发明涉及水产养殖领域，尤其是涉及水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法。
技术背景
水产养殖是人为控制下繁殖、培育和收获水生动植物的生产活动。一般包括在人工饲养管理下从苗种养成水产品的全过程。广义上也可包括水产资源增殖。水产养殖有粗养、精养和高密度精养等方式。粗养是在中、小型天然水域中投放苗种，完全靠天然饵料养成水产品，如湖泊水库养鱼和浅海养贝等。精养是在较小水体中用投饵、施肥方法养成水产品，如池塘养鱼、网箱养鱼和围栏养殖等。高密度精养采用流水、控温、增氧和投喂优质饵料等方法，在小水体中进行高密度养殖，从而获得高产，如流水高密度养鱼、虾等。
微生物在自然界中分布十分的广泛，同时它也是个体最小的微生物群体，因为微生物自身的一些特点，它能够很好的应用在水产养殖中，不同的微生物有不同的特点，所以正确的使用微生物可以很好的提升养殖的重量和效果，因此其也得到了十分广泛的应用。
技术实现要素：
发明的目的在于提供水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，本制备方法简单易行，复合微生物菌剂不仅可以吸附水中污染物、净化水质，还可以可提高水产饲料的消化吸收率，降低饲料系数。
发明中所用的微生物及其所购买的企业为：嗜酸乳杆菌、双歧杆菌，陕西森弗天然制品有限公司；枯草芽孢杆菌、蛭弧菌、硝化菌，江苏绿科生物技术有限公司。
发明针对
背景技术：
中提到的问题，采取的技术方案为：水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，包括：活化、负载、发酵，具体包括以下步骤：
活化：将煤矸石投入粉碎机中粉碎，过25-50目筛，将煤矸石粉经780-800℃焙烧活化2-3小时，获得热活化煤矸石载体样品；煤矸石在高温焙烧过程中发生强烈的吸热反应和脱水反应，并释放出一定的活性，煤矸石经焙烧后体积膨胀，其表面和内部形成大量的微孔，同时具有微孔和中孔的结构特征，具有强的离子交换性和较大的吸附能力，热活化煤矸石由于其具有吸附能力强、可再生、价廉的优势，可作为微生物菌群固定化的良好载体；
负载：准确称取30-45份的活化煤矸石载体，灭菌后加入3-5份的复合微生物菌剂、150-200份蒸馏水，放入摇床，在25-28℃以40-60r/min转速摇动60-90分钟，然后倾出多余菌液，加入30-35份浓度为3.5-4.0%的戊二醛水溶液，在1-2℃下交联24-36小时后倾出多余戊二醛，用无菌水洗涤4-6次，即得微生物负载煤矸石粉；活化载体主要通过物理吸附和化学吸附处理废水，物理吸附主要体现在煤矸石与污染物分子之间的分子间引力作用，这一作用受煤矸石的多孔性及表面积决定，这种吸附没有选择性，因而对各种污染物都有一定的吸附去除能力；而化学吸附主要是因为煤矸石中存在着大量的Al，Si等活性物质，能与吸附质通过化学链结合，其选择性强，通常情况下，物理吸附和化学吸附同时存在；另一方面由于活化载体具有发达的比表面积，为各种微生物的生活和繁殖创造了良好的环境，有利于复合菌群的固定化；复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出抗氧化物质，产生了稳定的生态系统，使水中有净化水质功能的原生动物、微生物及水生生物恢复了活性；
发酵：将青糠、玉米粉、豆粕、鱼粉按2-4:1.5-2.0:3-4:1的重量比复配成饲料；将复合微生物菌剂稀释成30-50%的菌液，然后按照200-300:1：0.3-0.5:80-100的重量比将饲料、复合微生物菌液、红糖、自然水搅拌混合，再加入复合微生物菌剂固形物重量3.7-3.9‰的（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇、15.2-15.5‰的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为38-40℃，发酵20-24小时即得复合微生物菌剂饲料，加入饲料重量5-8%的微生物负载煤矸石粉，即得水产养殖用复合微生物菌剂；（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇可与4-羟基苯乙醇发生协同增益作用，该协同增益作用可促使微生物分泌更多的乙酰辅酶A，从而加快乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合生成柠檬酸的反应，加快微生物的柠檬酸循环，从而大大加快微生物的能量代谢与物质代谢，加快微生物的生长繁殖，提高发酵效率，增大微生物的含量；复合微生物菌剂饲料可直接饲喂，可替代部分精料，降低饲料成本，可提高饲料的消化吸收率，降低饲料系数，显著提高水产养殖的经济效益；同时，微生物负载煤矸石粉为各种微生物的生活和繁殖创造了良好的环境，有利于复合菌群的固定化；复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出抗氧化物质，产生了稳定的生态系统，使水中有净化水质功能的原生动物、微生物及水生生物恢复活性。
为优选，复合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、硝化菌、蛭弧菌的混合菌，其重量比为1:0.3-0.5:0.2-0.3:0.4-0.5:0.1-0.15；复合微生物菌剂可分泌多种能降解有机物的酶类，不仅能有效抑制宿主肠道有害病菌生长，提高机体抗病能力，还可能直接利用水体中的硝酸盐和亚硝酸盐，分解池底有机物，降低养殖水体富营养化程度，优化水体环境；同时可调节水体及宿主肠道pH，抑制肠道不耐酸厌氧病原菌繁殖，维持肠道微生态平衡，还可合成短链脂肪酸和B族维生素，中和毒性产物，抑制氨和胺的合成，增强机体免疫力。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）活化载体主要通过物理吸附和化学吸附处理废水，物理吸附主要体现在煤矸石与污染物分子之间的分子间引力作用，这一作用受煤矸石的多孔性及表面积决定，这种吸附没有选择性，因而对各种污染物都有一定的吸附去除能力；2）活化载体具有发达的比表面积，为各种微生物的生活和繁殖创造了良好的环境，有利于复合菌群的固定化；复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出抗氧化物质，产生了稳定的生态系统，使水中有净化水质功能的原生动物、微生物及水生生物恢复了活性；3）（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇可与4-羟基苯乙醇发生协同增益作用，该协同增益作用可促使微生物分泌更多的乙酰辅酶A，从而加快乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合生成柠檬酸的反应，加快微生物的柠檬酸循环，从而大大加快微生物的能量代谢与物质代谢，加快微生物的生长繁殖，提高发酵效率，增大微生物的含量。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1）活化：将煤矸石投入粉碎机中粉碎，过25目筛，将煤矸石粉经780℃焙烧活化2小时，获得热活化煤矸石载体样品；煤矸石在高温焙烧过程中发生强烈的吸热反应和脱水反应，并释放出一定的活性，煤矸石经焙烧后体积膨胀，其表面和内部形成大量的微孔，同时具有微孔和中孔的结构特征，具有强的离子交换性和较大的吸附能力，热活化煤矸石由于其具有吸附能力强、可再生、价廉的优势，可作为微生物菌群固定化的良好载体；
2）负载：准确称取30份的活化煤矸石载体，灭菌后加入3份的复合微生物菌剂、150份蒸馏水，复合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、硝化菌、蛭弧菌的混合菌，其重量比为1:0.3:0.2:0.4:0.1，放入摇床，在25℃以40r/min转速摇动60分钟，然后倾出多余菌液，加入30份浓度为3.5%的戊二醛水溶液，在1℃下交联24小时后倾出多余戊二醛，用无菌水洗涤4次，即得微生物负载煤矸石粉；活化载体主要通过物理吸附和化学吸附处理废水，物理吸附主要体现在煤矸石与污染物分子之间的分子间引力作用，这一作用受煤矸石的多孔性及表面积决定，这种吸附没有选择性，因而对各种污染物都有一定的吸附去除能力；而化学吸附主要是因为煤矸石中存在着大量的Al，Si等活性物质，能与吸附质通过化学链结合，其选择性强，通常情况下，物理吸附和化学吸附同时存在；另一方面由于活化载体具有发达的比表面积，为各种微生物的生活和繁殖创造了良好的环境，有利于复合菌群的固定化；复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出抗氧化物质，产生了稳定的生态系统，使水中有净化水质功能的原生动物、微生物及水生生物恢复了活性；
3）发酵：将青糠、玉米粉、豆粕、鱼粉按2:1.5:3:1的重量比复配成饲料；将复合微生物菌剂稀释成30%的菌液，复合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、硝化菌、蛭弧菌的混合菌，其重量比为1:0.3:0.2:0.4:0.1，然后按照200:1:0.3:80的重量比将饲料、复合微生物菌液、红糖、自然水搅拌混合，再加入复合微生物菌剂固形物重量3.7‰的（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇、15.2‰的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为38℃，发酵20小时即得复合微生物菌剂饲料，加入饲料重量5%的微生物负载煤矸石粉，即得水产养殖用复合微生物菌剂；（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇可与4-羟基苯乙醇发生协同增益作用，该协同增益作用可促使微生物分泌更多的乙酰辅酶A，从而加快乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合生成柠檬酸的反应，加快微生物的柠檬酸循环，从而大大加快微生物的能量代谢与物质代谢，加快微生物的生长繁殖，提高发酵效率，增大微生物的含量；复合微生物菌剂饲料可直接饲喂，可替代部分精料，降低饲料成本，可提高饲料的消化吸收率，降低饲料系数，显著提高水产养殖的经济效益；同时，微生物负载煤矸石粉为各种微生物的生活和繁殖创造了良好的环境，有利于复合菌群的固定化；复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出抗氧化物质，产生了稳定的生态系统，使水中有净化水质功能的原生动物、微生物及水生生物恢复活性。
施例2：
水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1）将煤矸石投入粉碎机中粉碎，过50目筛，将煤矸石粉经800℃焙烧活化3小时，获得热活化煤矸石载体样品；2）准确称取45份的活化煤矸石载体，灭菌后加入5份复合微生物菌剂、200份蒸馏水，复合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、硝化菌、蛭弧菌的混合菌，其重量比为1:0.5:0.3:0.5:0.15，放入摇床，在28℃以40-60r/min转速摇动90分钟，然后倾出多余菌液，加入35份浓度为4.0%的戊二醛水溶液，在2℃下交联36小时后倾出多余戊二醛，用无菌水洗涤6次，即得微生物负载煤矸石粉；3）将青糠、玉米粉、豆粕、鱼粉按2:1.5:3:1的重量比复配成饲料；将复合微生物菌剂稀释成30-50%的菌液，复合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、硝化菌、蛭弧菌的混合菌，其重量比为1:0.5:0.3:0.5:0.15，然后按照200:1:0.5:100的重量比将饲料、复合微生物菌液、红糖、自然水搅拌混合，再加入复合微生物菌剂固形物重量3.9‰的（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇、15.5‰的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为40℃，发酵24小时即得复合微生物菌剂饲料，加入饲料重量8%的微生物负载煤矸石粉，即得水产养殖用复合微生物菌剂。
施例3：
水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，包括：活化、负载、发酵，具体包括以下步骤：
活化：将煤矸石投入粉碎机中粉碎，过40目筛，将煤矸石粉经780℃焙烧活化2.5小时，获得热活化煤矸石载体样品；煤矸石在高温焙烧过程中发生强烈的吸热反应和脱水反应，并释放出一定的活性，煤矸石经焙烧后体积膨胀，其表面和内部形成大量的微孔，同时具有微孔和中孔的结构特征，具有强的离子交换性和较大的吸附能力，热活化煤矸石由于其具有吸附能力强、可再生、价廉的优势，可作为微生物菌群固定化的良好载体；
负载：准确称取40份的活化煤矸石载体，灭菌后加入4份的复合微生物菌剂、160份蒸馏水，放入摇床，在27℃以55r/min转速摇动60分钟，然后倾出多余菌液，加入30份浓度为3.8%的戊二醛水溶液，在2℃下交联24小时后倾出多余戊二醛，用无菌水洗涤5次，即得微生物负载煤矸石粉；活化载体主要通过物理吸附和化学吸附处理废水，物理吸附主要体现在煤矸石与污染物分子之间的分子间引力作用，这一作用受煤矸石的多孔性及表面积决定，这种吸附没有选择性，因而对各种污染物都有一定的吸附去除能力；而化学吸附主要是因为煤矸石中存在着大量的Al，Si等活性物质，能与吸附质通过化学链结合，其选择性强，通常情况下，物理吸附和化学吸附同时存在；另一方面由于活化载体具有发达的比表面积，为各种微生物的生活和繁殖创造了良好的环境，有利于复合菌群的固定化；复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出抗氧化物质，产生了稳定的生态系统，使水中有净化水质功能的原生动物、微生物及水生生物恢复了活性；
发酵：将青糠、玉米粉、豆粕、鱼粉按3:1.8:3.5:1的重量比复配成饲料；将复合微生物菌剂稀释成40%的菌液，然后按照280:1:0.4:90的重量比将饲料、复合微生物菌液、红糖、自然水搅拌混合，再加入复合微生物菌剂固形物重量3.7‰的（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇、15.4‰的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为38℃，发酵20小时即得复合微生物菌剂饲料，加入饲料重量6%的微生物负载煤矸石粉，即得水产养殖用复合微生物菌剂；（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇可与4-羟基苯乙醇发生协同增益作用，该协同增益作用可促使微生物分泌更多的乙酰辅酶A，从而加快乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合生成柠檬酸的反应，加快微生物的柠檬酸循环，从而大大加快微生物的能量代谢与物质代谢，加快微生物的生长繁殖，提高发酵效率，增大微生物的含量；复合微生物菌剂饲料可直接饲喂，可替代部分精料，降低饲料成本，可提高饲料的消化吸收率，降低饲料系数，显著提高水产养殖的经济效益；同时，微生物负载煤矸石粉为各种微生物的生活和繁殖创造了良好的环境，有利于复合菌群的固定化；复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出抗氧化物质，产生了稳定的生态系统，使水中有净化水质功能的原生动物、微生物及水生生物恢复活性。
合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、硝化菌、蛭弧菌的混合菌，其重量比为1:0.4:0.2:0.4:0.12；复合微生物菌剂可分泌多种能降解有机物的酶类，不仅能有效抑制宿主肠道有害病菌生长，提高机体抗病能力，还可能直接利用水体中的硝酸盐和亚硝酸盐，分解池底有机物，降低养殖水体富营养化程度，优化水体环境；同时可调节水体及宿主肠道pH，抑制肠道不耐酸厌氧病原菌繁殖，维持肠道微生态平衡，还可合成短链脂肪酸和B族维生素，中和毒性产物，抑制氨和胺的合成，增强机体免疫力。
发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。