酪氨酸酶抑制剂β-檀香萜烯和表-β-檀香萜烯在面霜、洗面奶或美白乳液中的应用的制作方法

本发明属于化学领域，涉及酪氨酸酶抑制剂在面霜、洗面奶或美白乳液中的应用。

背景技术：

皮肤的颜色与皮肤中存在的色素的种类和数量有关，黑素对皮肤颜色影响最大。黑素在表皮基底部的黑素细胞中形成。其过程为黑素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下生成多巴、多巴醌最终形成黑素。黑素转移至基底细胞中，随着表皮细胞的移行被带到表皮全层，最后随角化细胞的脱落而脱失。酪氨酸酶是黑素生成的关键酶，控制着黑素的形成过程，其活性程度对色素的沉积起主要作用(裘炳毅，化妆品化学与工艺技术大全，中国轻工业出版社，1997：884-888)。市场上许多美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美白作用。

天然产物是指动物、植物提取物(简称植提)或昆虫、海洋生物和微生物体内的组成成分或其代谢产物，其中主要包括蛋白质、多肽、氨基酸、核酸、各种酶类、单糖、寡糖、多糖、糖蛋白、树脂、胶体物、木质素、维生素、脂肪、油脂、蜡、生物碱、挥发油、黄酮、糖苷类、萜类、苯丙素类、有机酸、酚类、醌类、内酯、甾体化合物、鞣酸类、抗生素类等。研究发现，这些天然存在的化学成分对人体的副作用较小。

从天然化学成分中筛选得到的酪氨酸酶抑制剂用于制备日化洗护用品，不仅美白效果好，而且安全性高，一直是各大研究机构的追逐的研究热点。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供酪氨酸酶抑制剂在面霜、洗面奶或美白乳液中的应用。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

化合物β-檀香萜烯或表-β-檀香萜烯，化学结构式如下：

上述化合物用作酪氨酸酶抑制剂的用途。

上述化合物在美白洗护日化中的应用。

一种美白面霜，含有有效量的上述化合物。

一种美白洗面奶，含有有效量的上述化合物。

一种美白乳液，含有有效量的上述化合物。

有益效果：

本发明发现，β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯、β-人参烯具有与熊果苷相似或更优异的酪氨酸酶抑制活性，在美白洗护日化中具有极为广阔的应用前景。

附图说明

图1为测试的化合物的化学结构式；

图2为阳性对照及测试的化合物对酪氨酸酶抑制作用的ic50值。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

实施例1：酪氨酸酶抑制剂筛选(筛选方法参照文献：任红荣等，香水莲花提取物抑制酪氨酸酶活性的研究，天然产物研究与开发natprodresdev2011，23:1122-1126)

一、实验材料

测试的化合物包括但不限于如下化合物(化学结构见图1)：

测试的化合物样品购买或自制，纯度均不低于95％。

l-酪氨酸(sigma公司)；熊果苷(上海源叶生物)；95％乙醇，二甲基亚砜(dmso)，磷酸，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，浓盐酸，均为市售分析纯；实验用水为去离子水。

新鲜马铃薯，购自南京市华润苏果超市。

二、实验方法

1、试剂配制

磷酸钠缓冲液(1/15m，ph＝6.8)：精确称取1.0005g磷酸二氢钠，1.1863g磷酸氢二钠，加入少量去离子水溶解后，定容至500ml，4℃冰箱保存备用。

l-酪氨酸溶液(7.5mmol/l)：精确称取l-酪氨酸0.2723g，先加入数滴浓盐酸，加去离子水约50ml，微热完全溶解后，用氢氧化钠溶液调ph至7.0，加去离子水定容至200ml。

受试液：精确称取测试的化合物样品各0.1g，分别溶于20ml二甲基亚砜，得到5mg/ml的待测液，再对倍稀释到2.5、1.25、0.625、0.3125mg/ml和0.15625mg/ml。

阳性对照：精确称取0.1g熊果苷，溶于20ml的去离子水中，得到5mg/ml的阳性对照母液，再对倍稀释到2.5、1.2500、0.6250、0.3125mg/ml和0.15625mg/ml。

2、酪氨酸酶液的制备

以新鲜完好的马铃薯制取酪氨酸酶液，具体操作为：

将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。去皮，切成约1×1×1cm³丁状，于-20℃冷冻过夜。称重，按1:1(w:v)的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000r/min离心10min，上清即为酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h内用完。

3、样品对酪氨酸酶活性的抑制

总反应体系为5ml，设计如下表。其中，用分光光度计测量吸光值时，“受试液”、“标准对照”、“阳性对照”分别以“阴性对照1”、“阴性对照2”和“阴性对照3”调零。

在此体系中，受试液(包括阳性对照熊果苷)的终浓度(mg/ml)梯度为0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25和0.5。

实验时，向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、不同浓度梯度的受试液(包括阳性对照)和酶液，于30℃水浴10min。然后加入底物l-酪氨酸，立即开始计时。测定反应20min时475nm波长下的吸光值。测定时以相应的阴性对照为参比，用下列公式计算受试液(包括阳性对照)对酪氨酸酶的抑制率。抑制率(％)＝(a-b)÷a×100％

其中，“a”为标准对照的吸光值，“b”为受试液(或阳性对照)的吸光值。每个实验做3个平行。根据抑制率，用bliss’s软件计算半数抑制浓度(ic50)值。

三、实验结果

阳性对照及测试的化合物对酪氨酸酶抑制作用的ic50值见下表和图2。

已知阳性对照熊果苷广泛用于美白洗护日化中，是源于绿色植物的天然活性物质，集“绿色植物、安全可靠”和“高效脱色”三者合谐统一于一体的皮肤脱色组份，它能迅速渗入肌肤，在不影响细胞增殖浓度的同时，能有效地抑制皮肤中的酪氨酸酶的活性，阻断黑色素的形成，通过自身与酪氨酶直接结合，加速黑色素的分解与排泄，从而减少皮肤色素沉积，祛除色斑和雀斑，而且对黑色素细胞不产生毒害性、刺激性、致敏性等副作用，同时还有杀菌、消炎的作用。它是当今流行的最为安全有效的美白原料，也是二十一世纪的理想皮肤美白祛斑活性剂。研究发现，β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯、β-人参烯具有与熊果苷相似或更优异的酪氨酸酶抑制活性，在美白洗护日化中具有极为广阔的应用前景。

实施例2：一种美白面霜

由如下重量百分含量的成分制成：β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯或β-人参烯，0.1％；角鲨烷，10％；丙二醇，3％；十八烷基硫酸钠，4％；月桂醇pca酯，3％；透明质酸，4％；椰油，7％；余量为水。

或在其他常规面霜配方基础上添加0.1％的β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯或β-人参烯。

实施例3：一种美白洗面奶

由如下重量百分含量的成分制成：β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯或β-人参烯，0.1％；珍珠液，5％；芦荟胶，5％；十六醇，8％；甘油，10％；异丙醇，2.5％；三乙醇胺，0.5％；椰油酰谷氨酸钠，20％；月桂醇pca酯，3％；余量为去离子水。

或在其他常规洗面奶配方基础上添加0.1％的β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯或β-人参烯。

实施例4：一种美白乳液

由如下重量百分含量的成分制成：β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯或β-人参烯，0.1％；甘油，12％；异丙醇，2％；三乙醇胺，0.3％；丙二醇，5％；十八烷基硫酸钠，5％；月桂醇pca酯，3％；透明质酸，5％；椰油，5％；余量为水。

或在其他常规乳液配方基础上添加0.1％的β-檀香萜烯、表-β-檀香萜烯、蔓藿香烯酮、蔓藿香烷酮、姜花素a、迷迭香胺、异迷迭香胺、玫瑰螺环烯醇、α-人参烯或β-人参烯。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。