一种2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺类似物及其制备方法和用途与流程

本发明提供了涉及药物领域，具体涉及一种2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺类似物及其制备方法和用途。

背景技术：

多组分组份反应因为其高收敛性、高原子经济性、高选择性等特性，而被广泛应用到医药小分子化合物的制备中。在绿色化学的大背景下，多组分组份合成不仅提高了整个药化、生化研究效率，更是因为反应步骤的减少，反应试剂消耗的降低而减小了化学合成的环保压力((1).c.hulme,m.ayaz,g.martinez-ariza,f.meddaanda.shaw,insmallmoleculemedicinalchemistry,johnwiley&sons,inc,2015,pp.145-187.(2).d.andj.swatschek,inmulticomponentreactions,johnwiley&sons,inc,2015,pp.416-495.(3).m.a.mironov,qsar&comb.sci.2006,25,423-431.(4).t.newhouse,p.s.baranandr.w.hoffmann,chem.soc.rev.2009,38,3010-3021.(5).l.f.tietzeandf.haunert,instimulatingconceptsinchemistry,wiley-vchverlaggmbh&co.kgaa,2005,pp.39-64.(6).b.trost,sci.1991,254,1471-1477.(7).y.huang,a.yazbakanda.ingreentechniquesfororganicsynthesisandmedicinalchemistry,johnwiley&sons,ltd,2012,pp.497-522.)。而本发明所涉及的制备方法是一种高效的五组分组份顺次反应，所有的化学原料均先后投入到反应中，生成的中间体无需分离提纯，最终得到一个产物，产率高达95％。反应结束后无需柱层析分离，直接减压过滤，即可得到高纯度产物。因此该制备方法的可操作性强，易于工业化大量生产。

3,4-二氢吡喃结构广泛存在于生物活性小分子中，针对含有3，4-二氢吡喃核的化合物的合成一直备受关注。但2-胺基-3，4-二氢吡喃类结构的合成鲜有报导，目前为止，只有两篇文献涉及了其衍生物的制备方法，先后在2011年和2012年发表((8).j.sun,e.-y.xia,q.wuandc.-g.yan,acscomb.sci.2011,13,421-426.(9).b.devibala,s.michaelrajeshands.perumal,greenchem.2012,14,2484-2490.)。文献所提供的方法虽然也是多组分合成，但得到的产物均是2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酯，无法一锅法反应完成2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺类化合物的制备。2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺的合成至今无人报导。因此，对于2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺类化合物的制备，如果用文献所报导的方法，具有以下几个缺点：1)文献方法提供的是2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酯类衍生物的制备，需要后续酰胺化反应步骤以制备2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺化合物，进而增加了制备难度和成本；2)文献所述的方法涉及到了微波反应器的应用，提高了反应成本，限制了制备方法的工业应用；3)文献所述方法用到了炔类化合物作为反应原料，炔类化合物毒性大且各种取代的炔类化合物类别有限，不易获得，一定程度上限制了产物类似物的拓展；4)文献方法反应时间长，而本发明所提供的方法，中间体的生成2小时，而后续反应时间可缩短至5分钟，耗时短；5)文献报导的方法，其产物的提纯有涉及到了柱层析分离，不利于工业化大量生产；6)更重要的是，文献所报导的2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酯类化合物均无明确的应用价值。而本发明所制备的2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺化合物具有潜在的抗炎活性。

众所周知，适度的炎症反应对机体具有保护作用，但长期或过度的炎症反应会对机体造成损伤，导致疾病发生。一些经典的炎性相关疾病，如(类)风湿性关节炎、动脉粥样硬化、哮喘、炎性肠道疾病、胃炎、肾炎、全身性炎症反应综合征等，其发生和致病过程，均与核转录因子κb(nf-κb)的过度或者持续激活相关。一些外源性因素或者内源性物质通过识别包括toll样受体(toll-likereceptors,tlr)在内的跨膜性蛋白，进入细胞内，经一系列的信号传递，从而激活nf-κb。

toll样受体(tlr)通过识别病原相关分子模式(pamp)或有害的内源性物质诱发天然免疫反应，抵抗病原体感染或组织损伤。tlr家族的tlr2和tlr4在天然免疫和炎症反应中起到重要作用。其中tlr2为家族中识别最多pamps分子的成员，得到广泛关注。tlr2通过识别pamps，致使下游一系列目的基因活化，进而指导目的基因转录和炎性介质的释放。本发明通过定量检测报告基因分泌型胎盘碱性磷酸酶seap(secretedalkalinephosphatase)信号的表达量，来检测tlr2的活化程度，从而反应机体炎症情况。

nf-κb作为各种炎症反应的共同通路，几乎存在于所有细胞中。nf-κb参与了多种细胞因子基因的转录，是细胞核内炎性递质基因转录的开关，在免疫应答、应激反应及细胞凋亡中起着主导作用。通过抑制nf-κb的激活，可对细胞因子的释放进行宏观调控，从而减轻炎症反应造成的脏器损伤。因此，nf-κb成为最具潜力的抗炎药物靶点。((10).a.samuelmawuli,y.michaelbright,a.seth,d.samuel.curr.drugdiscovtechnol,2018,15,1-11.(11).v.pande,,&m.ramos,j.currmedchem,2005,12(3),357-374.(12).h.li,w.han,v.polosukhin,f.e.yull,b.h.segal,c.-mxie,t.s.blackwell.mediatinflamm,2013,503,213.(13).d.vyas,s.samsophear,p.castro,l.chaturvedi,l.azevedo,j.tepe,a.vyas.j.surg.res.,2013,179(2),201.)过度激活的nf-κb形成复合物，从细胞浆内易位进入细胞核诱导趋化因子、粘附分子、免疫识别受体和细胞因子tnf-α,il-6等的转录与表达，最终造成炎症反应。因此通过检测细胞因子的表达量，可以一定程度上检测nf-κb的激活程度，从而判断机体炎症程度。

因此本发明的目的是制备2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺类化合物，并提供一种简便高效的合成方法。此外，本发明提供2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺化合物在抗炎活性上的数据，以证明本发明所制备的新型化合物的应用价值，更进一步证明本发明所提供的合成方法的价值。

技术实现要素：

本发明一个方面提供了一种制备含有2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺结构化合物的制备方法，其包括如下步骤：

1)将双乙烯酮与r2nh2在溶剂中搅拌反应至完全，得到

2)加入r3nh2，r1cho和式a化合物，并加入单质碘反应至反应液完全固化，过滤后将滤饼洗涤干燥得到含有2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺结构化合物；

其中式a化合物如下所示，

所得的含有2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺结构化合物如式i所示，

x选自c或o；

r1选自氢，c1-c6的烷基，苯基，杂芳基，环烷基，氰基，甲氧基；苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、萘基、羟基、卤素取代的c1-c6的烷基；c1-c3烷基、苯基、环烷基、氰基、c1-c3烷氧基、卤素、硝基、羟基取代的苯基或萘基；烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的杂芳基；或烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的环烷基；c1-c3取代的芳基、c1-c3取代的杂芳基或c1-c3取代的环烷基；

r2选自氢，c1-c6的烷基，苯基，苄基，杂芳基，环烷基，氰基，甲氧基；苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的c1-c6的烷基；c1-c6烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素、羟基取代的苯基或苄基；烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的杂芳基；或烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的环烷基；c1-c3取代的芳基、c1-c3取代的杂芳基或c1-c3取代的环烷基；

r3选自氢，c1-c6的烷基，苯基，苄基，杂芳基，环烷基，氰基，甲氧基；苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的c1-c6的烷基；c1-c6烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素、羟基取代的芳基或苄基；烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的杂芳基；或烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的环烷基；c1-c3取代的芳基、c1-c3取代的杂芳基或c1-c3取代的环烷基；

r4选自氢，c1-c6的烷基或与r7形成烯键；

r5选自氢，c1-c6的烷基或者和r6形成苯环；

r6选自氢，c1-c6的烷基或者和r5形成苯环；

r7选自氢，c1-c6的烷基或与r4形成烯键。

优选地，本发明中间体在制备过程中不需要分离。

在本发明的技术方案中，制备方法中所用的溶剂选自二氯甲烷，无水乙醇，乙腈。

在本发明的技术方案中，催化剂碘的用量为原料r3nh2用量的5％-30mol％，优选为8-12％。

本发明反应流程如下：

在本发明的技术方案中，所述的式i化合物选自式ii，式iii或式iv所示化合物，

本发明另一个方面提供了一种含有2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺结构化合物，其具有如式i所示结构，

x选自c或o；

r1选自氢，c1-c6的烷基，苯基，杂芳基，环烷基，氰基，甲氧基；苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、萘基、羟基、卤素取代的c1-c6的烷基；c1-c3烷基、苯基、环烷基、氰基、c1-c3烷氧基、卤素、硝基、羟基取代的苯基或萘基；烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的杂芳基；或烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的环烷基；c1-c3取代的芳基、c1-c3取代的杂芳基或c1-c3取代的环烷基；

r2选自氢，c1-c6的烷基，苯基，苄基，杂芳基，环烷基，氰基，甲氧基；苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的c1-c6的烷基；c1-c6烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素、羟基取代的苯基或苄基；烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的杂芳基；或烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的环烷基；c1-c3取代的芳基、c1-c3取代的杂芳基或c1-c3取代的环烷基；

r3选自氢，c1-c6的烷基，苯基，苄基，杂芳基，环烷基，氰基，甲氧基；苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的c1-c6的烷基；c1-c6烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素、羟基取代的芳基或苄基；烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的杂芳基；或烷基、苯基、杂芳基、环烷基、氰基、甲氧基、卤素取代的环烷基；c1-c3取代的芳基、c1-c3取代的杂芳基或c1-c3取代的环烷基；

r4选自氢，c1-c6的烷基或与r7形成烯键；

r5选自氢，c1-c6的烷基或者和r6形成苯环；

r6选自氢，c1-c6的烷基或者和r5形成苯环；

r7选自氢，c1-c6的烷基或与r4形成烯键。

在本发明的技术方案中，所述的式i化合物选自式ii，式iii或式iv所示化合物，

本发明还涉及一些具体的化合物，化合物的结构如下所示：

本发明另一个方面提供了前述式i化合物的单晶；式i化合物为所述单晶的空间群为p2/n，晶胞参数值为α＝90°，

β＝96.495(4)°，γ＝90°。

本发明另一各方面提供了前述单晶的制备方法，包括以下步骤：

1)将化合物用乙醇重结晶，过滤后得到的纯品，取纯品化合物，加入四氢呋喃，溶解后过滤，滤液收集；

2)取滤液置于透明样品瓶中，薄膜封口，薄膜上戳小洞静置3-5天后，带有点状颗粒出现，立刻封口，静置1-2周，有块状晶体长成。

本发明另一个方面提供了前述化合物在制备抗炎药物的用途。

附图说明

图1为化合物6aaca二维核磁谱图-¹hnmr图谱。

图2为化合物6aaca一维核磁谱图-¹³cnmr图谱。

图3为化合物6aaca二维核磁谱图-hsqc图谱。

图4为化合物6aaca一维核磁谱图-¹³cdept135图谱。

图5为化合物6aaca二维核磁谱图-cosy图谱。

图6为化合物6aaca二维核磁谱图-hmbc图谱。

图7为代表产物6aaca的xrd单晶结构。

图8为化合物z20(6gcaa)在细胞水平上的抗炎活性评价。

具体实施方式

实施例1制备(2s,3r,4s)-2-(4-甲基苯胺)-n-苄基-4-(4-氯苯基)-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-5-氧-二氢色烯-3-甲酰胺6aaaa:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮iv(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，5分钟后，有大量固体生成并迅速固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率95％)；熔点166-168℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ8.62-8.65(m,nh,1h),7.28-7.30(d,aromatic,2h),7.17-7.19(m,aromatic,3h),7.05-7.08(d,aromatic,2h),6.95-6.98(d,aromatic,2h),6.73-6.76(m,aromatic,4h),5.75(s,nh,1h),4.41-4.48(m,ch,1h),3.92-3.99(m,ch2,2h),2.80-2.84(d,ch,1h),2.29-2.48(m,ch2,2h),2.17(d,ch3,3h),1.95-2.13(m,ch2,2h),1.50(s,ch3,3h),1.06(s,ch3,3h),0.93(s,ch3,3h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ170.8,167.2,160.1,142.7,142.3,138.8,130.9,130.0,129.8,128.6,127.5,127.3,122.1,117.9,114.9,113.7,88.5,57.0,50.8,42.4,42.0,38.2,31.9,29.3,27.4,23.0,20.6；ms(esi⁺)m/z543(m+h)；anal.calcdforc33h35cln2o3:c,72.98；h,6.50；n,5.16.found:c,72.91；h,6.59；n,5.02.

实施例2制备(2s,3r,4s)-2-(4-氯苯胺)-n-苄基-4-(4-氯苯基)-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-5-氧-二氢色烯-3-甲酰胺6aaca:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对氯苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，10分钟后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率71％)；熔点168-171℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ8.63-8.65(m,nh,1h),7.27-7.31(m,aromatic,2h),7.21(m,aromatic,5h),7.07-7.08(d,aromatic,2h),6.88-6.90(d,aromatic,2h),6.78-6.79(d,aromatic,2h),6.06(s,nh,1h),4.43-4.47(m,ch2,1h),3.96-4.02(m,ch+ch2,2h),2.84-2.86(d,ch,1h),2.30-2.48(m,ch2,2h),1.99-2.12(m,ch2,2h),1.56(s,ch3,3h),1.07(s,ch3,3h),0.92(s,ch3,3h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ195.5,170.6,166.9,143.7,142.4,138.7,130.9,129.8,129.2,18.5,128.4,127.3,127.1,123.2,118.8,113.7,88.0,56.9,50.7,42.5,41.8,39.5,38.1,32.0,29.0,27.5,26.8,22.8；ms(esi⁺)m/z563(m+h)；anal.calcdforc32h32cl2n2o3:c,68.20；h,5.72；n,4.97.found:c,68.24；h,5.76；n,4.90.

实施例3.(2s,3r,4s)-2-(对甲苯胺)-n-苄基-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-4-(4-硝基苯基)-5-氧-二氢-色烯-3-甲酰胺6aaae:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对硝基苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，10分钟后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率81％)；熔点180-182℃；¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.63-8.65(m,nh,1h),8.01-8.11(m,aromatic,2h),7.30-7.31(m,aromatic,2h),6.99-7.14(m,aromatic,5h),6.77(m,aromatic,5h),5.77(s,nh,1h),4.37-4.42(m,ch2,1h),3.92-4.13(m,ch+ch2,2h),2.81-2.87(m,ch,1h),2.19(d,ch3,3h),1.98-2.13(m,2ch2,4h),1.53(s,ch3,3h),1.08(s,ch3,3h),0.96(s,ch3,3h)；¹³cnmr(75mhz,dmso-d6)δ195.1,169.8,151.7,145.7,141.4,138.3,129.4,129.1,128.2,128.1,127.9,127.0,126.8,123.2,117.6,72.3,68.8,56.0,50.1,42.5,41.9,41.6,41.4,41.3,38.3,31.4,28.6,27.0,22.5,20.1；ms(esi⁺)m/z554(m+h)；anal.calcdforc33h35n3o5:c,71.59；h,6.37；n,7.59.found:c,71.63；h,6.31；n,7.48.

实例4.(2s,3r,4s)-2-(对甲苯胺)-n-苄基-4-(4-氰基苯基)-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-5-氧-二氢-色烯-3-甲酰胺6aaaf:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氰基苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，15分钟后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率81％)；熔点160-162℃；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.48(d,j＝8.2,aromatic,2h),7.30(d,j＝2.0,aromatic,3h),7.25(d,j＝8.1,aromatic,2h),7.04(d,j＝8.1,aromatic,2h),6.88(t,j＝7.4,aromatic,4h),5.74(s,nh,1h),5.50(s,nh,1h),4.45(dd,j＝14.6,6.7,ch2,1h),4.22(d,j＝11.4,ch,1h),4.11(dd,j＝14.6,4.6,ch2,1h),2.48–2.38(m,ch3,3h),2.29(s,ch3,3h),2.14(dd,j＝34.9,16.6,ch2,2h),1.64(s,ch3,3h),1.15(s,ch3,3h),1.05(s,ch3,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ196.09,170.28,168.10,149.14,141.49,137.01,132.23,129.62,129.34,128.61,128.07,127.74,127.55,118.92,117.82,113.00,109.85,88.56,58.52,50.41,43.45,42.32,39.35,31.56,29.52,27.16,22.76,20.48.hrms:calcdforc34h35n3o3533.2678,found534.2742[m+h].

实例5.(2s,3r,4s)-2-(对甲苯胺)-n-苄基-3,4,5,6,7,8-六氢-4-(2，4-二氯苯基)-2,7,7-三甲基-5-氧-二氢-色烯-3-甲酰胺6aaah:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和2，4-二氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，24小时后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率47％)；熔点160.3-161.9℃；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.33(d,j＝2.1,aromatic,1h),7.25(s,aromatic,1h),7.24(d,j＝3.6,aromatic,1h),7.04(d,j＝8.1,aromatic,4h),6.94(d,j＝8.4,aromatic,1h),6.88(d,j＝8.1,aromatic,4h),6.09–5.88(m,2nh,2h),4.75(d,j＝11.5,ch,1h),4.52–4.45(m,ch2,1h),4.05(dd,j＝14.8,4.4,ch2,1h),2.54(d,j＝11.5,ch,1h),2.28(d,j＝12.5,ch3+ch2,5h),1.96(d,j＝21.0,ch2,2h),1.62(s,ch3,3h),1.08(s,ch3,3h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ＝196.50,195.94,170.79,170.08,167.67,167.36,141.78,141.72,139.87,137.06,136.95,136.09,135.17,132.97,132.17,131.49,130.20,129.54,129.42,129.22,129.03,128.60,127.59,127.54,127.46,127.35,127.27,127.22,118.06,117.70,114.15,112.29,88.99,88.19,77.31,77.00,76.68,57.98,52.53,50.47,50.31,43.62,43.35,42.41,42.28,39.91,34.39,31.53,31.40,29.58,29.26,27.84,27.01,22.99,22.43,20.49；lc-ms/ms(esi⁺)m/z599.243(m+na).

实施例6.(2s,3r,4s)-2-(对甲苯胺)-n-苄基-3,4,5,6,7,8-六氢-4-(4-羟基苯基)-2,7,7-三甲基-5-氧-二氢-色烯-3-甲酰胺6aaai:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对羟基苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，50分钟后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率72％)；熔点162-164℃；¹hnmr(400mhz,dmso)δ9.15(s,oh,1h),8.69–8.51(m,nh,1h),7.20(d,j＝6.9,aromatic,3h),6.98(d,j＝8.0,aromatic,2h),6.88(d,j＝8.1,aromatic,2h),6.80(d,j＝6.6,aromatic,2h),6.74(d,j＝8.0,aromatic,2h),6.65(d,j＝8.2,aromatic,2h),5.74(s,nh,1h),4.44(dd,j＝15.4,7.0,ch2,1h),4.04–3.95(m,ch,1h),3.89(d,j＝11.0,ch2,1h),2.84(d,j＝11.2,ch,1h),2.48–2.25(m,ch2,2h),2.19(s,ch3,3h),2.05(dd,j＝35.8,9.8,ch2,2h),1.51(s,ch3,3h),1.08(s,ch3,3h),0.95(s,ch3,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ195.38,171.19,166.12,155.94,155.43,142.32,138.75,133.44,129.85,128.80,128.47,128.23,127.29,127.07,117.62,115.25,114.58,88.35,57.52,50.79,42.27,41.89,37.78,31.70,29.26,27.20,22.95,20.53.anal.calcdforc33h36n2o4:c,75.55；h,6.92；n,5.34.found:c,75.59；h,6.84；n,5.41.

实施例7.(2s,3r,4s)-2-(对甲苯胺)-n-苄基-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-4-(2-萘基)-5-氧-二氢-色烯-3-甲酰胺6aaaj:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和乙萘醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，5分钟后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率68％)；熔点157-159℃；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.82–7.71(m,aromatic,4h),7.46(dd,j＝5.9,3.3,aromatic,2h),7.27-7.31(m,aromatic,1h),7.05(d,j＝7.0,aromatic,3h),6.95–6.81(m,aromatic,4h),6.51(d,j＝7.6,aromatic,2h),5.91(s,nh,1h),5.41(s,nh,1h),4.34(dd,j＝14.5,7.8,ch2+ch,2h),4.09–3.98(m,ch2,1h),2.63(d,j＝11.4,ch,1h),2.50(d,j＝19.2,ch2,2h),2.30(s,ch3,3h),2.09(dd,j＝33.8,16.2,ch2,2h),1.19(s,ch3,3h),1.05(d,j＝8.6,ch3,3h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ195.93,170.67,166.86,142.88,141.37,136.66,132.17,128.90,128.80,128.68,128.50,127.74,127.49,124.44,118.39,113.73,87.91,59.26,50.56,43.62,42.21,38.71,31.60,29.37,27.22,22.59.hrms:calcdforc37h38n2o3558.2882,found559.2945[m+h].

实施例8.(2s,3r,4s)-n-(2-氟苯基)-2-(对甲苯胺)-4-(4-氯苯基)-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-5-氧-二氢-色烯-3-甲酰胺6daaa:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入2-氟苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料2-氟苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，120分钟后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率76％)；熔点166-168℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ8.65(m,nh,1h),7.24-7.29(m,aromatic,3h),6.98-7.12(m,aromatic,6h),6.74-6.76(d,aromatic,2h),6.60-6.63(m,aromatic,1h),5.72(s,nh,1h),4.36-4.40(m,ch2,1h),3.95-4.11(m,ch+ch2,2h),2.82-2.84(d,ch,1h),2.31-2.47(m,ch2,2h),2.19(s,ch3,3h),1.99-2.16(m,ch2,2h),1.51(s,ch3,3h),1.07(s,ch3,3h),0.95(s,ch3,3h)；¹³cnmr(126mhz,dmso)δ195.51,170.95,167.19,161.29,159.35,142.52,130.81,130.18,129.91,129.84,129.66,129.47,129.40,128.44,125.49,125.38,124.40,121.50,117.89,115.50,115.33,113.62,88.49,56.96,50.72,41.99,38.16,36.25,36.22,31.87,29.18,28.41,27.38,22.91,20.59；ms(esi⁺)m/z561(m+h)；anal.calcdforc33h34clfn2o3:c,70.64；h,6.11；n,4.99.found:c,70.72；h,6.10；n,4.95.

实施例.(2s,3r,4s)-2-(对甲苯胺)-4-(4-氯苯基)-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-5-氧-n-对甲苯基-二氢-色烯-3-甲酰胺6eaaa:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入对甲苯胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，8小时后，有大量固体生成，反应混合液逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体。白色固体(产率83％)；熔点185-187℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.95(m,nh,1h),7.26-7.47(m,aromatic,4h),6.98-7.19(m,aromatic,6h),6.78-6.79(d,aromatic,2h),5.73(s,oh,1h),4.05-4.07(m,ch,1h),2.91-2.93(d,ch,1h),2.28-2.36(m,ch2,2h),2.19(s,ch3,3h),2.15(s,ch3,3h),1.99-2.12(m,ch2,2h),1.58(s,ch3,3h),1.04(s,ch3,3h),0.96(s,ch3,3h)；¹³cnmr(126mhz,dmso)δ195.30,169.64,167.54,142.72,142.18,135.42,133.15,129.90,129.58,128.50,127.23,123.54,123.37,120.59,118.01,113.56,88.29,57.83,50.69,42.02,38.30,31.94,29.11,27.51,23.01,20.90,20.60.ms(esi⁺)m/z543(m+h)；anal.calcdforc33h35cln2o3:c,72.98；h,6.50；n,5.16.found:c,72.93；h,6.58；n,6.63.

实施例10制备(2s,3r,4s)-(对甲苯胺)-n-丁基-4-(4-氯苯基)-3,4,5,6,7,8-六氢-2,7,7-三甲基-5-氧-二氢色烯-3-甲酰胺6faaa:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入正丁胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料正丁胺反应完全，中间体生成后，加入双甲酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，20分钟后，有大量固体生成，逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体，白色固体用无水乙醇重结晶。白色固体(产率71％)；熔点146-148℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ8.05(m,nh,1h),7.27-7.29(d,aromatic,2h),6.97-7.04(m,aromatic,4h),6.74-6.75(d,aromatic,2h),5.83(s,nh,1h),3.91-3.93(d,ch,1h),3.07-3.08(d,ch,1h),2.68-2.83(m,ch2,2h),2.31-2.47(m,ch2,2h),2.19(s,ch3,3h),1.99-2.13(m,ch2,2h),1.49(s,ch3,3h),1.11-1.16(m,ch2,2h),1.08(s,ch3,3h),0.88-0.95(m,ch2+ch3,5h),0.73-0.76(m,ch3,3h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ195.5,170.6,167.3,142.7,142.4,30.7,130.4,19.9,129.5,128.3,117.8,113.6,88.5,57.0,50.7,42.0,38.6,38.2,31.9,31.2,29.2,27.4,22.9,20.6,19.6,14.0；ms(esi⁺)m/z509(m+h)；anal.calcdforc30h37cln2o3:c,70.78；h,7.33；n,5.50.found:c,70.71；h,7.39；n,5.57.

实施例11制备(2s,3r,4s)-2-(对甲苯胺)-n-苄基-3,4,5,6,7,8-六氢-4-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-5-氧-二氢色烯-3-甲酰胺6abad:

在25ml的圆底单口烧瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入1，3-环己二酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对甲氧基苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，3分钟后，有大量固体生成，逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体，白色固体用无水乙醇重结晶。白色固体(产率41％)；熔点161.9-163.1℃；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.27–7.20(m,aromatic,3h),7.11(d,j＝8.3,aromatic,2h),7.03(d,j＝8.0,aromatic,2h),6.88(d,j＝8.2,aromatic,4h),6.79(d,j＝8.3,aromatic,2h),5.84(s,nh,1h),5.44(d,j＝5.2,nh,1h),4.41(dd,j＝14.7,6.3,ch2,1h),4.20–4.10(m,ch+ch2,2h),3.78(d,j＝7.2,ch3,3h),2.64–2.40(m,ch3,3h),2.33–2.15(m,ch3+ch2,5h),1.97(dd,j＝12.4,9.1,ch2,2h),1.63(s,ch3,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ＝196.13,171.19,168.30,158.09,141.91,137.05,134.91,129.48,128.84,128.51,128.07,127.58,117.72,115.73,113.99,88.23,59.83,55.09,43.54,38.36,36.84,28.70,22.77,20.44,20.02；hrms:calcdforc32h34n2o4510.2519,found511.2578[m+h].

实施例12制备(2s,3r,4s)-4-(4-氯苯)-2-甲基-5-氧-n-(对甲苯基)-2-(对甲苯胺)-2,3,4,5-四氢吡喃[3,2-c]色烯-3-甲酰胺,6ecaa:

在5ml的反应瓶中，加入对甲苯胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料对甲苯胺反应完全，中间体生成后，加入4-羟基香豆素(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，15分钟后，有大量固体生成，逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体，白色固体用无水乙醇重结晶。白色固体(产率85％)；熔点172.9-176.8℃；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.01(d,j＝7.7hz,aromatic,1h),7.50(t,j＝7.7hz,aromatic,1h),7.36(t,j＝7.4hz,aromatic,1h),7.17(d,j＝7.9hz,aromatic,3h),7.10(d,j＝12.9hz,aromatic,6h),6.97(d,j＝7.4hz,aromatic,3h),6.86(d,j＝7.7hz,aromatic,2h),5.92(s,nh,1h),4.48(d,j＝11.4hz,ch,1h),2.82(d,j＝11.4hz,ch,1h),2.31(s,ch3,3h),2.21(s,ch3,3h),1.83(s,ch3,3h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ168.88,162.47,160.76,153.00,140.86,139.81,135.34,133.59,132.77,131.81,129.96,129.56,129.47,128.96,128.49,128.46,124.04,122.64,121.07,118.68,116.73,115.68,104.45,90.07,59.43,53.52,39.75,22.76,20.84,20.43；hrms:calcdforc34h29cln2o4564.1816,found565.1876[m+h].

实施例13制备(2s,3r,4s)-4-(4-氯苯)-2-甲基-5-氧-n-(苯基)-2-(对甲苯胺)-2,3,4,5-四氢吡喃[3,2-c]色烯-3-甲酰胺,6gcaa:

在5ml的反应瓶中，加入苯胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料对甲苯胺反应完全，中间体生成后，加入4-羟基香豆素(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛ix(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，1分钟后，有大量固体生成，逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体，白色固体用无水乙醇重结晶。白色固体(产率91％)；熔点191.8-193.6℃；¹hnmr(400mhz,dmso)δ10.19(s,nh,1h),8.08(d,j＝7.7,aromatic,1h),7.67(t,j＝7.5,aromatic,1h),7.48(d,j＝7.6,aromatic,1h),7.42(t,j＝8.9,aromatic,3h),7.31(d,j＝8.3,aromatic,4h),7.24(d,j＝8.1,aromatic,2h),7.10(t,j＝7.2,aromatic,1h),7.02–6.81(m,aromatic,4h),6.02(s,nh,1h),4.50(d,j＝11.4,ch,1h),3.24(d,j＝11.4,ch,1h),2.14(s,ch3,3h),1.83(s,ch3,3h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ168.88,160.18,158.08,152.79,141.16,140.83,138.04,132.64,131.47,129.79,129.69,129.25,129.00,128.70,124.85,123.20,120.47,118.44,116.81,115.64,104.65,90.28,57.57,38.93,22.89,20.48；hrms:calcdforc33h27cln2o4550.1659,found549.1587[m-h].

实施例14制备(2s,3r,4s)-n-苯基-4-(4-氯苯基)-2,7-二甲基-5-氧-2-(对甲苯胺)-2,3,4,5-四氢吡喃[4,3-b]吡喃-3-甲酰胺,6adaa:

在5ml的反应瓶中，加入苄胺(2.0mmol)，低温下搅拌，缓慢滴入化合物双乙烯酮(2.0mmol)，搅拌中回温到室温，继续搅拌2小时，tlc检测跟踪，待原料苄胺反应完全，中间体生成后，加入4-羟基-6-甲基吡喃酮(2.0mmol)，对甲基苯胺(2.0mmol)和对氯苯甲醛(2.0mmol)，以及单质碘(0.2mmol)，室温下持续搅拌，30分钟后，有大量固体生成，逐渐固化，终止反应，加入2ml的乙腈，减压抽滤，滤饼依次用饱和硫代硫酸纳溶液和水洗涤，然后干燥，得到白色固体，白色固体用无水乙醇重结晶。白色固体(产率78％)；熔点180.5-182.1℃；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(d,j＝1.7hz,aromatic,3h),7.17(d,j＝8.4hz,aromatic,2h),7.07(d,j＝8.3hz,aromatic,2h),7.01(d,j＝8.1hz,aromatic,2h),6.83(d,j＝8.2hz,aromatic,4h),5.90(s,aromatic,1h),5.82(s,2nh,2h),4.43(dd,j＝14.8,6.7hz,ch2,1h),4.27(d,j＝11.5hz,ch,1h),4.08(dd,j＝14.8,4.5hz,ch2,1h),2.53(d,j＝11.5hz,ch2,1h),2.25(s,ch3,3h),2.14(s,ch3,3h),1.62(s,ch3,3h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ170.26,162.89,162.48,161.63,141.28,139.79,136.78,132.56,129.57,128.85,128.64,127.64,127.44,118.02,101.41,100.26,89.12,58.85,43.57,38.93,22.65,20.47,19.80；hrms:calcdforc31h29cln2o4528.1816,found529.1883[m+h].

含有2-胺基-3，4-二氢吡喃-3-甲酰胺结构的新型化合物i,ii和iii的抗炎活性评价(活性数据见实例15和实例16)

实施例15tlr2介导的seap信号抑制活性评价：

a.quanti-blu碱性磷酸酶活性检测：

hek-bluehtlr2细胞首先在加有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素双抗的dmem培养基中培养。随后接种到96孔板中(每孔200μl培养基，接种量为4x104细胞)在37℃恒温过夜。第二天换液，然后依次加入100μl药物溶液，50μl含有10ng/ml终浓度的pam3csk4，在37℃恒温培养24h，并设立空白和阳性对照。第三天取50μl培养基上清至新的96孔板中并加入50μlquanti-blue(invivogen)缓冲液。静置15分钟，最后在620nm波长下下测定吸光值。

b.mtt细胞活性检测：

第一天接种hek-bluehtlr2细胞如96孔板(40,000/孔，200μl含10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素双抗的dmem培养基)，37℃,5％co2培养24小时。第二天换液并加入待测化合物和10ng/ml终浓度的pam3csk4，在37℃,5％co2培养24小时。第三天每孔加入15μlmtt溶液(pbs溶解)，在37℃培养3小时，随后弃去培养基并干燥过夜。最后每孔加入100μldmso并摇晃混匀30分钟，在570nm波长下测定吸光值。

经过活性筛选，100μm的6ecaa和6gcaa对seap信号的抑制率达到90％以上(表1)，虽然用量偏大，但该剂量下并没有明显的细胞毒性。将化合物6ecaa和6gcaa分别命名为z19和z20，进一步测试得到其ic50，其结果见表1。因此，可以明确化合物z19和z20具有潜在的抗炎活性。

表1.靶向nf-κb的tlr2介导的seap信号抑制活性结果^[a]

^a10ng/mlpam3csk4作为阳性对照.^b三次独立操作后的平均值.

为进一步明确其抗炎活性，我们在此基础上，对化合物z19和z20在细胞水平上评价其对nf-κb激活后导致的炎症因子表达量的影响。初步评价结果显示，z19和z20均能够有效抑制激活后的炎症因子tnf-α和il-6的表达，而同时z20的效果更好。因此单独针对z20，扩大样本量，评价其对被激活的炎症因子tnf-α和il-6的表达水平的影响，具体见实例16。

实施例16脂多糖lps(lipopolysaccharide)激活nf-κb后导致炎症因子tnf-α和白介-6(il-6)的表达抑制率检测

两组成熟raw264.7细胞株同时给予lps刺激，lps组采用含有dmso的dmem培养细胞，lps+z20组用含有新型抗炎药物的dmem培养细胞。lps和吡喃衍生物z20的工作浓度分别为100ng/ml、100μmol/l。两组刺激维持6h后，弃细胞培养上清，用2mldpbs清洗细胞两遍，每孔加入500μltrion裂解液反复吹打收集细胞，提取细胞rna。

q-pcr检测raw264.7细胞中炎症因子mrna的表达：分别提取lps组和lps+z20组的rna，经逆转录转为cdna，而后经q-pcr扩增，根据ct值对两组细胞进行炎症因子mrna水平检测。

在lps刺激raw264.7巨噬细胞系后，用阴性对照物dmso(二甲亚枫)和z20共处理被lps刺激后的细胞，6小时后，通过实时荧光定量pcr实验检测两组炎症因子的mrna表达水平。

结果显示lps+新型抗炎药z20组相比于lps组，tnf-α的mrna表达水平可以降低0.59倍，il-6的表达水平可以降低0.43倍(图8)。由此我们得到初步结论：z20能够有效抑制lps导致的炎症因子释放，明确表现出抗炎效果。

实施例17单晶培养

对代表化合物6aaca进行单晶培养：将产物用乙醇重结晶，得到的纯品，取纯品化合物6aaca10mg，加入四氢呋喃(thf)，溶解后过滤，滤液收集。取3ml滤液置于5ml的透明样品瓶中，薄膜封口，毛细管在薄膜上戳3-5个小洞。静置3-5天后，带有点状颗粒出现，立刻封口(旋紧样品瓶盖子)，静置1-2周，有块状晶体长成。凡士林包裹取出的晶体待测。将晶体进行xrd单晶衍射检测，解析单晶数据，确定产物结构(单晶数据见下面数据)xrd单晶结构见图7.

化合物6aaca的晶体数据和结构精修.