本发明属于保健酒
技术领域：
，具体涉及一种石斛酒的制备方法。
背景技术：
：石斛(dendrobiumsw)为兰科石斛属植物的总称，民间又称“千金草”、“软黄金”，被列为“中华九大仙草”之首，是传统的名贵中药材。广泛分布于我国的云南、四川、贵州、广西、福建、安徽、浙江、江苏、湖南、江西等地。早在《神农本草经》和现代《中华人民共和国药典》记载，石斛具有滋阴清热、益胃生津、养肝明目。其中石斛多糖、生物碱、石斛酚具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老作用，被广泛用于保健食品和药品中。紫皮石斛，学名齿瓣石斛，拉丁名dendrodiundevonianumpaxt，是云南主要种植品种，其中龙陵的紫皮石斛占据全国的70％以上，是云南省质量技术监督局2014年发布的地理标志产品。经过检测，龙陵紫皮石斛多糖含量高达48％，高于铁皮石斛。目前有石斛酒的制备，但制备石斛酒并保证功效的方法尚不完善，具体是指石斛有效成分回流提取不充分，不能大规模应用于工业化生产。技术实现要素：针对上述现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种以紫皮石斛为原料，采用回流提取工艺，充分提取石斛有效成分，便于大规模的应用于工业化生产的石斛酒的制备方法。本发明采用如下技术方案：一种石斛酒的制备方法，将紫皮石斛原粉与基酒a混合后，经过回流提取、浓缩、纯化、配制、澄清、提香、稳定性处理步骤之后制得所述石斛酒。优选的是，所述基酒a为26-68％vol白酒。优选的是，使用80-95％vol食用乙醇进行所述纯化。优选的是，使用55％vol米香型白酒作为基酒b进行所述提香的用酒。优选的是，具体包括以下步骤：1)回流提取：将紫皮石斛干片15-25kg粉碎过8-40目筛，加入到含有基酒a的多功能浸提罐中浸泡0.5-1h，在常压60-82℃温度下回流提取2.5-3.5h，过滤得石斛醇提液；将过滤后的石斛粉滤渣加入纯化水于常压90-100℃下回流提取2-3次，每次2.5-3.5小时，过滤，得水提石斛液；2)浓缩：将水提石斛滤液抽入双效降膜浓缩器中，在55-75℃温度条件下减压浓缩至每1l浓缩液相当于石斛0.08-0.12kg，得浓缩液；3)纯化：将80-95％vol食用乙醇加入浓缩液中，低温静置后进行固液分离，去除浓缩液中的食用乙醇，制得纯化水提浓缩液；4)配制：将纯化水提浓缩液并入石斛醇提液中，混合均匀，制得混合液，将混合液转移至陶坛存放1年以上；5)澄清：将存放1年以上的混合液抽取上清液至冷冻罐进行冷冻澄清处理，过滤，制得石斛酒滤液；6)提香：向石斛酒滤液中加入提香液进行提香，使其有淡淡的石斛焦香和兰香；7)稳定性处理：提香过的石斛酒滤液通过硅藻土过滤机和微滤膜进行稳定性处理，过滤，即得所述石斛酒。所述石斛酒能够增强人体免疫功能。优选的是，所述步骤1)中的基酒a是55％vol的米香型白酒700-800l，具体要求为特级陈酿1.5年以上，优级陈酿2年以上。优选的是，所述步骤2)浓缩液中，检测石斛多糖5.8-6.2g/l。优选的是，所述步骤6)中的石斛提香酒液的提香工艺处理为10-30kg优级紫皮石斛鲜条清洗切片后经茶叶烘焙提香机于50-80℃烘干提香投入基酒b浸泡12-48小时，过滤后得到的提香液。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，石斛酒中石斛多糖含量为155-165mg/l。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，所述的石斛酒具有增强人体免疫力的功效。与现有技术相比，本发明具有如下优点：(1)使用本发明制备石斛酒，其实现制酒工艺规范化、数字化，实现工艺精确控制，即制酒过程中所用到的设备可以实现数字化控制，对应的紫皮石斛干粉的加入、基酒a的加入、基酒b的加入、回流提取工艺、浓缩工艺、纯化工艺、配制工艺、澄清工艺、提香工艺、稳定性处理工艺均可实现数字化控制，最终实现制酒工艺的标准化，不改变产品品质的前提下，确保该制备方法能够实现工业化生产；(2)使用本发明制备石斛酒，紫皮石斛中的有效成分提取充分，与现有石斛酒的制备方法相比较，现有的石斛酒的制备方法大多采用浸泡式处理，石斛中的有效成分不能够充分析出，影响成品石斛酒的口感和功效；(3)使用本发明制备石斛酒，其制备工艺规范、完善，工作人员只需要按照操作手册所示方法进行生产即可，对工作人员专业要求较低，降低因为工作人员专业素养高低出现成品石斛酒口感、质量问题；(4)使用本发明制备石斛酒，实现各个工艺步骤精确化控制，工作人员可以对工艺步骤的参数进行调节从而制得适宜人群更多的成品石斛酒，且成品石斛酒品质可控，无差异化；选择现有石斛酒中有效成分含量最高的石斛酒作为对照组，与本发明所制得的石斛酒作对比，其有效成分含量检测结果如表1所示：表1通过表1数据可知，本发明制得石斛酒中多糖、总黄酮、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、脯氨酸含量明显高于对照组，且多糖、总黄酮、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、脯氨酸均为增强人体免疫功能的主要成分。下面结合具体动物实验进一步对本发明进行说明，使用本发明制备的石斛酒做增强免疫力功能试验。经口给予小鼠不同剂量的本产品1个月，结果显示，本产品具有升高氢化可的松模型小鼠外周血白细胞数，增加模型小鼠胸腺、脾脏指数，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进模型小鼠细胞免疫功能。因此认为本产品具有增强免疫力的功能。1材料和方法1.1材料1.1.1样品：采用本发明制备的紫皮石斛酒剂；现有方法制备的紫皮石斛普通酒剂。酒剂浓缩20倍，乙醇度调至原来的度数。1.1.2实验动物：清洁级icr小鼠180只，雌性，体重18-22g。由浙江省医学科学院实验动物中心提供，动物合格证号：scxk(浙)2016-0010。1.1.3主要试剂：氢化可的松(天津生物化学制药有限公司)；pbs缓冲液(ph：7.2-7.4)；1.5％冰醋酸溶液；0.1％na2co3溶液；印度墨汁(上海长江日用粘合材料厂)；绵羊血红细胞(srbc，玉环县南方试剂厂)。1.1.4主要仪器：分析天平(上海精密仪器仪表有限公司)；uv-3000分光光度计(日本岛津)；游标卡尺(精密度0.02mm)；手术器械；计数器；显微镜；冰箱。1.2方法1.2.1对氢化可的松模型小鼠白细胞数和胸腺、脾脏指数的影响取健康小鼠60只，雌性，按体重随机分为6组，见表1。正常组，模型对照组小鼠每天灌胃给予37°白酒0.01ml·g-1，给药组按表1剂量分别灌胃给予紫皮石斛酒剂，即给药剂量(按浓缩前算)分别为5ml·kg-1体重、15ml·kg-1体重与50ml·kg-1体重，分别为低剂量给药组、中剂量给药组和高剂量给药组，每天1次，连续30天。除正常组外，其它各组于实验第18天开始皮下注射氢化可的松(40mg·kg-1)5次，隔天注射1次。末次给药1.5h后，小鼠眼眶采血，测定白细胞数，并用颈椎脱臼法处死动物，剖取胸腺、脾脏并称重量，计算脏器指数，再用t检验进行统计处理。1.2.2对氢化可的松模型小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响小鼠分组、给药及造模同实验1.2.1。末次给药1h后，各组小鼠尾静脉注射印度墨汁(用生理盐水稀释4倍)0.01ml·g-1，于注射后2min、10min时分别眼眶取血20ul，溶于2ml0.1％(wt)碳酸钠水溶液中，摇匀，于600nm波长处比色，测定吸收度值，计算吞噬指数a。吞噬指数a＝(loga1-loga2)÷(t1-t2)。1.2.3对绵羊红细胞(srbc)诱导小鼠足跖肿胀度的影响小鼠分组及给药同实验1.2.1。每天1次，连续30天。30天后，除正常组外，腹腔注射2％(wt)srbc，每只小鼠注射0.2ml(约1×108个srbc)。免疫4天后，测量左后足跖部厚度或肿胀度，然后在测量部位皮下注射20％(vv)srbc，每只鼠20ul(约1×108个srbc)，注射后24h测定左后足跖部厚度或肿胀度，同一部位测定三次，取平均值。2结果2.1对小鼠白细胞数及胸腺、脾脏指数的影响结果如表2所示，模型对照组小鼠的白细胞数、胸腺脾脏指数与正常对照组相比较，有显著的统计学差异(p0.01)，造模成功。与模型对照组相比较，紫皮石斛酒各剂量组均能有效抵制氢化可的松所引起的外周血白细胞数的急剧下降，减轻氢化可的松应用的副作用，并能有效抑制氢化可的松引起的免疫器官分泌淋巴细胞的减少；紫皮石斛酒中的高剂量组能够较明显地提升外周血白细胞的效应，促进免疫器官的增殖(p0.05，p0.01)。为平均值±标准差。表2紫皮石斛酒对模型小鼠白细胞数和胸腺、脾脏指数的影响(n＝10)2.2对氢化可的松模型小鼠碳廓清指数的影响结果如表3所示，各给药组小鼠的巨噬细胞的吞噬指数a与正常对照组相比，均无统计学差异(p＞0.05)。与模型对照组相比，紫皮石斛酒中的高剂量组均能有效抑制氢化可的松加入后引起的小鼠碳粒廓清速度减慢，明显提高吞噬速率a，增加小鼠碳粒廓清能力，且增强作用相近(p0.05)。表3紫皮石斛酒对氢化可的松模型小鼠碳粒廓清速度的影响(n＝10,)组别剂量ml·kg-1吞噬指数a正常组-4.478±0.43模型对照组-3.528±0.93##低剂量给药组54.089±0.68中剂量给药组154.424±0.84高剂量给药组504.549±0.77注：与正常组比较，##：p0.01；与模型组比较，：p0.05。2.3对绵羊红细胞(srbc)诱导小鼠足跖肿胀度的影响结果如表4所示，模型对照组的足跖肿胀度与正常对照组相比，有显著的统计学差异(p0.01)。与模型对照组相比，紫皮石斛酒中、高剂量组均能显著减少绵羊红细胞致敏引起的足跖肿胀程度，有效促进细胞免疫(p0.05，p0.01)。表4紫皮石斛酒对绵羊红细胞诱导小鼠足跖肿胀度的影响(n＝10)组别剂量ml·kg-1肿胀度％正常组-18.75±3.88模型对照组-30.90±4.56##低剂量给药组529.65±6.56中剂量给药组1524.58±6.62高剂量给药组5023.19±5.42注：与正常组比较，##：p0.01；与模型组比较，：p0.05，：p0.01。3、结论本研究提示紫皮石斛酒剂具有升高氢化可的松模型小鼠外周血白细胞数，增加模型小鼠胸腺、脾脏指数，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进模型小鼠细胞免疫功能，表明该制剂具有免疫增强作用，并且其效果要明显优于对比例1组。具体实施方式实施例1一种石斛酒的制备方法，将紫皮石斛原粉与基酒a混合后，经过回流提取、浓缩、纯化、配制、澄清、提香、稳定性处理步骤之后制得所述石斛酒；所述基酒a为26-68％vol白酒；使用80-95％vol食用乙醇进行所述纯化；使用55％vol米香型白酒作为基酒b进行所述提香的用酒；具体包括以下步骤：1)回流提取：将紫皮石斛干片15-25kg粉碎过8-40目筛，加入到含有基酒a的多功能浸提罐中浸泡0.5-1h，在常压60-82℃温度下回流提取2.5-3.5h，过滤得石斛醇提液；将过滤后的石斛粉滤渣加入纯化水于常压90-100℃下回流提取2-3次，每次2.5-3.5小时，过滤，得水提石斛液；2)浓缩：将水提石斛滤液抽入双效降膜浓缩器中，在55-75℃温度条件下减压浓缩至每1l浓缩液相当于石斛0.08-0.12kg，得浓缩液；3)纯化：将80-95％vol食用乙醇加入浓缩液中，静置后进行固液分离，去除浓缩液中的食用乙醇，制得纯化水提浓缩液；4)配制：将纯化水提浓缩液并入石斛醇提液中，混合均匀，制得混合液，将混合液转移至陶坛存放1年以上；5)澄清：将存放1年以上的混合液抽取上清液至冷冻罐进行冷冻澄清处理，过滤，制得石斛酒滤液；6)提香：向石斛酒滤液中加入提香液进行提香，使其有淡淡的石斛焦香和兰香；7)稳定性处理：提香过的石斛酒滤液通过硅藻土过滤机和微滤膜进行稳定性处理，过滤，即得所述石斛酒。所述石斛酒能够增强人体免疫功能；所述步骤1)中的基酒a是55％vol的米香型白酒700-800l，具体要求为特级陈酿1.5年以上，优级陈酿2年以上；所述步骤2)浓缩液中，检测石斛多糖5.8-6.2g/l；所述步骤6)中的石斛提香酒液的提香工艺处理为10-30kg优级紫皮石斛鲜条清洗切片后经经茶叶烘焙提香机于50-80℃烘干提香投入基酒b浸泡12-48小时，过滤后得到的提香液。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，石斛酒中石斛多糖含量为155-165mg/l。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，所述的石斛酒具有增强人体免疫力的功效。实施例2一种石斛酒的制备方法，将紫皮石斛原粉与基酒a混合后，经过回流提取、浓缩、纯化、配制、澄清、提香、稳定性处理步骤之后制得所述石斛酒；所述基酒a为26％vol白酒；使用80％vol食用乙醇进行所述纯化；使用55％vol米香型白酒作为基酒b进行所述提香的用酒；具体包括以下步骤：1)回流提取：将紫皮石斛干片15kg粉碎过8目筛，加入到含有基酒a的多功能浸提罐中浸泡0.5h，在常压60℃温度下回流提取2.5h，过滤得石斛醇提液；将过滤后的石斛粉滤渣加入纯化水于常压90℃下回流提取2次，每次2.5小时，过滤，得水提石斛液；2)浓缩：将水提石斛滤液抽入双效降膜浓缩器中，在55℃温度条件下减压浓缩至每1l浓缩液相当于石斛0.08kg，得浓缩液；3)纯化：将80％vol食用乙醇加入浓缩液中，静置后进行固液分离，去除浓缩液中的食用乙醇，制得纯化水提浓缩液；4)配制：将纯化水提浓缩液并入石斛醇提液中，混合均匀，制得混合液，将混合液转移至陶坛存放1年以上；5)澄清：将存放1年以上的混合液抽取上清液至冷冻罐进行冷冻澄清处理，过滤，制得石斛酒滤液；6)提香：向石斛酒滤液中加入提香液进行提香，使其有淡淡的石斛焦香和兰香；7)稳定性处理：提香过的石斛酒滤液通过硅藻土过滤机和微滤膜进行稳定性处理，过滤，即得所述石斛酒。所述石斛酒能够增强人体免疫功能；所述步骤1)中的基酒a是55％vol的米香型白酒700l，具体要求为特级陈酿1.5年以上，优级陈酿2年以上；所述步骤2)浓缩液中，检测石斛多糖5.8g/l；所述步骤6)中的石斛提香酒液的提香工艺处理为10kg优级紫皮石斛鲜条清洗切片后经茶叶烘焙提香机于50-80℃烘干提香投入基酒b浸泡12小时，过滤后得到的提香液。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，石斛酒中石斛多糖含量为155mg/l。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，所述的石斛酒具有增强人体免疫力的功效。实施例3一种石斛酒的制备方法，将紫皮石斛原粉与基酒a混合后，经过回流提取、浓缩、纯化、配制、澄清、提香、稳定性处理步骤之后制得所述石斛酒；所述基酒a为68％vol白酒；使用95％vol食用乙醇进行所述纯化；使用55％vol米香型白酒作为基酒b进行所述提香的用酒；具体包括以下步骤：1)回流提取：将紫皮石斛干片25kg粉碎过40目筛，加入到含有基酒a的多功能浸提罐中浸泡1h，在常压82℃温度下回流提取3.5h，过滤得石斛醇提液；将过滤后的石斛粉滤渣加入纯化水于常压100℃下回流提取3次，每次3.5小时，过滤，得水提石斛液；2)浓缩：将水提石斛滤液抽入双效降膜浓缩器中，在75℃温度条件下减压浓缩至每1l浓缩液相当于石斛0.12kg，得浓缩液；3)纯化：将95％vol食用乙醇加入浓缩液中，静置后进行固液分离，去除浓缩液中的食用乙醇，制得纯化水提浓缩液；4)配制：将纯化水提浓缩液并入石斛醇提液中，混合均匀，制得混合液，将混合液转移至陶坛存放1年以上；5)澄清：将存放1年以上的混合液抽取上清液至冷冻罐进行冷冻澄清处理，过滤，制得石斛酒滤液；6)提香：向石斛酒滤液中加入提香液进行提香，使其有淡淡的石斛焦香和兰香；7)稳定性处理：提香过的石斛酒滤液通过硅藻土过滤机和微滤膜进行稳定性处理，过滤，即得所述石斛酒。所述石斛酒能够增强人体免疫功能；所述步骤1)中的基酒a是55％vol的米香型白酒800l，具体要求为特级陈酿1.5年以上，优级陈酿2年以上；所述步骤2)浓缩液中，检测石斛多糖6.2g/l；所述步骤6)中的石斛提香酒液的提香工艺处理为30kg优级紫皮石斛鲜条清洗切片后经茶叶烘焙提香机于50-80℃烘干提香投入基酒b浸泡48小时，过滤后得到的提香液。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，石斛酒中石斛多糖含量为165mg/l。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，所述的石斛酒具有增强人体免疫力的功效。实施例4一种石斛酒的制备方法，将紫皮石斛原粉与基酒a混合后，经过回流提取、浓缩、纯化、配制、澄清、提香、稳定性处理步骤之后制得所述石斛酒；所述基酒a为47％vol白酒；使用87.5％vol食用乙醇进行所述纯化；使用55％vol米香型白酒作为基酒b进行所述提香的用酒；具体包括以下步骤：1)回流提取：将紫皮石斛干片20kg粉碎过24目筛，加入到含有基酒a的多功能浸提罐中浸泡0.7h，在71℃温度下回流提取3h，过滤得石斛醇提液；将过滤后的石斛粉滤渣加入纯化水于95℃下回流提取2次，每次3小时，过滤，得水提石斛液；2)浓缩：将水提石斛滤液抽入双效降膜浓缩器中，在65℃温度条件下减压浓缩至每1l浓缩液相当于石斛0.1kg，得浓缩液；3)纯化：将87.5％vol食用乙醇加入浓缩液中，静置后进行固液分离，去除浓缩液中的食用乙醇，制得纯化水提浓缩液；4)配制：将纯化水提浓缩液并入石斛醇提液中，混合均匀，制得混合液，将混合液转移至陶坛存放1年以上；5)澄清：将存放1年以上的混合液抽取上清液至冷冻罐进行冷冻澄清处理，过滤，制得石斛酒滤液；6)提香：向石斛酒滤液中加入提香液进行提香，使其有淡淡的石斛焦香和兰香；7)稳定性处理：提香过的石斛酒滤液通过硅藻土过滤机和微滤膜进行稳定性处理，过滤，即得所述石斛酒。所述石斛酒能够增强人体免疫功能；所述步骤1)中的基酒a是55％vol的米香型白酒750l，具体要求为特级陈酿1.5年以上，优级陈酿2年以上；所述步骤2)浓缩液中，检测石斛多糖6.0g/l；所述步骤6)中的石斛提香酒液的提香工艺处理为20kg优级紫皮石斛鲜条清洗切片后经茶叶烘焙提香机于50-80℃烘干提香投入基酒b浸泡30小时，过滤后得到的提香液。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，石斛酒中石斛多糖含量为160mg/l。一种石斛酒，采用上述所述的石斛酒的制备方法制得，所述的石斛酒具有增强人体免疫力的功效。当前第1页12