发明背景(1)发明领域本发明提供了对在髓性免疫细胞的表面上表达的抑制性受体免疫球蛋白样转录物3(ilt3)具有特异性的非混杂单克隆抗体。(2)相关技术的描述免疫球蛋白样转录物3(ilt3)，命名为cd85k，也称为白细胞免疫球蛋白样受体亚家族b成员4(lilrb4)和白细胞免疫球蛋白样受体5(lir-5)，是包含细胞质免疫受体酪氨酸基抑制基序(itim)基序并参与免疫应答的下调的i型膜蛋白(cella等，jexpmed.185(10)：1743-51(1997)；samarisdis等，eurjimmunol27(3)：660-665(1997))。ilt3的表达在致耐受性树突状细胞上被上调。该基因是白细胞免疫球蛋白样受体(lir)家族的成员，其见于在染色体区域19q13.4处的基因簇中。所编码的蛋白质属于lir受体的亚家族b类，其包含两个或四个细胞外免疫球蛋白结构域、跨膜结构域和两个至四个itim。ilt3由髓样抗原呈递细胞(apc)选择性表达，例如单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞，例如在il-10或维生素d3存在下分化的单核细胞衍生的树突状细胞。ilt3由447个氨基酸组成，预测的分子量为约47kd。ilt3的氨基末端部分以23个氨基酸的疏水信号肽开始，随后是包含两个c2型免疫球蛋白超家族结构域的胞外结构域，具有如seqidno:1所示氨基酸序列，减去c端his标记。(猕猴ilt3细胞外结构域具有seqidno:2所示氨基酸序列)。ilt3的推定跨膜结构域由21个氨基酸组成，其后是167个氨基酸的长胞质区，其特征是存在由26个氨基酸残基间隔开的基序，令人联想到在kir中确定的作为蛋白质酪氨酸磷酸酶shp-1的结合位点的itim基序(天然-杀伤细胞ig受体)。ilt3在免疫细胞上表达，在那里其与抗原呈递细胞上的mhci类分子结合，并转导抑制免疫应答的刺激的负信号。该受体还可以在抗原捕获和呈递中起作用。ilt3被认为是控制炎症响应和细胞毒性，以帮助集中免疫应答和限制自身反应性。已鉴定出编码ilt3的不同亚型的多种转录物变体。公开了使用抗体来调节ilt3活性以及用于抑制移植排斥或用于癌症或传染病治疗的应用的专利公布包括美国公布号20090202544，20150110714，20150139986和20170267759；和国际公布号wo2013043569，wo2013181438，wo2014116846，wo2016049641，wo2016127427，wo2018089300和wo2018148494。令人感兴趣是国际公布号wo2017015227，其公开了cd166，也称为淋巴细胞粘附分子(alcam)，它是ilt3的配体，并且在一些实施方式中提供了治疗癌症的方法，该方法包括针对cd166或alcam的抗体。还令人感兴趣的是美国专利号7777008和8901281，其公开了用于各种各样治疗的单克隆抗体9b11，其中期望的是上调用于抗癌治疗的免疫系统和下调用于抑制移植排斥的免疫系统。虽然专利公布公开了抗ilt3抗体，但在一些情况下没有具体抗体被公开或多种具体抗体被公开，其在一些情况下被显示是混杂的且与一种或多种ilt3相关受体如lilra6和ilt8交叉反应。混杂抗ilt3抗体可以具有脱靶效应，这可以具有使其对治疗应用的使用成为禁忌的不期望的效应。因此需要特异性结合ilt3且对其他相关受体没有可测量的乱交的抗体和抗原结合片段。技术实现要素：本发明提供了单克隆抗体和抗原结合片段，其特异性结合免疫球蛋白样转录物3(ilt3)，而与密切相关的蛋白质(例如，ilt5，ilt7，ilt8，或ilt11)没有可测量的结合，如通过以下测定的：(ⅰ)使用10μg/ml抗体或抗原结合片段的细胞elisa，或(ii)使用10μg/ml抗体或抗原结合片段的biacore。在特定实施方式中，所述抗体和抗原结合片段特异性结合人ilt3和猕猴ilt3两者。这些抗体和抗原结合片段能够拮抗ilt3活性，从而增强树突状细胞的激活和t细胞的初免(priming)。被耐受的树突状细胞和骨髓衍生抑制细胞(mdsc)也响应于这些抗体。此外，这些抗体在人源化nsgtm小鼠模型系统(杰克逊实验室，巴港，缅因州)中的体内研究显示，这些抗体可以具有减少肿瘤负荷和将细胞表型转移到更加激活的状态的能力。在临床试验的样品，ilt3表达，如pd-l1、lag-3和gep标签，被发现与对抗pd-1抗体(派姆单抗)的响应性相关联。在某些癌症类型中，循环中的可溶性ilt3也增加。总之，本发明的抗ilt3抗体可用于治疗特定癌症，或者是作为单一疗法治疗，或者是与抗pd-1和/或抗pd-l1抗体组合，以增强对抗pd-1或抗pd-l1抗体的响应性，特别是在癌症对抗pd-1或抗pd-l1单一疗法无响应的癌症治疗中。在特定的实施方式中，本发明提供了嵌合的或人源化的抗ilt3抗体。在某些实施方式中，抗体可以是与本文公开的抗体竞争结合本文公开的ilt3表位的全人抗体。本发明提供了抗体或抗原结合片段，其包含具有重链互补决定区(hc-cdr)1、2和3的重链可变vh结构域的一个、两个或三个互补决定区(cdr)，和具有lc-cdr1、2和3的轻链可变结构域vl的一个、两个或三个cdr，其中所述抗体或抗原结合片段能够特异性结合人ilt3，其中所述抗体或抗原结合片段的结合可以通过细胞elisa或biacore测定。在另一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段与人ilt3上的表位结合或与所公开的抗体竞争结合人ilt3上的表位，其中所述表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所述氨基酸序列中的一个或多个内的至少一个氨基酸。在另一个的实施方式中，所述抗体或抗原结合片段与人ilt3上的表位结合或与所公开的抗体竞争结合人ilt3上的表位，其中所述表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所述氨基酸序列中的一个或多个。在另一个的实施方式中，所述抗体或抗原结合片段与人ilt3上的表位结合或与所公开的抗体竞争结合人ilt3上的表位，其中所述表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所述氨基酸序列。在特定实施方式中，通过氢氘交换质谱法(hdx-ms)分析来确定所述表位。本发明进一步提供了结合人ilt3的抗体或抗原结合片段，其包含重链(hc)，其中重链可变结构域(vh)包含具有选自seqidno:22、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列的重链互补决定区(hc-cdr)3，或具有与选自seqidno:22、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列具有3、2或1个差异的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在特定的实施方式中，所述结合人ilt3的抗体或抗原结合片段包含重链(hc)，其中重链可变结构域(vh)包含具有选择选自seqidno:23、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列的重链互补决定区(hc-cdr)3，或具有与选自seqidno:23、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列具有3、2或1个差异的氨基酸序列。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在另一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段与人ilt3上的表位结合或与所公开的抗体竞争结合人ilt3上的表位，其中所述表位包含来自seqidno:3、4、5、6、7和8所述氨基酸序列中的一个或多个的至少一个氨基酸。在另一个的实施方式中，所述抗体或抗原结合片段与人ilt3上的表位结合或与所公开的抗体竞争结合人ilt3上的表位，其中所述表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所述氨基酸序列中的一个或多个。在另一个的实施方式中，所述抗体或抗原结合片段与人ilt3上的表位结合或与所公开的抗体竞争结合人ilt3上的表位，其中所述表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所述氨基酸序列。在特定实施方式中，通过氢氘交换质谱法(hdx-ms)分析来确定所述表位。本发明进一步提供了结合人ilt3的抗体或抗原结合片段，其包含(a)hc，其具有可变结构域(vh)，其包含具有seqidno:17、47、55、63、71、79、87、95或103所示氨基酸序列的可变结构域互补决定区(hc-cdr)1；具有seqidno:18、48、56、64、72、80、88、96或104所示氨基酸序列的hc-cdr2；具有seqidno:23、49、57、65、73、81、89、97或105所示氨基酸序列的hc-cdr3；及其其中所述hc-cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体；和(b)轻链(lc)，其具有可变结构域(vl)，其包含具有seqidno:27、50、58、66、74、82、90、98或106所示氨基酸序列的可变结构域互补决定区(lc-cdr)1；具有seqidno:43、51、59、67、75、83、91、99或107所示氨基酸序列的lc-cdr2；具有seqidno:44、60、68、76、84、92、100或108所示氨基酸序列的lc-cdr3；及其其中所述lc-cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，hc-cdr1具有seqidno:17所示氨基酸序列；hc-cdr2具有seqidno:19、20或21所示氨基酸序列；hc-cdr3具有seqidno:23所示氨基酸序列；和lc-cdr1具有seqidno:34、35、36、37、38、39、40、41或42所示氨基酸序列；lc-cdr2具有seqidno:43所示氨基酸序列；和lc-cdr3具有seqidno:44所示氨基酸序列；及其其中hc-cdr和lc-cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，hc-cdr1具有seqidno:17所示氨基酸序列；hc-cdr2具有seqidno:20所示氨基酸序列；hc-cdr3具有seqidno:23所示氨基酸序列；和lc-cdr1具有seqidno:41所示氨基酸序列；lc-cdr2具有seqidno:43所示氨基酸序列；和lc-cdr3具有seqidno:44所示氨基酸序列；及其其中hc-cdr和lc-cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含(a)vh，其具有选自人vh1、vh2、vh3、vh4、vh5、和vh6家族，及其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体的框架；和(b)vl，其具有选自人vκ1、vκ2、vκ3、vκ4、vκ5、vκ6、vλ1、vλ2、vλ3、vλ4、vλ5、vλ6、vλ7、vλ8、vλ9、和vλ10家族，及其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体的框架。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在特定实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含(a)vh，其具有人vh1家族框架或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体；和(b)vl，其具有人vκ5家族框架或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体的另一个实施方式中，所述抗体包含人igg1、igg2、igg3或igg4hc恒定区或其与天然igg1、igg2、igg3或igg4同种型hc恒定结构域的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定方面，恒定结构域可包含c-末端赖氨酸或可缺少c-末端赖氨酸或c-末端甘氨酸-赖氨酸二肽。在特定的实施方式中，重链恒定结构域是具有人igg1同种型，其已被修饰以具有减少的或很小的效应子功能。在进一步的方面，很小的效应子功能是由于效应子较低(effector-less)fc突变，其可包含或由如使用kabat编号确定的突变n297a或d265a/n297a组成，在这种情况下很小的效应子功能是由于无糖基化(aglycosylation)(参见例如，seqidno:211所示氨基酸序列，其中n297a突变对应于氨基酸位置180；d265a突变(如果存在的话)将对应于氨基酸位置148)。在特定方面，igg1已被修饰为包含或由如使用kabat编号确定的l234a，l235a和d265s突变组成，以使fc效应子较低(参见例如seqidno:12或13所示氨基酸序列，其中l234a，l235a和d265s突变分别对应于氨基酸位置117、118和148)。在另一方面，hc恒定结构域具有人igg4同种型，并且该同种型还包含脯氨酸取代位置228(eu编号)处的丝氨酸残基，其对应于seqidno:9或10的位置108(丝氨酸在位置108)。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体包含人κ或λlc恒定结构域或其与天然人κ或λlc恒定结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体包含(ⅰ)vh，其具有选自人vh1、vh2、vh3、vh4、vh5和vh6家族的框架和人igg1或igg4hc恒定结构域或其与天然人igg1或igg4同种型hc恒定结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体；和(ⅱ)vl，其具有选自人vκ1、vκ2、vκ3、vκ4、vκ5、vκ6、vλ1、vλ2、vλ3、vλ4、vλ5、vλ6、vλ7、vλ8、vλ9和vλ10家族的框架和人κ或λlc恒定结构域或其与天然人κ或λlc恒定结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体包含(i)具有人vh2家族框架的vh和具有人vκ5家族框架的vl；(ii)人igg1或igg4hc恒定结构域或其与天然人igg1或igg4同种型hc恒定结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体；和(iii)人κlc恒定结构域或其与天然人κlc恒定结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体包含(i)具有人vh1家族框架的vh和具有人vκ5家族框架的人vl；(ii)人igg4hc恒定结构域或其与天然人igg4同种型hc恒定结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体；和(iii)人κlc恒定结构域或其与天然人κlc恒定结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，所述氨基酸序列差异是保守改变/置换。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含分别具有seqidno:15和seqidno:16；seqidno:45和seqidno:46；seqidno:53和seqidno:54；seqidno:61和seqidno:62；seqidno:69和seqidno:70；seqidno:77和seqidno:78；seqidno:85和seqidno:86；seqidno:93和seqidno:94；或seqidno:101和seqidno:102所示氨基酸序列的vh和vl。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含具有seqidno:117、118、119、123、124或125所示氨基酸序列的vh；和具有seqidno:126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140或141所示氨基酸序列的vl。在所述抗体或抗原结合片段的另一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含具有seqidno:118所示氨基酸序列的vh；和具有seqidno:140所示氨基酸序列的vl。在所述抗体的另一个实施方式中，所述抗体包含hc恒定结构域，其包含seqidno:9、10、11、12或13所示氨基酸序列。在特定方面，包含seqidno:9、11、12或13所示氨基酸序列的hc恒定结构域可以缺少c端赖氨酸或c端甘氨酸-赖氨酸二肽。在特定实施方式中，hc恒定结构域包含seqidno:10所示氨基酸序列。在所述抗体的另一个实施方式中，所述抗体包含lc恒定结构域，其包含seqidno:14所示氨基酸序列。在所述抗体的另一个实施方式中，所述抗体包含hc，所述hc包含seqidno:142、143、144、148、149、150、167、168、169、170、174、175、176、177、178、182、183、184、185、186、187、191、192或193的氨基酸序列。在特定方面，包含seqidno:142、143、144、148、149、150、167、168、169、170、174或175所示氨基酸序列的hc可以缺少c端赖氨酸。或c端甘氨酸-赖氨酸二肽。在特定实施方式中，hc包含如seqidno:143或177所示氨基酸序列。在特定的实施方式中，如seqidno:177所示hc进一步缺少c端甘氨酸。在所述抗体的另一个实施方式中，所述抗体包含lc，所述lc包含seqidno:151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165或166所示氨基酸序列。在特定的实施方式中，所述lc包含seqidno:165所示氨基酸序列。在所述抗体的另一个实施方式中，所述抗体包含具有seqidno:143所示氨基酸序列的hc和含有seqidno:165所示氨基酸序列的lc。在特定方面，包含seqidno:143所示氨基酸序列的hc缺少c端赖氨酸残基或c端甘氨酸-赖氨酸二肽。本发明进一步提供了嵌合、人源化或重组人抗体或抗原结合片段，其与人ilt3上的表位结合，其中所述表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所示氨基酸序列内的至少一个氨基酸。在另一个实施方式中，所述嵌合、人源化或重组人抗体或抗原结合片段与人ilt3上的表位结合，所述表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所示氨基酸序列。在这些实施方式中，通过氢氘交换质谱法(hdx-ms)分析来确定所述表位。本发明进一步提供了结合ilt3的嵌合、人源化或重组人抗体或抗原结合片段，其中所述结合交叉阻断抗体或与所述抗体竞争结合，所述抗体包含具有seqidno:15所示氨基酸序列的重链和具有seqidno:16所示氨基酸序列的轻链。在另一个实施方式中，交叉阻断抗体或与所述抗体竞争的所述嵌合、人源化或重组人抗体或抗原结合片段结合包含seqidno:3、4、5、6、7和8所示氨基酸序列的ilt3上的表位，所述抗体包含具有seqidno:15所示氨基酸序列的重链和具有seqidno:16所示氨基酸序列的轻链。本发明进一步提供了一种组合物，其包含本文公开或要求保护的抗体或抗原结合片段中的任一种的一种或多种和药学上可接受的载体。本发明进一步提供了一种用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用足以治疗所述受试者的癌症的有效量的本文公开或要求保护的抗体或抗原结合片段。在另一个实施方式中，所述癌症是胰腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌、头颈癌、支气管癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌、外周神经系统癌、食道癌、宫颈癌、子宫或子宫内膜癌、口腔或咽癌、肝癌、肾癌、睾丸癌、胆道癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤或血液组织癌。本发明还提供了一种用于治疗受试者的癌症的方法，其包括向所述受试者同时或连续施用本文中公开的抗体或抗原结合片段与pd-1、pd-l1和/或pd-l2的一种或多种抑制剂或拮抗剂的组合。在一个实施方式中，pd-1的拮抗剂是与人pd-1结合并阻断pd1与人pd-l1和pd-l2结合的抗体或其抗原结合片段。在一个实施方式中，pd-l1或pd-l2的拮抗剂是与人pd-l1或pd-l2结合并阻断人pd-l1或pd-l2与pd1结合的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方式中，所述抗pd1拮抗剂是抗pd-1抗体，其是纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、西米普利单抗(cemiplimab)或pidilizumab，且所述pd-l1抑制剂是杜鲁麦单抗(durvalumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿伐单抗(avelumab)、yw243.55.s70、mpdl3280a、medi-4736、msb-0010718c或mdx-1105。本发明进一步提供了本文公开或要求保护的抗体或抗原结合片段，其用于治疗受试者的癌症。在另一个实施方式中，所述癌症是胰腺癌，黑素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈癌，支气管癌，结直肠癌，前列腺癌，胰腺癌，胃癌，卵巢癌，膀胱癌，脑癌或中央神经系统癌，周围神经系统癌，食道癌，宫颈癌，子宫或子宫内膜癌，口腔或咽癌癌，肝癌，肾癌，睾丸癌，胆道癌，小肠或阑尾癌，唾液腺癌，甲状腺癌，肾上腺癌，骨肉瘤，软骨肉瘤或血液学组织癌。本发明进一步提供了本文公开或要求保护的抗体或抗原结合片段，其用于治疗受试者的癌症，其中所述治疗还包含pd-1，pd-l1和/或pd-l2的一种或多种抑制剂或拮抗剂。在一个实施方式中，所述pd-1的拮抗剂是与人pd-1结合并阻断pd1与pd-l1和pd-l2结合的抗体或其抗原结合片段。在一个实施方式中，所述pd-l1或pd-l2的拮抗剂是与人pd-l1或pd-l2结合并阻断人pd-l1或pd-l2与pd1结合的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方式中，所述抗pd-1抗体是纳武单抗，派姆单抗，西米普利单抗，或pidilizumab，且所述pd-l1抑制剂是杜鲁麦单抗，阿特珠单抗，阿伐单抗，yw243.55.s70，mpdl3280a，medi-4736，msb-0010718c，或mdx-1105。本发明进一步提供了本文公开或要求保护的抗体或抗原结合片段的用于治疗癌症用途。本发明进一步提供了本文公开或要求保护的抗体或抗原结合片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在另一个实施方式中，所述癌症是胰腺癌，黑素瘤，乳腺癌，肺癌，头颈癌，支气管癌，结直肠癌，前列腺癌，胰腺癌，胃癌，卵巢癌，膀胱癌，脑癌或中央神经系统癌，周围神经系统癌，食道癌，宫颈癌，子宫或子宫内膜癌，口腔或咽癌癌，肝癌，肾癌，睾丸癌，胆道癌，小肠或阑尾癌，唾液腺癌，甲状腺癌，肾上腺癌，骨肉瘤，软骨肉瘤或血液学组织癌。本发明进一步提供了一种组合物，其包含上述抗体或抗原结合片段中的任一种和药学上可接受的载体。在特定实施方式中，该组合物包含包含具有c端赖氨酸的重链的抗体和包含缺少c端赖氨酸的重链的抗体的混合物。在特定的实施方式中，该组合物包含本文公开的抗体，其中主要的抗体形式包含具有c端赖氨酸的重链。在特定的实施方式中，该组合物包含本文公开的抗体，其中主要的抗体形式包含缺少c端赖氨酸的重链。在特定的实施方式中，该组合物包含本文公开的抗体，其中该组合物中约100％的所述抗体包含缺少c端赖氨酸的重链。附图说明图1a，图1b，图1c，图1d，图1e和图1f显示了本文公开的抗ilt3抗体中的多种对单克隆抗体9b11和小鼠igg1(miggg1)的选择性的比较，使用基于细胞的elisa格式。表达人ilt3(图1a)，猕猴ilt3(图1b)，人ilt5(图1c)，人ilt7(图1d)，人ilt8(图1e)，或人ilt11(图1f)的cho-k1细胞各自用单克隆抗体p40b5(lb179.40b5.1a1)，p49c6(lb181.49c6.1a1)，和p52b8(lb181.52b8.1b1)；抗体9b11(具有seqidno:33(轻链)和seqidno:34(重链)的氨基酸序列的美国专利号7,777,008)和小鼠igg1测试。图2a显示关于mab10的变体的结合亲和力，等电点，单体种类纯度和热稳定性测量的数据特性。术语：“huilt3”是指人ilt3；“rhilt3”是指猕猴ilt3；“pi”是指等电点；“tm”是指热展开曲线的温度中点；“tagg”是指热聚集曲线的中点；“sec”是指尺寸排阻超高效液相色谱法。图2b显示mab10(m64vvh1igg4)的人源化轻链变体的sec纯度与熔融温度的关系。vl1-vl8分别指具有seqidno:126-133所示氨基酸序列的变体。图3a显示由嵌合抗ilt352b8小鼠52b8vh亲本/人igg4(s228p)：小鼠52b8亲本vl/人κ抗体(“c58b2”；mab73)结合的人ilt3胞外结构域氨基酸残基的氘标记差示热图。这些六肽结构域，其包含由所述抗体结合的表位(残基18-23(iswgns；seqidno:3)，残基64-69(ipsmte；seqidno:4)，残基96-101(mtgays；seqidno:5)，残基124-131(qsrspmdt；seqidno:6)，残基152-159(aqqhqaef；seqidno:7)和残基184-187(llsh；seqidno:8))，位于ilt3细胞外结构域的d1和d2结构域的边界附近。该具有c端his标签的人细胞外结构域的氨基酸序列如seqidno:1所示。图3b显示人ilt3的细胞外结构域的表面结构模型的第一视图和第二视图。模型的暗区显示了包含被c58b8(mab73)结合的人ilt3-his表位的六肽结构域的位置。图3c是显示在ilt3细胞外结构域上的表位的位置的带状图：iswgns(seqidno:3)，ipsmte(seqidno:4)，mtgays(seqidno:5)，qsrspmdt(seqidno:6)，aqqhqaef(seqidno:7)和llsh(seqidno:8)。图3d显示被抗体zm4.1结合的人ilt3细胞外结构域氨基酸残基的氘标记差示热图。图3e显示被抗体dx446结合的人ilt3细胞外结构域氨基酸残基的氘标记差示热图被。图3f显示被抗体dx439结合的人ilt3细胞外结构域氨基酸残基的氘标记差示热图。图3g显示被抗体9b11结合的人ilt3细胞外结构域氨基酸残基的氘标记差示热图。图4显示了在人源化肿瘤模型(panc08.13和sk-mel-5)中的多个剂量之后，在血液中的游离c52b8(mab73)浓度。游离c52b8浓度用圆圈和正方形表示。虚线表示在c57bl/6j小鼠中静脉推注(ivbolus)施用1、3、10或30mg/kg的人源化igg4后的模拟历史抗体水平。图5a显示了人树突状细胞(dc)功能测定法，展示了抗ilt3抗体嵌合抗体，其中与igg4fc(c52b8；mab73)，igg1fc(mab78)或igg1(n297a)fc(mab76)融合的来自p52b8的vh和vl具有可比的激活树突状细胞(dc)的能力。制备了人未成熟dc，并在5天内用gm-csf(1000u/ml)和il-4(1000u/ml)分化为cd11c+树突状细胞。将这些细胞用il-10，lps(革兰氏阴性细菌细胞壁组分和tlr4配体(raetzetal.ann.rev.biochem.71:635–700(2002))，和不同浓度的所指示的抗体处理42个小时。显示的数据为两次技术重复的平均值和s.d.。该实验代表四次独立研究。对照igg没有效果(未示出)。图5b和图5c显示人源化52b8(lot26avy；mab46)与c52b8(mab73)在使用来自两个不同健康人类供体的dc的人dc功能测定法中不可区分。显示的数据是两次技术重复的平均值和s.d.。显示的数据代表了使用这两个供体的三次独立研究。图6a和图6b显示了抗ilt3抗体c52b8(mab73)和人源化抗ilt3抗体52b8(mab46；lot26avy)降低了骨髓衍生抑制细胞(mdsc)的抑制能力。用4:1的t细胞与mdsc之比进行该t细胞抑制测定。显示的数据是在t细胞测定步骤的水平上的三个技术重复的平均值和s.d.。显示的实验代表使用来自相同两个供体的pbmc的两次独立研究，具有定性地相似的结果。图7显示c52b8抑制携带sk-mel-5皮下肿瘤的sk-mel-5人-nsg小鼠中的sk-mel-5肿瘤的生长。动物基于移植后第21天的肿瘤体积被随机分配到治疗，在第21天开始每周一次皮下给予20毫克/千克的c52b8或同种型对照。顶部图显示的数据是平均值和std.误差(每组九只)。个体动物肿瘤生长曲线显示在中间图和底部图中。对照组和52b8组两者中体重均下降到相似的程度。该研究代表三次独立研究。图8a，图8b，图8c和图8d显示c52b8在肿瘤生长和免疫激活方面在sk-mel-5hu-nsg模型中的效果。图8a显示肿瘤生长曲线。图8b显示在第2剂量后7天收集的til的cytof定量：cd4+调节性t细胞％和在cd4+t细胞上的cd69表达水平；图8c显示在研究结束时收获的血浆中的shla-g水平；图8d显示肿瘤中的人cd3+t细胞浸润的ihc分析，每组中4个肿瘤。图9a，图9b，图9c和图9d显示c52b8和派姆单抗组合在panc08.13人-nsg小鼠中的效果。图9a显示肿瘤生长曲线。图9b显示来自在研究结束时收获的肿瘤的cd4+t细胞上的调节性t细胞％和cd69表达水平的cytof定量；图9c显示在终点血液样品中的血浆shla-g水平；图9d显示用10plexmsd(mesoscalediscovery)定量的在终点血液样品中的血浆ifnγ和il-8水平。图10显示在mdsc/t细胞抑制测定中，在4:1的t细胞与mdsc的比率下，人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)将mdsc的抑制能力降低到与嵌合抗ilt3抗体c52b8(mab73)可比的程度。图11显示使用从人类供体d001003835获得的mdsc细胞，在mdsc/t细胞抑制测定中，在4:1或8:1的t细胞与mdsc的比率下，人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)和派姆单抗组合的效果。图12显示使用从人类供体d001003180获得的mdsc细胞，在mdsc/t细胞抑制测定中，在8:1的t细胞与mdsc的比率下，人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)和派姆单抗组合的效果。图13显示使用从人类供体d001003507获得的mdsc细胞，在mdsc/t细胞抑制测定中，在4:1的t细胞与mdsc的比率下，人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)和派姆单抗组合的效果。图14显示使用从人类供体d001003428获得的mdsc细胞，在mdsc/t细胞抑制测定中，在8:1的t细胞与mdsc的比率下，人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)和派姆单抗组合的效果。图15显示了人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)和派姆单抗组合在il-10极化的人单核细胞衍生树突状细胞与同种异基因cd8+t细胞的混合淋巴细胞反应中的效果，孵育四天后测量培养物上清液中的干扰素γ(ifnγ)作为t细胞激活的读出。具体实施方式本发明提供了对在髓性免疫细胞的表面上表达的抑制性受体免疫球蛋白样转录物3(ilt3)具有特异性的非混杂单克隆抗体。定义“免疫球蛋白样转录物3”(在本文中缩写为“ilt3”，并且也称为lir-5，lilrb4，或cd85k)，如本文所用并且除非另有指明，是指ilt3家族的人类成员，其由髓样抗原呈递细胞(apc)如单核细胞，巨噬细胞和树突状细胞(例如，在存在il-10或维生素d3的情况下分化的单核细胞衍生树突状细胞)选择性表达。如本文所用，“抗体”是指完整的免疫球蛋白，包括重组产生的形式，并且包括表现出期望的生物学活性的抗体的任何形式。因此，它以最广泛的意义使用，具体包括但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)，多克隆抗体，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，人源化抗体，全人源抗体，双对位抗体，人源化骆驼科重链抗体和非人/人嵌合抗体。“亲本抗体”是在抗体出于预期用途而修饰之前，如用作人治疗性抗体的非人抗体的人源化，通过使免疫系统暴露于抗原而获得的抗体。在一个实施方式中，“抗体”是指包含通过二硫键相互连接的至少两个重链(hc)和两个轻链(lc)的糖蛋白，或其抗原结合部分。每条重链由重链可变区或结构域(在本文中缩写为vh)和重链恒定区或结构域组成。在某些天然存在的igg，igd和iga抗体中，重链恒定区由三个结构域ch1，ch2和ch3组成。在某些天然存在的抗体中，每个轻链均由轻链可变区或结构域(在这里缩写为vl)和轻链恒定区域或结构域组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。人vh包括六个家族成员：vh1，vh2，vh3，vh4，vh5和vh6，和人vl家族包括16个家族成员：vκ1，vκ2，vκ3，vκ4，vκ5，vκ6，vλ1，vλ2，，vλ3，vλ4，vλ5，vλ6，vλ7，vλ8，vλ9，和vλ10。这些家庭成员中的每一个都可以进一步分为特定的亚型。可以将vh和vl区进一步细分为高变区，称为互补决定区(cdr)，其间散布着更为保守的区域，称为框架区(fr)。每个vh和vl由三个cdr区和四个fr区组成，其从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：fr1，cdr1，fr2，cdr2，fr3，cdr3，fr4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种各样细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(clq)。对每个结构域分配氨基酸通常是根据以下的定义：sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,kabat,etal.；nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.；5thed.；nihpubl.no.91-3242(1991)；kabat(1978)adv.prot.chem.32:1-75；kabat,etal.,(1977)j.biol.chem.252:6609-6616；chothia,etal.,(1987)jmol.biol.196:901-917或chothia,etal.,(1989)nature342:878-883。通常，尽管抗体包含六个cdr，vh上三个，vl上三个，但现有技术认识到，在大多数情况下，重链的cdr3区是抗体特异性的主要决定因素，单独基于重链的cdr3的特异性抗体产生的实例是本领域已知的(例如，beiboeretal.,j.mol.biol.296:833-849(2000)；klimkaetal.,britishj.cancer83:252-260(2000)；raderetal.,proc.natl.acad.sci.usa95:8910-8915(1998)；xuetal.,immunity13:37-45(2000).参见kabatetal.(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(按照序列定义抗体的cdr区)；还参见chothiaandlesk(1987)j.mol.biol.196:901-917(按照结构定义抗体的cdr区))。表1中所示的以下一般规则可用于确定抗体序列中的cdr。存在极少数的例子，其中这些几乎不变的特征不出现；然而cys残基是最保守的特征。通常，基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包括两对相同的多肽链，每对具有一条“轻”链(约25kda)和一条“重”链(约50-70kda)。每条链的氨基末端部分包括约100至110个或更多氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。重链的羧基末端部分可以定义恒定区，该恒定区主要负责抗体的效应子功能。通常，人类轻链分为κ和λ轻链。此外，人类重链通常被分类为μ，δ，γ，α或ε，并且将抗体的同种型分别定义为igm，igd，igg，iga和ige。在轻链和重链中，可变区和恒定区由约12个或更多个氨基酸的“j”区相连，重链还包括约10个氨基酸的“d”区。通常参见fundamentalimmunology,ch.7(paul,w.,ed.,2nded.ravenpress,n.y.(1989)。抗体的重链可以包含或可以不包含末端赖氨酸(k)残基，或者末端甘氨酸和赖氨酸(gk)残基。因此，在本文的抗ilt3抗体的特定实施方式中，其包含缺少末端赖氨酸，但以甘氨酸残基终止的本文所示的重链恒定区氨基酸序列，进一步包括其中也缺少末端甘氨酸残基的实施方式。这是因为末端赖氨酸以及有时甘氨酸和赖氨酸一起可以在抗体表达期间被切割，或者当引入人体时被切割掉，而对抗体功效、稳定性或免疫原性没有明显的不利影响。在一些情况下，编码所述重链的核酸分子可以有意地省略编码末端赖氨酸的密码子或编码末端赖氨酸和甘氨酸的密码子。如本文所用，“抗原结合片段”是指抗体的片段，即保留与由全长抗体结合的抗原特异性结合的能力的抗体片段，例如保留一个或多个cdr区的片段。抗体结合片段的实例包括但不限于fab，fab'，f(ab')2和fv片段；双抗体；单链抗体分子，例如scfv；纳米抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。如本文所用，“fab片段”包含一条轻链和ch1以及一条重链的可变区。fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“fab片段”可以是抗体的木瓜蛋白酶切割的产物。如本文所用，“fab'片段”包含一条轻链和一条重链的一部分或片段，其包含vh结构域和ch1结构域以及ch1和ch2结构域之间的区域，使得可以在两个fab'片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成f(ab')2分子。如本文所用，“f(ab')2片段”包含两条轻链和两条重链，所述两条轻链和两条重链包含vh结构域和ch1和ch2结构域之间的恒定区的一部分，使得链间二硫键在两个重链之间形成。因此，f(ab')2片段由两个fab'片段组成，两个fab'片段通过两条重链之间的二硫键结合在一起。“f(ab')2片段”可以是抗体的胃蛋白酶切割的产物。如本文所用，“fv区”包括来自重链和轻链两者的可变区，但是缺少恒定区。这些和其他潜在的构造方法在chan&carter(2010)nat.rev.immunol.10:301中描述。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合部分可以通过重组dna技术或通过完整免疫球蛋白的酶促或化学裂解来产生。如本文中所使用的，“fc”区含有包含抗体的ch2和ch3结构域的两个重链片段。所述两个重链片段由两个或更多个二硫键和由ch3结构域的疏水性相互作用而保持在一起。如本文所用，“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包含与同一条多肽链中的轻链可变结构域(vl)连接的重链可变结构域(vh-vl或vl-vh)。通过使用太短以至于不允许同一条链上两个结构域之间配对的接头，这些结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体在例如ep404,097；wo93/11161；和holligeretal.(1993)proc.natl.acad.sci.usa90:6444-6448中有更全面的描述。对于工程化抗体变体的综述，一般参见holligerandhudson(2005)nat.biotechnol.23:1126-1136。如本文所用，“双特异性抗体”是具有两个不同的重/轻链对并因此具有两个不同的结合位点的人工杂合抗体。例如，双特异性抗体可包含第一重链/轻链对，其包含第一抗体的一条重链和一条轻链，其至少包含本文公开的抗ilt3抗体的六个cdr或其中六个cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，以及第二重/轻链对，其包含对ilt3以外的感兴趣的抗原具有特异性的第二抗体的一条重链和一条轻链。双特异性抗体可以通过多种方法产生，包括杂交瘤的融合或fab'片段的连接。参见例如songsivilai,etal.,(1990)clin.exp.immunol.79:315-321,kostelny,etal.,(1992)jimmunol.148:1547-1553。另外，双特异性抗体可以形成为“双抗体”(holliger,etal.,(1993)pnasusa90:6444-6448)或"janusins"(traunecker,etal.,(1991)emboj.10:3655-3659andtraunecker,etal.,(1992)int.j.cancersuppl.7:51-52)。如本文所用，“分离的”抗体或其抗原结合片段至少部分地不含来自产生它们的细胞或细胞培养物的其他生物分子，这样的生物分子包括核酸，蛋白质，脂质，碳水化合物或其他材料如细胞碎片和生长培养基。分离的抗体或抗原结合片段可以进一步至少部分地不含表达系统组分，例如来自宿主细胞或其生长培养基的生物分子。通常，术语“分离的”并非旨在指完全不存在这样的生物分子或不存在水，缓冲液或盐，也不是指包含所述抗体或片段的药物制剂的成分。如本文所用，“单克隆抗体”是指基本上均质的抗体群体，即，除了可以以少量存在的可能天然存在的突变以外，构成该群体的抗体分子在氨基酸序列上是相同的。相比之下，常规(多克隆)抗体制品通常包括在其可变结构域中具有通常对不同表位具有特异性的不同氨基酸序列的多种不同抗体。修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得，而不解释为要求通过任何特定方法生产所述抗体。例如，可以通过首先由kohleretal.(1975)nature256:495描述的杂交瘤方法来制备根据本发明使用的单克隆抗体，或可以通过重组dna方法制备(参见，例如，美国专利号4,816,567)。还可以使用例如clacksonetal.(1991)nature352:624-628和marksetal.(1991)j.mol.biol.222:581-597中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离“单克隆抗体”。也参见presta(2005)j.allergyclin.immunol.116:731。如本文所用，“嵌合抗体”是具有来自第一抗体的可变结构域和来自第二抗体的恒定结构域的抗体，其中(i)第一和第二抗体来自不同物种(u.s.pat.no.4,816,567；和morrisonetal.,(1984)proc.natl.acad.sci.usa81:6851-6855)或(ii)所述第一和第二抗体是来自不同同种型，例如，来自igg1抗体的可变结构域和来自igg4抗体的恒定结构域。一方面，可变结构域获自非人抗体，例如小鼠抗体(“亲本抗体”)，恒定结构域序列获自人抗体。在另一方面，可变结构域是来自小鼠抗体的人源化可变结构域和人抗体的恒定结构域。如本文所用，“人源化抗体”是指包含来自人和非人(例如鼠，大鼠)抗体的序列的抗体形式。通常，人源化抗体将包含至少一个且通常是两个可变结构域的全部，其中高变环对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有框架(fr)区是那些人免疫球蛋白序列的序列。人源化抗体可任选地包含人免疫球蛋白恒定区(fc)的至少一部分。“人源化”(也称为“重塑”或“cdr移植”)现已成为一种成熟的技术，用于降低异种来源(通常是啮齿动物)的单克隆抗体(mab)的免疫原性并改善效应子功能(adcc，补体激活，c1q结合)。使用分子生物学技术对工程mab进行工程改造，但是，将啮齿动物互补决定区(cdr)进行简单的cdr移植到人框架中通常会导致原始mab的结合亲和力和/或特异性丧失。为了使抗体人源化，人源化抗体的设计包括变体，例如cdr残基中的保守氨基酸置换，以及从啮齿动物mab残基向人构架区的反向取代(反向突变)。可以通过序列比较进行结构分析或通过分析可变区3d结构的同源性模型来识别或识别位置。亲和力成熟的过程最近已使用噬菌体文库来改变所选位置的氨基酸。类似地，已经使用许多方法来选择移植啮齿动物cdr的最合适的人框架。随着抗体结构已知参数的数据集的增加，这些技术的完善和精细化也随之增加。可以使用来自单个抗体的共有序列或种系序列，或来自几种不同人单克隆抗体的每个轻链或重链可变区内的框架序列片段。人源化的另一种方法是仅用人类单克隆抗体中发现的最常见残基修饰啮齿动物序列的表面残基，这种方法被称为“重铺表面”或“饰面”。人或人源化抗体通常在人中基本上是非免疫原性的。如本文所用，“非人氨基酸序列”相对于抗体或免疫球蛋白是指氨基酸序列，其是非人类哺乳动物的氨基酸序列的特性。该术语不包括从全人抗体文库获得的抗体或免疫球蛋白的氨基酸序列，其中文库中的多样性是通过计算机产生的(参见，例如，美国专利号8,877,688或8,691,730)。如本文所用，“效应子功能”指那些生物活性可归因于抗体的fc区，其随抗体同种型改变。抗体效应子功能的实例包括：c1q结合和补体依赖性细胞毒性(cdc)；fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)；吞噬作用；下调细胞表面受体(例如b细胞受体)；和b细胞活化。如本文所用，“保守修饰的变体”或“保守置换”是指氨基酸被具有相似特征(例如电荷，侧链大小，疏水性/亲水性，主链构象和刚性等)的其他氨基酸置换，使得可以经常进行更改而不改变蛋白质的生物学活性。本领域技术人员认识到，通常，多肽的非必要区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物活性(参见，例如，watsonetal.(1987)molecularbiologyofthegene,thebenjamin/cummingspub.co.,p.224(4thed.))。另外，结构或功能上相似的氨基酸的取代不太可能破坏生物活性。示例性保守置换在表2阐述。如本文所用，术语“表位”或“抗原决定簇”是指免疫球蛋白或抗体特异性结合的抗原(例如ilt3)上的位点。蛋白质抗原内的表位既可以由连续氨基酸(通常为线性表位)形成，也可以由蛋白质三级折叠并置的非连续氨基酸(通常为构象表位)形成。由连续氨基酸形成的表位通常但不总是在暴露于变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。连续的线性表位包含在抗原上的肽结构域，该肽结构域包含至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。非连续构象表位包含被抗体结合的抗原上的一个或多个肽结构域或区域，并散布有未被该抗体结合的一个或多个氨基酸或肽结构域，每个结构域独立地包含至少3、4、5、6、7，8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。确定给定抗体结合哪些表位的方法(即表位作图)是本领域众所周知的，包括例如免疫印迹和免疫沉淀测定法，其中测试重叠或连续的肽(例如来自ilt3)与给定的抗体(例如抗ilt3抗体)的反应性。确定表位的空间构象的方法包括本领域和本文所述的技术，例如x射线晶体学，二维核磁共振和hdx-ms(例如，参见epitopemappingprotocolsinmethodsinmolecularbiology,vol.66,g.e.morris,ed.(1996))。术语“表位作图”是指使用本领域和本文所述的技术，例如x射线晶体学，二维核磁共振和x射线晶体学，鉴定涉及抗体-抗原识别的抗原上的分子决定簇的过程。氢氘交换质谱法(hdx-ms)。术语“结合相同表位”涉及两种或更多种抗体，是指抗体结合相同段的氨基酸残基或氨基酸片段的组合，如通过给定的方法测定。确定抗体是否与本文所述的抗体结合“ilt3上的相同表位”的技术包括表位作图方法，例如对抗原:抗体复合物晶体进行x射线分析，从而提供表位的原子分辨率，和hdx-ms。监视抗体与抗原片段(例如蛋白水解片段)或抗原突变变异的结合的其他方法，其中结合的丧失是由抗原序列内氨基酸残基的修饰导致，通常认为是表位成分的指示(例如丙氨酸扫描诱变--cunningham&wells(1985)science244：1081)。另外，也可以使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于感兴趣的抗体从组合噬菌体展示肽库中亲和分离特定短肽的能力。“与另一种抗体竞争结合靶标，例如ilt3”的抗体是指抑制(部分或完全)另一种抗体与靶标，即ilt3的结合的抗体。可以使用已知的竞争实验来确定两种抗体是否彼此竞争结合靶标，即，一种抗体是否以及在何种程度上抑制另一种抗体与靶标的结合。在某些实施方式中，抗体与另一抗体竞争并抑制另一抗体与靶标的结合至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或100％。抑制或竞争的水平可能会有所不同，具体取决于哪种抗体是“封闭抗体”(即首先与靶标孵育的冷抗体)。竞争测定法可以例如在edharlowanddavidlane,coldspringharbprotoc；2006；doi:10.1101/pdb.prot4277orinchapter11of"usingantibodies"byedharlowanddavidlane,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,usa1999描述。竞争性抗体结合相同的表位，重叠的表位或邻近的表位(例如，通过位阻证明)。其他竞争性结合测定包括：固相直接或间接放射免疫测定(ria)，固相直接或间接酶免疫测定(eia)，夹心竞争测定(参见stahli等，methodsinenzymology9：242(1983))；等等。固相直接生物素-抗生物素蛋白eia(参见kirkland等，j.immunol.137：3614(1986))；固相直接标记测定法，固相直接标记夹心测定法(见harlowandlane,antibodies:alaboratorymanual,coldspringharborpress(1988))；使用1-125标记的固相直接标记ria(参见moreletal.,mol.immunol.25(1):7(1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白eia(cheung等，virology176：546(1990))；和直接标记ria(moldenhauer等，scand.j.immunol.32：77(1990))。如本文所用，就抗原或分子例如人ilt3而言，“特异性结合”是指抗体或其他配体全部或部分与人ilt3的优先结合，而不是与其他分子，特别是在人血液或血清中发现的分子。抗体通常以高亲和力特异性结合其关联抗原，这可通过10-7至10-11m或更小的解离常数(kd)反映出来，任何大于10-6m的kd通常被看作是表示非特异性结合。如本文所用，与人ilt3“特异性结合”或“特异性结合”的抗体是指以高亲和力与人ilt3结合的抗体，这意味着kd为10-7m或更小，在特定实施方式中，kd为10-8m或更小，或5×10-9m或更小，或10-8m至10-11m或更小，但不以可测量的结合与紧密相关的蛋白如人ilt5，人ilt7，人ilt8，和人ilt11结合，如在细胞elisa或biacore分析中使用10μg/ml抗体确定的。如本文所用，如果抗原与给定抗原表现出高度的氨基酸序列同一性，例如，如果其与给定抗原的氨基酸序列表现出至少80％，至少90％，至少90％，95％，至少97％或至少99％或更大的氨基酸序列同一性，则抗原与给定抗原“基本上相同”。举例来说，特异性结合人ilt3的抗体也可以与来自某些非人灵长类物种(例如猕猴或食蟹猴)的ilt3交叉反应。如本文所用，“分离的核酸分子”是指基因组，mrna，cdna或合成来源的dna或rna或其某种组合，其与在自然界中发现了分离的多核苷酸的多核苷酸的全部或部分不相关。或与本质上未连接的多核苷酸连接。为了本公开的目的，应当理解，“包含”特定核苷酸序列的核酸分子不包含完整的染色体。除特定序列外，“包含”特定核酸序列的分离的核酸分子可包括多达十个或甚至多达二十个或更多个其他蛋白质或其部分或片段的编码序列，或可包括控制所记载的核酸序列的编码区的表达的可操作连接的调控序列，和/或可以包括载体序列。如本文所用，“治疗”是指向患有一种或多种疾病的受试者或患者内部或外部施用治疗剂，例如含有本发明的任何抗体或其抗原结合片段的组合物。该药剂对其具有治疗活性或预防活性的症状或疑似疾病。通常，以有效减轻被治疗的受试者或人群中的一种或多种疾病症状的量施用所述药物，无论是通过以任何临床可测量的程度诱导此类症状的消退还是抑制其发展。有效减轻任何特定疾病症状的治疗剂的量可以根据诸如疾病状态，患者的年龄和体重以及药物在受试者中引起期望的反应的能力等因素而变化。可以通过医师或其他熟练的医疗保健提供者通常使用的任何临床测量来评估疾病症状是否得到缓解，以评估该症状的严重程度或进展状态。该术语进一步包括推迟与病症有关的症状的发展和/或减轻该病症的症状的严重性。该术语还包括改善现有的无法控制或不想要的症状，预防其他症状以及改善或预防此类症状的根本原因。因此，该术语表示已经向患有病症，疾病或症状或具有发展这种病症，疾病或症状的潜力的人或动物受试者赋予了有益的结果。如本文所用，“治疗”如其适用于人类或兽医受试者，是指治疗性治疗以及诊断应用。“治疗”当应用于人或兽医受试者，涵盖使或本发明的抗体或抗原结合片段接触人或动物受试者。如本文所用，“治疗有效量”是指足以在被治疗的受试者中实现所需效果的特定物质的量。例如，这可以是当与派姆单抗共同施用时抑制ilt3活化所必需的量或对于增强派姆单抗应答性所必需的量。如本文所用，术语“pd-1”是指程序性死亡1(pd-1)蛋白，其是t细胞调节剂的扩展的cd28/ctla-4家族的抑制成员(okazaki等(2002)curropinimmunol14：391779-82；bennett等(2003)j.immunol.170：711-8)。cd28家族的其他成员包括cd28，ctla-4，icos和btla。pd-1基因编码55kda的i型跨膜蛋白(agata等，(1996)intimmunol.8：765-72)。已经确定了pd-1的两个配体pd-l1(b7-h1)和pd-l2(b7-dc)，其已显示在与pd-1结合后下调t细胞活化(freeman等(2000(j.exp.med.192：1027-34；carter等(2002)eur.j.immunol.32：634-43)。pd-1被称为负调节tcr信号的免疫抑制蛋白(ishida，y.等(1992)emboj.11：3887-3895；blank，c.等(epub2006年12月29日).immunol.immunother.56(5)：739-745)。pd-1和pd-l1之间的相互作用可以充当免疫检查点，其例如可以导致肿瘤浸润淋巴细胞减少，t细胞受体介导的增殖减少和/或癌细胞的免疫逃逸(dong等(2003)j.mol.med.81：281-7；blank等(2005)cancerimmunol.immunother.54：307-314；konishi等(2004)clin.cancerres.10：5094-100)。可以通过抑制pd-1与pd-l1或pd-l2的局部相互作用来逆转免疫抑制。当pd-1与pd-l2的相互作用也被阻断时，这种作用是加和性的(iwai等(2002)proc.nat'l.acad.sci.usa99：12293-7；brown等(2003j.immunol.170：1257-66)。抗体和抗原结合片段本发明提供了分离的嵌合的，人源化和人抗体和抗原结合片段，其特异性结合ilt3，且与密切相关的蛋白质(例如，ilt5，ilt7，ilt8，和ilt11)没有可测量的结合，如使用10μg/ml抗体在细胞elisa或biacore测定法确定的。抗ilt3抗体增加抗原呈递细胞和树突状细胞的活性，降低单核细胞阻遏物的活性，并增加t细胞的启动。因此，本发明还包括使用抗ilt3抗体在单一疗法治疗癌症的用途和与抗pd-1或抗pd-l1抗体，用于在第一，二线或三线疗法中治疗癌症的用途。抗ilt3抗体包含按照氨基酸序列由本文公开的任何抗体，并包括任何抗体，其包含(i)按照氨基酸序列由本文公开的抗体的至少一个，两个，三个，四个，五个，或六个cdr；或(ii)虽然没有本文公开的cdr氨基酸序列，但其与本发明公开的抗体结合ilt3上的相同表位，且可调节ilt3受体信号，使得该抗体增加抗原呈递细胞和树突状细胞的活性，减少抑制单核细胞的活性，并增加t细胞的启动能力。在具体的方面，所述抗体没有与人ilt5，人ilt7，人ilt8，和人ilt11可测量的结合，如使用10μg/ml抗体在细胞elisa或在biacore测定中确定的。该术语特定地排除了包含以下抗体的至少一个cdr的抗体：抗体zm4.1或抗体9b11或美国专利号7,777,008和8,901,281或美国专利号20090202544，20150110714。20150139986，和20170267759；以及国际公布wo2013043569，wo2013181438，wo2014116846，wo2016049641，wo2016127427，wo2018089300和wo2018148494中公开的任何其他抗体。抗ilt3抗原结合片段等包括包含分子的任何蛋白质或肽，所述分子包含(i)按照氨基酸序列由本文公开的抗ilt3抗体的至少一部分，(ii)按照氨基酸序列由本文公开的抗体的至少一个，两个，三个，四个，五个，或六个cdr，或(iii)虽然没有本文公开的cdr氨基酸序列，但其与本发明公开的抗体结合ilt3上的相同表位，且可调节ilt3受体信号，使得该抗原结合片段增加抗原呈递细胞和树突状细胞的活性，减少抑制单核细胞的活性，并增加t细胞的启动能力。在具体的方面，所述抗原结合片段没有与人ilt5，人ilt7，人ilt8，和人ilt11可测量的结合，如使用10μg/ml该抗ilt3抗原结合片段在细胞elisa或在biacore测定中确定的。该术语特定地排除了包含以下抗体的至少一个cdr的抗原结合片段：抗体zm4.1或抗体9b11或美国专利号7,777,008和8,901,281或美国专利号20090202544，20150110714。20150139986，和20170267759；以及国际公布wo2013043569，wo2013181438，wo2014116846，wo2016049641，wo2016127427，wo2018089300和wo2018148494中公开的任何其他抗体。在进一步的实施方式中，抗ilt3抗体包括任何抗体，其包含(i)按照氨基酸序列由本文公开的抗体的至少hc-cdr3；或(ii)虽然没有本文公开的hc-cdr3氨基酸序列，但其与本发明公开的抗体结合ilt3上的相同表位，且可调节ilt3受体信号，使得该抗体增加抗原呈递细胞和树突状细胞的活性，减少抑制单核细胞的活性，并增加t细胞的启动能力。在具体的方面，所述抗体没有与人ilt5，人ilt7，人ilt8，和人ilt11可测量的结合，如使用10μg/ml抗体在细胞elisa或在biacore测定中确定的。该术语特定地排除了包含以下抗体的至少一个cdr的抗体：抗体zm4.1或抗体9b11或美国专利号7,777,008和8,901,281或美国专利号20090202544，20150110714。20150139986，和20170267759；以及国际公布wo2013043569，wo2013181438，wo2014116846，wo2016049641，wo2016127427，wo2018089300和wo2018148494中公开的任何其他抗体。抗ilt3抗原结合片段等包括包含分子的任何蛋白质或肽，所述分子包含(i)按照氨基酸序列由本文公开的抗ilt3抗体的至少一部分，(ii)按照氨基酸序列由本文公开的抗体的至少hc-cdr3，或(iii)虽然没有本文公开的hc-cdr3氨基酸序列，但其与本发明公开的抗体结合ilt3上的相同表位，且可调节ilt3受体信号，使得该抗原结合片段增加抗原呈递细胞和树突状细胞的活性，减少抑制单核细胞的活性，并增加t细胞的启动能力。在具体的方面，所述抗原结合片段没有与人ilt5，人ilt7，人ilt8，和人ilt11可测量的结合，如使用10μg/ml该抗ilt3抗原结合片段在细胞elisa或在biacore测定中确定的。该术语特定地排除了包含以下抗体的至少一个cdr的抗原结合片段：抗体zm4.1或抗体9b11或美国专利号7,777,008和8,901,281或美国专利号20090202544，20150110714。20150139986，和20170267759；以及国际公布wo2013043569，wo2013181438，wo2014116846，wo2016049641，wo2016127427，wo2018089300和wo2018148494中公开的任何其他抗体。在特定的实施方式中，抗ilt3抗体是人或人源化抗ilt3抗体或抗原结合片段或嵌合抗ilt3抗体或抗原结合片段，其包含本文公开的抗ilt3抗体分子的hc-cdr3或如表3所示的h3-cdr3。在特定的实施方式中，抗ilt3抗体是人或人源化抗ilt3抗体或抗原结合片段或嵌合抗ilt3抗体或抗原结合片段，其包含本文公开的或表3中的hc-cdr1，hc-cdr2，hc-cdr3，lc-cdr1，lc-cdr2和lc-cdr3。在特定实施方式中，抗ilt3抗体是人或人源化抗ilt3抗体或抗原结合片段或嵌合抗ilt3抗体或抗原结合片段，在每种情况下均包含具有重链互补决定区(hc-cdr)3的重链可变结构域(vh)，其包含选自seqidno:22、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列，或具有与选自seqidno:22、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列具有3、2或1个差异的氨基酸序列。在另一个实施方式中，抗体或抗原结合片段结合人ilt3上的表位，其中该表位包含选自seqidno:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列中的一个或多个的至少一个氨基酸。在另一个实施方式中，抗体或抗原结合片段结合人ilt3上的表位，其中该表位包含seqidno:3、4、5、6、7和8所示的氨基酸序列。在特定实施方式中，氨基酸序列差异是保守改变/置换。在特定的实施方式中，抗ilt3抗体是本文公开的人源化或嵌合的抗ilt3抗体。在特定实施方式中，抗ilt3抗体是人或人源化抗ilt3抗体或抗原结合片段或嵌合抗ilt3抗体或抗原结合片段，其结合由本文公开的抗ilt3抗体结合的相同表位或与本文公开的抗ilt3抗体竞争结合，且所述抗体包含本文公开的抗ilt3抗体的少于三个cdr或不含本文公开的抗ilt3抗体的cdr。本发明进一步提供了抗体或其抗原结合片段，其包含(i)抗免疫球蛋白样转录物3(ilt3)抗体的至少六个互补决定区(cdr)；或(ii)抗ilt3抗体的至少六个cdr，其中六个cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或组合；其中抗ilt3抗体的六个cdr包含具有seqidno:17、47、55、63、71、79、87、95或103所示氨基酸序列的重链(hc)-cdr1；具有seqidno:18，48，56，64，72，80，88，96，或104所示氨基酸序列的hc-cdr2；具有seqidno:22、49、57、65、73、81、89、97或105所示氨基酸序列的hc-cdr3；具有seqidno:27、50、58、66、74、82、90、98或106所示氨基酸序列的轻链(lc)-cdr1；具有seqidno:43、51、59、67、75、83、91、99或107所示氨基酸序列的lc-cdr2；具有seqidno:44、60、68、76、84、92、100或108所示氨基酸序列的lc-cdr3；并且，其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合人或猕猴ilt3或人和猕猴ilt3两者。在特定的实施方式中，氨基酸序列差异是保守改变/置换。在特定的实施方式中，本发明提供了抗体或抗原结合片段，其包含抗ilt3抗体的六个cdr，所述抗ilt3抗体包含具有seqidno:17所示氨基酸序列的重链(hc)-cdr1；具有seqidno:19、20或21所示氨基酸序列的hc-cdr2；具有seqidno:23、24、25或26所示氨基酸序列的hc-cdr3；具有seqidno:34、35、36、37、38、39、40、41或42所示氨基酸序列的轻链(lc)-cdr1；具有seqidno:43所示氨基酸序列的lc-cdr2；和具有seqidno:44所示氨基酸序列的lc-cdr3。在特定的实施方式中，本发明提供了抗体或抗原结合片段，其包含抗ilt3抗体的六个cdr，所述抗ilt3抗体具有具有seqidno:17所示氨基酸序列的重链(hc)-cdr1；具有seqidno:20所示氨基酸序列的hc-cdr2；具有seqidno:23所示氨基酸序列的hc-cdr3；具有seqidno:41所示氨基酸序列的轻链(lc)-cdr1；具有seqidno:43所示氨基酸序列的lc-cdr2；和具有seqidno:44所示氨基酸序列的lc-cdr3。在具体实施方式中，本发明提供了上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域(vh)，其具有选自以下的框架：人类vh1，vh2，vh3，vh4，vh5和vh6家族，及其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体；和(b)轻链可变结构域(vl)，其具有选自以下的框架：人vκ1，vκ2，vκ3，vκ4，vκ5，vκ6，vλ1，vλ2，，vλ3，vλ4，vλ5，vλ6，vλ7，vλ8，vλ9，和vλ10家族，及其具有1，2，3，4，5，6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，本发明提供上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含人igg1，igg2，igg3或igg4重链(hc)恒定结构域或其变体，其包含与天然igg1，igg2，igg3或igg4同种型的氨基酸序列相比，1、2、3、4、5，6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在特定的实施方式中，本发明提供上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含人κ或λ轻链恒定结构域或其变体，其包含与天然人κ或λ轻链结构域的氨基酸序列相比，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸的取代，添加，缺失或其组合。在具体实施方式中，本发明提供了上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)人重链可变结构域(vh)，其具有选自人vh3家族的框架，和人轻链可变结构域(vl)，其具有选自人vκ1，vκ3，和vκ4家族的框架；(ii)人igg1或igg4重链(hc)恒定结构域或其与天然igg1或igg4同种型的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体；(iii)人κ或λ轻链恒定结构域或其与天然人κ或λ轻链结构域的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体。在特定的实施方式中，氨基酸序列差异是保守改变/置换。在特定的实施方式中，本发明提供了上述抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含具有以下氨基酸序列所示的重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)：分别为seqidno:15和seqidno:16；seqidno:45和seqidno:46；seqidno:53和seqidno:54；seqidno:61和seqidno:62；seqidno:69和seqidno:70；seqidno:77和seqidno:78；分别为seqidno:85和seqidno:86；seqidno:93和seqidno:94；seqidno:101和seqidno:102。在特定的实施方式中，本发明提供了上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含具有seqidno:117、118、119、120、121、122、123、124或125所示氨基酸序列的重链可变结构域(vh)以及具有seqidno:126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140或141所示氨基酸序列的轻链可变结构域(vl)。在特定的实施方式中，本发明提供了上述抗体或抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含具有seqidno:118所示氨基酸序列的重链可变结构域(vh)和具有seqidno:140所示氨基酸序列的轻链可变结构域(vl)。在特定的实施方式中，本发明提供上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含重链(hc)恒定结构域，所述恒定结构域包含seqidno:9、10、11、12或13所示氨基酸序列以及seqidno:9、11、12或13的变体，其中hc缺少c端赖氨酸或甘氨酸赖氨酸。在特定的实施方式中，本发明提供上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含轻链(lc)恒定结构域，所述轻链恒定结构域包含seqidno:14所示氨基酸序列。在特定的实施方式中，本发明提供上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含重链(hc)，所述重链包含seqidno:142、143、144、148、149、150、167，168、169、170、174、175、176、177、178、182、183、184、185、186、187、191、192或193的氨基酸序列，以及包含seqidno:143，144，148，149，150，167，168，169，170，174，或175的氨基酸序列的hc的变体，其中hc缺少c-末端赖氨酸或甘氨酸-赖氨酸。在特定的实施方式中，本发明提供了上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含轻链(lc)，所述轻链(lc)包含seqidno:151、152、153、154、155、156，157、158、159、160、161、162、163、164、165或166所示氨基酸序列。在特定的实施方式中，本发明提供上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含重链(hc)，所述重链包含seqidno:142、143、144、148、149、150、167，168、169、170、174、175、176、177、178、182、183、184、185、186、187、191、192或193的氨基酸序列；和轻链(lc)，所述轻链包含seqidno:151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165或166所示氨基酸序列，以及包含seqidno:143、144、148、148、149、150、167、168、169、170、174或175的氨基酸序列的hc的变体，其中hc缺少c端赖氨酸或甘氨酸赖氨酸。在特定的实施方式中，本发明提供了选自表4所示抗体的抗体。在特定的实施方式中，本发明提供了上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含具有seqidno:143所示氨基酸序列的重链(hc)和包含seqidno:165所示氨基酸序列的轻链(lc)，以及其中hc缺少c端赖氨酸或甘氨酸赖氨酸的变体。在特定的实施方式中，本发明提供上述抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含人igg1，igg2，igg3或igg4重链(hc)恒定结构域或其与天然igg1，igg2，igg3或igg4同种型的氨基酸序列相比，包含1、2、3、4、5，6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的变体，及其其中hc缺少末端赖氨酸或甘氨酸赖氨酸的辩题。在一些实施方式中，不同的恒定结构域可融合到包含本文所提供的cdr的vl和vh区域。在特定实施方式中，可以将包含本文提供的cdr的vh区与人igg1，igg2，igg3或igg4重链(hc)恒定结构域或其与天然或野生型igg1，igg2，igg3或igg4同种型的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7，8，9或10个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合的变体，以及其中hc缺少变体c端赖氨酸或甘氨酸赖氨酸的变体融合。在特定的实施方式中，抗ilt3抗体(或抗原结合片段)具有改变的效应子功能，并且可以包含除天然(野生型)人igg1以外的重链恒定结构域，例如具有消除或最小化一种或多种效应子功能的突变的人igg1，包括结合补体，人igg4或杂合人igg1/人igg4的能力，以及其中hc缺少c端赖氨酸或甘氨酸-赖氨酸的变体。虽然天然人类igg1抗体提供长半衰期和效应物功能，如补体激活和抗体依赖性细胞的细胞毒性，但这样的活性可能对于抗体的所有用途并不是期望的。因此，在特定实施方式中，期望的是重链恒定结构域或fc具有很小的或减少的效应子功能(“效应子较低”)。在那些情况下，抗ilt3hc可变结构域可以与通常已知是效应子较低的人igg4恒定结构域融合，或者已经突变成效应子较低的igg1恒定结构域融合。与包含野生型iggfc区的多肽相比，这些效应子较低的分子与人fcγriiia，fcγriia和fcγ.ri的结合极小或减少，其中与人fcγriiia，fcγriia和fcγri的亲和力相较于包含野生型igg恒定结构域的多肽降低了1.15至100倍，其中所述分子诱导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)是包含野生型人igg1型恒定结构域的多肽诱导的adcc的0-20％。因此，在特定的实施方式中，本发明包括包含人igg4恒定结构域的嵌合或人源化抗ilt3抗体及其抗原结合片段。在另一个实施方式中，可以将人igg4恒定结构域修饰为与天然(野生型)人igg4恒定结构域(swiss-prot登录号p01861.1)在eu系统中对应于位置228的位置不同，并且kabat系统中的第241位，其中hc恒定结构域第108位(ser108)的天然丝氨酸被脯氨酸(pro)取代，例如参见seqidno:9。该修饰防止在位置106的半胱氨酸(cys106)和位置109的半胱氨酸(cys109)之间形成潜在的链间二硫键，这对应于eu系统中的cys226和cys229以及kabat系统中的cys239和cys242，可能会干扰适当的链内二硫键形成。参见angaletal.mol.imunol.30:105(1993)；还参见(schuurman等，mol.immunol.38：1-8，(2001)；seqidno:14和41)。在特定的实施方式中，人igg4恒定结构域除s228p取代外还可包括l235e取代。在一个其它实施方式中，嵌合或人源化抗ilt3抗体可以融合到修饰的人igg1恒定结构域，其已经被修饰为是效应子较低的。在一个实施方式中，人igg1hc可以包含人igg2hc残基在位置233-236和igg4hc残基在位置327，330和331的置换以极大降低adcc和cdc(armouretal.,eurjimmunol.29(8):2613-24(1999)；shieldsetal.,jbiolchem.276(9):6591-604(2001))。在特定实施方式中，抗体包含人igg1重链(hc)恒定结构域或其变体，其与天然igg的氨基酸序列相比包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合，其提供了具有降低的或很小的效应子功能的抗体。在特定方面，igg1已被修饰为包含l234a，l235a和d265s突变或由l234a，l235a和d265s突变组成，以使fc效应子较低。在美国专利号8,969,526中可以找到可用于使igg1fc效应子较低的其他突变。在另一个实施方式中，将人igg1hc修饰为在hc的297位附近缺少天冬酰胺(asn)残基的n-糖基化。n-糖基化的共有序列是asn-xaa-ser/thr(其中xaa是除pro以外的任何氨基酸)；在igg1中，n-糖基化共有序列是asn-ser-thr。可以通过用另一种氨基酸例如gln的密码子代替编码hc的核酸分子中第297位的asn的密码子来实现修饰。可替换地，密码子的ser可以与密码子为pro取代或密码子对苏氨酸可以与除了密码子的ser任何密码子来代替，例如，n297a或n297d。这种修饰的igg1分子几乎没有或没有可检测的效应子功能。或者，所有三个密码子均被修饰。在另一个实施方式中，修饰人igg1恒定结构域以包含一个或多个选自e233p，l234a，l235a，l235e，n297a，n297d，d265s和p331s的氨基酸置换，其中所述残基是根据kabat的eu索引编号，并且其中所述多肽显示出与包含野生型igg恒定结构域区的多肽相比，与人fcγriiia的和/或对fcγriia和/或fcγri降低的亲和力。在特定实施方式中，人igg恒定结构域包含例如seqidno:4所示的l234a，l235a和d265s的取代。在特定的实施方式中，人igg1恒定结构域在位置pro329处包含氨基酸置换和至少一个其他氨基酸置换e233p，l234a，l235a，l235e，n297a，n297d，d265s和p331s。这些和其他替代在wo9428027；wo2004099249；wo20121300831,u.s.patentnos.9,708,406；8,969,526；9,296,815；sondermannetal.nature406,267-273(20jul.2000)中公开。在本发明的一个实施方式中，所述抗ilt3抗体或抗原结合片段包括实施方式，其中六个cdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合，包括全四聚体结构，其具有两个轻链和两个重链(包括恒定区)。每个轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，通常，完整的抗体具有两个结合位点。除了双特异性抗体外，两个结合位点通常相同。在特定的实施方式中，本发明提供了表4中所示的抗ilt3抗体。除了在vh的101位上包含色氨酸残基的置换的那些抗体以外，本文公开的抗体结合人ilt3。如实施例4中所述，通过氢-氘交换质谱法(hdx-ms)进行的表位映射显示，本文公开的抗ilt3抗体结合至ilt3的细胞外结构域的d1和d2结构域之间的边界附近的细胞外结构域上的表位。使用hdx-ms确定的该表位表明，由本文公开的抗ilt3抗体结合的表位包含或由选自seqidno:3，4，5，6，7，和8的肽结构域氨基酸序列中的一个或多个内的至少一个氨基酸组成。在进一步的实施方式中，所述表位包含或由选自seqidno:3，4，5，6，7，和8的肽结构域氨基酸序列中的一个或多个组成。在某些实施方式中，所述表位包含或由选自seqidno:3，4，5，6，7，和8的肽结构域氨基酸序列中的每一个组成且在hdx-ms中确定。在具体实施方式中，所述表位包含或由选自seqidno:3，4，5，6，7，和8的肽结构域氨基酸序列中的一个或多个组成。在特定实施方式中，所述表位包含或由seqidno:3，4，5，6，7，和8所示的肽结构域组成。本发明还提供了嵌合的、人源化的或人抗体或抗原结合片段，其结合ilt3上的表位，其中所述表位包含或由包含如通过氢-氘交换质谱测定(hdx-ms)分析确定的seqidno:3，4，5，6，7，和8所示氨基酸序列显示的氨基酸序列的肽结构域中的一个或多个内的至少一个氨基酸组成。在另一个实施方式中，本发明进一步提供了与ilt3上的表位结合的嵌合的、人源化或人抗体或抗原结合片段，其中所述表位包含或由seqidno:3，4，5，6，7，和8中的一个或多个显示的肽结构域内的氨基酸组成。在某些实施方式中，所述表位包含或由如通过hdx-ms确定且示于图3a的热图中确定的肽结构域中的每一个组成。本发明进一步提供了嵌合的、人源化或人抗体或抗原结合片段，其交叉阻断抗体与ilt3上的表位结合，所述抗体包含具有seqidno:15所示氨基酸序列的重链可变结构域和具有seqidno:16所示氨基酸序列的轻链可变结构域。在进一步的实施方式中，所述表位包含或由肽结构域中的一个或多个内的至少一个氨基酸组成，所述肽结构域包含或由如通过氢-氘交换质谱测定(hdx-ms)分析确定的seqidno:3，4，5，6，7，和8所示氨基酸序列显示的氨基酸序列组成。在进一步的实施方式中，所述表位包含或由seqidno:3，4，5，6，7，和8中的一个或多个所示的肽结构域内的氨基酸组成。在某些实施方式中，所述表位包含或由如通过hdx-ms确定的肽结构域中的每一个中的至少一个氨基酸组成。本发明进一步提供了双特异性抗体和抗原结合片段，其包含结合ilt3的第一抗体或抗原结合片段和结合ilt3以外的分子的第二抗体或抗原结合片段，其中第一抗体或抗原结合片段至少包含具有选自seqidno:22，49，57、65，73，81，89，97，和105的氨基酸序列，或具有与选自seqidno:22、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列具有3、2或1个差异的氨基酸序列的hc-cdr3，其中第一抗体结合ilt3表位，所述表位包含seqidno:3，4，5，6，7，和8的序列内的氨基酸，和第二抗体结合ilt3以外的分子，及其使用方法。本发明进一步提供了双特异性抗体和抗原结合片段，其包含结合ilt3的第一抗体或抗原结合片段和结合ilt3以外的分子的第二抗体或抗原结合片段，其中第一抗体或抗原结合片段至少包含抗ilt3抗体或其其中所述cdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合实施方式的六个cdr，并且其中所述第一抗体结合ilt3表位，所述表位包含seqidno:3，4，5，6，7，和8的序列内的氨基酸，和第二抗体结合ilt3以外的分子，及其使用方法。本发明进一步提供了双互补位抗体(对同一抗原上的不同表位具有结合特异性的抗体)，其具有第一抗体的第一重链/轻链对，其包含至少hc-cdr3，所述所述hc-cdr3具有选自seqidno:22、49、57、65、73、81、89、97和105的氨基酸序列，或具有与选自seqidno:22，49，57、65，73，81，89，97，和105的氨基酸序列具有3、2或1个差异的氨基酸序列；其中所述第一重链/轻链对结合ilt3表位，所述表位包含seqidno:3，4，5，6，7，和8的序列内的氨基酸，并且所述第二抗体结合ilt3以外的分子，第二抗体的第二重链/轻链对具有不同于由第一重/轻链对识别的表位的针对抗ilt3表位的特异性。本发明进一步提供了双互补位抗体(对同一抗原上的不同表位具有结合特异性的抗体)，其具有第一抗体的第一重链/轻链对，其包含抗ilt3抗体或其其中cdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合的实施方式的至少六个cdr，其中所述第一抗体结合ilt3表位，所述表位包含seqidno:3，4，5，6，7，和8的序列内的氨基酸，其中所述第一重链/轻链对结合ilt3表位，所述表位包含seqidno:3，4，5，6，7，和8的序列内的氨基酸，和所述第二抗体结合ilt3以外的分子，第二抗体的第二重链/轻链对具有不同于由第一重/轻链对识别的表位的针对抗ilt3表位的特异性。药物组合物与施用为了制备抗ilt3抗体或其抗原结合片段的药物或无菌组合物，将抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体或赋形剂混合。参见，例如，remington'spharmaceuticalsciencesandu.s.pharmacopeia:nationalformulary,mackpublishingcompany,easton,pa(1984)和u.s.pharmacopeialconvention(usp)12601twinbrookparkway,rockville,md20852-1790,usa，在网上持续更新。治疗和诊断试剂的制剂可通过以下形式与药用载体，赋形剂或稳定剂混合来制备，例如，冷冻干燥粉末，浆液，水溶液或悬浮液(参见，例如，hardman,etal.(2001)goodmanandgilman’sthepharmacologicalbasisoftherapeutics,mcgraw-hill,newyork,ny；gennaro(2000)remington:thescienceandpracticeofpharmacy,lippincott,williams,andwilkins,newyork,ny；avis,etal.(eds.)(1993)pharmaceuticaldosageforms:parenteralmedications,marceldekker,ny；lieberman,etal.(eds.)(1990)pharmaceuticaldosageforms:tablets,marceldekker,ny；lieberman,etal.(eds.)(1990)pharmaceuticaldosageforms:dispersesystems,marceldekker,ny；weinerandkotkoskie(2000)excipienttoxicityandsafety,marceldekker,inc.,newyork,ny)。在另一个实施方式中，根据physicians'deskreference2017(thomsonhealthcare；第75版(2002年11月1日))将包含本文公开的抗体或抗体片段的组合物施用于受试者。施用抗体分子的方法是本领域已知的，并在下面描述。所使用的分子的合适剂量将取决于受试者的年龄和体重以及所使用的特定药物。抗ilt3抗体或抗原结合片段的剂量和治疗方案可以由技术人员确定。在某些实施方式中，抗ilt3抗体或抗原结合片段以约1至30mg/kg，例如约5至25mg/kg，约10至20的剂量通过注射(例如，皮下或静脉内)施用。mg/kg，约1至5mg/kg或约3mg/kg。在一些实施方式中，抗ilt3抗体或抗原结合片段以约1mg/kg，约3mg/kg或10mg/kg，约20mg/kg，约30mg/kg或约40mg/kg。在一些实施方式中，以约1-3mg/kg或约3-10mg/kg的剂量施用抗ilt3抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约0.5-2、2-4、2-5、5-15或5-20mg/kg的剂量施用抗ilt3抗体或抗原结合片段。给药时间表可以从例如每周一次到每2、3或4周一次变化。在一个实施方式中，每隔一周以约10至20mg/kg的剂量施用抗ilt3抗体或抗原结合片段。给药方式可以变化。合适的给药途径优选是肠胃外或皮下的。其他给药途径可包括口服，经粘膜，皮内，直接心室内，静脉内，鼻内，吸入，吹入或动脉内。在特定实施方式中，抗ilt3抗体或其抗原结合片段可以通过侵入性途径例如通过注射来施用。在本发明的其他实施方式中，抗ilt3抗体或其抗原结合片段或其药物组合物可以静脉内，皮下，动脉内或通过吸入，气雾剂递送施用。通过非侵入性途径(例如口服；例如在丸剂，胶囊或片剂中)的给药也在本发明的范围内。组合物可以与本领域已知的医疗装置一起施用。例如，本发明的药物组合物可以通过用皮下注射针注射来施用，所述皮下注射针包括例如预填充的注射器或自动注射器。本文公开的药物组合物还可以与无针皮下注射装置一起施用；优选地，可以使用无针皮下注射装置。例如美国专利号6,620,135中公开的设备；6,096,002；5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824或4,596,556。本文公开的药物组合物也可以通过输注施用。施用药物组合物的众所周知的植入物和模块的实例包括：美国专利号4,487,603公开了一种用于以受控的速率分配药物的可植入的微输液泵；美国专利no.4,447,233公开了一种用于以精确的输注速率输送药物的药物输注泵。美国专利号4,447,224公开了一种用于连续药物输送的可变流量可植入输注设备。美国专利。美国专利4,439,196公开了一种具有多腔室的渗透药物输送系统。许多其他此类植入物，递送系统和模块是本领域技术人员众所周知的。施用方案取决于几个因素，包括治疗性抗体的血清或组织更新率，症状水平，治疗性抗体的免疫原性以及生物基质中靶细胞的可及性。优选地，所述给药方案递送足够的治疗性抗体以实现目标疾病状态的改善，同时最小化不希望的副作用。因此，所递送的生物制剂的量部分取决于特定的治疗性抗体和所治疗病症的严重性。有选择适当剂量的治疗性抗体的指南(参见，例如，wawrzynczak(1996)antibodytherapy,biosscientificpub.ltd,oxfordshire,uk；kresina(ed.)(1991)monoclonalantibodies,cytokinesandarthritis,marceldekker,newyork,ny；bach(ed.)(1993)monoclonalantibodiesandpeptidetherapyinautoimmunediseases,marceldekker,newyork,ny；baert,etal.(2003)newengl.j.med.348:601-608；milgrometal.(1999)newengl.j.med.341:1966-1973；slamonetal.(2001)newengl.j.med.344:783-792；beniaminovitzetal.(2000)newengl.j.med.342:613-619；ghoshetal.(2003)newengl.j.med.348:24-32；lipskyetal.(2000)newengl.j.med.343:1594-1602)。调整剂量方案以提供最佳的期望反应(例如治疗反应)。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用数个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物是特别有利的，以易于给药和剂量均匀。如本文所用，剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；例如，单位剂量。每个单元包含预定量的活性化合物，该活性化合物经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果。本文所述的剂量单位形式的规范由(a)抗体或抗体结合片段的独特特征和要实现的特定治疗效果，以及(b)配制领域中固有的局限性直接决定。这种活性分子用于治疗个体的敏感性。(参见，例如，yang,etal.(2003)newengl.j.med.349:427-434；herold,etal.(2002)newengl.j.med.346:1692-1698；liu,etal.(1999)j.neurol.neurosurg.psych.67:451-456；portielji,etal.(20003)cancerimmunol.immunother.52:133-144)。本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段的用途与相关ilt不混杂的本文公开的抗ilt3抗体和抗原结合片段可以使用常规免疫测定法例如酶用于特异性检测人ilt3(例如，在诸如血清或血浆的生物样品中)，连锁免疫吸附测定(elisa)，放射免疫测定(ria)或组织免疫组织化学。本发明因此提供一种方法，用于检测人ilt3，包括与生物样品相接触的生物样品中的抗ilt3抗体或抗原结合片段，并检测任一抗ilt3抗体或抗原结合片段结合到人ilt3或未结合的本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段，从而检测生物样品中的人ilt3。所述抗ilt3抗体或抗原结合片段直接或间接地用可检测物质标记，以促进结合或未结合的检测抗ilt3抗体或抗原结合片段在本文中公开。合适的可检测物质包括各种酶，辅基，荧光物质，发光物质和放射性物质。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；等等。合适的修复基团复合物的例子包括链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素。合适的荧光材料的例子包括伞形酮，荧光素，异硫氰酸荧光素，若丹明，二氯三嗪胺荧光素，丹磺酰氯或藻红蛋白。发光材料的实例包括鲁米诺；合适的放射性材料的实例包括125i,131i,35s和3h。除了标记抗ilt3抗体或抗原结合片段外，人ilt3可以通过竞争性免疫测定法在生物体液中进行测定，方法是使用标记有可检测物质的ilt3标准品和未标记的抗人ilt3抗ilt3抗体或公开的抗原结合片段。在该测定中，将生物学样品，标记的ilt3标准品和抗ilt3抗体或抗原结合片段合并，并确定与本文公开的未标记的抗ilt3抗体或抗原结合片段结合的标记ilt3标准物的量。生物样品中人ilt3的量是成反比结合于标记的标准ilt3的抗ilt3抗体或抗原结合片段的量。在本文中公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段还可以用来检测来自除人以外的物种的ilt3，特别是来自灵长类的ilt3(例如，食蟹猴或猕猴)。体内上调免疫反应的方法本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以被用作免疫刺激组合物，例如，单独使用或作为疫苗的一部分或组合治疗，促进b细胞和/或t细胞的活化，例如，无论是th1细胞或th2细胞激活。即，本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以用作与目的抗原组合使用的佐剂，以增强体内针对该目的抗原的免疫应答。例如，为了刺激的抗体或细胞免疫应答于感兴趣(例如，用于疫苗接种目的)的抗原，本文中公开抗ilt3抗体或抗原结合片段可以是共给药(例如，共给药在在相同或不同的组合物中同时进行，或在时间上相继进行，以使免疫反应增强)。本文公开的目的抗原和抗ilt3抗体或抗原结合片段可以一起配制为单一药物组合物或单独的组合物。在一个实施方式中，将本文公开的目的抗原和抗ilt3抗体或抗原结合片段同时施用于受试者。或者，在某些情况下，可能需要先施用抗原，然后再施用本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段，反之亦然(例如，在自然引发th1反应的抗原的情况下，有利于首先单独施用抗原以刺激th1反应，然后单独或与抗原增强一起施用本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段以将免疫反应转变为th2反应)。在优选的实施方式中，本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段在用抗原引发时，即在第一次抗原施用时施用。例如，第-3，-2，-1、0，+1，+2，+3天。本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段的特别优选的给药天是-1天。在一个实施方式中，本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段与目的抗原一起施用。目的抗原是期望对其进行免疫应答的抗原。例如，感兴趣的抗原是抗原能够刺激免疫保护在一个由从该抗原衍生传染剂针对攻击受试者。还考虑给予本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段以增加免疫应答而无需给予抗原。因此，感兴趣的示例性抗原包括衍生自感染因子的那些，其中针对该抗原的免疫应答用于预防或治疗该因子引起的疾病。这样的抗原包括但不限于病毒，细菌，真菌或寄生虫蛋白以及任何其他蛋白，糖蛋白，脂蛋白，糖脂等。感兴趣的抗原还包括那些对有风险获得或被诊断患有肿瘤的受试者提供益处的抗原。所述受试者优选是哺乳动物，最优选是人。感兴趣的典型抗原可以分类如下：蛋白质抗原，例如铜蓝蛋白和血清白蛋白；和细菌抗原，例如海胆酸，鞭毛抗原，荚膜多糖，细胞外细菌产物和毒素；糖蛋白和糖脂；病毒，例如动物，植物和细菌病毒；与正常组织相比，结合的和合成的抗原，例如蛋白质/半抗原结合物，是由肿瘤优先表达的分子；合成多肽；核酸，例如核糖核酸和脱氧核糖核酸。如本文所用，术语“感染剂”，包括表达抗原的任何试剂，其引发宿主的细胞免疫应答。可以认为有用的病毒抗原的非限制性实例包括但不限于流感病毒的核蛋白(np)和hiv的gag蛋白。其他异源抗原包括但不限于hivenv蛋白或其组成部分gp120和gp41，hivnef蛋白和hivpol蛋白，逆转录酶和蛋白酶。此外，其他病毒抗原，例如埃博拉病毒(ebov)抗原，例如ebovnp或糖蛋白(gp)，在分子的粘蛋白区域中全长或gp缺失(yang等，natmed6：886(2000)，小痘抗原，肝炎a，b或c病毒，人类鼻病毒如2型或14型，单纯疱疹病毒，2型脊髓灰质炎病毒或3，手足口病病毒(fmdv)，狂犬病病毒，轮状病毒，流感病毒，柯萨奇病毒，人乳头瘤病毒(hpv)(例如16型乳头瘤病毒)，其e7蛋白以及含有e7蛋白或其表位的片段；以及猿猴免疫缺陷病毒(siv)可被使用。感兴趣的抗原不必限于病毒来源的抗原。寄生虫抗原，诸如，例如，疟疾抗原都包括在内，是真菌抗原，细菌抗原和肿瘤抗原。来源于细菌抗原的实例是百日咳博德特氏菌来源的那些(例如p69蛋白和丝状血凝素(fha)抗原)，霍乱弧菌，炭疽芽孢杆菌，和大肠杆菌的抗原，如大肠杆菌(e.coli)热升abile毒素b亚基(lt-b)，大肠杆菌k88抗原，和产肠毒素的大肠杆菌(e.coli)的抗原。抗原的其它实例包括曼氏血吸虫p28谷胱甘肽s-转移酶抗原(p28抗原)和吸虫，支原体，蛔虫，绦虫，抗原沙眼衣原体和疟疾寄生虫，例如，寄生虫属疟原虫或巴贝斯虫，例如恶性疟原虫，以及编码上述抗原的免疫原性表位的肽。如本文所用，术语“肿瘤相关抗原”是指影响宿主生物中肿瘤生长或转移的抗原。肿瘤相关抗原可以是由肿瘤细胞表达的抗原，或者可以是由非肿瘤细胞表达的抗原，但是当这样表达时，可以促进肿瘤细胞的生长或转移。肿瘤抗原和肿瘤相关抗原的类型包括任何已知或迄今为止未知的肿瘤抗原，包括但不限于白血病中的bcr/abl抗原，与宫颈癌有关的致癌病毒的hpve6和e7抗原，mage1和mz2-黑色素瘤中或与之相关的e抗原，以及乳腺癌中或与之相关的mvc-1和her-2抗原。可以通过施用包含本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段的组合物来治疗或预防的感染，疾病或病症，包括其中宿主免疫反应起到预防感染，疾病或病症作用的任何感染，疾病或病症。紊乱。可以通过施用包含本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段的组合物来治疗或预防的疾病，病症或感染，包括但不限于由或引起的任何感染，疾病或病症。由生物恐怖主义，李斯特菌病，埃博拉病毒，sars，小痘，甲型肝炎，乙型肝炎，丙型肝炎，人为引起的疾病和病症引起的或与之相关的真菌，寄生虫，病毒或细菌，疾病，病症或感染轮状病毒，流感，柯萨奇病毒，人乳头瘤病毒，siv，疟疾，癌症(例如肿瘤)引起的或与之相关的鼻病毒，hiv和aids，疱疹，脊髓灰质炎，脊髓灰质炎，口蹄疫，狂犬病，疾病或失调由百日咳博德特氏菌，霍乱弧菌，炭疽杆菌，大肠杆菌，吸虫，支原体，弧虫，绦虫，沙眼衣原体和疟原虫等引起或与之相关的疾病或病症。免疫应答肿瘤细胞调节性t细胞通过抑制针对自身免疫性疾病和癌症的免疫反应，在维持免疫学自耐受性中起重要作用。因此，在一个实施方式中，上调免疫应答对于增强癌症中的免疫应答将是有益的。因此，本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以被在恶性肿瘤的治疗中用于抑制肿瘤生长或转移。本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以全身或局部施用于肿瘤部位。在一实施方式中，人ilt3功能的调节可用于诱导肿瘤免疫。一个ilt3结合分子可以施用于具有患者的肿瘤细胞(例如，肉瘤，黑色素瘤，淋巴瘤，白血病，神经母细胞瘤，癌)，以克服在所述受试者的肿瘤特异性耐受性。如本文所用，术语“肿瘤性疾病”的特征在于恶性肿瘤生长或处于以良性过度增殖和增生性细胞为特征的疾病状态。术语“瘤形成”的一般医学含义是指“新细胞生长”，其导致对正常生长控制(例如肿瘤细胞生长)的反应性丧失。如本文所用，术语“过度增殖”，“增生性”可互换使用，并且是指那些细胞中的异常状态或状况，其特征快速增殖或肿瘤。“恶性”和“肿瘤性”的术语意味着包括所有类型的过度增殖性的增长，增生性生长，癌性生长或致癌过程，转移性的组织或恶性转化的细胞，组织或器官，而与组织病理类型或侵入。阶段中的“增生”是指经历生长的异常高的速率的细胞。然而如本文所用，术语“瘤形成”和“增生”可以互换使用，如其上下文所揭示，通常指经历异常细胞生长速率的细胞，瘤和增生包括“肿瘤”，其可以是良性，恶变前或恶性的。术语“瘤形成”，“增生”和“肿瘤”通常被称为“癌症”，它是100多种以细胞失控，异常生长为特征的疾病的总称。癌症的例子包括但不限于：乳腺癌；结肠；非小细胞肺，头和颈部；大肠肺；前列腺；子房；肾黑色素瘤胃肠道(例如胰腺和胃)癌；和成骨肉瘤。胰腺癌，黑素瘤，乳腺癌，肺癌，：在一个实施方式中，所述癌症选自头颈癌，支气管癌，结直肠癌，前列腺癌，胰腺癌，胃癌，卵巢癌，泌尿膀胱癌，脑或中枢神经系统癌(例如，胶质母细胞瘤)，周围神经系统癌，食道癌，宫颈癌，子宫或子宫内膜癌，口腔或咽癌，肝癌，肾癌，睾丸癌，胆道癌癌，小肠或阑尾癌，唾液腺癌，甲状腺癌，肾上腺癌，骨肉瘤，软骨肉瘤和血液组织癌。对传染原的免疫反应免疫应答的上调可以是增强现有免疫应答或引发初始免疫应答的形式。例如，在病毒感染的情况下，通过调节ilt3增强免疫反应可能是有用的。由于本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可起到增强免疫反应的作用，因此在病原体例如细菌和病毒的更快速或彻底清除将是有益的情况下，它们将在治疗上有用。如本文所用，术语“病毒感染”包括以下生物体的感染，所述生物体包括但不限于hiv(例如，hiv-1和hiv-2)，人疱疹病毒，巨细胞病毒(特别是人)，轮状病毒，爱泼斯坦-巴尔病毒，水痘带状疱疹病毒，乙型肝炎病毒，例如乙型肝炎病毒，甲型肝炎病毒，丙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒，副粘病毒：呼吸道合胞病毒，副流感病毒，麻疹病毒，腮腺炎病毒，人乳头瘤病毒(例如hpv6，11、16、18等)，黄病毒(例如黄热病病毒，登革热病毒，t传脑炎病毒，日本脑炎病毒)或流感病毒。如本文所用，术语“细菌感染”包括各种细菌生物的感染，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。例子包括但不限于，包括淋病奈瑟氏球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的奈瑟氏球菌，包括肺炎链球菌，化脓性链球菌，无乳链球菌，变形链球菌的链球菌；嗜血杆菌属，包括b型流感嗜血杆菌，不可分型流感嗜血杆菌，杜克嗜血杆菌；莫拉氏菌，包括卡他莫拉氏菌，也称为卡他布拉氏菌；博德特氏菌，包括百日咳博德特氏菌，副百日咳博德特氏菌和支气管败血性博德特氏菌；分枝杆菌属，包括结核分枝杆菌，牛分枝杆菌，麻风分枝杆菌，鸟分枝杆菌，副结核分枝杆菌，耻垢分枝杆菌；军团菌属物种，包括嗜肺乳杆菌；大肠杆菌，包括肠毒性大肠杆菌，肠出血性大肠杆菌，肠致病性大肠杆菌；霍乱弧菌，包括霍乱弧菌，志贺氏菌，包括s.sonnei，痢疾链球菌，弗氏链球菌；耶尔森氏菌，包括小肠结肠炎耶尔森氏菌，鼠疫耶尔森氏菌，假结核耶尔森氏菌，空肠弯曲菌，包括空肠弯曲杆菌和大肠杆菌。沙门氏菌，包括伤寒沙门氏菌，副伤寒沙门氏菌，霍乱沙门氏菌，肠炎沙门氏菌；李斯特菌属，包括单核细胞增生李斯特菌；幽门螺杆菌，包括幽门螺杆菌；假单胞菌属物种包括铜绿假单胞菌，葡萄球菌属物种包括金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌；肠球菌，包括粪肠球菌，粪肠球菌；梭状芽胞杆菌，包括破伤风梭菌，肉毒梭菌，艰难梭菌；芽孢杆菌属，包括炭疽杆菌；棒杆菌属，包括白喉衣原体；伯氏疏螺旋体(borreliaspp.)，包括b.burgdorferi，b.garinii，b.afzelii，b.andersonii，b.hermsii；埃里希氏菌，包括e.equi和人类粒细胞埃希氏菌病的病原；立克次体属，包括r.rickettsii；衣原体属，包括沙眼衣原体，肺炎衣原体，鹦鹉热衣原体；leptsiraspp。，包括l.interrogans；梅毒螺旋体，包括梅毒螺旋体，齿状螺旋体，猪痢疾螺旋体。优选的细菌包括但不限于利斯特氏菌，分枝杆菌，分枝杆菌(例如结核)，炭疽，沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌。在另一个实施方式中，t细胞可以从患者中移除，并接触在体外用抗ilt3抗体或抗原结合片段在本文中公开，任选地与一个激活信号(例如，抗原加apc或多克隆抗体)和再引入患者。本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段也可以预防性地用于针对各种病原体的疫苗中。可以通过用病毒蛋白以及本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段进行疫苗接种来诱导针对病原体例如病毒的免疫。或者，表达载体即编码基因在本文中公开的抗原和抗ilt3抗体或抗原结合片段，例如，痘苗病毒表达载体工程化以表达编码核酸的病毒蛋白和编码核酸的在本文中公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段，可用于疫苗接种。疫苗可能有用的病原体包括，例如，乙型肝炎，丙型肝炎，爱泼斯坦-巴尔病毒，巨细胞病毒，hiv-1，hiv-2，结核病，疟疾和血吸虫病。本发明进一步包括与诊断或治疗剂缀合的本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段。本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可作为临床测试程序的一部分用于诊断，例如监测肿瘤的发生或进展，以例如确定给定治疗方案的功效。检测可以通过将抗体偶联到可检测物质来促进。可检测物质的实例包括各种酶，辅基，荧光材料，发光材料，生物发光材料，放射性材料，使用各种正电子发射断层摄影术的正电子发射金属和非放射性顺磁性金属离子。可检测的物质可以使用本领域已知的技术通过中间体(例如本领域已知的连接子)直接或间接地偶联或结合到结合分子上。美国专利美国专利号4,741,900公开了可以与结合分子结合的金属离子。合适的酶的例子包括辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；等等。合适的修复基团复合物的例子包括链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素。合适的荧光材料的例子包括伞形酮，荧光素，异硫氰酸荧光素，若丹明，二氯三嗪胺荧光素，丹磺酰氯或藻红蛋白。发光材料的实例包括鲁米诺；生物发光材料的例子包括萤光素酶，萤光素和水母发光蛋白；合适的放射性材料的实例是125i，131i，和99tc。此外，本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以缀合至治疗性部分，例如细胞毒素，例如细胞生长抑制或杀细胞剂，治疗剂或放射性金属离子，例如α-发射剂，例如，例如213bi。细胞毒素或细胞毒性剂包括任何对细胞有害的物质。实例包括紫杉醇，细胞松弛素b，短杆菌肽d，溴化乙锭，依米丁，丝裂霉素，依托泊苷，替诺泊苷，长春新碱，长春碱，秋水仙碱，阿霉素，柔红霉素，二羟基蒽醌二酮，米托蒽醌，米曲霉素，前睾酮，肌酐丁卡因，利多卡因，普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。治疗剂包括但不限于抗代谢药(例如甲氨蝶呤，6-巯基嘌呤，6-硫鸟嘌呤，阿糖胞苷，5-氟尿嘧啶脱羧嗪)，烷基化剂(例如甲氧乙胺，噻菌胺氯安定，美法仑，卡莫汀(bsnu)和洛莫斯汀(ccnu)，环硫磷，白消安，二溴甘露醇，链脲佐菌素，丝裂霉素c和顺二氯二胺铂(ii)(ddp)顺铂)，蒽环类药物(例如柔红霉素(以前为道诺霉素)和阿霉素)，抗生素(例如放线菌素))，博来霉素，光神霉素和蒽霉素(amc))和抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春碱)。本发明进一步涉及涉及对动物，优选哺乳动物，最优选人类患者施用本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段的疗法，以治疗，检测和/或预防以下一种或多种：本文公开的疾病，失调或状况。本发明的治疗化合物包括但不限于本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段。所述抗ilt3抗体或抗原结合片段本文公开可被用于治疗，诊断，抑制或预防与ilt3的异常活性，包括相关的疾病，障碍或病症，包括但不限于，任何一种或多种疾病，紊乱的或此处所述的条件。本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可有利地与其他单克隆或嵌合结合分子，或与淋巴因子或造血生长因子(例如，il-2，il-3和il-7)组合使用。例如，其用于增加与结合分子相互作用的效应细胞的数量或活性。本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以单独给药或与其他类型的治疗联合使用，例如免疫刺激治疗或旨在控制活化免疫细胞(例如癌细胞或病原体)靶标增殖的治疗。示例性疗法包括例如放射疗法，化学疗法，激素疗法，免疫疗法和抗肿瘤剂，抗生素和免疫球蛋白。出于治疗目的，可以将本文公开的n抗ilt3抗体或抗原结合片段施用于人类受试者。而且，本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以施用于表达ilt3的非人类哺乳动物，为了兽医目的或作为人类疾病的动物模型，结合分子与ilt3交叉反应(例如灵长类)。组合方式本文的抗ilt3抗体或抗原结合片段可以以未偶联形式使用或与第二试剂偶联，所述第二试剂例如细胞毒性药物，放射性同位素或蛋白质例如蛋白质毒素或病毒蛋白质。该方法包括：将单独的或与细胞毒性药物缀合的本文的抗ilt3抗体或抗原结合片段施用于需要这种治疗的受试者。本文的抗ilt3抗体或抗原结合片段可用于递送多种治疗剂，例如细胞毒性部分，例如治疗药物，放射性同位素，植物，真菌或细菌来源的分子或生物蛋白(例如蛋白质毒素)或颗粒(例如重组病毒颗粒，例如通过病毒外壳蛋白)，或其混合物。其他组合疗法本文公开的抗ilt3抗体或抗原结合片段可与其它疗法组合使用。例如，组合疗法可包括包含与一种或多种其他治疗剂例如一种或多种抗癌剂，细胞毒性或细胞抑制剂，激素治疗，疫苗和/或其他免疫疗法共同配制和/或共同施用的抗ilt3抗体或抗原结合片段的组合物。在其它实施方式中，抗ilt3抗体或其抗原结合片段与其它治疗性治疗方式，包括外科手术，放射，冷冻手术，和/或热疗施用。这样的组合疗法可以有利地利用较低剂量的所给予的治疗剂，从而避免了与各种单一疗法相关的可能的毒性或并发症。“与...组合”并不意味着暗示必须同时施用治疗和/或治疗剂和/或配制用于一起递送，尽管这些递送方法在本文所述的范围内。所述抗ilt3抗体或其抗原结合片段可以被同时与施用一个或多个其它附加疗法或治疗剂之前或之后。所述抗ilt3抗体或其抗原结合片段和其它药剂或治疗方案可以以任何次序施用。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或时间表施用。还将认识到，在该组合中使用的另外的治疗剂可以单一组合物一起施用或以不同组合物分开施用。通常，期望以不超过单独使用它们的水平的组合使用另外的治疗剂。在一些实施方式中，组合使用的水平将低于单独使用的水平。在某些实施方式中，本文所述的抗ilt3抗体或其抗原结合片段与程序性死亡受体1(pd-1)或其配体pd-l1和pd-l2的一种或多种检验点抑制剂或拮抗剂组合施用。所述抑制剂或拮抗剂可以是抗体，抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在一些实施方式中，抗pd-1抗体选自纳武单抗(opdivo，bristolmyerssquibb，纽约，纽约)，派姆单抗(keytruda，mercksharp&dohmecorp，kenilworth，njusa)，cetiplimab(regeneron，tarrytown)，ny)或pidilizumab(ct-011)。在一些实施方式中，pd-1抑制剂是免疫粘附素(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的fc区)融合的pd-l1或pd-l2的细胞外或pd-1结合部分的免疫粘附素。在一些实施方式中，pd-1抑制剂是amp-224。在一些实施方式中，pd-l1抑制剂是抗pd-l1抗体，例如杜鲁麦单抗(imfinzi，astrazeneca，wilmington，de)，阿特珠单抗(tecentriq，roche，苏黎世，ch)或阿伐单抗(bavencio，emdserono，billerica，ma)。在一些实施方式中，抗pd-l1结合拮抗剂选自yw243.55.s70，mpdl3280a，medi-4736，msb-0010718c或mdx-1105。mdx-1105，也称为bms-936559，是wo2007/005874中所述的抗pd-l1抗体。抗体yw243.55.s70是描述于wo2010/077634的抗pd-l1(重链和轻链可变区序列分别如seqidno:20和21所示)。纳武单抗，也称为opdivo，mdx-1106-04，ono-4538，或bms-936558，是全人igg4抗pd-1抗体，在wo2006/121168和美国专利8008449中描述。派姆单抗，也称为keytruda，ambrolizumab，mk-3475或sch-900475，是人源化抗pd-1抗体，在美国专利号8,354,509和wo2009/114335中描述，和例如例如在hamid,etal.,newenglandj.med.369(2):134-144(2013)中公开。派姆单抗的重链和轻链分别由seqidnos:225和226所示氨基酸序列表示。pidilizumab，也称为ct-011(curetech)，是与pd-1结合的人源化igg1单克隆抗体。pidilizumab和其他人源化抗pd-1单克隆抗体在wo2009/101611中公开。其他抗pd-1抗体包含amp514(amplimmune)，尤其是例如美国专利8609089；美国公开号2010028330；和美国公开号20120114649中公开的抗pd-1抗体。amp-224(b7-dcig；amplimmune；例如，在wo2010/027827和wo2011/066342中公开)是一种pd-l2fc融合可溶性受体，其阻断pd-1和b7-h1之间的相互作用。mdpl3280a(genentech/roche)是与pd-l1结合的人fc优化igg1单克隆抗体。mdpl3280a和其他针对pd-l1的人单克隆抗体在美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906中公开。其他抗pd-l1结合剂包括yw243.55.s70(重链和轻链可变区在wo2010/077634中示为seqidno:20和21)和mdx-1105(也称为bms-936559)。它和其他抗pd-l1结合剂在wo2007/005874中公开。试剂盒还提供了包含一种或多种组分的试剂盒，所述组分包括但不限于本文所述的抗ilt3抗体或其抗原结合片段，以及一种或多种其他组分，包括但不限于另一种治疗剂。如本文所述。抗体或片段和/或治疗剂可以在药物组合物中配制为纯组合物或与药学上可接受的载体组合。在一个实施方式中，试剂盒在一个容器中(例如，在无菌玻璃或塑料小瓶中)包含抗ilt3抗体或其抗原结合片段或其药物组合物，并且在另一容器中(例如，在无菌中)包含另一种治疗剂。玻璃或塑料瓶)。在另一个实施方式中，所述试剂盒包含所述的组合抗ilt3抗体或其抗原结合片段或其药物组合物结合一起配制，任选地，在药物组合物中，在单一、公共容器中。如果试剂盒包括用于肠胃外给药于受试者的药物组合物，则试剂盒可以包括用于进行这种给药的装置。例如，试剂盒可包括一个或多个皮下注射针头或如上所述的其他注射装置。因此，本发明包括试剂盒，其包括注射装置和抗ilt3抗体或其抗原结合片段，例如，其中注射装置包括抗体或片段，或者其中抗体或片段在单独的容器中。试剂盒可以包括包装插页，该包装插页包括关于试剂盒中的药物组合物和剂型的信息。通常，这样的信息帮助患者和医生有效且安全地使用封闭的药物组合物和剂型。例如，可以在插入物中提供以下有关本发明组合的信息：药代动力学，药效学，临床研究，功效参数，适应症和用法，禁忌症，警告，注意事项，不良反应，过量，适当的剂量和给药方式提供的适当存储条件，参考，制造商/分销商信息和专利信息。制备抗体及其抗原结合片段的方法本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段也可以重组产生。在该实施方式中，可以将编码抗体分子的核酸分子插入载体(质粒或病毒)中，并转染或转化到宿主细胞中，在该宿主细胞中可以从宿主细胞表达和分泌该核酸分子。产生重组抗体的几种方法是本领域已知的。在具体的方面，本发明提供了编码hc和lc的核酸分子，其中所述hc包含本文公开的抗ilt3抗体的至少hc-cdr3或其其中hc-cdr3具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式。在进一步的实施方式中，hc和/或lc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在具体的方面，本发明提供了编码hc和lc的核酸分子，其中所述hc包含本文公开的抗ilt3抗体的hc-cdr1，2和3或其其中hc-cdr1、2和3中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，并且其中所述lc包含本文公开的抗ilt3抗体的lc-cdr1、2和3或其其中hc-cdr1、2和3中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式。在进一步的实施方式中，hc和/或lc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在具体的方面，本发明提供包含第一表达载体，其包含编码hc的核酸分子，所述hc包含本文公开的抗ilt3抗体的至少hccdr或其其中三个hccdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，和/或其中hc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合，以及第二表达载体，其包含编码lc的核酸分子，所述lc包含本文公开的抗ilt3抗体的至少lccdr或其其中三个lccdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，和/或其中lc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换，添加，缺失或其组合。在具体的方面，本发明提供了编码为vh和vl的核酸分子，其中vh包含本文公开的抗ilt3抗体的至少hc-cdr3或其其中所述hc-cdr3具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式。在进一步的实施方式中，vh和/或vl可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在具体的方面，本发明提供了编码为vh和vl的核酸分子，其中所述hc包含本文公开的抗ilt3抗体的hc-cdr1，2和3或其其中hc-cdr1，2和3中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或组合的实施方式，和其中所述vl包含本文公开的抗ilt3抗体的lc-cdr1、2和3或其其中其中hc-cdr1、2和3中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式。在进一步的实施方式中，vh和/或vl可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在具体的方面，本发明提供了编码vh的核酸分子，所述vh包含本文公开的抗ilt3抗体的hccdr或其其中三个hccdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，和/或其中vh和/或vl可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合，以及编码vl的核酸分子，所述vl包含本文公开的抗ilt3抗体的lccdr或其其中三个lccdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，和/或其中vh和/或vl可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸替换，添加，缺失或其组合。可用作表达抗体或片段的宿主的哺乳动物细胞系是本领域众所周知的，并且包括可从美国典型培养物保藏中心(atcc)获得的许多永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢(cho)细胞，nso，sp2细胞，hela细胞，小仓鼠肾(bhk)细胞，猴肾细胞(cos)，人肝细胞癌细胞(例如hepg2)，a549细胞，3t3细胞，人胚肾293(hek-293)细胞和许多其他细胞系。通过确定哪些细胞系具有高表达水平来选择特别优选的细胞系。可以使用的其他细胞系是昆虫细胞系，例如sf9细胞，两栖细胞，细菌细胞，植物细胞，丝状真菌细胞(例如里氏木霉)和酵母细胞(例如酿酒酵母或巴斯德毕赤酵母)。在特定方面，宿主细胞可以是原核宿主细胞，例如大肠杆菌。当重组表达载体，其包括核酸分子编码重链或其抗原结合部分或片段，所述轻链和/或抗原结合片段被引入到宿主细胞中，所述抗体是通过培养所述宿主细胞产生的条件下，和为足以允许抗体在宿主细胞中表达的时间，或更优选地，将抗体分泌到其中生长宿主细胞的培养基中。可以从培养基中回收抗体，并进一步纯化或加工以产生本发明的抗体。在具体的方面，宿主细胞用包含表达载体转染，所述表达载体包含核酸分子，其编码hc和lc，其中所述hc包含本文公开的抗ilt3抗体的hc-cdr3或其其中所述hc-cdr3具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式。在进一步的实施方式中，hc和/或lc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在具体的方面，宿主细胞用表达载体转染，所述表达载体包含核酸分子，其编码hc和lc，其中所述hc包含本文公开的抗ilt3抗体的hc-cdr1，2和3或其其中hc-cdr1、2和3中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，并且其中所述lc包含本文公开的抗ilt3抗体的lc-cdr1、2和3或其其中hc-cdr1、2和3中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式。在进一步的实施方式中，hc和/或lc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在具体的方面，宿主细胞用第一表达载体和第二表达载体转染，所述第一表达载体包含核酸分子，其编码hc，所述hc包含本文公开的抗ilt3抗体的hccdr或其其中三个hccdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合的实施方式，和/或其中hc可变区框架包括0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10个酸取代，添加，缺失或其组合，所述第二表达载体包含核酸分子，其编码lc，所述lc包含本文公开的抗ilt3抗体的lccdr或其其中三个lccdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸的取代，添加，缺失或其组合的实施方式，和/或其中lc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸替换，添加，缺失或其组合。在特定方面，用表达载体转染宿主细胞，所述表达载体包含编码vh和vl的核酸分子，其中vh至少包含本文公开抗ilt3抗体的hc-cdr3或其实施方式，其中所述hc-cdr3具有1、2或3个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在进一步的实施方式中，vh和/或vl可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在具体的方面，用包含核酸分子的表达载体转染宿主细胞，所述核酸分子编码vh和vl，其中vh包括本文公开的抗ilt3抗体的hc-cdr1，2和3或其其中hc-cdr1、2和3中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，并且其中vl包含本文公开的抗ilt3抗体的lc-cdr1、2和3或其其中lc-cdr1、2和3中的一个或多个具有1、2或3个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式。在进一步的实施方式中，vh和/或vl可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失或其组合。在特定方面，用包含第一表达载体和第二表达载体转染宿主细胞，所述第一表达载体包含核酸分子，其编码vh，所述vh包含本文公开的抗ilt3抗体的至少hccdr或其其中三个hccdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式，和/或其中vh可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10氨基酸置换、添加、缺失或其组合，所述第二表达载体包含核酸分子，其编码vl，所述vl本文公开的抗ilt3抗体的至少lccdr或其中三个lccdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸的取代，添加，缺失或其组合的实施方式，和/或其中vl可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换，添加，缺失，或其组合。在特定实施方式中，hc和lc或vh和vl表达为融合蛋白，其中hc和lc的n端与前导序列融合，以促进抗体通过分泌途径的运输。可以使用的前导序列的例子包括msvptqvlgllllwltdarc(seqidno:12)或mewswvflfflsvttgvhs(seqidno:11)。本发明进一步提供了包含核酸分子的质粒或病毒载体，其编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段。本发明进一步提供了一种质粒或病毒载体，其包含编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的hc或其其中3个cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式的核酸分子，和/或其中hc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10氨基酸置换、添加、缺失或其组合，以及编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的lc或其其中三个cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合的实施方式的核酸分子或，和/或其中lc可变区框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换位置，添加，缺失或其组合。本发明进一步提供了质粒或病毒载体，包含编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的hc的核酸分子，和质粒或病毒载体，其包含编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的lc的核酸分子。本发明还提供了一种宿主细胞，其包含质粒或病毒载体，其包含核酸分子，其编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的hc或本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的实施方式，其中3个cdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合，和/或其中的hc可变区框架包括0，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合，和质粒或病毒载体，其包含核酸分子，其编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的lc或本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的实施方式，其中3个cdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合，和/或其中lc可变区框架包括0，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合。在特定的实施方式中，宿主细胞是cho或hek-293宿主细胞。本发明进一步提供了包含核酸分子的质粒或病毒载体，其编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段。本发明进一步提供了质粒或病毒载体，其包含编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的vh或抗ilt3抗体或其抗原结合片段的实施方式的核酸分子，其中三个cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合，和/或其中vh框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸酸取代，添加，缺失，或其组合，和编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的vl或抗ilt3抗体或其抗原结合片段的实施方式的核酸分子，其中三个cdr中的一个或多个具有一个、两个或三个氨基酸置换、添加、缺失或其组合，和/或其中vl框架包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸酸取代，添加，缺失，或其组合。本发明进一步提供了包含编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的vh的核酸分子或抗原结合片段的质粒或病毒载体和包含编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的vl的核酸分子或抗原结合片段的质粒或病毒载体。本发明还提供了一种宿主细胞，其包含质粒或病毒载体，其包含核酸分子，其编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的vh或本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的实施方式，其中3个cdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合，和/或其中的vh可变区框架包括0，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合，和质粒或病毒载体，其包含核酸分子，其编码本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的vl或本文公开的抗ilt3抗体或其抗原结合片段的实施方式，其中3个cdr中的一个或多个具有一个，两个，或三个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合，和/或其中vl可变区框架包括0，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换、添加、缺失，或其组合。在特定的实施方式中，宿主细胞是cho或hek-293宿主细胞。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗ilt3抗体或其抗原结合片段。此外，可以使用多种已知技术来增强来自生产细胞系的本发明抗体(或其中的其他部分)的表达。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(gs系统)是在某些条件下增强表达的常用方法。通常，在特定细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白将具有糖基化模式，该糖基化模式是在细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白的特征(参见例如croset等，j.biotechnol.161：336-348)。(2012))。因此，抗体的特定糖基化模式将取决于用于产生抗体的特定细胞系或转基因动物。但是，由本文提供的核酸分子编码或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体均独立于抗体可能具有的糖基化模式而构成本发明。下面的实施例意在促进对本发明的进一步理解。一般方法sambrook,fritschandmaniatis(1982&19892ndedition,20013rdedition)molecularcloning,alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny；sambrookandrussell(2001)molecularcloning,3rded.,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny；wu(1993)recombinantdna,vol.217,academicpress,sandiego,ca)描述了分子生物学中的标准方法。标准方法也出现在ausbel,etal.(2001)currentprotocolsinmolecularbiology,vols.1-4,johnwileyandsons,inc.newyork,ny，描述了细菌细胞中的克隆和dna诱变(第1卷)，哺乳动物细胞和酵母中的克隆(第2卷)，糖缀合物和蛋白质表达(第3卷)和生物信息学(第4卷)。描述了用于蛋白质纯化的方法，其包括免疫沉淀，色谱，电泳，离心和结晶(coligan,etal.(2000)currentprotocolsinproteinscience,vol.1,johnwileyandsons,inc.,newyork)。描述了化学分析，化学修饰，翻译后修饰，融合蛋白的产生，蛋白的糖基化(参见例如coligan,etal.(2000)currentprotocolsinproteinscience,vol.2,johnwileyandsons,inc.,newyork；ausubel,etal.(2001)currentprotocolsinmolecularbiology,vol.3,johnwileyandsons,inc.,ny,ny,pp.16.0.5-16.22.17；sigma-aldrich,co.(2001)productsforlifescienceresearch,st.louis,mo；pp.45-89；amershampharmaciabiotech(2001)biodirectory,piscataway,n.j.,pp.384-391)。描述了多克隆和单克隆抗体的产生，纯化和片段化(coligan,etal.(2001)currentprotcolsinimmunology,vol.1,johnwileyandsons,inc.,newyork；harlowandlane(1999)usingantibodies,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny；harlowandlane,supra)。表征配体/受体相互作用的标准技术是可用的(参见，例如，coligan,etal.(2001)currentprotocolsinimmunology,vol.4,johnwiley,inc.,newyork)。可以制备单克隆抗体，多克隆抗体和人源化抗体(参见，例如，sheperdanddean(eds.)(2000)monoclonalantibodies,oxforduniv.press,newyork,ny；kontermannanddubel(eds.)(2001)antibodyengineering,springer-verlag,newyork；harlowandlane(1988)antibodiesalaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny,pp.139-243；carpenter,etal.(2000)j.immunol.165:6205；he,etal.(1998)j.immunol.160:1029；tangetal.(1999)j.biol.chem.274:27371-27378；bacaetal.(1997)j.biol.chem.272:10678-10684；chothiaetal.(1989)nature342:877-883；footeandwinter(1992)j.mol.biol.224:487-499；u.s.pat.no.6,329,511)。人源化的替代方法是使用在噬菌体上展示的人抗体文库或转基因小鼠中的人抗体文库(vaughanetal.(1996)naturebiotechnol.14:309-314；barbas(1995)naturemedicine1:837-839；mendezetal.(1997)naturegenetics15:146-156；hoogenboomandchames(2000)immunol.today21:371-377；barbasetal.(2001)phagedisplay:alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,newyork；kayetal.(1996)phagedisplayofpeptidesandproteins:alaboratorymanual,academicpress,sandiego,ca；debruinetal.(1999)naturebiotechnol.17:397-399)。抗体可以偶联至例如小药物分子，酶，脂质体，聚乙二醇(peg)。抗体可用于治疗，诊断，试剂盒或其他目的，并且包括例如偶联至染料，放射性同位素，酶或金属(例如胶体金)的抗体(参见，例如，ledoussaletal.(1991)j.immunol.146:169-175；gibellinietal.(1998)j.immunol.160:3891-3898；hsingandbishop(1999)j.immunol.162:2804-2811；evertsetal.(2002)j.immunol.168:883-889)。可以使用流式细胞术的方法，其包括荧光激活细胞分选(facs)(参见，例如，owens,etal.(1994)flowcytometryprinciplesforclinicallaboratorypractice,johnwileyandsons,hoboken,nj；givan(2001)flowcytometry,2nded.；wiley-liss,hoboken,nj；shapiro(2003)practicalflowcytometry,johnwileyandsons,hoboken,nj)。适用于例如例如用作诊断试剂的适于修饰核酸的荧光试剂包括核酸引物和探针，多肽和抗体(molecularprobes(2003)catalogue,molecularprobes,inc.,eugene,or；sigma-aldrich(2003)catalogue,st.louis,mo)。描述了免疫系统组织学的标准方法(参见，例如，muller-harmelink(ed.)(1986)humanthymus:histopathologyandpathology,springerverlag,newyork,ny；hiatt,etal.(2000)coloratlasofhistology,lippincott,williams,andwilkins,phila,pa；louis,etal.(2002)basichistology:textandatlas,mcgraw-hill,newyork,ny)。提供了用于确定例如抗原性片段，前导序列，蛋白质折叠，功能域，糖基化位点和序列比对的软件包和数据库(例如，参见genbank,vectorsuite(informax,inc,bethesda,md)；gcgwisconsinpackage(accelrys,inc.,sandiego,ca)；(timelogiccorp.,crystalbay,nevada)；menne,etal.(2000)bioinformatics16:741-742；menne,etal.(2000)bioinformaticsapplicationsnote16:741-742；wren,etal.(2002)comput.methodsprogramsbiomed.68:177-181；vonheijne(1983)eur.j.biochem.133:17-21；vonheijne(1986)nucleicacidsres.14:4683-4690)。纯度测定：在acquityuplch-class系统上进行尺寸排阻超高效液相色谱(se-uplc)或(sec)。所用柱为acquityuplcproteinbehsec柱(部件号186005225，1.7微米，200埃，4.6毫米×150毫米)来自waters(米尔福德，马萨诸塞州)。使用柱温度为25℃，在1毫克/毫米下10微升样品使用0.5毫升/分钟的系统流速注入。使用的流动相是100mm磷酸钠，200mm氯化钠和0.02％叠氮化钠，ph7.0。在214和280nm处对数据进行定量，并使用empower3软件进行分析。使用购自waters(马萨诸塞州米尔福德)的beh200sec蛋白质标准混合物(部件号186006518)，并以10ug的剂量注射，测量uspresolution，理论塔板和拖尾。nano-dsf(商品名为改性差示扫描荧光的方法来确定蛋白质的稳定性，采用固有色氨酸或酪氨酸荧光)：热解折叠曲线的温度中点tm和热聚合曲线的中点tagg使用prthermcontrolv2.0.4软件控制的prometheusnt.48差示扫描荧光计(nanotempertechnologies)通过nano-dsf测定。激发功率为40％，温度以1℃/min的速率从20℃增加到至95℃。自动测量tm和tagg。通过在20mm乙酸钠ph5.5缓冲液中稀释至1mg/ml来制备样品，并通过毛细管作用将其吸入prometheus玻璃毛细管(pr-l002)中。毛细管等电聚焦(cief)：cief是使用用于仪器控制和数据分析的icecfr软件4.1.1在得自proteinsimple(sanjose，ca)的ice3系统上进行。使用的cief滤芯为fc包被的(proteinsimple，101701)，并根据制造商的说明进行制备。制备由40μg分析物和1％v/v3-10pharmalyte，0.5％v/v8-10.5pharmalyte，0.5％v/v5-8pharmalyte(gehealthcare)，37.5％v/v8.0m尿素(sigma-aldrich)，35％v/v1％甲基纤维素和1μl各自的5.85和9.22pi标志物(proteinsimple)的200μl样品。样品注入60秒。等电聚焦参数是1500v持续1分钟和3000v持续8分钟。使用内部pi标记作为两点校准标准品，自动测量pi。校准后的数据通过使用empower3转换为empower格式进行进一步分析和量化并进行分析。实施例1杂交瘤克隆52b8是通过标准的小鼠和大鼠免疫接种以及杂交瘤选择鉴定的。通常，在标准的四周足垫免疫中，用人ilt3-his重组蛋白对balb/c小鼠或大鼠进行免疫，以产生超免疫反应。来自引流淋巴结的主体淋巴细胞与p3骨髓瘤融合伴侣的电融合产生了永生化杂交瘤。杂交瘤上清液在基于初级细胞的elisa结合测定中筛选人cho-人ilt3细胞。在基于细胞的elisa形式中二次筛选cho亲本，cho-ilt3snp，cho-rhesusilt3，cho-ilt5，cho-ilt8和cho-ilt11细胞(参见实施例2)。在ilt3特异性和猕猴阳性杂交瘤细胞上通过有限稀释进行亚克隆。扩增亚克隆以产生纯化的蛋白质，以使能够进行biacore分析和功能筛选的额外测试。表5显示了10种杂交瘤克隆，其产生归入一起并对人ilt3具有高亲和力的抗体，如分别由实施例2和4公开的进行的celisa和biacore所示。表6显示从上述克隆获得的mab的重链和轻链可变结构域的氨基酸序列。为了最终指导先导抗体的选择，对抗体进行了进一步的分析，并在一组生物功能，生物物理和理化分析中进行了再评估。最后，使用人skmel5黑色素瘤攻击的人源化小鼠，在体内生物学证据肿瘤回归研究中测试了抗体。实施例2各种抗ilt3抗体的选择性使用基于细胞的elisa(celisa)来显示表5中所示的各种亲本抗ilt3抗体和人源化抗ilt3单克隆抗体9b11(美国专利号7,777,008中公开，其具有seqidno:33(轻链)和seqidno:34(重链)的氨基酸序列)的选择性。使用基于细胞的elisa格式测试了小鼠抗人ilt3抗体与人ilt3的结合以及与猕猴ilt3，人ilt5，人ilt7，人ilt8和人ilt11表达cho-k1细胞的交叉反应性。cho-k1细胞在50μl的dmem/f12，10％bcs和庆大霉素(cho-k1介质)中接种于96孔组织培养板中。在测定前两天以2×104细胞/孔或在测定前一日以4×104细胞/孔将细胞铺板。在添加测试样品之前，从孔中除去培养基。将纯化的抗体在cho-k1培养基中连续稀释，然后添加到cho-k1平板中。将样品在室温下孵育30-60分钟，并使用biotekel405xselectcw洗板机上的细胞洗涤程序，用pbs/05％tween-20将板洗涤3次。使用在cho-k1培养基中以1:2000稀释度加入的hrp偶联山羊抗小鼠igg(southernbiotechcat#1031-05)二抗检测结合，并在室温下孵育30-60分钟。如上洗涤测定板并用tmb显影，并用tmb终止溶液终止(kpl目录号50-85-06)。测定在450nm-620nm处的吸光度。小鼠igg1(migg1)作为对照。结果示于图1a、1b、1c、1d和1e中。这些图表明，来自克隆p40b5，p49c6和p52b8的代表性抗体对ilt3具有特异性，并且不与ilt5，ilt7，ilt8和ilt11交叉反应或与之结合。来自克隆p49c6和p52b8的抗体，来自其它克隆的抗体，能够结合猕猴ilt3。基于(1)其与人ilt3的高度亲和力，(2)缺少与其他ilt家族成员的结合，以及(3)与猕猴ilt3的交叉反应性，选择p52b8克隆进行体内表征。实施例3将亲本小鼠52b8重链(vh)和轻链(vl)可变结构域序列与人种系序列进行比较。选择与小鼠抗体的框架紧密同源的人框架序列。小鼠抗人ilt3mab52b8克隆的小鼠vh结构域在亚组iii和j区的jh4中对人重链种系3-07得分很高。基于结构上的考虑，引入了两个框架置换(r87k和a97g)以维持与亲本抗体等同的结合。该抗体克隆的小鼠vl结构域在κ亚组i中对人轻链种系1-o2得分很高。将小鼠52b8cdr工程化到j区的1-o2和jk2的可变轻链序列上。基于结构上的考虑，引入了三个框架置换(m4l，s64a和g72r)。为了产生人源化变体，将人源化vh序列克隆到编码人igg4s228p重链恒定结构域的载体中，并将人源化vl结构域克隆到编码κ轻链恒定结构域的载体中。总共设计了两个人性化的vh(vh1和vh2)和8个人性化的vl。小鼠52b8的计算机序列和结构分析表明，分子上有六个潜在的“热点”：vh-cdr2(m64)和vh-cdr3(w101)中的两个潜在的氧化位点，vh-cdr2(d62)中的一个潜在的异构化位点，vl-cdr1(n34)中的一个潜在的脱酰胺位点，vl-cdr1(d30)和vl-cdr2(d59)中的两个潜在异构化位点。m64被修饰为v64或l64，其保持了良好的理化特性和结合/功能。图2a提供了表格，其显示了关于所设计的人源化变体的结合亲和力，等电点，单体种类纯度和热稳定性测量的数据特征。biacore用于测量结合亲和力，cief用于测量pi，纯度通过se-uplc确定，tm和tgg通过nano-dsf确定。图2b显示了各种人源化轻链变体的sec纯度与熔融温度的关系。将数据绘制为从八个人源化轻链变体中的每一个获得的值，表明vl5具有最高的纯度和热稳定性两者。基于图2a和图2b的数据，vl5被选择用于轻链。对瞬时cho细胞中产生的人源化vh1m64v/vl5进行了初步研究。在未配制的人源化52b8vh1m64v/vl5上同时进行50℃孵育和高ph胁迫的强制脱酰胺条件显示vl-cdr1中lcn34的脱酰胺(分别为4.0％和7.2％)，且hc-cdr3中w101氧化在1×光胁迫暴露下为15.4％。用biacorespr分析评估n34置换q34维持对人和猕猴ilt3的结合亲和力和通过dctnfα产生分析评估功能活性；然而，如通过biacorespr测定所确定的，w101残基的置换导致结合的显著损失。总结，人源化52b8是抗ilt3mab(52b8vh1m64v/vl5n34qigg4s228p/κ)，包含在vl中的一个框架置换(m4l)和在vh中的一个框架置换(a97g)。实施例4使用biacoret200系统(gehealthcare，piscataway，nj)通过表面等离振子共振测量了抗人ilt3克隆对人或猕猴ilt3-his标记的重组蛋白的结合动力学和亲和力。使用hbs-ep+缓冲液(br-1006-69)作为运行缓冲液。按照制造商的说明，通过胺偶联化学方法将抗人fc抗体(humanfccapturekit，br100839，gehealthcare)固定在seriesscm5传感器芯片(br100530或29149603，gehealthcare)上的所有四个流通池中。流通池1用作背景扣除的参考，不用于捕获。上面列出的抗人ilt3抗体(在hbs-ep+缓冲液中稀释至1μg/ml)在流动池2、3和4中的抗人fc捕获表面上以10μl/ml注射10秒，这导致在60-70ru六点的范围内的抗体捕获水平，范围为20nm至0.31nm的2倍稀释系列的人或猕猴ilt3-his蛋白和两个零(hbs-ep+)以50μl/ml在参比和捕获抗体表面上注射180秒的结合，然后是600秒的解离。在每个注射循环后，以10μl/分钟的流速使用3mmgcl2溶液的30秒第二注射再生所有四个流动池。在biacoret200评估软件(2.0版)中，扣除参比的传感图拟合至1:1langmuir结合模型以确定结合(ka)和解离(kd)速率常数和平衡解离常数kd(＝kd/ka)。表7总结了抗人ilt3抗体与重组人或猕猴ilt3的结合动力学和亲和力。实施例5结合人ilt3的嵌合抗ilt352b8小鼠vh/人igg4(s228p):小鼠vl/人κ(“c58b8”；mab73)通过氢氘交换(hdx)质谱进行的表位映射通过使用氢氘交换质谱(hdx-ms)分析来确定抗体与人ilt3细胞外结构域的接触区域。hdx-ms测量氘在蛋白质的酰胺主链中的掺入，并且这种掺入的变化受氢的溶剂暴露的影响。进行单独的抗原的样品和结合的抗体的样品中的氘交换水平的比较，以确定可以与抗体接触的ilt3细胞外结构域上的区域。具有c端his标签的人ilt3细胞外结构域(人ilt3-his)具有seqidno:1所示氨基酸序列。his-标记的人ilt3-his胞外结构域与抗体c58b8(mab73)一起预先孵育，c58b8是嵌合抗ilt352b8小鼠vhm64v/人igg4(s228p):小鼠vl/人κ，其包含具有seqidno:113的氨基酸序列的hc和具有seqidno:116所示氨基酸序列的lc，之后在氘缓冲液中孵育。使用3kmwco离心柱将人ilt3-his和抗体进行缓冲液交换至pbsph7.4。将人ilt3-his(80pmol/μl)与等体积的抗体(40pmol/μl)混合，或作为未结合的对照，pbsph7.4。在开始标记实验之前，将结合的抗体的样品和未结合的对照在室温下孵育1小时。为了将样品进行氘标记，2μl样品与25μlpbs在氧化氘中混合，ph7.6。标记时间点为30、300、3000、6000或12000秒。在设定时间后，将25μl标记混合物添加到30μl冷淬灭缓冲液(8m尿素，150mmtcep)中。将淬灭的样品在1.5℃下孵育2分钟。53μl然后注入柱冷却室，其中将样品经过胃蛋白酶/蛋白酶xiii柱，将所得的肽装载到捕获柱。三分钟后，启动分析梯度和质谱仪。通过将2μl的人ilt3-his与108μl氘化变性缓冲液(4m尿素，150mmtcep，在99.5％的氧化氘中)一起孵育，产生完全氘化样品。将样品在37℃下孵育过夜。然后55μl被直接注射到柱室中，并获取数据。采集未标记样品的lc-ms/ms数据，并在进行氘标记之前进行搜索，以验证蛋白质的成功消化并生成肽列表。使用proteomediscoverer1.4和sequestht搜索算法(thermofisherscientific)对数据库进行数据搜索。所使用的蛋白质数据库是连接到酵母酿酒酵母数据库的人ilt3-his序列。标记后，55μl样品等份被施加到novabioassays胃蛋白酶/蛋白酶xiii柱，随后是waterscshc18保护柱和waterscshc181x50mm分析柱上的色谱，在含有2％乙腈、0.1％tfa的上样缓冲液中。通过质谱测量氘掺入到人ilt3-his细胞外结构域中。猝灭：8m尿素，150mmtcep；标记缓冲液：pbs，ph7.6；空白缓冲液：pbs，ph7.4。质谱仪是thermoscientificorbitrap-elite。为了测量氘标记的样品，将质谱仪设置为以120,000的分辨力，1e6的目标离子数和500毫秒的最大离子注入时间，在轨道阱中获取一个全扫描ms数据。为了获得用于肽鉴定的ms/ms数据，将质谱仪设置为以120,000的分辨力采集一个完整的扫描谱，然后在离子阱中采集十个数据依赖性ms/ms光谱。所用液相色谱系统是用于分析柱梯度的watersnanoacquity和用于样品消化和装载的waters515等度泵。对于样品的消化和上样，所用的缓冲液为2％乙腈和0.1％三氟乙酸，流速为100μl/min。对于分析梯度，缓冲液为缓冲液a)在水中的0.1％甲酸，和缓冲液b)在乙腈中的0.1％甲酸。梯度以40μl/min在10分钟内从2％b到36％b，然后用80％b洗涤1.5分钟，然后在2％b下重新平衡3分钟。然后通过使梯度在2％和80％b之间循环三次洗涤柱，每步1分钟，然后在2％b下最终平衡5分钟。捕获柱是watersvanguardc18beh1.7μm保护柱，分析柱是watersc18beh300，1.7μm1×50mm柱。氘标记的样品处理是通过leaptech/d-xpal系统完成的。标记样品盘温度设置为25℃，淬灭盘温度设置为1.5℃，阱和分析柱室设置为1.5℃。固定的胃蛋白酶柱(胃蛋白酶/蛋白酶xiii柱nba2014002，2.1x30mm，novabioassay)在室温下保持在柱室的外部。抗体结合的人ilt3-his氨基酸残基的氘标记差示热图示于图3a。hdx质谱表明，本文公开的抗体和与所述抗体交叉竞争的其他抗体家族结合表位，该表位包含或由以下组成：ilt3的氨基酸残基18-23(iswgns；seqidno:3)，64-69(ipsmte；seqidno:4)，96-101(mtgays；seqidno:5)，124-131(qsrspmdt；seqidno:6)，152-159(aqqhqaef；seqidno:7)和184-187(llsh；seqidno:8)中的一个或多个中的至少一个氨基酸。图3b显示了人ilt3细胞外结构域的三维表面结构模型的第一视图和第二视图，显示受保护的氨基酸残基。这些受保护的氨基酸残基包含跨越细胞外结构域的d1和d2结构域之间的边界的分裂或不连续的表位。图3c是带状图，显示了表位在人ilt3细胞外结构域上的位置。黑色的残基被保护以免被抗体标记。白色的残基未显示在标记方面的变化，深灰色的残基未从其获取数据。平均每个残基的氘标记差异，并将其映射到ilt3的晶体结构上(chengetal.,“crystalstructureofleukocyteig-likereceptorlilrb4(ilt3/lir-5/cd85k):amyeloidinhibitoryreceptorinvolvedinimmunetolerance.”jbiolchem286:18013-25(2011))。使用抗体zm4.1，dx439，dx446和9b11进行了类似的hdx映射实验。zm4.1抗体可商购自thermofisherscientific,carlsbad,ca或biolegend,sandiego,ca。抗体dx439和dx446已在wo2018089300中公开，抗体9b11已在美国专利7,777,008中公开。在这些抗体中，仅观察到抗体zm4.1结合与本发明的抗体结合的表位部分重叠的表位。然而，归类研究显示抗体zm4.1没有交叉阻断本发明的抗体的结合。图3d，3e，3f和3g显示了抗体zm4.1，dx439，dx446和9b11与人ilt3的结合的热图。实施例6嵌合抗ilt352b8小鼠vh/人igg4(s228p):小鼠vl/人κ(“c58b8”；mab73)在nsg小鼠中的药代动力学在panc08.13人-nsg小鼠模型和sk-mel-5人cd34+-nsg小鼠模型中评价嵌合抗ilt352b8小鼠vh/人igg4(s228p):小鼠vl/人κ(c85b8；mab73)的药代动力学。sk-mel-5是人黑素瘤衍生细胞系，可以生长为皮下肿瘤。panc08.13是人类胰腺癌衍生的肿瘤细胞系。panc08.13人-nsg模型已显示对派姆单抗和ipilimumab治疗敏感。与panc08.13模型相比，sk-mel-5模型在肿瘤中具有强大而多样的髓样浸润。两种模型均显示肿瘤和脾脏中人cd14+髓样细胞上增加的ilt3表达。基于ecl的靶标捕获免疫分析用于定量人源化小鼠血浆中的抗体。使用生物素化的重组ilt3作为捕获试剂，并使用southernbiotech(cat#9190-01)的sulfotag标记的小鼠抗huigg(fc特异性)作为检测试剂，建立了该测定法。校准品和qc均在纯c57bl/6血浆中制备，并在平板中测试时稀释100倍。该测定法已经合格，该测定法的lloq测定为40ng/ml，mrd为100。在panc08.13hu-nsg小鼠模型中，对于前三个剂量每周一次和对于第四个剂量在第三个剂量后两周，ip给予20mg/kg的抗体，与或不与派姆单抗(5mg/kg)一起。在第三个剂量之前(ctrough)和在第三个剂量之后24小时(cmax)收集血液样品。还在第四个剂量之后的第5天和第6天收集末期血液样品。在sk-mel-5hucd34+-nsg小鼠模型中，通过ip每周以2和20mg/kg施用抗体。在第三剂量前(ctrough)和第三次剂量后24h(cmax)收集血液样品。还在第三剂量之后的第3天和第7天收集末期血液样品。通过抗原捕获测定法确定游离的(未结合的)抗体浓度。药代动力学参数是从历史igg4抗体数据(在c57bl/6j小鼠中静脉推注施用1、3、10、30mg/kg的人源化igg4抗体)产生，所研究的剂量的抗体的phoenixnlme.pk曲线是基于所产生的药代动力学参数来模拟。历史igg4抗体数据的pk分析显示auc和所研究的剂量之间的线性关系(参见图4)。在包括跨不同测试剂量的c52b8的线性pk、不同小鼠品系之间没有pk差异、抗体ip给药后的快速吸收和100％的生物利用度的假设下，基于历史igg4抗体数据模拟了所研究的剂量的c52b8的pk曲线。结果表明，在panc08.13人-nsg模型和sk-mel-5hucd34+-nsg模型两者中，在20mg/kg的模拟曲线均遵循观察到的c52b8浓度。实施例7抗ilt3单克隆抗体激活树突状细胞并降低骨髓衍生抑制细胞(mdscs)的抑制能力冷冻，融化分离自新鲜白细胞的人pbmc，并通过阴性选择纯化cd14+单核细胞。纯化的细胞与gm-csf(1000u/ml)和il4(1000u/ml)一起培养5天。然后在添加有或没有抗ilt3抗体的il-10(50ng/ml)和lps(1ug/ml)的情况下，将这些未成熟的dc进一步培养42小时。tnfα在培养上清液中测量。滴定实验表明，c52b8当在极化步骤期间添加时，引起培养基中tnfα分泌的剂量依赖性增加，而对照igg4没有(对照是针对rsv的市售抗体的变体，商品名synagis)(图5a)。产生tnfα水平的半数最大增加所需的抗体浓度(ec50)为约1.9纳克/毫升。对于其中p58b8的vh和vl与具有人igg1框架(mab78)或n297a突变的人igg1框架(mab76)的fc融合的嵌合变体而言，这没有什么不同。这些数据表明，在该测定中，fc受体结合在功能活性中不发挥任何作用。相对于fc受体结合的独立性控制了这种测定法中的激活机制是通过识别用抗体装饰的培养物中的其他dc而变得被激活的dc的可能性，其会是与ilt3无关的机制。图5b和5c显示在两个供体中在c52b8(mab73)和人源化抗ilt3mab52b8vh1m64v/vl5n34qigg4s228p/κ(mab46)之间在功能活性方面没有差异显著。如所示，在dc的极化期间添加抗体c52b8，但不在t细胞初免期间，dc更好地能够激活t细胞以增殖，类似于不耐受il10的dc。当抗体c52b8在t细胞初免期间添加，但不在dc极化期间，t细胞更好地能够响应于后续的再刺激。在人源化后，在相同的测定法中测试了保留与嵌合体相当的结合的变体，发现它们是有活性的，它们之间的效力没有有意义的差异。这些数据表明，用c52b8生成的数据是代表如果使用人源化mab46会有的数据。实施例8抗ilt3抗体降低骨髓衍生抑制细胞(mdsc)的抑制能力不归因于任何特定理论或假说，我们假设生产性t细胞对肿瘤的反应在某些情况下可受到未成熟和抑制性髓样细胞的存在的限制。这些细胞表达ilt3，我们假设ilt3以抑制方式发挥作用以维持特征为低hla-dr表达、il-10产生以及t细胞激活和增殖的有效抑制的未成熟状态。建立基于人pbmc与skmel5肿瘤细胞体外共培养的模型，然后纯化mdsc并测试其抑制自体cd8+t细胞增殖的能力，使得能够探索ilt3生物学的这一方面。这个例子表明，c52b8和人源化52b8(mab46)能够损害t细胞抑制表型的获得(或维持)。为了生成mdsc，健康人pbmc与skmel5细胞和20ng/ml的gm-csf一起培养7天。通过基于阳性抗体的磁珠选择收集cd33+细胞，然后在多克隆刺激物存在的情况下，按所示比率与纯化自体cd8+t细胞共培养3天。在共培养和t细胞抑制步骤两者中，培养物包含c52b8(mab73)，人源化52b8(mab46)，或同种型对照抗体(1μg/ml)。以t细胞与mdsc的比率为4:1进行t细胞抑制测定，并测量产生的干扰素γ(infγ)的量。图6a和图6b示例了人源化52b8和c52b8在mdsc模型中在一定比率的t细胞与mdsc下的活性，其中这些抗体的作用最为明显，表明该等抗体以可比的方式降低了mdsc的抑制能力。这些数据进一步表明，用c52b8生成的数据是代表使用人源化mab46会发现的数据。实施例9抗ilt3抗体cc52b8抑制携带sk-mel-5皮下肿瘤的sk-mel-5hu-nsg小鼠中的sk-mel-5肿瘤生长每周一次对携带已确立的皮下肿瘤的小鼠全身性施用c52b8提供了肿瘤生长的抑制(图7)。在植入后第21天根据肿瘤体积将动物随机分配至治疗组，并从第21天开始每周一次向其皮下给药20mg/kgc52b8(mab73)或同种型对照。左图中显示的数据是平均和std.误差(每组九只)。右图显示了个体动物肿瘤生长曲线。对照组和52b8组两者中的体重下降到相似的程度。该研究代表了三次独立研究。在三个独立的研究中，肿瘤生长的抑制程度一致且相似，且与抗ilt4的作用非常相似。迄今为止测试的其他机制(例如抗pd-1，抗ilt4，抗cd27，抗gitr)均未提供回归，导致我们推测肿瘤停滞可代表该模型的基础。这明显不同于通常用于临床前功效测定的小鼠同基因模型。实施例10c52b8处理后sk-mel-5hu-nsg中的免疫激活为了了解介导肿瘤功效的免疫机制，分析了肿瘤浸润免疫细胞并测量了血液中的测量的shla-g水平。用c52b8(2和20mg/kgi.p.qw)处理小鼠。根据在mini-pk和使用历史研究的模拟中检测到的cmax和ctrough水平来选择抗体剂量。收集血样用于pk，shla-g和细胞因子分析。使用cytof进行til分析以同时检测36个标记物。固定终末肿瘤样品并用于人cd3+t细胞ihc分析。在用20mpk52b8处理的小鼠中观察到百分之三十的肿瘤生长抑制作用。然而，由于与人源化肿瘤模型相关的较大可变性，未检测到统计学显著性差异。52b8适度的肿瘤疗效是与肿瘤cd4+cd127-cd25+t抑制细胞(21％相比于14％)和血液shla-g水平的适度降低以及肿瘤中t细胞的激活的增加(cd69强度，14相比于23)相关联。如图8所示，对于c52b8处理未检测到细胞因子变化。实施例11抗ilt3抗体c52b8与派姆单抗组合在panc08.13hu-nsg模型中的效果：肿瘤功效和免疫激活在panc08.13hu-nsg模型中评估了抗ilt3抗体c52b8。用作单一药物的52b8显示对肿瘤生长抑制很小的作用。当52b8与派姆单抗组合使用时，人源化小鼠的五个群(五个不同的人供体)中的一个具有50％的肿瘤生长抑制(tgi)，且该tgi与增加的t细胞激活和ifnγ生产和降低的血液shla-g水平相关联，如图9a，图9b，图9c和图9d所示。实施例12抗ilt3抗体52b8与派姆单抗的组合在mdsc/t细胞抑制测定中的效果在mdsc/t细胞抑制测定中，与和不与派姆单抗一起的人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)实现了增加t细胞活性。当mab46与派姆单抗组合使用时，效果是加和性的。为了生成mdsc，来自特定供体的健康人pbmc与skmel5细胞和20ng/ml的gm-csf一起培养七天。用52b8(1μg/ml)或同种型对照抗体(1μg/ml)处理培养物。用抗cd33磁性微珠和ls柱分离(miltenyibiotec，德国)收集cd33+细胞，然后在多克隆刺激物存在下，以指定比率与纯化自体cd8+t细胞共培养3天。使用基于阴性抗体的磁珠选择(stemcelltechnologies，加拿大)从健康人pbmc中分离自体cd8+t细胞，然后与cd33+髓样细胞以8:1的比率(t细胞:mdsc)在96孔板中共培养2天。在共培养和t细胞抑制步骤两者中，培养物包含人源化52b8(mab46)或同种型对照抗体(igg4)(1μg/ml)单独或与派姆单抗(2μg/ml)组合。用同种型对照抗体将每种处理中的总抗体浓度调节至3ug/ml。t细胞增殖是由多克隆刺激性抗cd3/cd28珠和il2诱导。使用msdelisa(mesoscalediscovery，md)，在培养物上清液中确定ifnγ水平。用4:1或8:1的t细胞与mdsc之比进行t细胞抑制测定，并测量产生的干扰素γ(infγ)的量。结果示于图10-14中。图10显示在mdsc/t细胞抑制测定中，使用从来自两个不同人类供体(分别为d00100385和d001003507)的pbmc获得的mdsc，人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)将mdsc的抑制能力降低到与嵌合抗ilt3抗体c52b8(mab73；lot26avy)可比的程度。图11-14显示，在mdsc/t细胞抑制测定法中，(a)使用从来自人类供体d001003835的pbmc获得的mdsc，在4:1或8:1的t细胞与mdsc比率下(图11)；(b)使用从来自人类供体d001003180的pbmc获得的mdsc，在4:1或8:1的mdsc与t细胞的比率下(图12)；(c)使用从来自人类供体d001003507的pbmc获得的mdsc，在4:1或8:1的t细胞与mdsc的比率下(图13)；和使用从来自人类供体的pbmc获得的mdsc，在8:1的t细胞与mdsc的比率下(图14)，人源化抗ilt3抗体52b8(mab46)与派姆单抗组合以与每一者相比在更高水平上降低了t细胞激活的mdsc抑制。结果总结在表8和9中。如图10-13和表8和9所示，将抗ilt3抗体52b8与派姆单抗组合，产生了使t细胞的激活相对于单独使用派姆单抗或52b8可实现的相比增加的加和效应。如所示，相对于其他治疗，该组合的ifnγ的增加的范围为41％至74％。这些结果表明，派姆单抗与52b8的组合不导致t细胞激活的过度或不受控制的增加。实施例13抗ilt3抗体52b8与派姆单抗组合在极化il-10dc和同种异基因cd8+t细胞的混合淋巴细胞反应中的效果在该实施例中，il-10极化人单核细胞衍生树突状细胞和同种异基因cd8+t细胞的混合淋巴细胞反应培养4天，随后测量培养物上清液中的干扰素γ(ifnγ)作为t细胞激活的读出。在该实验中，在9个同种异基因供体对中，将派姆单抗，52b8或两者的组合的活性与同种型对照抗体(在两种情况下均为igg4)进行了比较。来自三个cd14+单核细胞供体的单核细胞衍生树突状细胞(dc)-il10dc分化七天(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gmcsf)和il4五天，然后il10两天，有和没有igg4(lot92asj)，有和没有1μg/ml的52b8(lot41bab))以产生dc129，dc226和dc196。分离来自三个供体的cd8+细胞，并从这三个供体在1:5的dc:t细胞比率下在96孔格式中建立混合白细胞反应(mlr)(30kdcvs150kcd8+t细胞)，其中用和不用igg4(lot92asj)；用和不用2μg/ml的派姆单抗(lot42asn)处理细胞。igg4或52b8也以1μg/ml加回到mlr中。结束以9个mlr对的il10dc:cd8+t细胞：dc129vst30，t3788和t3259dc226vst30，t3788和t3259dc196vst30，t3788和t3259在第4天收集ifnγ上清液并使用mesoscalediscovery(msd)定量。在第5天收集额外的上清液部分，收集细胞并染色pd1和pdl1表达。在分化的第7天(就在mlr设置之前)进行树突状细胞染色。mlr测定进行第5天的cd8+t细胞的t细胞染色。图15显示所有供体对合并到一个图中的结果(每个标记是供体配对)。如所示，将52b8与派姆单抗组合实现了t细胞耐受性的逆转，从而导致cd8+t细胞的激活的统计学显著性增加。尽管本文参照示出的实施方式描述了本发明，但是应当理解本发明不限于此。具有本领域普通技术且可以获得本文的教导的那些人将认识到其范围内的其他修改和实施方式。因此，本发明仅由本文所附的权利要求书限制。当前第1页12当前第1页12