本发明涉及n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的制备领域，尤其涉及一种高纯度的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成方法。
背景技术：
n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺，是一类特别的构建酶特异性试剂盒必备的有机合成切块，用以修饰dna多聚酶，保持其酶活性热稳定性，而使其具有做成试剂盒的能力；对于整个酶试剂盒而言，n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的纯度将直接影响酶试剂盒的最终检测结果。据此，对高纯度的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成开发将具有极其重要的现实意义。然而，目前为止，采用现有方法得到的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的纯度还不够高，无法达到上述酶特异性试剂盒的开发要求。例如，ep1806400a2、us2007224611a1中关于n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺合成方法的报道中，目标产物的纯度只有95％，若需更高纯度，则仍需要柱色谱方法进行进一步纯化。
据此，目前急需一种无需柱色谱进一步纯化的高纯度n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成方法。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种无需柱色谱进一步纯化的高纯度的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成方法。
本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：
一种高纯度的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成方法，包括如下步骤：
(1)制备2，3-二甲基丁烯二酰亚胺
a.将1.0-1.2g3，4-二甲基呋喃-2，5-二酮溶于10-12mldmf中，冰浴下加入17-19ml六甲基二硅氮烷hmds和1.7-1.9ml甲醇，加毕室温反应1-3h，旋去溶剂；
b.加入4-6mldmf、17-19mlhmds和1.7-1.9ml甲醇反应7-9h，再加入65-75ml水、45-55ml乙酸乙酯进行萃取，萃取2-4次；
c.合并有机相，并对萃取液进行水洗、饱和食盐水洗后，采用无水硫酸钠干燥法进行干燥，再蒸去溶剂，油泵拉干，得白色固体，即2，3-二甲基丁烯二酰亚胺；
(2)制备n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺
a.0-5℃温度下，将0.9-1.1ml氯甲酸乙酯逐滴加入到2，3-二甲基丁烯二酰亚胺和n-甲基吗啉的乙酸乙酯混合液中，室温反应4-6h；其中，乙酸乙酯混合液的体积为19-21ml，2，3-二甲基丁烯二酰亚胺的含量为0.9-1.1g，n-甲基吗啉的含量为0.9-1.1ml；
b.反应完全，对反应产物先后进行水洗、饱和食盐水洗、稀盐酸洗，接着采用无水硫酸钠干燥，蒸干后得无色液体，即n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中旋去溶剂指采用旋转蒸发仪把相应溶剂蒸干。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中2，3-二甲基丁烯二酰亚胺的产量为0.9-1.1g，收率89％，纯度99.0％。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中乙酸乙酯混合液的具体体积为20ml，其中，2，3-二甲基丁烯二酰亚胺的含量为1.0g，n-甲基吗啉的含量为1.0ml。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中对反应产物进行稀盐酸洗时的稀盐酸浓度具体为1m。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的最终产量为1.3-1.5g，收率90％，纯度98.0％。
本发明相比现有技术的优点在于：采用两步合成法合成n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺，步骤简单、操作方便，且最终以hplc:purity>98％，90％的收率得到目标产物；其中，第一步反应为本发明最为关键的步骤，该步骤中，使用hmds替代传统的脲，无需高温(150℃)，于室温下反应即可得到第一步产物，并且杂质少，操作简单；此外，第一步反应中，利用二次加入hmds和溶剂再反应和纯化一步进行，以89％的收率，99.0％纯度得到第一步产物，为第二步反应产物的纯度提供了有效保障。因此，本发明能高效得到高纯度用于生物试剂盒开发的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺，利用该产品能够顺利得到性能高效的酶反应试剂盒，具有很好的市场应用价值。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种高纯度的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成方法，包括如下步骤：
(1)制备2，3-二甲基丁烯二酰亚胺
a.将1.0g3，4-二甲基呋喃-2，5-二酮(结构式如式1所示)溶于10mldmf中，冰浴下加入17ml六甲基二硅氮烷hmds和1.7ml甲醇，加毕室温反应1h，再采用旋转蒸发仪把相应溶剂蒸干；
b.加入4mldmf、17mlhmds和1.7ml甲醇反应7h，再加入65ml水、45ml乙酸乙酯进行萃取，萃取2次；
c.合并有机相，并对萃取液进行水洗、饱和食盐水洗后，采用无水硫酸钠干燥法进行干燥，再蒸去溶剂，油泵拉干，得0.9g白色固体，即2，3-二甲基丁烯二酰亚胺(结构式如式2所示)，收率89％，纯度99.0％。
(2)制备n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺
a.0℃温度下，将0.9ml氯甲酸乙酯逐滴加入到2，3-二甲基丁烯二酰亚胺和n-甲基吗啉的乙酸乙酯混合液中，室温反应4h；其中，乙酸乙酯混合液的体积为19ml，2，3-二甲基丁烯二酰亚胺的含量为0.9g，n-甲基吗啉的含量为0.9ml；
b.反应完全，对反应产物先后进行水洗、饱和食盐水洗、1m稀盐酸洗，接着采用无水硫酸钠干燥，蒸干后得1.3g无色液体，即n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺(结构式如式3所示)，收率90％，纯度98.0％。
实施例2
本实施例的一种高纯度的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成方法，包括如下步骤：
(1)制备2，3-二甲基丁烯二酰亚胺
a.将1.2g3，4-二甲基呋喃-2，5-二酮(结构式如式1所示)溶于12mldmf中，冰浴下加入19ml六甲基二硅氮烷hmds和1.9ml甲醇，加毕室温反应3h，再采用旋转蒸发仪把相应溶剂蒸干；
b.加入6mldmf、19mlhmds和1.9ml甲醇反应9h，再加入75ml水、55ml乙酸乙酯进行萃取，萃取4次；
c.合并有机相，并对萃取液进行水洗、饱和食盐水洗后，采用无水硫酸钠干燥法进行干燥，再蒸去溶剂，油泵拉干，得1.1g白色固体，即2，3-二甲基丁烯二酰亚胺(结构式如式2所示)，收率89％，纯度99.0％。
(2)制备n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺
a.5℃温度下，将1.1ml氯甲酸乙酯逐滴加入到2，3-二甲基丁烯二酰亚胺和n-甲基吗啉的乙酸乙酯混合液中，室温反应6h；其中，乙酸乙酯混合液的体积为21ml，2，3-二甲基丁烯二酰亚胺的含量为1.1g，n-甲基吗啉的含量为1.1ml；
b.反应完全，对反应产物先后进行水洗、饱和食盐水洗、1m稀盐酸洗，接着采用无水硫酸钠干燥，蒸干后得1.5g无色液体，即n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺(结构式如式3所示)，收率90％，纯度98.0％。
实施例3
本实施例的一种高纯度的n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺的合成方法，包括如下步骤：
(1)制备2，3-二甲基丁烯二酰亚胺
a.将1.1g3，4-二甲基呋喃-2，5-二酮(结构式如式1所示)溶于11mldmf中，冰浴下加入18ml六甲基二硅氮烷hmds和1.8ml甲醇，加毕室温反应2h，再采用旋转蒸发仪把相应溶剂蒸干；
b.加入5mldmf、18mlhmds和1.8ml甲醇反应8h，再加入70ml水、50ml乙酸乙酯进行萃取，萃取3次；
c.合并有机相，并对萃取液进行水洗、饱和食盐水洗后，采用无水硫酸钠干燥法进行干燥，再蒸去溶剂，油泵拉干，得1.0g白色固体，即2，3-二甲基丁烯二酰亚胺(结构式如式2所示)，收率89％，纯度99.0％；1hnmr(cdci3)δ7.40(br,1h),1.99(6h,s,2×ch3)。
(2)制备n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺
a.4℃温度下，将1.0ml氯甲酸乙酯逐滴加入到2，3-二甲基丁烯二酰亚胺和n-甲基吗啉的乙酸乙酯混合液中，室温反应5h；其中，乙酸乙酯混合液的体积为20ml，2，3-二甲基丁烯二酰亚胺的含量为1.0g，n-甲基吗啉的含量为1.0ml；
b.反应完全，对反应产物先后进行水洗、饱和食盐水洗、1m稀盐酸洗，接着采用无水硫酸钠干燥，蒸干后得1.4g无色液体，即n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺(结构式如式3所示)，收率90％，纯度98.0％；1hnmr(cdci3)δ1.42(3h,t,och2ch3),2.04(6h,s,2×ch3),4.43(2h,q,ch2)，hplc:purity>98％.(hplc方法摸索得，h2o:ch3cn＝50:50)。
上述实施例1-3揭示了本发明从3，4-二甲基呋喃-2，5-二酮(结构式如式1所示)制备得到2，3-二甲基丁烯二酰亚胺(结构式如式2所示)，再进一步制备得到n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺(结构式如式3所示)的过程；而上述实施例方法却不限于此，其同样适用于结构通式为如式4所示化合物制备得到式5化合物，再进一步制备得到式6化合物的过程。
具体地，上述实施例中3，4-二甲基呋喃-2，5-二酮(结构式如式1所示)为式4所示化合物中r1、r2取代基具体表现为甲基的形式，2，3-二甲基丁烯二酰亚胺(结构式如式2所示)为式5所示化合物中r1、r2取代基具体表现为甲基的形式，n-乙氧羰基-2，3-二取代丁烯二酰亚胺(结构式如式3所示)为式6所示化合物中r1、r2取代基具体表现为甲基的形式。同样地，本发明方法还可适用于r1、r2取代基为其他不同的烷基、芳基、脂环或杂原子的情况。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。