玫瑰花精油的提取方法及其活性组分的定量分析方法与流程

本发明属于玫瑰花提取领域，特别涉及一种玫瑰花活性组分的定量分析方以及玫瑰花精油的提取方法。

背景技术：

蔷薇科(rosaceae)蔷薇属植物玫瑰(rosarugosathunb)生长于全国大部分地区，玫瑰花是玫瑰的干燥花蕾，性甘、温、微苦，可入药。玫瑰花化学成分多样，主要包含挥发油、黄酮、鞣质、多糖、氨基酸等化学成分。在我国，玫瑰花药用历史久远，药用价值广泛。玫瑰花挥发油能抑制金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、结核杆菌，促进胆汁分泌，对实验性动物心肌缺血提供保护。以往的水蒸气蒸馏法提取或有机溶剂提取，提取时间长，试剂损耗量大而且对环境有污染，低共熔溶剂对天然活性成分如多酚和黄酮等具有极强的亲和力，并且提取效率高于有机溶剂，对环境绿色无污染，近年来越来越受到广泛关注。采用顶空直接进样技术对玫瑰花挥发性成分进行采集和hs/gc/ms分析，并通过nist谱库，比对化合物结构，定量分析低共熔溶剂对玫瑰花活性组分提取效果。

技术实现要素：

第一方面，本发明提供一种玫瑰花精油的提取方法，该方法包括如下步骤：将玫瑰花球磨磨粉，采用提取溶剂提取，所述的提取溶剂为低共熔溶剂与水的混合溶液；所得提取液通过大孔树脂分离除去溶剂，制得玫瑰花多活性组分精油；

其中，所述低共熔溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的10-60倍；且所述低共熔溶剂为季铵盐与氢键供体的混合溶剂，选自氯化胆碱/尿素，氯化胆碱/乙二醇，氯化胆碱/丙三醇，氯化胆碱/柠檬酸，氯化胆碱/乙酰胺，氯化胆碱/乳酸，氯化胆碱/1,4-丁二醇，氯化胆碱/蔗糖其中的一种。

本发明采用低共熔溶剂进行提取，季铵盐与氢键供体以一定摩尔比组成的混合溶剂，溶剂熔点低于各单体的熔点，理化性质主要由溶剂体系的组成和配比决定，所得提取液通过大孔树脂分离除去溶剂，制得玫瑰花多活性组分精油。作为优选，所述季铵盐与氢键供体的摩尔比为1:1～5。

作为优选，所述季铵盐与氢键供体的摩尔比为1:2～3。

作为优选，所述的低共熔溶剂与水的质量比为9～1:1。

作为优选，所述大孔树脂型号选自ads-7、xad7hp、d101、ads-17、xad16、xad4、xad1600n、ab-8-ii、xad18、hp2mgl、sp825、sp70、sp700、hp21、sp207等。优选ads-17、xad16、xad4、xad1600n、hp21、sp207、sp700中的一种或者两种以上。

进一步优选地，所述的大孔树脂型号选自为xad4、xad1600n、xad7hp、ads-7、hp2mgl中的一种或两种以上的混合。

作为优选，将玫瑰花放入行星式球磨机进行磨粉，所述的行星式球磨机的球墨转速在100-500rpm,球磨时间为10-60minmin。

作为优选，所述低共熔溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的30-40倍。

作为优选，所述的低共熔溶剂与水的质量比为1.5～1:1。

作为优选，所述的玫瑰花为含水率不大于12％的玫瑰花药材或玫瑰花药材粉末。

第二方面，本发明提供一种玫瑰花活性组分的定量分析方法，该方法包括如下步骤：将玫瑰花球磨磨粉与提取溶剂加入顶空进样瓶中，进行headspace-gc-ms分析；所述的提取溶剂为低共熔溶剂与水的混合溶液；其中，所述低共熔溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的10-60倍；且所述低共熔溶剂为季铵盐与氢键供体的混合溶剂，选自氯化胆碱/尿素，氯化胆碱/乙二醇，氯化胆碱/丙三醇，氯化胆碱/柠檬酸，氯化胆碱/乙酰胺，氯化胆碱/乳酸，氯化胆碱/1,4-丁二醇，氯化胆碱/蔗糖其中的一种。

进一步优选地，所述季铵盐与氢键供体的摩尔比为1:1～5，优选地，所述季铵盐与氢键供体的摩尔比为1:2～3。

采用本工艺将玫瑰花有效组分提取和顶空气相检测同时进行，大大缩短了生产步骤；并且显著性提高产品提取率，工艺简单、操作方便、易于实现工业化生产。与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

(1)本发明将玫瑰花有效组分的提取和定量分析同时进行，大大缩短了生产周期；(2)本发明生产周期短，减少了有效组分的降解，并且动态顶空进样减少了测试样品前处理步骤，避免产品损失；(3)本发明对玫瑰花有效组分进行了低共熔溶剂体系提取以及hs/gc/ms定量分析，提高了玫瑰花有效组分的稳定性，延长了半衰期。

本发明将玫瑰花有效组分提取和顶空气相检测同时进行，大大缩短了生产步骤；并且显著性提高产品提取率，工艺简单、操作方便、易于实现工业化生产。而且降低了玫瑰花有效组分在提取过程中损失，提高了化合物的稳定性，为玫瑰花相关制剂开发及应用奠定基础。

附图说明：

图1是本发明蒸馏萃取玫瑰花挥发性化学成分的总离子流色谱图；

图2是本发明实施例1中顶空分析玫瑰花精油化学成分的总离子流色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明方案进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。

以下实施例中玫瑰花有效组分稳定性测定方法为：

稳定性考察的实验环境：湿度50％、温度为35℃。

玫瑰花提取物气相的色谱条件：采用waters-gc/tof型高分辨气质联用仪；气相色谱条件：色谱柱：pe-35ms(30m×0.32mm×0.25um)；进样口温度：250℃；载气：高纯氦气，流速1.5ml/min；分流比20:1；程序升温：初始温度50℃，维持10min，然后以10℃/min升至250℃，维持10min。

质谱条件：接口温度：220℃；离子源温度：220℃；电离方式：ei+；电子能量70ev；扫描范围：40-400amu。

顶空进样分析条件：样品加热温度：120℃；进样针温度：100℃；进样速度：50ul/s；进样量：2000ul。

食用玫瑰花挥发性化学成分色谱行为测定：根据色谱条件分析对玫瑰花进行分析测定。

玫瑰花挥发性化学成分定量分析：用nist2018标准质谱检索库检索鉴定玫瑰花主要挥发性化学成分，峰面积归一化确定各成分的相对含量。

半衰期的计算方法：在第0、15、30、45、60、75、125、250、500天取样，参照玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类的含量检测与计算方法，得到玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类的含量，然后建立线性关系曲线，通过关系曲线计算，当玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类的含量下降到原总量50％时所用的天数。

对照试验

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材用行星式球磨机磨粉后，水蒸气蒸馏法所得玫瑰花水提取液经过冷冻干燥制备得玫瑰花花活性组分0.47g。苯乙醇类、醛类得率分别为19.1％和17.9％，玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类的半衰期分别为56天和180天。

实施例1

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入20颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁30min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/1,4-丁二醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的40倍，氯化胆碱/1,4-丁二醇的摩尔比为1:2；氯化胆碱/1,4-丁二醇与水的质量比为6:4，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例1的玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为26.7％和23.3％，是对照试验的1.4和1.3倍，半衰期分别为566和522天，是对照试验的10.1和2.9倍。表1是本实施例中玫瑰花挥发性化学成分分析结果。

表1

实施例2

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入20颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁30min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/1,4-丁二醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的40倍，氯化胆碱/1,4-丁二醇的摩尔比为1:1；氯化胆碱/1,4-丁二醇与水的质量比为7:3，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例二的玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类分别为24.8％和21.5％，是对照试验的1.3和1.2倍，半衰期分别为571和396天，是对照试验的10.2和2.2倍。

实施例3

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入30颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁30min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/1,4-丁二醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的40倍，氯化胆碱/1,4-丁二醇的摩尔比为1:4；氯化胆碱/1.4-丁二醇与水的质量比为8：2，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例三的玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类分别为24.8％和21.5％，是对照试验的1.3和1.2倍，半衰期分别为571和378天，是对照试验的10.1和2.1倍。

实施例4

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入20颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁30min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/丙三醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的30倍，氯化胆碱/丙三醇的摩尔比为1:3；氯化胆碱/丙三醇与水的质量比为9:1，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例四的玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类分别为31.0％和35.8％，是对照试验的1.6和2.0倍，半衰期分别为526和450天，是对照试验的9.4和2.5倍。

实施例5

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入20颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁40min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/丙三醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的30倍，氯化胆碱/丙三醇的摩尔比为1:4；氯化胆碱/丙三醇与水的质量比为6:4，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例五的玫玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为48.7％和19.7％，是对照试验的2.5和1.1倍，半衰期分别为554和486天，是对照试验的9.9和2.7倍。

实施例6

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入20颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁50min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/丙三醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的30倍，氯化胆碱/丙三醇的摩尔比为1:5；氯化胆碱/丙三醇与水的质量比7:3，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例六的玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为27.9％和24.7％，是对照试验的1.5和1.4倍，半衰期分别为566和486天，是对照试验的10.1和2.7倍。

实施例7

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入20颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁60min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/丙三醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的20倍，氯化胆碱/丙三醇的摩尔比为1:3；氯化胆碱/丙三醇与水的质量比为6:4，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例七的玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为30.7％和19.7％，是对照试验的1.6和1.1倍，半衰期分别为571和504天，是对照试验的10.2和2.8倍。

实施例8

取1g含水率9％的干燥玫瑰花药材加入20颗小号球磨珠置于行星式球磨机球磨破壁70min，粉末与提取溶剂共同加入顶空进样瓶中，提取溶剂为水与氯化胆碱/丙三醇的混合物，所述的提取溶剂的质量用量为玫瑰花的质量的20倍，氯化胆碱/丙三醇的摩尔比为1:2；氯化胆碱/丙三醇与水的质量比为6：4，进行headspace-gc-ms分析，样品经过大孔树脂xad4进行回收。该实验与对照试验相比较，实施例八的玫瑰花香气成分苯乙醇类、醛类得率分别为32.7％和23.3％，是对照试验的1.7和1.3倍，半衰期分别为560和468天，是对照试验的10.0和2.6倍。