本发明涉及中药提取领域，特别是一种以动态逆流提取技术原理提取高纯度穿心莲内酯的方法。
背景技术：
：穿心莲为爵床科穿心莲andrographispaniculatanees多年生或一年生草本植物，别名一见喜、斩蛇剑、斩舌剑、苦草、苦胆草、四方草、榄核莲、圆锥药草等，以全草入药。穿心莲味苦、性寒，归心、肺、大肠、膀胱经，为常用中药，是抗病毒首选药物之一。穿心莲内酯andrographolide是穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物，是中药穿心莲的主要有效成分之一，分子式c20h30o5，白色方棱形或片状结晶(乙醇或甲醇)，无臭，味苦；在沸乙醇中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，极微溶于氯仿，在水或乙醚中几乎不溶。现代药理研究表明：穿心莲内酯具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、保肝利胆、治疗心脑血管疾病、抗糖尿病、抗生育等药理作用。根据穿心莲内酯具有的清热解毒，凉血，消炎、消肿、止痛等功效，业已开发出用于细菌性痢疾、慢性迁延性肝炎、尿道感染、急性扁桃体炎、咽喉炎、气管炎、结肠炎等疾病的穿心莲内酯制剂如：穿心莲内酯片、复方穿心莲片、喜炎平注射剂、穿琥宁注射剂、炎琥宁注射剂、莲必治注射剂、复方穿琥宁涂膜剂等应用于临床，被誉为天然抗生素。但由于穿心莲内酯难溶于水，所以通常仅能口服给药，药物体内吸收较差。穿心莲内酯通常被作为穿心莲二萜内酯类化合物的合成及生物转化的起始原料，根据国内外最新研究，穿心莲内酯的衍生物对“类激素”与“类蛋白转换酶”有抑制性，有望开发成为一种高效抗艾滋病的天然药物。随着对其药理作用研究的不断深入，其临床应用也越来越呈现出诱人的前景。穿心莲内酯结构复杂，人工合成困难，因此国内均从植物中提取得到。提取穿心莲内酯的方法很多，目前，穿心莲内酯传统提取方法有水提法、醇提法、碱水提取法等。然而，穿心莲内酯类成分难溶于水，水提法的提取效率及含量较低；而碱水提取法对ph值的要求较严格，若ph值控制不当，有可能造成内酯环的聚合；醇提取法不能很好的把有效成分和众多的杂质得到分离。这些方法提取的浸膏中有效成分含量均较低，存在提取率低、有机溶剂消耗量大等缺点。而酶法提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等方法，虽都能在较低温度下提取，但存在收率低、提取物杂质含量较高、纯度不够、提取成本较高、设备要求严格，生产条件苛刻，安全性差等问题和不足。近几年，国家药品不良反应监测中心的报告显示：穿琥宁、炎琥宁注射剂不良反应数据逐年上升。据统计，6岁以下儿童的不良反应报告占总报告数的40％以上，不良反应表现以过敏性休克、过敏样反应、呼吸困难等严重过敏反应为主。研究表明，不良反应事件的发生与产品中有关杂质的含量较高有密切关系。所以，改进穿心莲现有的提取技术和分离方法，提高穿琥宁、炎琥宁初始合成原料—穿心莲内酯的纯度，对科学合理地利用穿心莲资源,具有重大的现实意义。动态逆流提取技术是新型的提取工艺，集萃取、重渗漉、动态和逆流技术为一体，是通过多个(或多段)提取单元之间物料和溶剂的合理浓度梯度排列和相应的流程配置，结合物料的粒度、提取单元组数、提取温度和提取溶媒用量，循环组合，对物料进行提取的一种新技术。该技术主要利用了固液(药材与溶剂)两相中有效成分的浓度差，逐级将药材中有效成分溶出扩散至起始浓度较低的提取溶剂中，达到最大限度转移药材中有效成分的目的。技术实现要素：针对上述情况，为克服现有技术缺陷，有必要对提取工艺进行改进，以适应市场对穿心莲内酯旺盛的需求。本发明的目的是提供一种提取穿心莲内酯的方法，采用动态逆流提取技术提取穿心莲内酯，有效解决目前穿心莲内酯收率低、有机溶剂使用量大、提取成本高、安全性差等问题。一种提取穿心莲内酯的方法，包括以下步骤：(1)粉碎：将穿心莲草粉碎；(2)提取：将穿心莲粉末置于动态逆流提取装置中，以乙醇或甲醇为溶剂，进行动态逆流提取，收集提取液；(3)脱色：将提取液缓慢加入装有活性炭的层析柱内进行脱色，收集脱色液；(4)浓缩：脱色液减压浓缩回收溶剂至60℃时热测相对密度为1.3～1.4，得穿心莲内酯浓缩物；(5)粗结晶：向浓缩物中加入70～95％乙醇或甲醇，加热搅拌溶解后，过滤，滤液结晶，得穿心莲内酯粗制品；(6)精制：将粗制品溶于70～95％乙醇或甲醇，加热搅拌溶解后，得到粗制品溶解液缓慢加入装有活性炭的层析柱内进行第二次脱色，收集脱色液，再经1-2次重结晶，干燥得穿心莲内酯精制品。在所述步骤(1)中，优选穿心莲草粉碎成长度为1-5厘米长度，更优选2-3厘米。在所述步骤(2)中，优选动态逆流提取过程中溶剂为甲醇或乙醇，优选溶剂浓度为80～100％，更优选90～98％，最优选95％。优选动态逆流提取过程中溶剂的用量为每千克穿心莲草加入3～7l溶剂，更优选5l。优选动态逆流提取过程的温度为40-70℃，更优选60℃。优选动态逆流提取过程每级提取时间为30min～120min。所述动态逆流提取装置由三级提取分离装置组成，每级装置由投料斗、内带螺旋输送装置的提取筒(以下简称提取筒)、出渣螺旋输送器、过滤器、挤榨机、储液罐、泵等组成，另有蒸汽发生器以夹套蒸汽加热的方式为各级提取装置加热，并辅以冷凝水控制温度。所述动态逆流提取流程为向提取筒注入溶剂，当溶剂的液位高度达到筒体直径的3/4时，开启蒸汽阀门加热溶剂，温度加热至60℃时，开始向提取筒内投入穿心莲草粉末，将提取筒轴旋转速控制为3r/min，固定在轴的螺旋带将穿心莲草粉末从机组前端向后缓慢推进，同时提取溶剂从机组末端的进液口进入过滤器，由筒后端穿过移动的物料向前端流动，固液两相物质在这种逆向运动中充分接触，当穿心莲草粉末被输送至筒体长度的1/2时开启过滤器、挤榨机，当穿心莲草粉末被出渣螺旋输送器输送至末端时开始出料，经过滤，挤榨后进入下一级提取筒的进料口进行第二级提取，提取液通过过滤器的收集漏斗进入储液罐内，第二级、第三级的提取流程与第一级相同，每批穿心莲草粉末经过三级动态逆流提取后，药渣经蒸渣回收溶剂后弃去，第二、三级的提取液经泵泵入上一级提取筒进液口作为下一批药材的第一、二级提取溶剂，下批药材的第三级提取加入新鲜溶剂提取，以此循环，收集每批穿心莲草粉末第一级提取液进行后续处理。在所述步骤(3)中，优选活性炭的重量为穿心莲草重量的0.05～0.8倍，更优选为0.1～0.4倍，最优选0.25倍。在所述步骤(4)中，优选减压浓缩温度为40-70℃，更优选50-65℃，最优选60℃。优选减压浓缩真空度为0.08mpa至0.03mpa，更优选0.04mpa至0.07mpa，最优选0.06mpa。在所述步骤(5)中，优选按每千克步骤(4)中浓缩物加入乙醇或甲醇5～30l。优选乙醇或甲醇浓度为80～95％(v/v)，更优选85～90％；优选结晶过程为：向浓缩物中加入乙醇或甲醇，加热至60-80℃，搅拌溶解后过滤，滤液保持在60-80℃，加入纯化水使最终乙醇或甲醇浓度为30％-50％，搅拌1-2h后开始降温；降温过程为：分2-3次降温至0～20℃，每次降温10～20℃，保持2h-4h，当温度降至40℃以下时停止搅拌，静置降温；当温度降至0～20℃时，静置24h-72h。在所述步骤(6)中，优选溶解粗制品的乙醇的量为每千克粗制品95％乙醇5-20l，更优选8-15l，最优选10l；优选重结晶过程为：脱色液保持在60-80℃，加入纯化水使最终乙醇或甲醇浓度为30％-50％，搅拌1-2h后开始降温；降温过程为：分2-3次降温至0～20℃，每次降温10～20℃，保持2h-4h，当温度降至40℃以下时停止搅拌，静置降温；当温度降至0～20℃时，静置24h-72h。优选粗制品与活性炭的重量比为1:0.1～0.6，更优选为1:0.2～0.4，最优选1:0.3。在步骤(5)和步骤(6)中，结晶或重结晶的方法为经过用本发明方法处理后的溶液在0～20℃条件下，静置至穿心莲内酯晶体不再析出，过滤，将所得晶体用适量30％-50％乙醇或甲醇洗涤，结晶母液进入下一批药材步骤(5)中，循环利用。本发明具有如下有益效果：本发明采用动态逆流提取原理进行穿心莲内酯的提取，与现有的醇提工艺相比，具有明显的优势，(1)醇的使用量降低：采用动态逆流提取工艺，出液系数小，物料与溶剂沿相反的方向运动，固液两相不断地更新，所需的提取溶剂少，浓度梯度大、有效成分提取率大，节省溶剂，溶剂用量比当前醇提工艺降低70％以上。(2)药材处理能力大：采用了动态逆流提取工艺，提取速度快，能够连续化生产，因而处理能力大、效率高、耗时短。(3)穿心莲内酯结晶中杂质含量低，半合成的穿琥宁、炎琥宁对比试验证明，有关物质含量极低，明显优于市场采购的原料。动态逆流提取技术在保证及提高指标成分提取率的基础上，节省能源，缩短生产周期，具有工艺简单、溶剂大大节省、能耗低、提取时间短、提取效率高等优点。与传统工艺相比，采用该技术提取的穿心莲内酯得率高、残渣中穿心莲内酯的残余低，工艺操作简单、所需设备成本低、溶剂使用量低，利用工业化大规模生产。具体实施方案1.实施例1(1)粉碎：取穿心莲草100kg，粉碎至平均长度为3厘米。(2)提取：向提取筒注入95％乙醇500l，当溶剂的液位高度达到筒体直径的3/4时，开启蒸汽阀门加热溶剂，温度加热至60℃时，开始向提取筒内投入穿心莲草粉末，将提取筒轴旋转速控制为3r/min，固定在轴的螺旋带将穿心莲草粉末从机组前端向后缓慢推进，同时提取溶剂从机组末端的进液口进入过滤器，由筒后端穿过移动的物料向前端流动，固液两相物质在这种逆向运动中充分接触，当穿心莲草粉末被输送至筒体长度的1/2时开启过滤器、挤榨机，当穿心莲草粉末被出渣螺旋输送器输送至末端时开始出料，经过滤，挤榨后进入下一级提取筒的进料口进行第二级提取，提取液通过过滤器的收集漏斗进入储液罐内，第一级提取时间为1h。第二级、第三级的提取流程与第一级相同，每批穿心莲草粉末经过三级动态逆流提取后，药渣经蒸渣回收溶剂后弃去，第二、三级的提取液经泵泵入上一级提取筒进液口作为下一批药材的第一、二级提取溶剂，下批药材的第三级提取加入新鲜溶剂提取，以此循环，收集每批穿心莲草粉末第一级提取液。(3)脱色：将收集到的第一级提取液缓慢加入装有25kg活性炭的层析柱内进行脱色。(4)浓缩：收集脱色液，于60℃，真空度为0.06mpa条件下进行减压浓缩，回收溶剂直至60℃时热测相对密度为1.3，得到穿心莲内酯浓缩物15.6kg。(5)粗结晶：量取95％乙醇53l加入至浓缩物中，加热至78.3℃搅拌溶解后，过滤，滤液保持在70℃，加纯化水73l使最终乙醇浓度为40％，恒温搅拌2h后开始降温；第一次降温至50℃，搅拌2h后，降温至30℃，静置3h后，再次降温至10℃，静置72h后过滤，得穿心莲内酯粗制品3.23kg。(6)精制：将粗制品缓慢加入到32.3l95％乙醇中，加热至78.3℃搅拌溶解后，得到粗制品溶解液。粗制品溶解液缓慢加入装有活性炭的层析柱内进行脱色，活性炭重量0.969kg，收集脱色液。脱色液保持在70℃，加纯化水44.4l使最终乙醇浓度为40％，恒温搅拌2h后开始降温；第一次降温至50℃，搅拌2h后，降温至30℃，静置3h后，再次降温至10℃，静置72h后过滤，晶体用13.7l55％乙醇洗涤三次，干燥得穿心莲内酯精制品2.73kg。表1实施例1的提取过程分析表原料粗制品晶体精制品晶体重量(kg)1003.232.73穿心莲内酯含量(％)3.2890.399.6穿心莲内酯重量(kg)3.282.922.72收率(％)—89.082.92.实施例2(1)粉碎：取穿心莲草100kg，粉碎至平均长度为2厘米。(2)提取：向提取筒注入95％甲醇500l，当溶剂的液位高度达到筒体直径的3/4时，开启蒸汽阀门加热溶剂，温度加热至60℃时，开始向提取筒内投入穿心莲草粉末，将提取筒轴旋转速控制为3r/min，固定在轴的螺旋带将穿心莲草粉末从机组前端向后缓慢推进，同时提取溶剂从机组末端的进液口进入过滤器，由筒后端穿过移动的物料向前端流动，固液两相物质在这种逆向运动中充分接触，当穿心莲草粉末被输送至筒体长度的1/2时开启过滤器、挤榨机，当穿心莲草粉末被出渣螺旋输送器输送至末端时开始出料，经过滤，挤榨后进入下一级提取筒的进料口进行第二级提取，提取液通过过滤器的收集漏斗进入储液罐内，第一级提取时间为1h。第二级、第三级的提取流程与第一级相同，每批穿心莲草粉末经过三级动态逆流提取后，药渣经蒸渣回收溶剂后弃去，第二、三级的提取液经泵泵入上一级提取筒进液口作为下一批药材的第一、二级提取溶剂，下批药材的第三级提取加入新鲜溶剂提取，以此循环，收集每批穿心莲草粉末第一级提取液。(3)脱色：将收集到的第一级提取液缓慢加入装有25kg活性炭的层析柱内进行脱色，收集脱色液。(4)浓缩：收集脱色液，于60℃，真空度为0.06mpa条件下进行减压浓缩，回收溶剂直至60℃时热测相对密度为1.32，得到穿心莲内酯浓缩物16.8kg。(5)粗结晶：量取90％乙醇57l加入至浓缩物中，加热至75℃搅拌溶解后，过滤，滤液保持在70℃，加纯化水114l使最终甲醇浓度为30％，恒温搅拌2h后开始降温；第一次降温至50℃，搅拌2h后，降温至30℃，静置3h后，再次降温至10℃，静置72h后过滤，得穿心莲内酯粗制品3.28kg。(6)精制：将粗制品缓慢加入到32.8l90％甲醇中，加热至75℃搅拌溶解后，得到粗制品溶解液。粗制品溶解液缓慢加入装有活性炭的层析柱内进行脱色，活性炭重量0.984kg，收集脱色液。脱色液保持在70℃，加纯化水65.5l使最终乙醇浓度为30％，恒温搅拌2h后开始降温；第一次降温至50℃，搅拌2h后，降温至30℃，静置3h后，再次降温至10℃，静置72h后过滤，晶体用13.7l55％乙醇洗涤三次，干燥得穿心莲内酯精制品2.75kg。表2实施例2的提取过程分析表原料粗制品晶体精制品晶体重量(kg)1003.282.75穿心莲内酯含量(％)3.2890.299.8穿心莲内酯重量(kg)3.282.962.74收率(％)—90.283.5对比例1(浸渍法)取穿心莲草100kg，粉碎至20目于多功能提取罐中。加入95％乙醇900l，室温条件下浸提8h，过滤，再浸提两次，每次用95％乙醇800l，室温条件下浸提8h，合并三次浸提滤液，按实施例1提取液处理方法处理，将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例2(渗漉法)取穿心莲草100kg，粉碎至20目于渗漉罐中。加入95％乙醇900l，室温条件下浸润2h，从渗漉罐下方以1500l/h的速度放出渗漉液，并用泵打入渗漉罐中，循环4h，收集渗漉液。再进行两次渗漉提取，每次加入95％乙醇800l，从渗漉罐下方以1500l/h的速度放出渗漉液，并用泵打入渗漉罐中，循环4h，收集第一、二次渗漉提取液按实施例1提取液处理方法处理，将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。第三次渗漉提取液作为下一批药材的提取溶剂，以此循环。对比例3(回流法)取穿心莲草100kg，粉碎至20目于多功能提取罐中。加入95％乙醇900l，回流提取3h，过滤，向滤渣中再加入95％乙醇800l，回流提取3h，过滤，收集两次回流提取的滤液，按实施例1提取液处理方法处理，将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例4(连续逆流法)取穿心莲草100kg，粉碎至20目于连续逆流提取罐中。加入95％乙醇900l，室温条件下浸润2h，将95％乙醇900l，装入储液罐中，再用泵泵入提取罐底部，待提取液达到提取罐顶端时经管道流入储液罐中，形成循环，控制提取温度为60℃，提取4h，放出滤液，按实施例1提取液处理方法处理，将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例5取穿心莲草100kg，粉碎至平均长度为8厘米，其他步骤同实施例1。将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例6取穿心莲草100kg，在步骤(2)中提取溶剂为70％乙醇，其他步骤同实施例1。将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例7取穿心莲草100kg，在步骤(2)中每级提取溶剂95％乙醇的用量为200l，其他步骤同实施例1。将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例8取穿心莲草100kg，在步骤(2)中动态逆流提取过程的温度为20℃，其他步骤同实施例1。将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例9取穿心莲草100kg，在步骤(2)中动态逆流提取过程中，动态逆流提取的级数为一级提取，其他步骤同实施例1。将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例10取穿心莲草100kg，在步骤(5)中，加入纯化水使最终乙醇浓度为70％，在步骤(6)中，加入纯化水使最终乙醇浓度为70％，其他步骤同实施例1。将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。对比例11取穿心莲草100kg，在步骤(5)中，加纯化水73l使最终乙醇浓度为40％，恒温搅拌2h后直接降温至10℃，在步骤(6)中，加纯化水44.4l使最终乙醇浓度为40％，恒温搅拌2h后直接降温至10℃，其他步骤同实施例1。将所得精制品称量，并用hplc检测含量，计算收率。检测方法hplc检测方法：色谱柱：shim-packvp-ods(250mm×4.6mm,5.0μm)，流动相：甲醇：水(65:35)，流速：0.8ml/min，柱温：30℃，检测波长225nm。对照品溶液的制备：精密称取穿心莲内酯对照品25mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度制成浓度为0.25mg/ml的溶液。供试品溶液的制备：取本品约0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。标准曲线的绘制：：分别精密吸取穿心莲内酯对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，置于25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，分别进样20μl，以峰面积(y)为纵坐标，以质量浓度(x)为横坐标做回归计算，得回归方程为：y＝2000000x+29143，r2＝1。穿心莲内酯在0.01mg/ml～0.06mg/ml范围内线性关系良好。穿心莲内酯含量(％)＝{[(y-29143)×a×v]/2000000m}×100a:稀释倍数，v：溶液体积，m：穿心莲内酯晶体重量收率(％)＝[穿心莲内酯重量/(穿心莲草粉末重量×穿心莲草中穿心莲内酯含量)]×100表3各提取方法对比穿心莲内酯残留(％)为提取后穿心莲草粉末中穿心莲内酯的重量与提取前穿心莲草粉末中穿心莲内酯重量的比值。表3实验结果表明，五种提取方法都能够将穿心莲内酯基本提取完全，但本发明所用提取时间最短，溶剂用量最少，有较高的经济效益，更具有市场竞争优势。表4对比例5-11结果穿心莲内酯含量(hplc，％)收率(％)对比例599.468.5对比例699.662.4对比例799.354.3对比例899.721.4对比例999.264.7对比例1091.480.5对比例1190.680.7表4实验结果表明，在动态逆流提取中，穿心莲草粉碎的长度、提取溶剂的浓度及其用量，提取温度和提取级数都是影响穿心莲内酯收率的重要因素，结晶和重结晶过程中最终乙醇浓度是影响穿心莲内酯纯度的重要因素，当降温速度过快时，所得到的穿心莲内酯纯度也较低。应用实施例1a.脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的合成将50g穿心莲内酯(142.7mmol)、42.8g琥珀酸酐(427.7mmol)充分混匀，加入装有机械搅拌、回流冷凝管和温度计的250ml三颈烧瓶中，在氮气保护下，加入无水吡啶180ml，搅拌回流反应10h，反应过程由tlc监控(二氯甲烷：无水乙醇：冰醋酸＝40：1：1)，反应结束后迅速冷却到70℃以下。加入400ml纯化水固化析晶后过滤，得黄色固体物质。用纯化水浸泡4h，洗涤，过滤，干燥，得黄色粗品。将粗品溶于甲醇中，待完全溶解后，加入1.5g活性炭，加热回流30min，趁热过滤。滤液于0℃冰水浴中冷却后，结晶，洗涤干燥得乳白色固体。b.制备穿琥宁氮气保护下，将20g脱水穿心莲内酯二琥珀酸半酯(37.55mmol)溶于70ml无水乙醇溶液，加热至30℃后，缓慢滴加碳酸氢钾饱和溶液(含4.5gkhco3，44.95mmol)，产生大量气泡，并伴有少量固体析出。保温搅拌3h至不再有气泡生成，停止加热，自然冷却2h后过滤，干燥，得白色穿琥宁晶体。表5合成穿琥宁质量对比注：穿心莲内酯1、2、3、4均为购买而来，用应用实施例1方法制备穿琥宁。上述实验结果表明，穿心莲内酯的纯度对穿琥宁的质量影响较大，本发明提取得到的穿心莲内酯纯度较高，因此合成穿琥宁的纯度较高。穿琥宁含量检测方法hplc检测方法：色谱柱：shim-packvp-ods(250mm×4.6mm,5.0μm)，流动相：甲醇：0.05％磷酸二氢钾溶液(用磷酸调ph值至2.5)＝70:30，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，检测波长251nm。理论板数按脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯峰计算不低于3000。精密称定10mg穿琥宁样品，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。另取脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算试品中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(c28h36o10)的含量，与1.072相乘，即得样品中穿琥宁的含量，有关杂质的含量为剩余部分。应用实施例2由穿琥宁制备炎琥宁称取100g穿琥宁(175.2mmol)，325ml无水乙醇，氮气保护，在45℃水浴搅拌条件下，滴加碳酸钠饱和溶液(含na2co321.4g，201.9mmol)，加毕，搅拌反应至反应液澄清，加入700ml无水乙醇，继续搅拌20分钟后，室温条件下静置至不再析出晶体，过滤。将所得晶体与8.9g活性炭加入到8.9l无水乙醇中，搅拌回流30min，趁热过滤，滤液蒸出溶剂至6l，静置析晶至不再有晶体析出，晶体用500ml无水乙醇洗涤2次，真空干燥得到炎琥宁。表6合成炎琥宁质量对比注：穿心莲内酯1、2、3、4均为购买而来，用应用实施例2方法制备炎琥宁。上述实验结果表明，穿琥宁的纯度对合成炎琥宁有进一步的影响，本发明提取到的穿心莲内酯含量较高，对炎琥宁含量影响最小。炎琥宁含量测定方法取炎琥宁样品28mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀乙醇适量使溶解，加醋酸0.1ml,用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀；另精密称取以五氧化二磷为干燥剂在60℃减压干燥至恒重的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对照品适量，按同法制成每1ml中含25μg的溶液，上述两种溶液，照分光光度法(中国药典2015年版二部附录ⅳa)在251nm的波长处测定吸收度，计算求得供试品中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的含量与1.1128相乘，即得供试品中含c28h34knao10的含量，有关杂质的含量为剩余部分。当前第1页12