一种基于计数的高精度细菌菌液制备方法，属于用药实验技术领域。
背景技术：
目前，在医院实验室中，为确定某种药物的灭菌效果，常规的方法是制备一定浓度的细菌菌液，然后将一定浓度的药物与细菌菌液结合进行测试。由于药物一般在出厂时是严格按照相关要求制备的，因此药物在出厂时其浓度单位十分精准，所以与之配合的细菌菌液的浓度是影响实验结果的决定性因素之一。
在现有技术中，针对细菌菌液浓度测定的公认的方法有两种：比浊法以及吸光度法，其中比浊法是指光照射细菌菌液之后，利用透射光强度与入射光强度的比值，或用散射光强度与入射光强度的比值来测定细菌菌液中细菌浓度的方法；而吸光度法是指利用细菌菌液中细菌对特性光线吸光的特性，来测定细菌菌液中细菌浓度的方法。由此可知这两种方式都是根据细菌液浓度（浑浊度）与光源的关系间接对细菌菌液中细菌的浓度进行测定。
然而在实际测试中，由于各种细菌的形态、体积差别较大（如球状细菌、杆状细菌、螺旋状细菌），因此在相同体积的细菌菌液中，通过比浊法或吸光度法测得的相同浓度的细菌菌液中由于细菌形态的不同，其实际浓度（单位体积菌液中细菌的个数）会出现较大差别，因此通过现有技术的方法测得的细菌菌液中的细菌浓度数据会出现极大的误差。
由上述可知，由于对细菌菌液中细菌浓度的数据无法精确测量，因此会大大影响对药物药效的测定，无法对药品的药效获得足够的认识，因此进一步影响了临床对用药量以及用药种类的选择，无法做到精准用药。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种通过设置标准微球悬浊液，通过标准微球悬浊液与细菌菌液混合然后通过标准微球与细菌数量比值的方法精确计算得到细菌菌液中的细菌浓度，有助于在已知准确细菌浓度下确定药物药效以便实现精准用药的基于计数的高精度细菌菌液制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：该基于计数的高精度细菌菌液制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤a，制备标准微球悬浊液，标准微球悬浊液中标准微球的浓度为确定值；
步骤b，制备细菌浓度待测的细菌菌液；
步骤c，分别取标准微球悬浊液和细菌菌液，充分混合得到混合液，标准微球悬浊液和细菌菌液的体积比为确定值；
步骤d，得到混合液中标准微球以及细菌的数量；
步骤e，根据步骤d中标准微球以及细菌数量的比值得到步骤b中细菌菌液的细菌浓度的数值；
步骤f，根据步骤b中细菌菌液的细菌浓度制备预定细菌浓度的细菌菌液；
步骤c中标准微球悬浊液和细菌菌液的体积比为确定值。
优选的，步骤e中，得到细菌菌液的细菌浓度时，具体包括如下步骤：
步骤f-1，根据混合液中标准微球悬浊液和细菌菌液的体积比得到混合液中标准微球的浓度值；
步骤f-2，根据混合液中标准微球以及细菌的数量比，结合混合液中标准微球的浓度值，得到混合液中细菌浓度的数值；
步骤f-3，根据混合液中标准微球悬浊液和细菌菌液的体积比得到混合液中细菌浓度与步骤b中细菌菌液细菌浓度的比值；
步骤f-4，根据步骤f-2以及步骤f-3得到步骤b中细菌菌液的细菌浓度的数值。
优选的，在步骤d中，利用观测仪器通过计数的方式得到标准微球以及细菌的数量。
优选的，所述的观测仪器为相差显微镜或高倍显微镜或荧光显微镜。
优选的，步骤f中所述的预定细菌浓度小于步骤b中细菌菌液的细菌浓度。
优选的，在进行步骤d时，可通过所述混合液的总量或某一确定视野下的部分混合液得到混合液中标准微球以及细菌的数量。
与现有技术相比，本发明所具有的有益效果是：
在本基于计数的高精度细菌菌液制备方法中，通过设置已知浓度的标准微球悬浊液，通过标准微球悬浊液与细菌菌液混合买然后得到标准微球与细菌的数量比值，然后通过计算混合液中标准微球的浓度进一步计算得出原始细菌菌液中细菌浓度。相比较现有技术中通过比浊法以及吸光度法对细菌浓度进行测定的方法，克服了不同细菌体积及形态不同带来的影响，计算效果更为准确，因此可以在已知准确细菌浓度下对药品的药效进行准确的测试及充分的了解，有助于医生的精准用药。
附图说明
图1为基于计数的高精度细菌菌液制备方法流程图。
具体实施方式
图1是本发明的最佳实施例，下面结合附图1对本发明做进一步说明。
如图1所示，一种基于计数的高精度细菌菌液制备方法，包括如下步骤：
步骤1001，制备已知浓度的标准微球悬浊液；
取已知数量为n的标准微球，然后将所有标准微球放入已知体积v1的无菌液体，充分搅拌均匀后得到已知浓度的标准微球悬浊液。为便于表述，将制得的标准微球悬浊液记为液体s1，因此可以得到液体s1中标准微球的浓度值c1，浓度值c1的单位可任意设定，如：（个/ml）或（个/l）。
步骤1002，制备浓度待测的细菌菌液；
根据本领域常规操作，将一定数量的细菌放入已知体积v2的无菌液体内，充分搅拌均匀后得到浓度未知的细菌菌液。将制得的细菌菌液记为液体s2，由于细菌数量未知，因此当前原始液体s2中细菌的浓度值c2为未知量，为便于计算液体s2中细菌浓度c2采用与液体s1中标准微球浓度c1相同的单位。
由本领域公知常识可知，在得到浓度较大的细菌菌液之后，可以通过稀释的方式得到浓度较小的任意浓度的菌液。因此，在进行本步骤时，可以通过经验使液体s2的细菌浓度c2远远大于实验用细菌菌液的浓度，以便于得到细菌浓度c2进行稀释，以得到期望浓度的细菌菌液。
步骤1003，分别取标准微球悬浊液和细菌菌液，充分混合后得到混合液；
取一定体积（记为v1’）的标准微球悬浊液和一定体积（记为v2’）的细菌菌液，将两种液体混合后充分搅拌得到混合液s3。
由于将体积v1’的液体s1和体积v2’的液体s2充分混合后，液体s1和液体s2相互稀释，因此为得到混合液s3中标准微球的浓度值c1’，体积v1’和体积v2’比值需为已知量。由此得到混合液s3中标准微球的浓度值c1’的表达式为：
c1’=c1·v1’/（v1’+v2’）公式（1）
在公式（1）中，由于浓度c1为已知量，体积v1’和体积v2’比值为已知量，因此可以得到浓度c1’的确定值。
同理：混合液s3中标准微球的浓度值c2’的表达式为：
c2’=c2·v2’/（v1’+v2’）公式（2）
在公式（2）中，由于体积v1’和体积v2’比值为已知量，因此可以得到浓度c2’与浓度c2的比值关系。
步骤1004，抽取一定体积的混合液s3。
步骤1005，分得到标准微球以及细菌的数量。
将步骤1004中抽取的混合液s3全部或部分转移到观测仪器上，然后利用观测仪器通过计数的方式分别得到其中标准微球的数量以及细菌的数量。在进行计数时，可以针对转移到观测仪器上的混合液s3的总量分别进行标准微球以及细菌的计数，也可以针对某一确定的观测视野下的标准微球以及细菌分别进行计数。观测仪器可通过本领域常规的相差显微镜或高倍显微镜或荧光显微镜实现。
步骤1006，得到细菌菌液的浓度；
在完成步骤1005中分别对标准微球以及细菌进行技术后，标准微球数量与细菌数量的比值即为混合液s3中标准微球浓度c1’与细菌浓度c2’的比值，因此通过上述公式（1）在确定了浓度c1’数值的基础上可以得到混合液s3中细菌浓度c2’的数值，然后根据上述公知（2）可以进一步计算得到步骤1002中制备的原始细菌菌液（液体s2）中的细菌浓度c2的数值。
步骤1007，制备预定浓度的细菌菌液；
在确定了原始细菌菌液中细菌浓度c2的数值之后，通过常规的稀释方法可以得到实验时所期望浓度的细菌菌液。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。