一种柱式阳性噬菌体富集装置的制作方法

本实用新型属于生物技术的领域，具体涉及一种柱式阳性噬菌体富集装置。

背景技术：

目前，抗体药物的研发是国际生物医药研究领域的热点，随着技术的发展在抗体药物研发中噬菌体展示技术逐渐成为重要技术之一，噬菌体展示技术有诸多优势，其可以利用合成库在不通过机体免疫的条件下筛选出阳性抗体，也可以利用天然库或半合成库并从中筛选出高亲和力抗体等。

噬菌体展示技术的关键步骤是从库容非常大(高达10^12)的文库中富集阳性噬菌体，目前常用的方法是用96孔酶标板或免疫试管对阳性噬菌体进行富集，这两种方法筛选通量较小，增加了文库筛选的工作量。

有鉴于此，特提出本实用新型。

技术实现要素：

本实用新型的目的是提供一种柱式阳性噬菌体富集装置，解决了对阳性噬菌体进行富集的方法的筛选通量小和筛选工作量大的问题。

为了实现上述目的，本实用新型提供的一种柱式阳性噬菌体富集装置，包括柱体，其特征在于，还包括柱体盖子、微球填料、上层支撑膜、下层支撑膜和流速控制阀；所述柱体盖子覆盖于所述柱体的上方；所述柱体外侧设有柱体固定卡位；所述微球填料设置在所述柱体内，所述上层支撑膜和下层支撑膜分别位于所述微球填料的上方和下方用于固定所述微球填料，所述上层支撑膜和所述下层支撑膜都能够通过噬菌体抗体但无法通过微球填料；所述流速控制阀用于调节所述中通孔以控制液体流速。

优选地，所述流速控制阀为柱状。

优选地，所述微球填料为非特异性结合材料。

优选地，所述微球填料为聚苯乙烯微球。

优选地，所述微球填料为特异性结合材料。

优选地，所述微球填料为镍柱琼脂糖微球或还原型谷胱甘肽琼脂糖微球。

优选地，所述上层支撑膜由位于上下两侧的塑料支撑材料和位于中间的滤膜组成，所述塑料支撑材料具有一定的强度用以固定维持滤膜的位置和形状；所述滤膜上设有孔，所述孔能够通过噬菌体抗体但无法通过微球填料。

优选地，所述滤膜上孔的孔径大小为40-80μm。

优选地，所述下层支撑膜由位于上下两侧的塑料支撑材料和位于中间的滤膜组成，所述塑料支撑材料具有一定的强度用以固定维持滤膜的位置和形状；所述滤膜上设有孔，所述孔能够通过噬菌体抗体但无法通过微球填料。

优选地，所述滤膜上孔的孔径大小为40-80μm。

本实用新型提供的一种柱式阳性噬菌体富集装置，具有如下有益效果：

1、柱体方便固定，整个装置稳定性高；

2、柱体容积大，增加了一次上样量，减少操作次数和时间，简单、快速、高通量地进行阳性噬菌体富集；

3、流速控制阀可以控制柱体内液体流速，进而准确控制样品在柱体内的反应时间和反应程度。

附图说明

图1为具体实施方式中的柱式阳性噬菌体富集装置的结构示意图。

图中：

1.柱体盖子 2.柱体 3.柱体固定卡位 4.微球填料 5.上层支撑膜 6.下层支撑膜 7.流速控制阀。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本实用新型方案，下面结合具体实施方式对本实用新型作进一步的详细说明。

一种柱式阳性噬菌体富集装置，包括柱体盖子1、柱体2、柱体固定卡位3、微球填料4、上层支撑膜5、下层支撑膜6和流速控制阀7。柱体2的形状为上粗下细，柱体2上部分比较粗，使得柱体2的溶积大，增加一次上样量，减少操作次数和时间；柱体2下部分比较细，便于控制柱体2内的液体从下方流出的流速。柱体盖子1覆盖于柱体2的上方进而对柱体2进行密封。柱体2外侧设置的一段加厚管壁为柱体固定卡位3，设置柱体固定卡位3后的装置可以方便固定于离心管架之上，也可利用铁架台进行固定，增加了装置的稳定性也方便安装。微球填料4位于柱体2比较粗的部分处，微球填料4可以根据需要使用非特异性结合材料或特异性结合材料，其中非特异性结合材料的微球填料4可以选择使用聚苯乙烯微球；其中特异性结合材料的微球填料4可以选择使用镍柱琼脂糖微球或还原型谷胱甘肽琼脂糖微球。上层支撑膜5和下层支撑膜6分别位于微球填料4的上方和下方，上层支撑膜5和下层支撑膜6能够固定微球填料4的位置，上层支撑膜5和下层支撑膜6的结构相同，都是由位于上下两侧的塑料支撑材料和位于中间的滤膜两部分组成，塑料支撑材料具有一定的强度用以固定维持滤膜的位置和形状；滤膜有一定孔径，该孔径可以通过抗体但无法通过微球填料4，滤膜的孔径大小设计为40-80μm。流速控制阀7为柱状，直径大于所安装部位柱体2内径以实现对柱体2的封闭，流速控制阀7中间有中通孔，流速控制阀7的一端为旋钮，通过转动旋钮可以调节中通孔与柱体2孔洞大小实现对液体流速的控制。

样品从柱体2上方加入，利用重力作用样品可以通过微球填料4，柱体盖子1与流速控制阀7联合使用可以对柱体2进行密封或控制柱体2内液体流速，进而准确控制样品在柱体2内的反应时间和反应程度。

实施例一：微球填料4使用非特异性结合材料聚苯乙烯微球

柱式阳性噬菌体富集装置的使用方法，包括以下步骤：

1、利用柱体固定卡位3将柱体2固定于离心管架上以稳定整个装置；

2、将柱体盖子1打开，并且将流速控制阀7关闭；

3、向柱体2内加入稀释至特定浓度的抗原，通过调节流速控制阀7进行调节流速，使抗原与聚苯乙烯微球填料结合；

4、向柱体2内加入PBS缓冲液，通过调节流速控制阀7进行调节流速，洗去未与聚苯乙烯微球填料结合的抗原；

5、向柱体2内加入制备的噬菌体抗体展示文库，通过调节流速控制阀7进行调节流速，使抗体与微球填料4表面结合的抗原结合；

6、向柱体2内加入PBS缓冲液，通过调节流速控制阀7进行调节流速，洗去微球填料4未结合的噬菌体；

7、向柱体2内加入Tris甘氨酸缓冲液，通过调节流速控制阀7进行调节流速，洗下阳性噬菌体，完成对阳性噬菌体的富集。

实施例二：微球填料4使用特异性结合材料镍柱琼脂糖微球

柱式阳性噬菌体富集装置的使用方法，包括以下步骤：

1、利用柱体固定卡位3将柱体2固定于离心管架上以稳定整个装置；

2、将柱体盖子1打开，并且将流速控制阀7关闭；

3、向柱体2内加入稀释至特定浓度的抗原(抗原带有6×His标签)，通过调节流速控制阀7进行调节流速，使抗原与镍柱琼脂糖微球填料结合；

4、向柱体2内加入PBS缓冲液，通过调节流速控制阀7进行调节流速，洗去未与镍柱琼脂糖微球填料结合的抗原；

5、向柱体2内加入制备的噬菌体抗体展示文库，通过调节流速控制阀7进行调节流速，使抗体与微球填料4表面结合的抗原结合；

6、向柱体2内加入PBS缓冲液，通过调节流速控制阀7进行调节流速，洗去微球填料4未结合的噬菌体；

7、向柱体2内加入Tris甘氨酸缓冲液，通过调节流速控制阀7进行调节流速，洗下阳性噬菌体，完成对阳性噬菌体的富集。

本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本实用新型的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明构思的前提下，所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进，均应包含在本实用新型的保护范围之内。