一种快速检测食源性细菌的方法与流程

文档序号:17737388发布日期:2019-05-22 03:20阅读:175来源:国知局
本发明属于食品安全检测领域,具体涉及一种快速检测食源性细菌的方法。
背景技术
:食源性疾病都是危害公众健康的重要因素。其中,由微生物引起的食源性疾病是影响食品安全的首要因素,而食源性细菌在食源性微生物中又是最为重要的一类微生物。近年来我国的重大食品安全事件屡见不鲜,要解决这些食品安全问题,就需要从农田到餐桌对食品的生产、加工、流通和销售等各个环节进行全程监控和管理。而现有的食品安全监督管理体系普遍建立在仪器分析的基础之上,不仅人力、物力消耗大,时间成本高,而且信息发布滞后,导致监管部门很难对问题食品进行快速反映。因此,迫切需要大量能够满足现场、快速、准确、灵敏且成本低廉的食品安全分析检测技术。试纸法作为一种快速的现场检测方法,具有制作简单、使用方便、价格低廉、灵敏性好、稳定性好、特异性强、反应迅速、无需设备、结果显示直观、一次性使用、不需检修维护等特点,在食品安全检测领域显示出良好的应用前景,并有望成为最廉价的分析检测手段。目前已有报道的试纸检测方式有免疫学检测、分子生物检测等,制备复杂、成本高,如何提供一种简便低廉且准确度高的试检测纸是非常有意义的。技术实现要素:为了解决上述问题,本发明提供了一种带色蛋白水凝胶涂覆的检测试纸,利用带色的水凝胶与纯色的试纸相结合,在测试时,由于食源性细菌的存在,带色水凝胶会被食源性细菌吞噬,试纸显示本色,进而可以得到待测物品是否被细菌污染的结论。本发明的第一个目的在于提供一种食源性细菌的检测试纸,所述试纸是在基材纸上均匀涂覆带色蛋白水凝胶,干燥即得。在本发明的一种实施方式中,所述带色蛋白水凝胶的组分按照重量份数配比,包括10-20份变性蛋白、10-15份明胶、3-5份明阿拉伯胶、5-10份明食用色素。在本发明的一种实施方式中,所述试纸中的带色蛋白水凝胶涂覆的厚度为100-1000nm。在本发明的一种实施方式中,所述试纸中的基材纸为白色。在本发明的一种实施方式中,所述干燥是在30-80℃温度下烘干。在本发明的一种实施方式中,所述带色蛋白水凝胶的制备方法包括:(1)植物蛋白与水混合制备得到植物蛋白水溶液;(2)植物蛋白水溶液加热使得蛋白变性,然后加入明胶、阿拉伯胶、食用色素,即得带色蛋白水凝胶。在本发明的一种实施方式中,所述步骤(1)中植物蛋白与水的质量比为1:5-1:10。在本发明的一种实施方式中,所述步骤(1)中植物蛋白水溶液的ph为7.5。在本发明的一种实施方式中,所述步骤(2)中植物蛋白水溶液、明胶、阿拉伯胶、食用色素的质量比为100:(10-15):(3-5):(5-10)。在本发明的一种实施方式中,所述步骤(2)中蛋白变性是在60-80℃温度下加热20-30min。在本发明的一种实施方式中,所述步骤(2)中的凝胶ph为中性。在本发明的一种实施方式中,所述植物蛋白的制备方法包括:榨取植物得到汁液,静置后取上清液,然后调节ph值至4-5,0-10℃静置析出沉淀,分离沉淀,即得植物蛋白。在本发明的一种实施方式中,所述试纸的制备方法具体包括:(1)植物蛋白的制备:将新鲜植物通过高速榨汁机榨取其汁液,常温静置20-30min,分离其上层清液,下层残渣回收,上清液用2mol/l盐酸调节ph值至4-5,0-10℃静置20-30min至蛋白析出,以5000-6000g对料液离心30-60min。弃上清液,取出该沉淀,以1:(5-10)的量加入去离子水使其悬浮,调节ph至7.5,慢速搅拌待其充分溶解,得到植物蛋白水溶液;(2)水凝胶的制备:将植物蛋白水溶液置于水浴中60-80℃加热20-30min,使植物蛋白变性;冷却至室温后,调节溶液的ph至中性,按照重量配比加入明胶、阿拉伯胶、食用色素,然后均质使其成胶,得到带色植物蛋白水凝胶;(3)食源性细菌的检测试纸的制备:将带色植物蛋白水凝胶溶液均匀涂布于试纸上,试纸的底色为白色,涂覆的厚度为100-1000nm,30-80℃烘干,即可以得到所述的食源性细菌的检测试纸。本发明的第二个目的是提供一种食源性细菌的快速检测方法,所述方法是利用上述的检测试纸进行检测。本发明的第三个目的是提供一种食源性疾病的预防方法,所述方法是利用上述的检测试纸或者检测方法对食品进行筛选,除去含食源性细菌的食品。本发明的第四个目的是将上述的检测试纸或者检测方法应用于食品安全检测领域中。本发明的有益效果:1、本发明的食源性细菌的检测试纸采用天然材料,其具有普遍具有良好的生物相容性,植物蛋白是一类优质的食物蛋白质资源,具有很高的营养价值,具有易吸收、容易成胶的特点。本发明的食源性细菌的检测试纸主要是将带颜色的水凝胶与纯色的试纸相结合,在测试时,由于细菌的存在,带色水凝胶会被细菌吞噬,试纸显示本色,因此可以得到待测物品是否被细菌污染的结论。2、本发明的食源性细菌的检测试纸具有很强的亲水性能、可以通过比色判断细菌污染程度,结果显示直观,准确率高(达80%以上),灵敏度高(1h即可完成检测),稳定性好,便于存储(12个月的准确率仍可达75%以上),普适性高(对多种食源性菌均有较好的检测效果)。3、本发明的食源性细菌的检测试纸的体积小巧、一次性使用、不需检修维护、操作简便、成本低,具有广泛的应用前景,可以获得巨大的经济效益。具体实施方式准确率的测试方法为:在细菌浓度恒定的情况下,用试纸进行测试,测得试纸上100个格子中褪色的区域,计算褪色区域占比,即得准确率。实施例1蛋白质水凝胶制备:植物蛋白的制备:将新鲜植物通过高速榨汁机榨取其汁液,常温静置20min,分离其上层清液,下层残渣回收。上清液用2mol/l盐酸调节ph值至4,0℃静置20min至蛋白析出,以5000g对料液离心30min。弃上清液,取出该沉淀,以1:5的量加入去离子水使其悬浮,调节ph至7.5,慢速搅拌待其充分溶解,得到植物蛋白水溶液。水凝胶的制备:将制备好的植物蛋白水溶液置于60℃的水浴中加热20min,使植物蛋白变性;冷却至室温后,调节溶液的ph至中性,按照植物蛋白水溶液:明胶:阿拉伯胶:食用色素质量比=100:10:3:5,加入明胶、阿拉伯胶、食用色素,然后均质成胶,得到植物蛋白水凝胶。食源性细菌的检测试纸的制备:采用涂布法将制备好的植物蛋白水凝胶均匀涂布于试纸上,试纸的底色为白色,涂覆的厚度为100nm,(在紫外光照射下,将液态水凝胶固定在试纸上面)30℃烘干8h,得到食源性细菌的检测试纸。实施例2蛋白质水凝胶制备:植物蛋白的制备:将新鲜植物通过高速榨汁机榨取其汁液,常温静置25min,分离其上层清液,下层残渣回收。上清液用2mol/l盐酸调节ph值至4.5,5℃静置25min至蛋白析出,以5000g对料液离心45min。弃上清液,取出该沉淀,以1:8的量加入去离子水使其悬浮,调节ph至7.5,慢速搅拌待其充分溶解,得到植物蛋白水溶液。水凝胶的制备:将制备好的植物蛋白水溶液置于70℃下的水浴中加热25min,使植物蛋白变性;冷却至室温后,调节溶液的ph至中性,按照植物蛋白水溶液:明胶:阿拉伯胶:食用色素质量比=100:13:4:8,加入明胶、阿拉伯胶、食用色素,然后均质成胶,得到植物蛋白水凝胶。食源性细菌的检测试纸的制备:采用涂布法将制备好的植物蛋白水凝胶均匀涂布于试纸上,试纸的底色为白色,涂覆的厚度为500nm,(在紫外光照射下,将液态水凝胶固定在试纸上面)60℃烘干5h,得到食源性细菌的检测试纸。实施例3蛋白质水凝胶制备:植物蛋白的制备:将新鲜植物通过高速榨汁机榨取其汁液,常温静置30min,分离其上层清液,下层残渣回收。上清液用2mol/l盐酸调节ph值至5,10℃静置30min至蛋白析出,以6000g对料液离心60min。弃上清液,取出该沉淀,以1:10的量加入去离子水使其悬浮,调节ph至7.5,慢速搅拌待其充分溶解,得到植物蛋白水溶液。水凝胶的制备:将制备好的植物蛋白水溶液置于80℃下的水浴中加热30min,使植物蛋白变性;冷却至室温后,调节溶液的ph至中性,按照植物蛋白水溶液:明胶:阿拉伯胶:食用色素质量比=100:15:5:10,加入明胶、阿拉伯胶、食用色素,然后均质成胶,得到植物蛋白水凝胶。食源性细菌的检测试纸的制备:采用涂布法将制备好的植物蛋白水凝胶均匀涂布于试纸上,试纸的底色为白色,涂覆的厚度为700nm,(在紫外光照射下,将液态水凝胶固定在试纸上面)80℃烘干2h,即可以得到所述的食源性细菌的检测试纸。对实施例1-3和市售的检测试纸进行检测效果分析,检测不同菌的准确率结果见表1,检测相同数量的食源性细菌的结果对比见表2,各试纸的测试可储存性能见表3。其中市售检测试纸为餐具食用性细菌群快速检验纸片。表1各试纸对不同菌进行检测的准确率结果实施例金黄色葡萄球菌大肠杆菌沙氏门菌霍乱弧菌市售检测试纸50656055实施例180858080实施例285888380实施例383858084表2各试纸检测相同数量的食源性细菌的检测结果实施例准确率(%)检测时间(h)保质期(年)市售检测试纸6080.5实施例1801≥1实施例2851≥1实施例3831≥1表3不同试纸不同储存时间的准确率(%)储存时间(月)13612市售检测试纸6040200实施例180808075实施例285858583实施例383838380实施例4参照实施例1,改变水凝胶制备过程中植物蛋白水溶液的用量,其他条件不变,制备检测试纸。将植物蛋白水溶液的用量由100份替换为表4所示的份数,分别制备得到不同试纸,对所得试纸进行测试,结果见表4。表4不同植物蛋白水溶液的用量所得试纸的检测结果植物蛋白的质量份数准确率(%)检测时间(h)120701100801807516060140551203010101实施例5参照实施例1,改变水凝胶制备过程中明胶的用量,其他条件不变,制备检测试纸。将明胶的用量由10份替换为表5所示的份数,分别制备得到不同试纸,对所得试纸进行测试,结果见表5。表5不同明胶的用量所得试纸的检测结果明胶的质量份数准确率(%)检测时间(h)1080187016601440122010101实施例6参照实施例1,改变水凝胶制备过程中阿拉伯胶的用量,其他条件不变,制备检测试纸。将阿拉伯胶的用量由3份替换为表6所示的份数,分别制备得到不同试纸,对所得试纸进行测试,结果见表6。表6不同阿拉伯胶的用量所得试纸的检测结果阿拉伯胶的质量份数准确率(%)检测时间(h)3801250113010301实施例7参照实施例1,改变水凝胶制备过程中食用色素的用量,其他条件不变,制备检测试纸。将食用色素的用量由5份替换为表7所示的份数,分别制备得到不同试纸,对所得试纸进行测试,结果见表7。表7不同食用色素的用量所得试纸的检测结果食用色素的质量份数准确率(%)检测时间(h)156011075158013701160100-当前第1页12
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