具有抗肿瘤活性的吡咯并嘧啶化合物及其用途的制作方法

本发明涉及医药领域，具体涉及具有抗肿瘤活性的吡咯并嘧啶化合物及其用途，这类化合物能有效抑制二氢叶酸还原酶和/或胸苷酸合成酶。

背景技术：

肿瘤是严重危害人类健康的顽症，随着社会的发展，肿瘤的发病呈现不断上升的趋势，恶性肿瘤死因高居死亡榜首。目前，治疗肿瘤主要有外科疗法(手术)、化学疗法(化疗)、放射治疗(放疗)等，其中药物治疗仍然在癌症治疗中扮演着重要角色。因此，寻找高效低毒的抗癌药物一直以来都是药物研究工作者的重要目标。

叶酸在细胞生物合成过程中起重要作用。叶酸循环过程中的关键酶包括二氢叶酸还原酶(dhfr)和胸苷酸合成酶(ts),是目前叶酸拮抗剂作用的主要靶点。通过影响细胞内叶酸代谢过程中的重要酶,达到抗肿瘤目的方法,一直是药物化学家研究的重点。在人体叶酸代谢过程中，只有四氢叶酸具有生理功能，二氢叶酸需经过二氢叶酸还原酶(dhfr)催化还原为四氢叶酸(fh4)才能被人体所利用。四氢叶酸是一碳单元的传递体，使得胸苷合成酶(ts)能够催化2’-脱氧脲苷5’-单磷酸盐(dump)还原甲基化转变为2’-脱氧胸苷-5’-单磷酸盐(dtmp)，是dtmp从头合成的唯一途径。除了参与核酸的合成以外，四氢叶酸还参与体内其他重要化合物的生成和代谢。在肿瘤细胞快速增长过程中，如果dhfr和ts受到抑制，肿瘤细胞会因缺乏胸腺嘧啶而死亡，因此这两种酶已成为癌症化疗的重要靶点。

目前已在临床广泛应用的抗肿瘤叶酸拮抗剂包括甲氨蝶呤(mtx)，培美曲塞(pmx)，普拉曲沙(pdx)等。mtx是联合用药方案中常用的周期特异性药物，用于急性白血病，绒膜毛上皮癌。mtx是二氢叶酸还原酶的抑制剂，阻止二氢叶酸还原为四氢叶酸，使胸腺嘧啶核苷酸和嘌呤核苷酸的合成原料耗竭，抑制dna和rna的合成，从而抑制细胞的增生和复制，起到细胞毒作用。pmx的体外研究显示，培美曲塞能够抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶的活性从而达到抗肿瘤的作用。以上两种药物属于细胞毒性类药物，对机体损伤大，因此寻找替代的化合物尤为重要。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一类具有抗肿瘤活性的吡咯并嘧啶化合物，同时提供其用途。

一方面，本发明提供了式ⅱ化合物

其中：

m选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；

w选自

q选自取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的三元-十二元杂环基，取代或未取代的c3-c12的饱和或不饱和单环烷基；

a选自

r1选自h，取代或未取代的c1-c4的烷基,取代或未取代的氨基；

r2选自以下基团：

n选自0、1或2、3、4、5或6；

r4选自以下基团：

-cooh、

在本发明中，虽然式ⅱ化合物被表示成4-氧形式，而且在整个说明书中都如此表示，该氧即以与相应的4-羟基互变异构平衡的形式存在。因此，式ⅱ化合物被认为包括结构式所示的4-氧及其互变异构4-羟基形式。

在本发明中，式ⅱ化合物包括其药学可接受的盐以及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物。

在本发明的一些方案中，m选自0、1或2。

在本发明的一些方案中，w选自：

在本发明的一些方案中，q选自取代或未取代的芳基和杂芳基，所述杂芳基选自：包含一个或多个选自n、o或s的杂原子的5或6元杂芳基。优选的，q选自取代或未取代的芳基和杂芳基。

在本发明的一些方案中，r1选自h，ch3，c2h5或nh2。

在本发明的一些方案中，n选自0、1或2。

在本发明的一些方案中，r4选自以下基团：

-cooh或

其中上文的一个任选被取代的基团可以是未被取代的或者被一个或多个、例如1、2或3个取代基独立地取代，所述取代基独立地选自c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、-oc1-c4烷基、-c1-c4烷基-oh、-c1-c4烷基-o-c1-c4烷基、-oc1-c4卤代烷基、卤素、-oh、-nh2、-c1-c4烷基-nh2、-n(c1-c4烷基)(c1-c4烷基)、-nh(c1-c4烷基)。

式ⅱ化合物(包括其药学可接受的盐以及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物)的优选实施方案如下：

另一方面，本发明提供了任何一种本发明的化合物和/或至少一种药学上可接受的盐和/或至少一种前药，以及任何一种这些化合物的药学可接受的载体或赋形剂的药物组合物。

本发明所述的“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与本发明化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱包括无机碱及有机碱制备的盐，所述的无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。所述的有机无毒碱的盐，包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括取取代胺和环状胺。例如：n,n'－二苄基乙二胺、二乙胺、2一二乙基氨基乙醇、2一二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n一乙基吗啉、n一乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺等。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸。

本发明所述的“前药”表示能够在体内转化为式ⅱ化合物的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。

包含本发明所述的至少一种化合物和/或至少一种药学上可接受的盐和/或至少一种前药的组合物可以以各种已知的方式施用，例如口服施用、胃肠外施用、通过吸入喷雾施用或经由植入的贮库施用。本文所用的术语“胃肠外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、损害内和颅内注射或输注技术。本发明的药物组合物可单独给药也可与其他抗肿瘤药物联合用药，被治疗动物包括哺乳动物、爬行动物、甲壳动物、两栖类、鱼类、家禽类，本发明特别指人。

口服组合物可以是任何口服可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶囊、乳剂以及水性混悬剂、分散物和溶液。常用的药学上可接受的载体学上可接受的赋形剂的实例包括稳定剂、润滑剂、表面活性剂、稀释剂、抗氧化剂、粘合剂、着色剂、填充剂、乳化剂、或味道改性剂。

无菌可注射组合物可按照本领域已知的技术使用适合的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌可注射半成品也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬剂，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的药学上可接受的载体和溶剂尤其是甘露醇、水、林格氏液和等张氯化钠溶液。另外，常利用固定油作为溶剂或混悬介质。脂肪酸例如油酸及其甘油酯衍生物可用在注射剂的半成品中，天然的药学上可接受的油例如橄榄油或蓖麻油(尤其是它们的聚氧乙基化形式)也是如此。这些油溶液或混悬剂也可含有长链醇稀释剂或分散剂，或者羧甲基纤维素或类似的分散剂。

吸入组合物可按照药物制剂领域公知的技术制备，可利用苄醇或其它适合的防腐剂、增加生物利用度的吸收促进剂、氟碳和/或本领域已知的其它增溶剂或分散剂被制备成在盐水中的溶液的形式。

局部组合物可被配制成油、乳膏剂、洗剂、软膏剂等形式。用于组合物的适合的载体包括植物油或矿物油、白矿脂、支链脂肪或油、动物脂肪和高分子量醇。药学上可接受的载体是活性成分在其中可溶的载体。如果需要，还可以包含乳化剂、稳定剂、保湿剂和抗氧化剂以及赋予颜色或香味的物质。

可以改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平以获得对特定患者、组合物和施用方式而言可有效实现所需治疗响应、对患者无毒的活性成分的量。

所选择的剂量水平将取决于多种因素，包括所用的具体的本发明的化合物或其酯、盐或酰胺的活性、施用途径、施用时间、所用的具体化合物的排泄速率、治疗的持续时间、与所用的具体化合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料、所治疗的患者的年龄、性别、体重、情况、一般健康状况和既往医学史以及医学领域中公知的类似因素。

再一方面，本发明提供了任何一种本发明的式ⅱ化合物在制备治疗与二氢叶酸还原酶和/或胸苷酸合成酶相关的疾病的药物中的应用。

所述二氢叶酸还原酶和/或胸苷酸合成酶相关疾病包括癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫有关的疾病。所述的癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫有关的疾病包含但不限制于关节炎、类风湿性关节炎、脊椎关节病、痛风性关节炎、骨关节炎、幼年型关节炎、其它关节炎状况、狼疮、系统性红斑狼疮、皮肤有关的疾病、银屑病、干眼、湿疹、皮炎、特应性皮炎、疼痛、肺部病症、肺部炎症、成人呼吸窘迫综合征、肺结节病、慢性肺部炎症性疾病、慢性阻塞性肺疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化、心肌梗死、充血性心脏衰竭、心脏再灌注损伤、炎性肠道疾病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、哮喘、干燥综合征、自身免疫甲状腺疾病、荨麻疹、多发性硬化症、硬皮病、器官移植排斥、异种移植、特发性血小板减少性紫癜、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、糖尿病相关疾病、炎症、盆腔炎性疾病、变应性鼻炎、变应性支气管炎、变应性鼻窦炎、白血病、淋巴瘤、b细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤、骨髓瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、毛细胞白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增生性肿瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、宫颈癌、胃癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、肺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、cns癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、头颈部癌、或胰腺癌。

在本发明的一些方案中，提供了任何一种本发明的式ⅱ化合物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明进行进一步详细的说明。

实施例12-氨基-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

将2,6-二氨基-4-氧嘧啶(50g,0.4mol)和乙酸钠(33.6g,0.4mol)加入水中(150ml)，加热至回流后，逐滴加入与氯乙醛(60.9g,0.47mol)。反应物回流18h后，冷却至室温，沉淀过滤，分别用水(2×50ml)和丙酮(2×50ml)洗涤，干燥后得到2-氨基-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮。esi-ms(m/z):151.1[m+h]⁺。

实施例22-氨基-6-碘-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

室温下将2-氨基-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.5g,0.01mol)和碘(5.1g,0.02mol)溶于乙醇/水(2:1,100ml)，加热至回流2h。冷却析出沉淀，沉淀过滤，分别用1n硫代硫酸钠溶液(2×30ml)和水(2×50ml)洗涤，干燥后得到2-氨基-6-碘-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮。esi-ms(m/z):276.9[m+h]⁺。

实施例32-氨基-6-(羟乙炔基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

室温下将2-氨基-6-碘-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(2.7g,0.01mol)和乙炔醇(0.43g,0.01mol)溶于无水dmf(30ml)中，加入氯化钯(71mg,0.40mmol)，三苯基膦(131mg,0.40mmol)，三乙胺(10.1g,0.1mol)和碘化亚铜(304mg,1.60mmol)，加热至100℃反应12h。减压蒸去溶剂，经柱色谱分离得到2-氨基-6-(羟乙炔基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮。esi-ms(m/z):191.1[m+h]⁺。

实施例42-氨基-6-(2-羟乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

将2-氨基-6-(羟乙炔基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.9g,0.01mol)溶于甲醇(50ml)中，加入5％钯碳(200mg)，室温下催化氢化(50psi)反应12h。过滤，减压蒸去溶剂得到2-氨基-6-(2-羟乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮。mp>275℃；esi-ms(m/z):195.1[m+h]⁺。

实施例52-氨基-6-(2-溴乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

将2-氨基-6-(2-羟乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.2g,6mmol)溶于30％溴化氢冰醋酸溶液(30ml)中，室温反应18h。减压蒸去乙酸，加入乙醚(50ml)，析出沉淀，过滤，洗涤得到2-氨基-6-(2-溴乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.6g,88％)。mp:229℃；esi-ms(m/z):258.1[m+h]⁺。

实施例62-氨基-6-(叠氮乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

将2-氨基-6-(2-溴乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.28g,5mmol)加入无水dmf(15ml)中，加入叠氮化钠(0.52g，8mmol)，升温至回流反应2-3h。减压蒸去溶剂，加水(50ml)有固体析出，过滤烘干即得2-氨基-6-(叠氮乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.85g,77.62％)。mp＝178℃。esi-ms(m/z):218.0[m-h]^-。

实施例72-氨基-6-(2-氨基乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

将2-氨基-6-(叠氮乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.09g,5mmol)加入无水dmf(15ml)中，加入pd/c(0.85g，8mmol)，于室温通氢气反应过夜。过滤得滤液，减压蒸去溶剂，即得2-氨基-6-(2-氨基乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.85g,88.08％)。mp>275℃。esi-ms(m/z):194.2[m+h]⁺。

实施例84-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸

室温下将2-氨基-6-(2-氨基乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(96.5mg,5mmol)和1-羟基苯并三唑(0.8g,6mmol)溶于无水dmf(20ml)中搅拌2h，随后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.2g,6mmol),4-(甲氧基羰基)苯甲酸(1.8g,10mmol)和三乙胺(1.0g,10mmol)。室温下继续反应5小时后，减压蒸去溶剂，加入na2co3溶液(50ml)析出沉淀。沉淀过滤后加入1nnaoh(100ml)溶解，室温反应1.5h。冰浴冷却下，用1nhcl调节ph至2-3。沉淀过滤，冷水(30ml)洗涤，干燥后得到4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(897mg,47.5％)。mp>275℃。esi-ms(m/z):341.1[m-h]^-。

实施例9n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n⁴-(吡啶-4-基甲基)对苯二甲酰胺

室温下将4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(342mg,1.0mmol)和1-羟基苯并三唑(0.8g,6mmol)溶于无水dmf(15ml)中搅拌2h，随后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(230mg,1.2mmol),4-氨甲基吡啶(216mg,2mmol)和三乙胺(202mg,2mmol)。室温下继续反应5小时后，减压蒸去溶剂，加入na2co3溶液(20ml)析出沉淀。沉淀过滤，甲醇/乙酸乙酯(1:1,30ml)洗涤，干燥后得n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n⁴-(吡啶-4-基甲基)对苯二甲酰胺(175mg,40.6％)。mp＝209.4℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.83-2.86(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.56-3.61(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.56-4.57(d,j＝4hz,2h,-conhch2-),6.01(s,1h,5-h),6.10(s,2h,2-nh2),7.37-7.38(d,j＝4hz,2h,ar-h),7.97-7.99(d,j＝8hz,2h,ar-h),8.03-8.05(d,j＝8hz,2h,pyridine),8.55-8.57(d,j＝8hz,2h,pyridine),8.73-8.76(t,j＝12hz,1h,-ch2ch2nhco-),9.31-9.35(t,j＝16hz,1h,-conhch2-),10.25(s,1h,3-h),10.97(t,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝27.3,28.9,41.8,98.6,99.8,109.8,119.8,122.1,125.4,127.2,128.4,136.1,136.9,146.4,149.5,151.1,151.478,152.0,158.5,165.5,166.0；esi-ms(m/z):430.1[m-h]^-。

实施例10n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n⁴-(吡啶-3-基甲基)对苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n⁴-(吡啶-3-基甲基)对苯二甲酰胺(161mg,37.4％)。mp＝278.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.76-2.80(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.49-3.52(q,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.50-4.51(d,j＝4hz,2h,-conhch2-),5.96(s,1h,5-h),6.04(s,2h,2-nh2),7.35-7.38(t,j＝12hz,1h,pyridine),7.73-7.75(d,j＝8hz,1h,pyridine),7.89-7.92(d,j＝8hz,2h,ar-h),7.92-7.96(d,j＝8hz,2h,ar-h),8.46-8.47(s,j＝4hz,1h,pyridine),8.56(s,1h,pyridine),8.68-8.70(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),9.23-9.26(t,j＝12hz,1h,-conhch2-),10.20(s,1h,3-h),10.93(t,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝165.8,165.5,158.5,151.9,151.1,148.7,146.0,136.9,136.2,135.2,134.9,126.4,127.2,123.5,99.8,96.9,40.4；esi-ms(m/z):430.2[m-h]^-。

实施例11n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n⁴-(吡啶-2-基甲基)对苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n⁴-(吡啶-2-基甲基)对苯二甲酰胺(185mg,43.2％)。mp＝257.7℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.77-2.81(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.51-3.56(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.58-4.60(d,j＝8hz,2h,-conhch2-),5.96(s,1h,5-h),6.08(s,2h,2-nh2),7.27-7.30(t,j＝12hz,1h,pyridine)7.34-7.36(d,j＝8hz,1h,pyridine),7.76-7.79(t,j＝12hz,1h,pyridine),7.92-7.94(d,j＝8hz,2h,ar-h),7.98-8.00(d,j＝8hz,2h,ar-h),8.52-8.53(d,j＝4hz,1h,pyridine),8.68-8.71(t,j＝12hz,1h,-ch2ch2nhco-),9.25-9.28(t,j＝12hz,1h,-conhch2-),10.22(s,1h,3-h),10.92(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝165.8,165.5,158.5,158.4,153.3,151.9,150.9,148.6,136.9,136.9,136.3,128.4,127.2,122.7,122.2,121.1,99.8,98.6,44.6；esi-ms(m/z):432.2[m+h]⁺。

实施例12(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰基)苯甲酰氨基)戊二酸

室温下将2-氨基-6-(2-氨基乙基)-3,7-二氢-4h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.70g,5mmol)和1-羟基苯并三唑(0.8g,6mmol)溶于无水dmf(20ml)中搅拌2h，随后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.2g,6mmol),l-谷氨酸二乙酯(1.8g,10mmol)和三乙胺(1.0g,10mmol)。室温下继续反应5小时后，减压蒸去溶剂，加入na2co3溶液(50ml)析出沉淀。沉淀过滤后加入1nnaoh(100ml)溶解，室温反应1.5h。冰浴冷却下，用1nhcl调节ph至2-3。沉淀过滤，冷水(30ml)洗涤，干燥后得到(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰基)苯甲酰氨基)戊二酸(1.06g,45.3％)。mp＝159.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝1.94-2.01(m,j＝28hz,1h,-ch2ch2cooh),2.10-2.12(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2cooh),2.36-2.37(d,j＝4hz,2h,-ch2cooh),2.79-2.82(s,2h,-ch2ch2nhco),2.84-2.87(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.42(s,1h,-nhchcooh),5.98(s,1h,5-h),6.11(s,2h,2-nh2),7.94-8.04(m,j＝40hz,4h,ar-h),8.76-8.78(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.73(s,1h,-conhch-),10.28(s,1h,3-h),10.94(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝173.9,173.3,166.0,165.6,158.5,152.0,151.1,136.9,135.9,129.4,129.2,126.6,127.4,127.1,99.8,98.6,52.0,30.4,27.3,25.8；esi-ms(m/z):469.1[m-h]^-。

实施例13(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.13g,46.0％)。mp＝167.1℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.18-2.22(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.44-2.48(m,2h,-ch2-tetrazole),2.79-2.81(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco),2.84-2.87(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-)，4.32(s,1h,-nhchco-),5.88(s,1h,5-h),6.15(s,2h,2-nh2),7.02(s,1h,-tetrazole),7.96-8.02(m,j＝40hz,4h,ar-h),8.74-8.78(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.77(s,1h,-conhch-),10.29(s,1h,3-h),10.88(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):493.1[m-h]^-。

实施例143-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物3-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(706mg,41.4％)。mp>275℃。esi-ms(m/z):340.2[m-h]^-。

实施例15n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n³-(吡啶-4-基甲基)间苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n³-(吡啶-4-基甲基)间苯二甲酰胺(192mg,54.5％)。mp＝257.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.78-2.82(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.51-3.56(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.51-4.53(d,j＝8hz,2h,-conhch2-),5.96(s,1h,5-h),6.11(s,2h,2-nh2),7.33-7.35(d,j＝8hz,2h,pyridine),7.76-7.79(t,j＝12hz,1h,pyridine),7.93-8.00(d,j＝28hz,4h,ar-h),8.51-8.52(d,j＝4hz,2h,pyridine),8.71-8.73(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco),9.31-9.34(t,j＝12hz,1h,-conhch2-),10.25(s,1h,3-h),10.92(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝165.9,165.5,158.4,152.0,151.1,149.3,148.7,136.9,136.09,134.1,128.4,127.2,122.7,122.2,99.7,98.6,41.9,41.8；esi-ms(m/z):430.2[m-h]^-。

实施例16n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n³-(吡啶-3-基甲基)间苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n³-(吡啶-3-基甲基)间苯二甲酰胺(204mg,57.8％)。mp＝233.4℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.77-2.80(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.50-3.55(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.60-4.61(d,j＝4hz,2h,-conhch2-),5.95(s,1h,5-h),6.03(s,2h,2-nh2),7.35-7.38(d,j＝12hz,1h,pyridine),7.54-7.58(t,j＝16hz,1h,ar-h),7.77-7.79(d,j＝8hz,1h,ar-h),7.99-8.01(d,j＝8hz,2h,ar-h),8.37(s,1h,ar-h),8.46-8.47(d,j＝4hz,1h,pyridine),8.57(s,1h,pyridine),8.68-8.71(t,j＝12hz,1h,-ch2ch2nhco),9.24-9.27(t,j＝12hz,1h,-conhch2-),10.17(s,1h,3-h),10.91(s,1h,7-h).；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝165.9,165.7,158.4,151.9,151.1,148.9,148.1,135.2,134.9,134.8,134.2,129.9,129.7,128.4,126.3,123.5,99.8,98.5,42.2,40.4；esi-ms(m/z):430.2[m-h]^-。

实施例17n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n³-(吡啶-2-基甲基)间苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n³-(吡啶-2-基甲基)间苯二甲酰胺(220mg,62.4％)。mp＝216.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.78-2.82(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.52-3.57(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.60-4.61(d,j＝4hz,2h,-conhch2-),5.97(s,1h,5-h),6.16(s,2h,2-nh2),7.30-7.33(t,j＝12hz,1h,ar-h),7.39-7.40(d,j＝4hz,1h,pyridine),7.56-7.60(t,j＝16hz,1h,pyridine),7.80-7.84(t,j＝16hz,1h,pyridine),7.99-8.01(d,j＝8hz,1h,ar-h),8.04-8.06(d,j＝8hz,1h,ar-h),8.45(s,1h,ar-h),8.54-8.55(d,j＝4hz,1h,pyridine),8.73-8.75(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),9.31-9.34(t,j＝12hz,1h,-conhch2-),10.27(s,1h,3-h),10.97(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝166.0,165.7,158.4,151.9,148.3,137.3,134.7,134.2,129.9,129.8,128.5,126.3,122.3,121.2,99.8,98.6,44.5,41.9；esi-ms(m/z):430.2[m-h]^-。

实施例18(s)-2-(3-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰基)苯甲酰氨基)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(3-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰基)苯甲酰氨基)戊二酸(1.02g,43.6％)。mp＝216.7℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝1.95-2.01(m,j＝24hz,1h,-ch2ch2cooh),2.08-2.17(m,j＝36hz,1h,-ch2ch2cooh),2.38-2.41(t,j＝12hz,2h,-ch2co-),2.84-2.87(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.54-3.59(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.41-4.46(m,j＝20hz,1h,-nhchco-),6.12(s,1h,5-h),7.55-7.59(t,j＝16hz,1h,ar-h),7.99-8.03(t,j＝16hz,1h,ar-h),8.41(s,1h,ar-h),8.79-8.83(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-,-conhch-),11.31(s,1h,3-h),11.71(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝173.6,173.3,166.2,165.8,150.8,151.1,141.3,134.6,134.0,130.0,128.3,126.5,100.0,99.0,52.0,30.4,27.0,25.8；esi-ms(m/z):469.1[m-h]^-。

实施例19(s)-2-(3-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(3-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.07g,43.4％)。mp＝210.2℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.19-2.23(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.45-2.48(m,2h,-ch2-tetrazole),2.77-2.79(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco),2.84-2.87(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.36(s,1h,-nhchco-),5.90(s,1h,5-h),6.23(s,2h,2-nh2),7.12(s,1h,-tetrazole),7.90-7.93(m,4h,ar-h),8.76-8.78(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.69(s,1h,-conhch-),10.34(s,1h,3-h),10.82(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):493.1[m-h]^-。

实施例202-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物3-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(999mg,58.6％)。mp>275℃。esi-ms(m/z):340.2[m-h]^-。

实施例21n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n²-(吡啶-4-基甲基)邻苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n²-(吡啶-4-基甲基)邻苯二甲酰胺(175mg,40.5％)。mp＝94.3℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.71-2.74(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.39-3.44(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.45-4.46(d,j＝4hz,2h,-conhch2-),5.97(s,1h,5-h),6.01(s,2h,2-nh2),7.40-7.42(d,j＝8hz,2h,pyridine),7.49-7.56(m,j＝28hz,4h,ar-h),8.41-8.44(t,j＝12hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.49-8.51(d,j＝8hz,2h,pyridine),8.93-8.96(t,j＝12hz,1h,-conhch2-)，10.16(s,1h,3-h)，10.87(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝168.6,68.1,158.2,151.9,151.1,149.4,146.5,142.9,136.6,135.9,129.5,129.3,126.6,127.6,127.5,122.1,99.8,98.6,43.8,41.5；esi-ms(m/z):432.2[m+h]⁺。

实施例22n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n²-(吡啶-3-基甲基)邻苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n²-(吡啶-3-基甲基)邻苯二甲酰胺(186mg,42.9％)。mp＝109.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.61-2.65(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-)，3.39-3.44(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.46-4.48(d,j＝8hz,2h,-conhch2-),5.99(s,1h,5-h),6.06(s,2h,2-nh2),7.34-7.38(q,j＝16hz,1h,pyridine),7.42-7.53(m,j＝44hz,4h,ar-h),7.80-7.82(d,j＝8hz,1h,pyridine),8.60(s,1h,pyridine),8.41-8.43(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-)，8.43-8.45(d,j＝8hz,1h，pyridine)，8.92-8.95(t,j＝12hz,1h,-conhch2-)，10.23(s,1h,3-h),10.91(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝168.5,168.1,158.5,151.9,151.2,148.7,147.9,142.9,142.9,136.6,135.9,135.1,134.9,132.6,129.4,129.3,128.9,127.6,127.5；esi-ms(m/z):432.2[m+h]⁺。

实施例23n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n²-(吡啶-2-基甲基)邻苯二甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n¹-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-n²-(吡啶-2-基甲基)邻苯二甲酰胺(169mg,38.9％)。mp＝144.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.04-3.07(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.39-3.43(q,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco),4.52-4.54(d,j＝8hz,2h,-conhch2),5.96(s,1h,5-h),6.11(s,2h,2-nh2),7.25-7.28(t,j＝12hz,1h,pyridine),7.49-7.59(m,j＝40hz,4h,ar-h),7.76-7.79(t,j＝12hz,1h,pyridine),8.43-8.46(t,j＝12hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.49-8.50(d,j＝4hz,1h,pyridine),8.93-8.96(t,j＝12hz,1h,-conhch2-),10.25(s,1h,3-h),10.87(s,1h,7-h)；¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ＝168.5,168.2,158.6,158.3,152.0,151.1,148.6,136.6,135.9,129.4,129.3,127.6,122.0,120.9,99.8,96.6,44.6,42.0；esi-ms(m/z):432.2[m+h]⁺。

实施例24(s)-2-(2-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰基)苯甲酰氨基)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(2-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰基)苯甲酰氨基)戊二酸(898mg,38.2％)。mp＝155.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝1.17-1.26(m,j＝36hz,1h,-ch2ch2cooh),1.30-1.41(m,j＝44hz,1h,-ch2ch2cooh),2.75(s,2h,-ch2co-),3.43(s,2h,-ch2ch2nhco-),5.98(s,1h,5-h),6.27(s,2h,2-nh2),7.37-7.39(d,j＝8hz,1h,ar-h),7.50-7.51(q,j＝8hz,2h,ar-h),7.77(s,1h,ar-h),8.47(s,1h,-ch2ch2nhco-),11.31(s,1h,3-h),11.71(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):469.1[m-h]^-。

实施例25(s)-2-(2-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(2-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.23g,50.1％)。mp＝161.2℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.20-2.23(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.41-2.44(m,2h,-ch2-tetrazole),2.73-2.75(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco),2.81-2.83(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.39(s,1h,-nhchco-),5.97(s,1h,5-h),6.21(s,2h,2-nh2),7.11(s,1h,-tetrazole),7.93-7.97(m,4h,ar-h),8.77-8.80(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.81(s,1h,-conhch-),10.20(s,1h,3-h),10.77(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):493.1[m-h]^-。

实施例264-(3-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)苯甲酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物4-(3-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)苯甲酸(678mg,38.1％)。mp＝254℃。esi-ms(m/z):355.1[m-h]^-。

实施例274-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)-n-(吡啶-4-基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)-n-(吡啶-4-基)苯甲酰胺(206mg,46.3％)。mp＝130.7℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.00-3.03(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.34-3.39(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.49-4.52(d,2h,-conhch2),5.91(s,1h,5-h),6.12(s,2h,2-nh2),7.24-7.27(m,2h,pyridine),7.40-7.47(m,4h,ar-h),7.66-7.69(m,2h,pyridine),8.40-8.42(m,2h,-nhconh-),8.90-8.92(t,1h,-conhch2-),10.24(s,1h,3-h),10.79(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):447.3[m+h]⁺。

实施例284-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)-n-(吡啶-3-基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)-n-(吡啶-3-基)苯甲酰胺(203mg,45.5％)。mp＝137.2℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.01-3.03(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.31-3.39(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.50-4.52(d,2h,-conhch2),5.89(s,1h,5-h),6.01(s,2h,2-nh2),7.23-7.26(m,1h,pyridine),7.41-7.49(m,4h,ar-h),7.66-7.69(m,2h,pyridine),8.40-8.43(m,2h,-nhconh-),8.53-8.55(m,1h,pyridine),8.90-8.93(t,1h,-conhch2-),10.22(s,1h,3-h),10.77(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):447.3[m+h]⁺。

实施例294-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)-n-(吡啶-2-基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)-n-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(198mg,44.3％)。mp＝140.1℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.05-3.08(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.35-3.37(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.54-4.55(d,2h,-conhch2),5.81(s,1h,5-h),6.14(s,2h,2-nh2),7.24-7.26(m,1h,pyridine),7.41-7.46(m,4h,ar-h),7.66-7.71(m,3h,pyridine),8.40-8.43(m,2h,-nhconh-),8.90-8.93(t,1h,-conhch2-),10.25(s,1h,3-h),10.57(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):447.2[m+h]⁺。

实施例30(s)-2-(4-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)苯甲酰胺基)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)苯甲酰胺基)戊二酸(895mg,36.9％)。mp＝235.1℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝1.91-1.93(m,1h,-ch2ch2cooh),2.01-2.07(m,1h,-ch2ch2cooh),2.35-2.37(t,2h,-ch2cooh),2.81-2.84(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.51-3.54(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.46-4.49(m,1h,-nhchcooh),6.18(s,1h,5-h),7.59-7.62(t,1h,ar-h),7.88-7.93(t,1h,ar-h),8.31(s,1h,ar-h),8.76-8.88(m,3h,-ch2ch2nhconh-,-conhch-),11.21(s,1h,3-h),11.67(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):484.5[m-h]^-。

实施例31(s)-2-(4-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-(3-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)脲基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.05g,41.2％)。mp＝221.2℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.15-2.18(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.43-2.45(m,2h,-ch2-tetrazole),2.73-2.75(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhconh-),2.81-2.84(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2nhconh-),4.31(s,1h,-nhchco-),5.79(s,1h,5-h),6.12(s,2h,2-nh2),7.25(s,1h,-tetrazole),7.93-7.96(m,4h,ar-h),8.72-8.78(m,3h,-ch2ch2nhconh-,-conhch-),10.32(s,1h,3-h),10.72(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):508.1[m-h]^-。

实施例324-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)氧基)苯甲酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物4-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)氧基)苯甲酸(906mg,50.8％)。mp>275℃。esi-ms(m/z):356.3[m-h]^-。

实施例334-(吡啶-4-基氨甲酰)苯基(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(吡啶-4-基氨甲酰)苯基(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酸酯(151mg,33.8％)。mp＝179.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.15-3.17(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.35-3.41(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.41-4.44(d,2h,-conhch2),5.88(s,1h,5-h),6.03(s,2h,2-nh2),7.22-7.26(m,2h,pyridine),7.41-7.45(m,4h,ar-h),7.55-7.58(m,2h,pyridine),8.44-8.45(m,1h,-nhcoo-),8.89-8.93(t,1h,-conhch2-),10.10(s,1h,3-h),10.75(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):448.5[m+h]⁺。

实施例344-(吡啶-3-基氨甲酰)苯基(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(吡啶-3-基氨甲酰)苯基(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酸酯(138mg,30.9％)。mp＝172.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.13-3.16(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.34-3.41(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.39-4.44(d,2h,-conhch2),5.91(s,1h,5-h),6.10(s,2h,2-nh2),7.20-7.24(m,1h,pyridine),7.42-7.47(m,4h,ar-h),7.54-7.58(m,2h,pyridine),8.44-8.48(m,1h,-nhcoo-),8.68-8.72(m,1h,pyridine),8.89-8.92(t,1h,-conhch2-),10.13(s,1h,3-h),10.71(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):448.5[m+h]⁺。

实施例354-(吡啶-2-基氨甲酰)苯基(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(吡啶-2-基氨甲酰)苯基(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酸酯(172mg,38.5％)。mp＝170.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.13-3.15(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.39-3.41(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.39-4.42(d,2h,-conhch2),5.88(s,1h,5-h),6.15(s,2h,2-nh2),7.22-7.24(m,2h,pyridine),7.42-7.48(m,4h,ar-h),7.54-7.56(m,1h,pyridine),8.44-8.46(m,1h,-nhcoo-),8.68-8.70(m,1h,pyridine),8.90-8.92(t,1h,-conhch2-),10.20(s,1h,3-h),10.74(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):448.3[m+h]⁺。

实施例36(s)-2-(4-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)氧基)苯甲酰胺)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物((s)-2-(4-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)氧基)苯甲酰胺)戊二酸(995mg,40.9％)。mp＝229.3℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝1.93-1.96(m,1h,-ch2ch2cooh),2.00-2.03(m,1h,-ch2ch2cooh),2.38-2.40(t,2h,-ch2cooh),2.85-2.88(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.55-3.58(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.49-4.51(m,1h,-nhchcooh),6.25(s,1h,5-h),7.66-7.69(t,1h,ar-h),7.88-7.91(t,1h,ar-h),8.32(s,1h,ar-h),8.79-8.84(m,2h,-ch2ch2nhcoo-,-conhch-),11.29(s,1h,3-h),11.74(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):485.4[m-h]^-。

实施例37(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)氧基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)氧基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.07g,42.0％)。mp＝225.2℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.12-2.14(m,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.44-2.46(m,2h,-ch2-tetrazole),2.72-2.74(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2nhcoo-),2.80-2.82(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2nhcoo-),4.37(s,1h,-nhchco-),5.75(s,1h,5-h),6.32(s,2h,2-nh2),7.21(s,1h,-tetrazole),7.83-7.85(m,4h,ar-h),8.71-8.76(m,2h,-ch2ch2nhcoo-,-conhch-),10.33(s,1h,3-h),10.81(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):509.1[m-h]^-。

实施例384-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物4-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酸(693mg,38.8％)。mp>275℃。esi-ms(m/z):356.2[m-h]^-。

实施例392-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基(4-(吡啶-4-基氨甲酰)苯基)氨基甲酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基(4-(吡啶-4-基氨甲酰)苯基)氨基甲酸酯(222mg,49.7％)。mp＝210.0℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.24-3.26(t,2h,-ch2ch2oco-),3.30-3.32(q,2h,-ch2ch2oco-),4.37-4.39(d,2h,-conhch2-),5.82(s,1h,5-h),6.03(s,2h,2-nh2),7.12-7.16(m,2h,pyridine),7.40-7.45(m,4h,ar-h),7.53-7.57(m,2h,pyridine),8.41-8.44(m,1h,-oconh-),8.71-8.74(t,1h,-conhch2-),10.14(s,1h,3-h),10.67(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):448.1[m+h]⁺。

实施例402-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基(4-(吡啶-3-基氨甲酰)苯基)氨基甲酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基(4-(吡啶-3-基氨甲酰)苯基)氨基甲酸酯(232mg,52.0％)。mp＝202.3℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.25-3.28(t,2h,-ch2ch2oco-),3.32-3.36(q,2h,-ch2ch2oco-),4.39-4.44(d,2h,-conhch2-),5.81(s,1h,5-h),6.13(s,2h,2-nh2),7.10-7.15(m,1h,pyridine),7.40-7.43(m,4h,ar-h),7.53-7.56(m,2h,pyridine),8.42-8.44(m,1h,-oconh-),8.61-8.66(m,1h,pyridine),8.71-8.73(t,1h,-conhch2-),10.17(s,1h,3-h),10.65(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):448.3[m+h]⁺。

实施例412-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基(4-(吡啶-2-基氨甲酰)苯基)氨基甲酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基(4-(吡啶-2-基氨甲酰)苯基)氨基甲酸酯(241mg,54.4％)。mp＝19.8℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.22-3.24(t,2h,-ch2ch2oco-),3.34-3.36(q,2h,-ch2ch2oco-),4.39-4.42(d,2h,-conhch2-),5.78(s,1h,5-h),6.07(s,2h,2-nh2),7.13-7.15(m,2h,pyridine),7.44-7.49(m,4h,ar-h),7.54-7.57(m,1h,pyridine),8.42-8.45(m,1h,-oconh-),8.62-8.66(m,1h,pyridine),8.74-8.77(t,1h,-conhch2-),10.12(s,1h,3-h),10.69(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):448.2[m+h]⁺

实施例42(s)-2-(4-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酰胺)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-(((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酰胺)戊二酸(786mg,32.3％)。mp＝241.2℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝1.83-1.86(m,1h,-ch2ch2cooh),1.95-1.99(m,1h,-ch2ch2cooh),2.35-2.39(t,2h,-ch2cooh),2.75-2.78(t,2h,-ch2ch2nhco-),3.51-3.55(q,2h,-ch2ch2nhco-),4.42-4.47(m,1h,-nhchcooh),6.20(s,1h,5-h),7.61-7.65(t,1h,ar-h),7.81-7.85(t,1h,ar-h),8.44(s,1h,ar-h),8.66-8.69(m,2h,-ch2ch2oconh-,-conhch-),11.27(s,1h,3-h),11.73(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):485.4[m-h]^-。

实施例43(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(0.87g,44.4％)。mp＝231.5℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.14-2.17(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.41-2.44(m,2h,-ch2-tetrazole),2.72-2.75(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2oconh-),2.81-2.84(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2oconh-),4.30(s,1h,-nhchco-),5.79(s,1h,5-h),6.30(s,2h,2-nh2),7.22(s,1h,-tetrazole),7.81-7.83(m,4h,ar-h),8.72-8.79(m,2h,-ch2ch2oconh-,-conhch-),10.23(s,1h,3-h),10.66(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):509.1[m-h]^-。

实施例444-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)苯甲酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)苯甲酸(738mg,39.1％)。mp＝221.1℃。esi-ms(m/z):376.3[m-h]^-。

实施例454-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)-n-(吡啶-4-基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)-n-(吡啶-4-基)苯甲酰胺(234mg,50.2％)。mp＝175.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.35-3.38(t,2h,-ch2ch2nhso2-),3.66-3.68(q,2h,-ch2ch2nhso2-),4.22-4.25(d,2h,-conhch2-),5.73(s,1h,5-h),6.21(s,2h,2-nh2),7.17-7.20(m,2h,pyridine),7.38-7.45(m,4h,ar-h),7.43-7.46(m,2h,pyridine),8.42-8.46(m,1h,-nhso2-),8.74-8.77(t,1h,-conhch2-),10.18(s,1h,3-h),10.61(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):468.3[m+h]⁺。

实施例464-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)-n-(吡啶-3-基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)-n-(吡啶-3-基)苯甲酰胺(228mg,48.8％)。mp＝172.3℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.33-3.37(t,2h,-ch2ch2nhso2-),3.67-3.69(q,2h,-ch2ch2nhso2-),4.22-4.26(d,2h,-conhch2-),5.77(s,1h,5-h),6.25(s,2h,2-nh2),7.16-7.20(m,2h,pyridine),7.38-7.41(m,4h,ar-h),7.43-7.48(m,1h,pyridine),8.41-8.45(m,1h,-nhso2-),8.67-8.70(m,1h,pyridine),8.73-8.76(t,1h,-conhch2-),10.20(s,1h,3-h),10.55(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):468.3[m+h]⁺。

实施例474-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)-n-(吡啶-2-基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)-n-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(216mg,46.2％)。mp＝169.8℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.31-3.34(t,2h,-ch2ch2nhso2-),3.62-3.65(q,2h,-ch2ch2nhso2-),4.23-4.26(d,2h,-conhch2-),5.79(s,1h,5-h),6.19(s,2h,2-nh2),7.17-7.20(m,2h,pyridine),7.39-7.41(m,4h,ar-h),7.43-7.47(m,1h,pyridine),8.42-8.45(m,1h,-nhso2-),8.68-8.70(m,1h,pyridine),8.74-8.76(t,1h,-conhch2-),10.31(s,1h,3-h),10.70(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):468.1[m+h]⁺。

实施例48(s)-2-(4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)苯甲酰胺基)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨磺酰基)苯甲酰胺基)戊二酸(1.04g,41.1％)。mp＝206.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.11-2.15(m,1h,-ch2ch2cooh),2.22-2.34(m,1h,-ch2ch2cooh),2.44-2.46(t,2h,-ch2cooh),2.70-2.74(t,2h,-ch2ch2nhso2-),3.53-3.55(q,2h,-ch2ch2nhso2-),4.45-4.46(m,1h,-nhchcooh),6.21(s,1h,5-h),7.63-7.65(t,1h,ar-h),7.81-7.83(t,1h,ar-h),8.56(s,1h,ar-h),8.7-8.79(m,2h,-ch2ch2nhso2-,-conhch-),11.37(s,1h,3-h),11.83(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):505.5[m-h]^-。

实施例49(s)-2-(4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)磺胺基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-(n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)磺胺基)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.07g,40.3％)。mp＝200.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.17-2.19(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.42-2.43(m,2h,-ch2-tetrazole),2.70-2.72(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2nhso2-),2.83-2.84(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2nhso2-),4.37(s,1h,-nhchco-),5.77(s,1h,5-h),6.31(s,2h,2-nh2),7.25(s,1h,-tetrazole),7.81-7.83(m,4h,ar-h),8.71-8.75(m,2h,-ch2ch2nhso2-,-conhch-),10.29(s,1h,3-h),10.68(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):529.1[m-h]^-。

实施例504-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)磺酰基)苯甲酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)磺酰基)苯甲酸(698mg,36.9％)。mp＝260.0℃。esi-ms(m/z):377.3[m-h]^-。

实施例512-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基4-(吡啶-4-基氨基甲酰基)苯磺酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基4-(吡啶-4-基氨基甲酰基)苯磺酸酯(202mg,43.1％)。mp＝161.1℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.30-3.32(t,2h,-ch2ch2oso2-),3.53-3.56(q,2h,-ch2ch2oso2-),4.11-4.13(d,2h,-conhch2-),5.54(s,1h,5-h),6.35(s,2h,2-nh2),7.11-7.14(m,2h,pyridine),7.40-7.46(m,4h,ar-h),7.45-7.47(m,2h,pyridine),8.73-8.75(t,1h,-conhch2-),10.22(s,1h,3-h),10.61(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):469.3[m+h]⁺。

实施例522-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基4-(吡啶-3-基氨基甲酰基)苯磺酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基4-(吡啶-3-基氨基甲酰基)苯磺酸酯(197mg,42.0％)。mp＝155.1℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.29-3.32(t,2h,-ch2ch2oso2-),3.57-3.60(q,2h,-ch2ch2oso2-),4.11-4.15(d,2h,-conhch2-),5.58(s,1h,5-h),6.31(s,2h,2-nh2),7.10-7.13(m,1h,pyridine),7.40-7.43(m,4h,ar-h),7.45-7.49(m,2h,pyridine),8.55-8.60(m,1h,pyridine),8.71-8.73(t,1h,-conhch2-),10.25(s,1h,3-h),10.65(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):469.5[m+h]⁺。

实施例532-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯磺酸酯

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯磺酸酯(211mg,44.9％)。mp＝152.6℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝3.29-3.31(t,2h,-ch2ch2oso2-),3.55-3.56(q,2h,-ch2ch2oso2-),4.13-4.15(d,2h,-conhch2-),5.61(s,1h,5-h),6.13(s,2h,2-nh2),7.10-7.12(m,1h,pyridine),7.40-7.43(m,4h,ar-h),7.45-7.47(m,1h,pyridine),8.54-8.60(m,2h,pyridine),8.73-8.75(t,1h,-conhch2-),10.26(s,1h,3-h),10.72(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):469.6[m+h]⁺。

实施例54(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)磺酰基)苯甲酰氨基)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)磺酰基)苯甲酰氨基)戊二酸(1.20g,47.1％)。mp＝202.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.04-2.08(m,1h,-ch2ch2cooh),2.12-2.14(m,1h,-ch2ch2cooh),2.24-2.26(t,2h,-ch2cooh),2.61-2.66(t,2h,-ch2ch2oso2-),3.51-3.55(q,2h,-ch2ch2oso2-),4.40-4.46(m,1h,-nhchcooh),6.26(s,1h,5-h),7.68-7.70(t,1h,ar-h),7.80-7.84(t,1h,ar-h),8.60(s,1h,ar-h),8.77-8.80(m,1h,-conhch-),11.33(s,1h,3-h),11.71(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):506.5[m-h]^-。

实施例55(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)磺酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙氧基)磺酰)苯甲酰胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.07g,40.3％)。mp＝200.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.16-2.19(m,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.42-2.44(m,2h,-ch2-tetrazole),2.69-2.72(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2oso2-),2.83-2.85(t,j＝6hz,2h,-ch2ch2oso2-)),4.36(s,1h,-nhchco-),5.72(s,1h,5-h),6.33(s,2h,2-nh2),7.27(s,1h,-tetrazole),7.83-7.84(m,4h,ar-h),8.71-8.72(m,1h,,-conhch-),10.30(s,1h,3-h),10.61(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):530.1[m-h]^-。

实施例564-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯磺酸

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨基甲酰基)苯磺酸(910mg,46.1％)。mp>275℃。esi-ms(m/z):376.1[m-h]^-。

实施例57n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-4-(n-(吡啶-4-基甲基)磺胺基)苯甲酰胺

以与实施例8类似的方法，制备目标化合物n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-4-(n-(吡啶-4-基甲基)磺胺基)苯甲酰胺(176mg,36.9％)。mp＝211.9℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.71-2.74(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.60-3.62(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.50-4.53(d,j＝4hz,2h,-conhch2-),6.10(s,1h,5-h),6.18(s,2h,2-nh2),7.33-7.35(d,j＝4hz,2h,ar-h),7.91-7.94(d,j＝8hz,2h,ar-h),8.03-8.05(d,j＝8hz,2h,pyridine),8.51-8.53(d,j＝8hz,2h,pyridine),8.71-8.74(t,j＝12hz,1h,-ch2ch2nhco-),9.33-9.37(t,j＝16hz,1h,-so2nhch2-),10.31(s,1h,3-h),10.75(t,1h,7-h)；esi-ms(m/z):468.1[m-h]^-。

实施例58n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-4-(n-(吡啶-3-基甲基)磺胺基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-4-(n-(吡啶-3-基甲基)磺胺基)苯甲酰胺(207mg,44.4％)。mp＝287.1℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.74-2.78(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.50-3.52(q,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.50-4.53(d,j＝4hz,2h,-conhch2-),5.99(s,1h,5-h),6.05(s,2h,2-nh2),7.33-7.37(t,j＝12hz,1h,pyridine),7.71-7.75(d,j＝8hz,1h,pyridine),7.88-7.92(d,j＝8hz,2h,ar-h),7.92-7.95(d,j＝8hz,2h,ar-h),8.44-8.45(s,j＝4hz,1h,pyridine),8.58(s,1h,pyridine),8.67-8.70(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),9.24-9.26(t,j＝12hz,1h,-so2nhch2-),10.23(s,1h,3-h),10.72(t,1h,7-h)；esi-ms(m/z):468.2[m-h]^-。

实施例59n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-4-(n-(吡啶-2-基甲基)磺胺基)苯甲酰胺

以与实施例9类似的方法，制备目标化合物n-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)-4-(n-(吡啶-2-基甲基)磺胺基)苯甲酰胺(194mg,41.7％)。mp＝243.5℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.77-2.80(t,j＝16hz,2h,-ch2ch2nhco-),3.52-3.56(q,j＝20hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.58-4.61(d,j＝8hz,2h,-conhch2-),5.87(s,1h,5-h),6.17(s,2h,2-nh2),7.28-7.31(t,j＝12hz,1h,pyridine)7.36-7.38(d,j＝8hz,1h,pyridine),7.77-7.79(t,j＝12hz,1h,pyridine),7.93-7.94(d,j＝8hz,2h,ar-h),7.98-8.01(d,j＝8hz,2h,ar-h),8.52-8.54(d,j＝4hz,1h,pyridine),8.65-8.68(t,j＝12hz,1h,-ch2ch2nhco-),9.22-9.24(t,j＝12hz,1h,-so2nhch2-),10.31(s,1h,3-h),10.88(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):468.2[m+h]⁺.

实施例60(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯磺胺基)戊二酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物((s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯磺胺基)戊二酸(1.27g,50.4％)。mp＝152.3℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝1.94-2.01(m,j＝28hz,1h,-ch2ch2cooh),2.10-2.12(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2cooh),2.36-2.37(d,j＝4hz,2h,-ch2cooh),2.79-2.82(s,2h,-ch2ch2nhco),2.84-2.87(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-),4.42(s,1h,-nhchcooh),5.98(s,1h,5-h),6.11(s,2h,2-nh2),7.94-8.04(m,j＝40hz,4h,ar-h),8.76-8.78(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.73(s,1h,-so2nhch-),10.28(s,1h,3-h),10.94(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):505.1[m-h]^-。

实施例61(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯磺胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸

以与实施例12类似的方法，制备目标化合物(s)-2-(4-((2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-基)乙基)氨甲酰)苯磺胺基)-4-(1h-四唑-5-基)丁酸(1.29g,48.6％)。mp＝177.3℃。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝2.23-2.25(m,j＝8hz,1h,-ch2ch2-tetrazole),2.46-2.48(m,2h,-ch2-tetrazole),2.79-2.82(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco),2.85-2.88(t,j＝12hz,2h,-ch2ch2nhco-)，4.35(s,1h,-nhchco-),5.90(s,1h,5-h),6.25(s,2h,2-nh2),7.12(s,1h,-tetrazole),7.98-8.02(m,j＝40hz,4h,ar-h),8.76-8.78(t,j＝8hz,1h,-ch2ch2nhco-),8.79(s,1h,-so2nhch-),10.30(s,1h,3-h),10.86(s,1h,7-h)；esi-ms(m/z):529.1[m-h]^-。

试验例1化合物对二氢叶酸还原酶的抑制活性数据

将不同浓度梯度化合物，mtx的溶液加入含有二氢叶酸还原酶的混合溶液中，检测od值的变化量，分别计算出酶活力值，与浓度做出酶活力曲线，计算出50％dhfr酶抑制浓度。

备注：c为50％酶抑制浓度。mtx50％酶抑制浓度为25nm/ml。

试验例2化合物对胸苷酸合成酶的抑制活性数据

将不同浓度梯度化合物，raltitrexed的溶液加入含有胸苷酸合成酶的混合溶液中，检测od值的变化量，分别计算出酶活力值，与浓度做出酶活力曲线，计算出50％ts酶抑制浓度。

备注：c为50％酶抑制浓度。raltitrexed50％酶抑制浓度为3.4μm/ml。

试验例3生物学活性

cck法又称cck比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的脱氢酶能将外源性的wst-8还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(formazandye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450-490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞存活数量。

在进行cck法检测细胞存活率试验时，首先收集细胞并将其分散为单个，接种在96孔板中，接种密度为3000-5000个细胞/孔。然后，于37℃，5％co2条件下将细胞在培养基(10％fbs)中96孔板中培养生长24小时。依次向各孔中加入不同浓度梯度的试验化合物(dmso中储存溶液，-20℃保存，使用时依次用含有10％fbs的培养基稀释为不同浓度梯度)，并在37℃，5％co2下孵育48小时。在孵育结束时，向每个孔中加入10μlcck溶液，37℃孵育2h。在波长490nm下测定吸光度。每个测定进行三次重复，并且所有实验重复至少两次。表a中给出了用该法测定本发明的化合物的数据(下表中采用均数(标准差)的形式表示)：

以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。