重组枯草芽孢杆菌及其过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法与流程

文档序号:15469406发布日期:2018-09-18 19:56阅读:来源:国知局

技术特征:

1.重组枯草芽孢杆菌,其特征在于:在重组枯草芽孢杆菌BSGNK的基础上,进一步过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶(GlmS),得到重组菌BSGNKS;所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK,是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagA Δ nagB Δ ldh Δ pta Δ glck :: lox72为宿主,分别以启动子PxylA、P43控制glms、GNA1的重组表达。

2.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于:所述6-磷酸氨基葡萄糖合成酶(GlmS)编码基因glmS如NCBI中geneID:938736所示。

3.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于:所述6-磷酸氨基葡萄糖合成酶(GlmS)的构建整合表达框为SEQID NO.1,并经同源重组整合至glcK位点。

4.利用如权利要求1、2或3所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法,其特征在于:以重组枯草芽孢杆菌BSGNK作为出发菌株,过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶(GlmS),所得的重组菌BSGNKS用于生产乙酰氨基葡萄糖,所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagA Δ nagB Δ ldh Δ pta Δ glck :: lox72为宿主,分别以启动子PxylA、P43控制glms、GNA1的重组表达。

5.如权利要求4所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法,其特征在于:利用所述重组菌BSGNKS结合复合培养基复合生产乙酰氨基葡萄糖。

6.如权利要求5所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法,其特征在于:所述复合培养基包括按g/L计的以下组分:

初始葡萄糖55~65、蛋白胨 5~8、酵母粉 10~14、(NH4)SO45~8、 K2HPO4·3H2O 11~13、KH2PO4 2~3.5、CaCO3 3.5~6、微量元素溶液 8~12ml/L;

所述微量元素溶液包括按g/L计的以下组分:

MnSO4·5H2O 0.75~1.25、Cocl 2·6H2O 0.3~0.5、NaMoO4·2H2O 0.1~0.3、ZnSO4·7H2O 0.1~0.3、 Alcl3·6H2O 0.05~0.15、Cucl 2·H2O 0.05~0.15、H3BO4 0.04~0.06。

7.如权利要求4所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法,其特征在于:利用所述重组菌BSGNKS结合发酵培养基发酵法生产乙酰氨基葡萄糖。

8.如权利要求7所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法,其特征在于:将活化后的所述重组枯草芽孢杆菌的种子培养液以至少10%的接种量转入所述发酵培养基中进行接种,接种至少2 h后加入诱导剂并置于摇瓶内,在30~40 oC的温度环境中以200~240rpm 的转速条件下培养至少 48 h。

9.如权利要求8所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法,其特征在于:所述发酵培养基包括按g/L计的以下组分:

初始葡萄糖55~65、蛋白胨 5~8、酵母粉 10~14、(NH4)SO45~8、 K2HPO4·3H2O 11~13、KH2PO4 2~3.5、CaCO3 3.5~6、微量元素溶液 8~12ml/L;

所述微量元素溶液包括按g/L计的以下组分:

MnSO4·5H2O 0.75~1.25、Cocl 2·6H2O 0.3~0.5、NaMoO4·2H2O 0.1~0.3、ZnSO4·7H2O 0.1~0.3、 Alcl3·6H2O 0.05~0.15、Cucl 2·H2O 0.05~0.15、H3BO4 0.04~0.06。

10.如权利要求8所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法,其特征在于:所述诱导剂包括木糖,所述木糖的用量为5 g/L;所述摇瓶的装液量为50 mL。

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