一种二氢杨梅素晶体及其制备方法与流程

本发明涉及有机化合物分离领域，具体而言，涉及一种二氢杨梅素晶体及其制备方法。

背景技术：

藤茶为葡萄科蛇葡萄属一种藤本植物，其学名为显齿蛇葡萄(ampelopsisgrossedentata(hand-mazz)w.t.wang)主要分布于我国长江流域以南方大部，如福建两广、湖北湖南及云南东南部等地，其嫩茎叶可作为茶品饮用。二氢杨梅素是藤茶中含量很高的黄酮类活性物质，具有抗氧化、清除自由基、抗血栓、消炎、抗肿瘤等多种功效，有降血糖、降血脂、降血压、抗氧化、抗血栓、抑菌抗菌等药理作用，可预防与减轻酒精对肝脏的损伤，有明显的保肝护肝作用。

目前从藤茶中大量提取制备的二氢杨梅素由于制备技术、生产成本等方面的限制，在生产上二氢杨梅素的纯度难以达到98％以上，不符合医药开发的要求，或工艺的产品收率低生产成本高，难以在生产中应用。因此，对纯度相对较低的二氢杨梅素产品采用高效低成本的结晶技术方法进行进一步的纯化，制备高纯度、高品质的二氢杨梅素，对于提高二氢杨梅素产品的附加值和拓展其应用领域具有重要的价值与实际意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种新的二氢杨梅素晶体。

本发明的另一目的在于提供上述二氢杨梅素晶体的制备方法，其具有工艺流程简单，生产成本低，有机溶剂易于回收利用，生产得到的产品纯度与收率高的优点。

本发明的实施例是这样实现的：

本发明提供了一种二氢杨梅素晶体，其晶体以2θ角度和晶面间距表示的，使用cu-kα辐射的x-射线粉末衍射图谱在8.80、10.24、11.93、14.62、16.63、18.98、19.95、20.72、21.73、22.59、23.41、25.33、26.02、26.87、29.61、32.87处显示特征衍射峰。

本发明还提供了上述的二氢杨梅素晶体的制备方法，其包括以下步骤：

将二氢杨梅素粗品溶于乙醇溶液并加热溶解，过滤得到滤液；

将滤液减压浓缩至乙醇质量百分比为5-10％后使用大孔树脂吸附，将大孔树脂冷却至25-30℃后依次使用水和质量百分比为30-40％的乙醇溶液洗涤，再用质量百分比为80-95％的乙醇溶液洗涤大孔树脂得到洗脱液；

将洗脱液浓缩、结晶、过滤得到晶体，水洗后干燥。

在本发明较佳的实施例中，上述二氢杨梅素粗品中二氢杨梅素的质量百分含量在70％以上。

在本发明较佳的实施例中，上述使用大孔树脂对滤液进行吸附时，使用大孔树脂在40-50℃下吸附1-2h。

在本发明较佳的实施例中，上述使用水洗涤大孔树脂时，使用大孔树脂体积2-3倍的水洗涤1-2次。

在本发明较佳的实施例中，上述使用水洗涤大孔树脂后，用大孔树脂体积2-3倍的质量百分比为30-40％的乙醇溶液洗涤1-2次。

在本发明较佳的实施例中，上述使用水和乙醇溶液洗涤大孔树脂后，用大孔树脂体积2-3倍的质量百分比为80-95％的乙醇溶液洗脱2-3次。

在本发明较佳的实施例中，上述将洗脱液在50-70℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比为10-20％，得到浓缩液，随后将浓缩液和水按1：2-3的体积比混合均匀后自然冷却至25-30℃，以10℃/h的降温速度降温至5-10℃，静置结晶8-12h后过滤得到晶体。

在本发明较佳的实施例中，上述水洗是将晶体用20-30℃的水洗涤2-3次后干燥。

在本发明较佳的实施例中，上述干燥是在60-90℃和真空减压条件下进行。

本发明实施例的有益效果是：本发明实施例提供的二氢杨梅素晶体以2θ角度和晶面间距表示的，使用cu-kα辐射的x-射线粉末衍射图谱在8.80、10.24、11.93、14.62、16.63、18.98、19.95、20.72、21.73、22.59、23.41、25.33、26.02、26.87、29.61、32.87处显示特征衍射峰。本发明实施例还提供了上述二氢杨梅素的制备方法，包括将二氢杨梅素粗品溶于乙醇溶液并加热溶解，过滤得到滤液；将滤液减压浓缩至乙醇含量为5-10％后使用大孔树脂吸附，将大孔树脂冷却至25-30℃后依次使用水和质量百分比为30-40％的乙醇溶液洗涤，再用质量百分比为80-95％的乙醇溶液洗涤大孔树脂得到洗脱液；将洗脱液浓缩、结晶、过滤得到晶体，水洗后干燥。该二氢杨梅素的制备方法具有工艺流程简单，生产成本低，乙醇溶剂易于回收利用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例1制备的吸附洗脱浓缩液中二氢杨梅素结晶时的照片；

图2为本发明实施例1制备的二氢杨梅素晶体的显微形态照片；

图3为本发明实施例1制备的二氢杨梅素晶体的hplc图谱；

图4为二氢杨梅素对照品的hplc图谱；

图5为二氢杨梅素晶体粉末的x-射线衍射图谱。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例提供的二氢杨梅素晶体的制备方法进行具体说明。

本发明实施例提供了一种二氢杨梅素，其晶体以2θ角度和晶面间距表示的，使用cu-kα辐射的x-射线粉末衍射图谱在8.80、10.24、11.93、14.62、16.63、18.98、19.95、20.72、21.73、22.59、23.41、25.33、26.02、26.87、29.61、32.87处显示特征衍射峰。

本发明实施例还提供了一种上述二氢杨梅素的制备方法，其包括以下步骤：将二氢杨梅素粗品溶于乙醇溶液并加热溶解，过滤得到滤液；将滤液减压浓缩至乙醇含量为5-10％后使用大孔树脂吸附，将大孔树脂冷却至25-30℃后依次使用水和质量百分比为30-40％的乙醇溶液洗涤，再用质量百分比为80-95％的乙醇溶液洗涤大孔树脂得到洗脱液；将洗脱液浓缩、结晶、过滤得到晶体，水洗后干燥。其中，二氢杨梅素粗品中二氢杨梅素的质量百分含量在70％以上，优选的二氢杨梅素粗品中二氢杨梅素的质量百分比为70-95％。

本发明实施例提供的二氢杨梅素的制备方法是，将二氢杨梅素粗品溶于乙醇溶液并加热溶解，过滤得到滤液以初步去除部分不溶杂质，随后将滤液减压浓缩至乙醇溶液质量百分比为5-10％时使用大孔树脂吸附处理，使滤液中的二氢杨梅素吸附到大孔树脂上，并依次用水和质量百分比为30-40％的乙醇溶液洗涤大孔树脂去除杂质，最后用质量百分比为80-95％的乙醇溶液洗涤大孔树脂并收集洗涤溶液，得到二氢杨梅素的洗脱液，将洗脱液减压浓缩、结晶、过滤得到晶体，水洗干燥得到二氢杨梅素成品。

本发明实施例提供的二氢杨梅素晶体的制备采用大孔树脂吸附洗涤结晶纯化的方法，其较目前水溶液多次重结晶的方法可省去多次结晶的操作，且除杂后的溶液单次结晶可获得高纯度的二氢杨梅素，极大的简化了工艺流程，同时还具有较高的收率。该工艺不使用有毒的化学试剂和碱性药剂，不破坏二氢杨梅素的分子结构，环境相容性相好，醇溶剂可回收循环使用，能耗少，生产成本低，工艺流程简单，适合连续化规模化生产的要求。

其中，使用大孔树脂对滤液进行吸附时，优选使用大孔树脂在40-50℃下吸附1-2h，随后冷却至25-30℃，该方法可充分吸附滤液中的二氢杨梅素，而且使用大孔树脂吸附时采用较低的温度且无需剧烈的ph变化，操作条件温和，有利于保持二氢杨梅素天然的分子结构和生物活性，保持二氢杨梅素成品的品质。

此外，洗涤大孔树脂时，先用大孔树脂体积2-3倍的水洗涤大孔树脂，再用大孔树脂体积2-3倍的质量百分比为30-40％的醇溶液洗涤1-2次，最后用大孔树脂体积2-3倍的质量百分比为80-95％的乙醇溶液将二氢杨梅素从大孔树脂上洗脱，可将二氢杨梅素粗品中的其他不吸附或吸附能力弱的杂质有效分离，从而大幅提高二氢杨梅素晶体的纯度。

在洗脱液浓缩结晶时，先将洗脱液在50-70℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比为5-10％得到浓缩液，随后将浓缩液和水按1：0.5-1的体积比混合均匀后自然冷却至25-30℃，以10℃/h的降温速度降温至5-10℃，静置结晶8-12h后过滤得到晶体。洗脱液浓缩结晶时，首先减压浓缩回收其中的乙醇，随后加水在低温下静置使二氢杨梅素结晶析出，通过减压浓缩和加水低温结晶技术，可以调节浓缩母液中二氢杨梅素的浓度和过饱浓度，从而调控二氢杨梅素的结晶速度，在一定程度范围内实现结晶过程与晶体形态的调控，获得高纯度的二氢杨梅素结晶。

在本发明较佳的实施例中，将过滤分离晶体用20-30℃水洗涤2-3次后在60-90℃和真空减压环境下进行干燥，该干燥方法有利于使晶体充分脱水，有利于保持二氢杨梅素的生物活性和成品的品质。

本发明所述的大孔树脂采用的是现有常规的d-101、ab-8等大孔树脂；乙醇溶液均是指乙醇的水溶液；真空减压即真空负压。

以下结合具体实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供了一种二氢杨梅素晶体，采用以下的制备方法制备得到，其具体工艺如下：

s11、将30g质量百分含量为70％的二氢杨梅素粗品和1000ml质量百分比浓度为60％的乙醇溶液混合，加热至60℃搅拌溶解，随后趁热过滤得到滤液。

s12、将过滤液在60℃下减压浓缩至乙醇质量百分比为5％时使用d-101大孔树脂进行吸附，在45℃下保温吸附1.5h后将大孔树脂冷却至25℃。

s13、用大孔树脂体积3倍的水洗涤大孔树脂1次，再用大孔树脂体积2倍的质量百分比为30％的乙醇溶液洗涤大孔树脂2次，最后使用大孔树脂2倍的质量百分比为95％的乙醇溶液洗涤大孔树脂2次，收集洗涤溶液得到洗脱液。

s14、将洗脱液在60℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比含量约为20％，得到浓缩液，向浓缩液中加入其体积3倍的水后慢速搅拌自然冷却至25℃，以10℃/h的速度降温至5℃，静置过夜使二氢杨梅素结晶析出，如图1所示，过滤收集晶体沉淀。

s15、将晶体沉淀用25℃水洗涤3次，滤纸过滤后在90℃减压真空干燥，得到二氢杨梅素，其收率为80％。

对上述实施例1制备得到的二氢杨梅素使用显微镜观察，如图2所示，以二氢杨梅素标准品(标示纯度≥98％，hplc法)为对照，采用hplc进行检测，其纯度≥99％，hplc图谱如图3、图4所示，此外，实施例1制备得到的二氢杨梅素的x-射线衍射图谱如图5所示。

其中hplc的测定色谱条件：lc-300分析型高效液相色谱仪(武汉赛尔夫科技有限公司)；色谱柱：thermoc18(4.6×250mm，5μm)；柱温：28℃；流动相：甲醇-1％醋酸(25：75)；流速：1ml/min；检测波长：294nm；进样量：20μl。

实施例2

本实施例提供了一种二氢杨梅素，其是采用以下的藤茶提取二氢杨梅素的方法制备得到，其具体工艺如下：

s21、将35g二氢杨梅素质量百分含量为70％的二氢杨梅素粗品和1000ml质量百分比浓度为70％的乙醇溶液混合，加热至70℃搅拌溶解，随后趁热过滤得到滤液。

s22、将过滤液在70℃下减压浓缩至乙醇质量百分比为10％时使用d-101大孔树脂进行吸附，在50℃下保温吸附1h后将大孔树脂冷却至25℃。

s23、用大孔树脂体积3倍的水洗涤大孔树脂1次，再用大孔树脂体积2倍的质量百分比为40％的乙醇溶液洗涤大孔树脂3次，最后使用大孔树脂2倍的质量百分比为90％的乙醇溶液洗涤大孔树脂2次，收集洗涤溶液得到洗脱液。

s24、将洗脱液在70℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比含量约为15％，向浓缩液中加入其体积2.5倍的水后慢速搅拌自然冷却至25℃，以10℃/h的速度降温至5℃，静置过夜使二氢杨梅素结晶析出，过滤收集晶体沉淀。

s25、将晶体沉淀用水洗涤2次，滤纸过滤后在85℃减压真空干燥，得到二氢杨梅素，其收率为82％；

对上述实施例2制备得到的二氢杨梅素采用hplc法进行检测，其纯度≥99％。

实施例3

本实施例提供了一种二氢杨梅素，其是采用以下的藤茶提取二氢杨梅素的方法制备得到，其具体工艺如下：

s31、将40g二氢杨梅素质量百分含量为70％的二氢杨梅素粗品和1000ml质量百分比浓度为80％的乙醇溶液混合，加热至80℃搅拌溶解，随后趁热过滤得到滤液。

s32、将滤液在70℃下减压浓缩至乙醇质量百分比为10％时使用d-101大孔树脂进行吸附，在50℃下保温吸附1h后将大孔树脂冷却至25℃。

s33、用大孔树脂体积2倍的水洗涤大孔树脂2次，再用大孔树脂体积2倍的质量百分比为40％的乙醇溶液洗涤大孔树脂2次，最后使用大孔树脂3倍的质量百分比为80％的乙醇溶液洗涤大孔树脂3次，收集洗涤溶液得到洗脱液。

s34、将洗脱液65℃减压浓缩至乙醇的质量百分比含量约为10％，向浓缩液中加入其体积2倍的水后慢速搅拌自然冷却至25℃，以10℃/h的降温速度降温至5℃，静置过夜使二氢杨梅素结晶析出，随后筛分收集晶体沉淀。

s35、将晶体沉淀用适量水洗涤3次，滤纸过滤后在80℃减压真空干燥，得到二氢杨梅素，其收率为85％；

对上述实施例3制备得到的二氢杨梅素采用hplc法进行检测，其纯度≥98％。

综上所述，本发明提供了一种二氢杨梅素晶体的制备方法，该制备方法能够有效的去除二氢杨梅素粗品中的杂质，显著提高二氢杨梅素的纯度，可使其纯度达到98％以上，同时二氢杨梅素的收率可达80％以上。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。