacidsres.25：3389-3402，1997；baxevanisbioinformatics：apracticalguidetotheanalysisofgenesandproteins，wiley，1998；misener等，(eds.)，bioinformaticsmethodsandprotocols(methodsinmolecularbiology，vol.132)，humanapress，1999。除了搜索相同的序列之外，上述计算机程序通常提供同一性的程度。在两个序列中，如果在一定长度的残基上相应位点的残基的至少70％、优选至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多是相同的，则认为是“基本上相同”的序列。优选地，“一定长度的残基”可以是至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300个或更多的残基。

在本发明中，术语“对应”通常用于确定给定多肽的氨基酸残基的位置/身份。如常规的，多肽中的残基通常使用基于参考相关多肽的规范编号系统来指定。因此，例如，第190位残基中的“对应”氨基酸不必总是在特定氨基酸链中的第190位，并且本领域普通技术人员将容易理解如何鉴定对应氨基酸。

“功能等同物”可以是由于添加、取代或缺失本发明多肽的一些氨基酸序列而产生的多肽。氨基酸的取代优选为保守取代。自然界中存在的氨基酸的保守取代的实例如下：脂肪族氨基酸(gly，ala，pro)，疏水性氨基酸(ile，leu，val)，芳香族氨基酸(phe，tyr，trp)，酸性氨基酸(asp，glu)，碱性氨基酸(his，lys，arg，gln，asn)和含硫氨基酸(cys，met)。功能等同物中还包括其中一部分氨基酸在本发明多肽的氨基酸序列中被缺失的变体。氨基酸的缺失或取代优选位于与本发明多肽的生理活性不直接相关的区域。在本发明中，与生理活性直接相关的区域是kgae区域，并且缺失或取代能够位于除上述区域之外的区域。另外，氨基酸的缺失优选位于不直接参与本发明多肽的生理活性的区域。还包括其中一些氨基酸在本发明多肽的氨基酸的两端或序列中添加的变体。还包括在本发明的功能等同物中的是蛋白质或多肽衍生物，其中蛋白质的一些化学结构被修饰，同时保持根据本发明的蛋白质的基本骨架和生理活性。这包括，例如，改变本发明蛋白质的稳定性、贮存稳定性、挥发性或溶解性的结构修饰。

在本发明中，序列同源性和同一性定义为在将候选序列与多肽的氨基酸序列比对并引入缺口后候选序列的氨基酸残基相对于本发明多肽的氨基酸序列的百分比。如果需要，作为序列同源性的一部分的保守取代不被认为获得最大百分比序列同源性。而且，本发明多肽的氨基酸序列的n-末端、c-末端或内部延伸(stretch)、缺失或插入不被解释为影响序列同源性或同一性的序列。另外，序列同源性可以通过用于比较两种蛋白质或多肽的相似区域的氨基酸序列的标准方法来确定。blast或这样的计算机程序比对两种蛋白质或多肽，使得每个氨基酸得到最佳匹配(沿着一个或两个序列的全长序列或沿着一个或两个序列的预测区域)。该程序提供默认开放罚分和默认缺口罚分，并提供评分矩阵，例如pam250(standardscoringmatrix；dayhoff等，inatlasofproteinsequence&lt；rtiid＝0.0&gt；structure，vol5，supp3，1978)。例如，百分比同源性能够如下计算：将相同匹配的总数乘以100并除以匹配范围中较长序列的长度和引入较长序列以比对两个序列的缺口数之和。

能够通过遗传工程方法构建本发明的多肽。首先，根据常规方法构建编码本发明多肽的多核苷酸序列。例如，能够使用合适的引物通过pcr扩增作为模板的编码人aimp1基因的多核苷酸来构建多核苷酸序列。或者，dna序列可以通过本领域已知的标准方法合成，例如，使用自动dna合成仪(可从biosearch或appliedbiosystemsinc商购)。然后将构建的多核苷酸插入包含一个或多个表达控制序列(例如，启动子、增强子等)的载体中，所述表达控制序列与多核苷酸可操作地连接，从而控制多核苷酸碱基序列的表达，然后用重组表达载体转化宿主细胞。得到的转基因细胞在适于表达dna序列的培养基和条件下培养，并从培养物中收集由dna序列编码的基本上纯的蛋白质。收集意指使用本领域已知的方法(例如色谱法)分离(分离)和/或纯化目标肽。

术语“基本上纯的蛋白质”意指基本上不含源自宿主细胞的任何其他蛋白质。用于本发明蛋白质合成的基因工程方法可以在以下参考文献中找到：maniatis等，molecularcloning；alaboratorymanual，coldspringharborlaboratory，1982；sambrook等，supra；geneexpressiontechnology，methodinenzymology，geneticsandmolecularbiology，methodinenzymology，guthrie&fink(eds.)，academicpress，sandiego，calif，1991；和hitzeman等，j.biol.chem.，255：12073-12080，1990。

本发明的多肽还能够通过本领域已知的技术化学合成(creighton，proteins：structuresandmolecularprinciples，whfreemanandco.，ny(1983))。也就是说，能够使用常规的逐步液相或固相合成、分级缩合、f-moc或t-boc化学制备本发明的多肽(chemicalapproachestothesynthesisofpeptidesandproteins，williams等，eds.，crcpress，bocaratonflorida，(1997)；apracticalapproach，atherton&sheppard，eds.，irlpress，oxford，england，(1989))。优选的制备方法是固相合成。能够通过常规固相方法中受保护的氨基酸之间的缩合反应合成本发明的多肽，根据从c-末端开始鉴定的氨基酸序列顺序进行。缩合反应后，能够通过酸分解或氨解等公知的方法除去保护基和与c末端氨基酸连接的载体。上述肽合成方法在相关书中有详细描述(grossandmeienhofer′s，thepeptides，vol2，academicpress，1980)。

通过基因工程方法产生的蛋白质或化学合成的蛋白质能够通过本领域已知的各种方法分离和纯化，例如提取、重结晶、各种色谱(凝胶过滤、离子交换、沉淀、吸附、反相)、电泳、逆流分配方法等。

此外，本发明提供了编码本发明多肽的多核苷酸，所述多肽由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成，并且其中所述多肽包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)。多核苷酸的基本构成没有特别限制，只要其编码上述本发明的多肽即可。优选地，编码本发明多肽的多核苷酸由seqidno：7(编码seqidno：2的s1200多肽)或seqidno：8(编码seqidno：3的s1300多肽)的核苷酸序列组成。

在本发明中，“多核苷酸”、“核酸”是指单链或双链核酸形式的脱氧核糖核苷酸(dna)或核糖核苷酸(rna)。除非另有限制，否则它还包括天然核苷酸的已知类似物，其以与天然存在的核苷酸类似的方式与核酸杂交。

胶原蛋白是一种纤维蛋白，在真皮的成纤维细胞中产生并占真皮的70％，并且负责皮肤的柔韧性和弹性。因此，当胶原蛋白的合成减少时，皮肤老化并且皮肤的弹性和柔韧性迅速降低，导致皮肤变薄或有皱纹。另一方面，当通过促进皮肤中的胶原蛋白合成来激活胶原代谢时，真皮基质的成分增加，从而改善皱纹、改善弹性和强化皮肤。

从以下实施例和附图中可以看出，本发明的aimp1蛋白的多肽片段具有刺激胶原合成和成纤维细胞增殖的活性(参见实施例1和2，图1至2)。因此，本发明的aimp1多肽片段促进胶原蛋白的合成和/或成纤维细胞的增殖，因此它可用于预防皮肤老化、抗皱纹和改善皮肤柔韧性和弹性。

在本发明中，术语“皮肤老化”是指作为其中皮肤的结构和生理功能随着老化而不断恶化的自然老化现象的内在老化，以及由紫外线、药物的副作用、压力、环境因素、疤痕等各种类型的外部因素引起的外在老化。因此，在本说明书中，术语“预防皮肤老化”具有广泛的含义，包括抑制、减少、预防或改善由包括内在老化和外在老化在内的各种原因引起的皮肤老化状态。

本发明的aimp1蛋白的多肽片段能够用作上述用途的药物、皮肤病学或化妆品组合物的活性成分。

该组合物能够制备成本领域常规生产的任何配方。优选用于皮肤应用的制剂。例如，它能够制成溶液、悬浮液、乳液、糊剂、凝胶、霜剂、洗剂、粉末、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉底、乳液粉底、蜡粉底和喷雾剂，但不限于此。更优选地，它能够以润肤露、营养洗剂、营养霜、按摩霜、精华素、眼霜、清洁霜、清洁泡沫、清洁水、包(pack)、喷雾或粉末形式制备。

此外，本发明的组合物能够配制成用于美塑疗法的可注射制剂。可注射制剂能够根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂制备。例如，本发明的多肽能够通过将其溶解在盐水或缓冲液中来配制用于注射。

本发明的组合物还能够配制用于口服施用。对于口服施用，本发明的多肽能够通过与赋形剂混合以可摄入的片剂、口含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆和薄饼的形式配制。这些制剂能够含有稀释剂(例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸)和润滑剂(例如二氧化硅、滑石、硬脂酸及其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇)。片剂能够含有粘合剂，如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，任选地与崩解剂如钠盐、淀粉、琼脂、吸收剂、着色剂、调味剂和/或甜味剂。制剂能够通过常规的混合、制粒或包衣方法制备。

本发明提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其包含作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其由作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的化妆品组合物，其基本上由作为活性成分的由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

此外，本发明提供了用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其包含来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明还提供了用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明还提供了用于预防皮肤老化的化妆品组合物，其基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

此外，本发明的组合物能够进一步含有已知的物质，其具有促进胶原蛋白合成，促进成纤维细胞增殖，抑制/改善皮肤老化，保湿皮肤，改善皮肤弹性/柔韧性，抗皱纹，增强皮肤功能的作用。这些物质包括但不限于视黄酸、转化生长因子(tgf)、桦木酸、肉桂酸、氢化芪、维生素a、维生素e、维生素c、红葡萄提取物粉末等。它还可以含有其它药物、皮肤病学和/或化妆品可接受的介质或基质，例如促进蛋白质吸收到皮肤中的物质、防腐剂、保湿剂、乳化促进剂、缓冲剂等。

基于化妆品组合物的总重量，本发明化妆品组合物中包含的本发明多肽的含量能够为0.0001至50重量％，优选0.01至10重量％。

此外，本发明提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其包含来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明还提供了用于抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的食品组合物，其基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

此外，本发明提供了用于预防皮肤老化的食品组合物，其包含来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明还提供了用于预防皮肤老化的食品组合物，其由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明提供了用于预防皮肤老化的食品组合物，其基本上由来自seqidno：1的氨基酸序列的4至17个连续氨基酸组成且包含seqidno：1的氨基酸序列的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的多肽或由与该多肽具有70％或更多序列同源性的氨基酸序列组成的多肽组成。优选地，所述多肽可以是seqidno：2或3的多肽。

本发明的食品组合物包括所有形式，例如功能性食物、营养补充剂、保健食品和食品添加剂。能够根据本领域已知的常规方法以各种形式制备这些类型。

例如，作为保健食品，本发明的食品组合物本身能够以茶、果汁和饮料的形式制备，并且能够以颗粒状、胶囊状和粉末状形式摄取。此外，能够通过与已知具有抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的作用的已知物质或活性成分混合而以组合物的形式制备本发明的食品组合物。

此外，功能性食品还包括饮料(beverage)(包括酒精饮料)、水果及其加工食品(例如罐装水果、瓶装、果酱、柑橘酱等)、鱼类、肉类和加工食品(例如火腿等)、面包和面条(如乌冬面、荞麦面、拉面、意大利面、通心粉等)、果汁、各种饮料(drink)、饼干、锞子、乳制品(如黄油、奶酪等)、食用植物油、人造黄油、植物蛋白、蒸煮食品、冷冻食品、各种调味料(如豆瓣酱、酱、酱油等)。

本发明多肽的食物组合物的优选含量没有特别限制，但在最终制备的食物中优选为0.01-50％重量。为了以食品添加剂的形式使用本发明的食品组合物，能够以粉末或浓缩物的形式制备它。

本发明提供了所述多肽用于制备抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的药剂的用途。

本发明提供了一种抗皱纹、改善皮肤柔韧性和弹性的方法，该方法包括给需要的受试者施用有效量的所述多肽。

本发明提供了所述多肽用于制备用于预防皮肤老化的药剂的用途。

本发明提供了一种预防皮肤老化的方法，该方法包括给有此需要的受试者施用有效量的所述多肽。

本发明的“有效量”是指当给个体施用时代表改善、治疗、预防、检测或诊断皮肤老化的效果的量，并且“个体”包括动物，优选为哺乳动物，特别是可以是包含人的动物、动物来源的细胞、组织、器官等。受试者能够为需要该效果的患者。

本发明的术语“治疗”广泛地指与皮肤皱纹，皮肤弹性，皮肤柔韧性或皮肤老化有关的症状的改善，并且它可包括治疗、基本上预防或改善这些疾病的状态。并且它还可以包括减轻、治疗或预防由这些疾病引起的症状或大多数症状，但不限于此。

本发明的术语“包含”与“含有”或“其特征在于”同义使用，并且不排除组合物或方法中未提及的其他组分元件或方法步骤。术语“由...组成”是指排除未另外提及的其他元件\步骤或组件。术语“基本上由......组成”旨在包括组成元件或步骤等，除了所描述的组成元件或步骤之外，其基本上不影响它们的基本特性。

有益效果

因此，本发明提供了aimp1蛋白的新片段和包含其作为活性成分的组合物，用于预防皮肤老化、抗皱纹、和改善皮肤柔韧性和弹性。根据本发明的新多肽和包含其作为活性成分的组合物能够用于预防皮肤老化、抗皱纹、和改善皮肤柔韧性和弹性。

附图说明

图1是显示procollageni型elisa测定结果的图，其中neo-pep多肽(seqidno：1，10μm)及其肽片段(seqidno：2至4，10μm)的胶原合成诱导作用得到确认[对照(con)：20％甘油/pbs(10μg/ml)；neo-pep多肽(seqidno：1)、s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3)、s1400(seqidno：4)]。

图2是显示cellcountingkit-8测定结果的图，其中neo-pep多肽(seqidno：1，10μm)及其肽片段(seqidno：2至4，10μm)的人成纤维细胞增殖诱导作用得到确认[对照(con)：20％甘油/pbs(10μg/ml)；neo-pep多肽(seqidno：1)、s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3)、s1400(seqidno：4)]。

图3是显示细胞毒性测定(cellcountingkit-8测定)结果的图，其中neo-pep多肽(seqidno：1，10μm)及其肽片段(seqidno：2至4，10μm)的细胞毒性在正常表皮细胞(vero)上得到确认[对照(con)：20％甘油/pbs(10μg/ml)；neo-pep多肽(seqidno：1)、s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3)、s1400(seqidno：4)、doxo(阿霉素，10μg/ml)]。

图4是显示tnf-αelisa测定结果的图，其中用neo-pep多肽(seqidno：1，10μm)及其肽片段(seqidno：2至4，10μm)的处理raw264.7细胞上tnf-α的分泌量得到确认[对照(con)：20％甘油/pbs(10μg/ml)；neo-pep多肽(seqidno：1)、s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3)、s1400(seqidno：4)、lps(脂多糖，10ng/ml)]。

具体实施方式

在下文中，将详细描述本发明。

然而，以下实施例仅用于说明本发明，而不是用于限制本发明的范围。

方法

1.胶原elisa测定

将人包皮成纤维细胞(1.5x10⁴个细胞/孔；promocell)在含有10％血清的dmem培养基中在24孔板中培养12小时，然后在无血清培养基中培养约3小时。然后，将neo-pep多肽(seqidno：1)及其片段(seqidno：2至4，在glbiochem合成)加入到dmem培养基中，各自浓度为10μm，然后培养12小时。

此后，收集培养基，以1,000g离心10分钟，然后使用procollageni型elisa试剂盒(takara，japan)根据制造商的说明检测分泌的胶原。

2.细胞增殖和细胞毒性测定(cellcountingkit-8测定)

为了证实成纤维细胞的增殖和细胞毒性，根据制造商的说明书进行dojindomoleculartechnologies(日本)的cck-8测定(cellcountingkit-8测定)。

首先，将人包皮成纤维细胞(3,000个细胞/孔；promocell)和正常上皮细胞(vero；3,000个细胞/孔)在含有10％血清的dmem培养基中在96孔板中培养12小时，然后在无血清中培养约3小时。然后，将各自浓度为10μm的neo-pep多肽(seqidno：1)及其片段(seqidno：2至4)加入到dmem培养基中，然后培养24小时。

然后，将10μl的cck-8溶液(dojindomoleculartechnologies，japan)加入到培养基的每个孔中，并使用酶标仪根据制造商的说明书在450nm处分析吸光度。

3.tnf-αelisa测定

将raw264.7细胞(atcctib-71；3,000个细胞/孔)在含有10％血清的dmem培养基中在96孔板中培养12小时，然后在无血清培养基中培养约3小时。然后，将各自浓度为10μm的neo-pep多肽(seqidno：1)及其片段(seqidno：2至4)加入到dmem培养基中，然后培养6小时。

然后，收集培养基并以1,000g离心10分钟，并根据制造商的说明书使用tnf-αelisa测定(bdbiosciences，usa)检测分泌的tnf-α。

实施例1：胶原合成诱导本发明多肽的作用

本发明人制备了s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3)、s1400(seqidno：4)、neo-pep多肽的片段，由15个氨基酸组成，以确认本发明多肽对预防皮肤老化、抗皱纹和改善皮肤柔韧性和弹性的作用。

下表1显示了neo-pep(seqidno：1)及其片段s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3)、s1400(seqidno：4)的氨基酸序列、pi和tm。

表1

作为参考，本发明的多肽neo-pep(seqidno：1)对应于aimp1蛋白中的第63位至第46位氨基酸残基(seqidno：5)。

从图1中可以看出，作为上述procollageni型elisa测定方法的结果，neo-pep多肽(seqidno：1)和neo-pep多肽的片段由15个连续氨基酸组成并包含neo-pep多肽的第9位至第12位氨基酸的残基(kgae)(s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3))诱导的胶原合成比对照组(con)更多。

并且，neo-pep(seqidno：1)的片段(s1400(seqidno：4)由neo-pep多肽的15个连续氨基酸组成，没有第9位至第12位氨基酸残基(kgae)，显示诱导胶原合成的效果略好于对照组，但如图2所示，其对诱导成纤维细胞增殖的作用低于对照组。

实施例2：本发明多肽的成纤维细胞增殖诱导作用

从图2中可以看出，作为上述cck-8测定方法的结果，neo-pep多肽(seqidno：1)和neo-pep多肽的片段由15个连续氨基酸组成并包含neo-pep多肽的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)(s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：3))比对照组(con)更多地诱导成纤维细胞的增殖。

另一方面，neo-pep(seqidno：1)的片段(s1400(seqidno：4)由neo-pep多肽的15个连续氨基酸组成，没有第9位至第12位氨基酸残基(kgae)，与对照组相比，其诱导成纤维细胞增殖的作用较小。

通过实施例1和2的上述结果，证实了包含neo-pep多肽(seqidno：1)的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)并由连续氨基酸如s1200(seqidno：1)和s1300(seqidno：3)组成的多肽片段诱导胶原蛋白的合成和成纤维细胞的增殖，因此具有防止皮肤老化、抗皱纹和改善皮肤柔韧性和弹性的作用。

实施例3：用本发明的多肽证实存在细胞毒性和炎症诱导

如在图3中可以看到的，作为上述cck-8测定方法的结果，用neo-pep多肽(seqidno：1)、s1200(seqidno：2)或s1300(seqidno：3)处理的组的上皮细胞存活力与对照组相似，显示其安全性，但用没有neo-pep多肽(seqidno：1)的第9位至第12位氨基酸残基(kgae)的片段(s1400(seqidno：4))处理的组的上皮细胞存活率略低。作为参考，使用阿霉素(10μg/ml)(一种有效的细胞毒性剂)以比较细胞毒性。

另外，如图4中可见，作为上述tnf-αelisa测定的结果，用neo-pep多肽(seqidno：1)、s1200(seqidno：2)、s1300(seqidno：no：3)或s1400(seqidno：4)处理的组的分泌的tnf-α水平非常低并且与对照组相似，表明几乎没有诱导诸如炎症的免疫反应。因此，表明它们在体内使用是安全的。作为参考，使用lps(脂多糖，10ng/ml)(一种诱导免疫反应的有效内毒素)以比较免疫反应的诱导程度，例如炎症。

<110>curebio株式会社

<120>aimp1蛋白的新片段和包含该片段的用于保护皮肤的组合物

<130>op19-0015

<150>kr10-2016-0096240

<151>2016-07-28

<150>pct/kr2017/008077

<151>2017-07-27

<160>13

<170>kopatentin2.0

<210>1

<211>41

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>智人neo-pep多肽;aimp1-(6-46)

<400>1

alavalleulysargleugluglnlysglyalaglualaaspglnile

151015

ileglutyrleulysglnglnvalserleuleulysglulysalaile

202530

leuglnalathrleuarggluglulys

3540

<210>2

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>智人s1200多肽;neo-pep-(5-19)

<400>2

argleugluglnlysglyalaglualaaspglnileileglutyr

151015

<210>3

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>智人s1300多肽;neo-pep-(9-23)

<400>3

lysglyalaglualaaspglnileileglutyrleulysglngln

151015

<210>4

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>智人s1400多肽;neo-pep-(17-31)

<400>4

ileglutyrleulysglnglnvalserleuleulysglulysala

151015

<210>5

<211>312

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>智人aimp1蛋白质

<400>5

metalaasnasnaspalavalleulysargleugluglnlysglyala

151015

glualaaspglnileileglutyrleulysglnglnvalserleuleu

202530

lysglulysalaileleuglnalathrleuarggluglulyslysleu

354045

argvalgluasnalalysleulyslysgluileglugluleulysgln

505560

gluleuileglnalagluileglnasnglyvallysglnileprophe

65707580

proserglythrproleuhisalaasnsermetvalsergluasnval

859095

ileglnserthralavalthrthrvalserserglythrlysglugln

100105110

ilelysglyglythrglyaspglulyslysalalysglulysileglu

115120125

lyslysglyglulyslysglulyslysglnglnserilealaglyser

130135140

alaaspserlysproileaspvalserargleuaspleuargilegly

145150155160

cysileilethralaarglyshisproaspalaaspserleutyrval

165170175

glugluvalaspvalglygluilealaproargthrvalvalsergly

180185190

leuvalasnhisvalproleugluglnmetglnasnargmetvalile

195200205

leuleucysasnleulysproalalysmetargglyvalleusergln

210215220

alametvalmetcysalaserserproglulysilegluileleuala

225230235240

proproasnglyservalproglyaspargilethrpheaspalaphe

245250255

proglygluproasplysgluleuasnprolyslyslysiletrpglu

260265270

glnileglnproaspleuhisthrasnaspglucysvalalathrtyr

275280285

lysglyvalprophegluvallysglylysglyvalcysargalagln

290295300

thrmetserasnserglyilelys

305310

<210>6

<211>123

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>智人neo-pepaimp1-(6-46)多核苷酸

<400>6

gctgttctgaagagactggagcagaagggtgcagaggcagatcaaatcattgaatatctt60

aagcagcaagtttctctacttaaggagaaagcaattttgcaggcaactttgagggaagag120

aag123

<210>7

<211>45

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>智人s1200neo-pep-(5-19)多核苷酸

<400>7

agactggagcagaagggtgcagaggcagatcaaatcattgaatat45

<210>8

<211>45

<212>dna

<213>人工序列

<220>

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cysileilethralaarglyshisproaspalaaspserleutyrval

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