藻类基因的诱导表达的制作方法

文档序号:26003758发布日期:2021-07-23 21:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基因工程藻类,包含dna分子,所述dna分子包含与编码多肽或功能性rna的目的dna可操作地连接的藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子,其中所述编码多肽或功能性rna的目的dna在自然界中不受启动子调控,并且其中所述dna分子被整合到藻类基因组中。

2.根据权利要求1所述的基因工程藻类,其中所述藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子来自相同的藻类物种。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的基因工程藻类,其中所述目的dna编码多肽,并且其中所述多肽与所述藻类物种异源。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的基因工程藻类,其中所述目的dna包含至少一个内含子,其中所述内含子与所述编码多肽或功能性rna的目的dna异源。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的基因工程藻类,其中所述目的dna编码(a)与脂质生物合成相关的蛋白质、(b)脂肪酶、(c)参与光合作用的蛋白质、(d)与碳固定相关的蛋白质、(e)转运蛋白、(f)脱氢酶、(g)转录因子、(h)转录激活剂、(i)细胞信号蛋白、(j)酶、(k)报告蛋白、(l)选择标记或(m)重组酶。

6.根据权利要求5所述的基因工程藻类,其中所述目的dna编码cre重组酶。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的基因工程藻类,其中所述藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子包含与选自由seqidno:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49组成的群组中的序列的至少100个连续核苷酸具有至少80%同一性的核苷酸序列。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的基因工程藻类,其中所述dna分子进一步包含与所述编码多肽或功能性rna的目的dna可操作地连接的终止子序列。

9.根据权利要求8所述的基因工程藻类,其中终止子包含与选自由seqidno:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50组成的群组中的序列的至少75个连续核苷酸具有至少80%同一性的序列。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的基因工程藻类,其中所述突变藻类属于选自由以下组成的群组中的属:曲壳藻属(achnanthes)、茧形藻属(amphiprora)、双眉藻属(amphora)、纤维藻属(ankistrodesmus)、星胞藻属(asteromonas)、黄金色藻属(boekelovia)、bolidomonas属、borodinella属、气球藻属(botrydium)、葡萄藻属(botryococcus)、bracteococcus属、角毛藻属(chaetoceros)、四鞭藻属(carteria)、衣藻属(chlamydomonas)、绿球藻属(chlorococcum)、绿梭藻属(chlorogonium)、小球藻属(chlorella)、蓝隐藻属(chroomonas)、金球藻属(chrysosphaera)、cricosphaera属、隐甲藻属(crypthecodinium)、隐藻属(cryptomonas)、小环藻属(cyclotella)、杜氏藻属(dunaliella)、ellipsoidon、圆石藻属(emiliania)、独球藻属(eremosphaera)、ernodesmius、裸藻属(euglena)、真眼点藻属(eustigmatos)、披刺藻属(franceia)、脆杆藻属(fragilaria)、丽丝藻属(gloeothamnion)、红球藻属(haematococcus)、halocafeteria属、异弯藻属(heterosigma)、膜胞藻属(hymenomonas)、等鞭金藻属(isochrysis)、鳞孔藻属(lepocinclis)、微芒藻属(micractinium)、蒜头藻属(monodus)、单针藻属(monoraphidium)、微球藻属(nannochloris)、微拟球藻属(nannochloropsis)、舟形藻属(navicula)、新绿藻属(neochloris)、肾鞭藻属(nephrochloris)、肾藻属(nephroselmis)、菱形藻属(nitzschia)、棕鞭藻属(ochromonas)、鞘藻属(oedogonium)、卵囊藻属(oocystis)、蚝球藻属(ostreococcus)、巴夫藻属(pavlova)、拟小球藻属(parachlorella)、帕氏藻属(pascheria)、pelagomonas属、褐指藻属(phaeodactylum)、噬菌体属(phagus)、微绿藻属(picochlorum)、扁藻属(platymonas)、颗石藻属(pleurochrysis)、肋球藻属(pleurococcus)、原囊藻属(prototheca)、拟绿球藻属(pseudochlorella)、拟新绿藻属(pseudoneochloris)、拟角星鼓藻属(pseudostaurastrum)、塔胞藻属(pyramimonas)、桑椹藻属(pyrobotrys)、栅列藻属(scenedesmus)、骨条藻属(skeletonema)、spyrogyra属、裂丝藻属(stichococcus)、四爿藻属(tetraselmis)、海链藻属(thalassiosira)、黄丝藻属(tribonema)、无隔藻属(vaucheria)、viridiella、魏氏藻属(vischeria)和团藻属(volvox)。

11.一种包含dna分子的表达盒,所述dna分子包含与编码多肽或功能性rna的目标dna可操作地连接的藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子,其中所述编码多肽或功能性rna的目的dna在自然界中不受启动子的调控,其中所述目的dna编码(a)与脂质生物合成相关的蛋白质、(b)脂肪酶、(c)参与光合作用的蛋白质、(d)与碳固定相关的蛋白质、(e)转运蛋白、(f)脱氢酶、(g)转录因子、(h)转录激活剂、(i)细胞信号蛋白、(j)代谢酶、(k)报告蛋白、(l)选择标记、(m)重组酶、n)反义序列、(o)shrna、(p)sirna、(q)grna或(r)核酶。

12.根据权利要求11所述的表达盒,进一步包含与所述编码多肽或功能性rna的目的dna可操作地连接的终止子序列。

13.根据权利要求11至12中任一项所述的表达盒,其中所述藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子包含与选自由seqidno:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49组成的群组中的序列的至少100个连续核苷酸具有至少80%同一性的核苷酸序列。

14.根据权利要求12所述的表达盒,其中终止子包含与选自由seqidno:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50组成的群组中的序列的至少75个连续核苷酸具有至少80%同一性的序列。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的表达盒,其中所述编码多肽或功能性rna的dna分子包含至少一个内含子,其中所述内含子与所述编码多肽或功能性rna的目的dna异源。

16.一种在藻类细胞中选择性表达目的dna的方法,包括:

a)用分离的dna分子转化藻细胞,所述dna分子包含与所述编码目的dna的目的dna可操作地连接的藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子,其中所述编码目的dna的目的dna在自然界中不受启动子调控以产生转化的藻类细胞;和

b)使所述转化的藻类细胞在培养基中生长,所述培养基选择性允许在所述藻类细胞中表达所述目的dna。

17.根据权利要求16所述的方法,其中所述分离的dna分子通过粒子轰击引入。

18.根据权利要求16所述的方法,其中所述分离的dna分子通过电穿孔引入。

19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法,其中启动子序列是亚硝酸还原酶,并且其中所述藻类细胞在包含硝酸盐的培养基中生长,其中诱导所述目的dna的表达。

20.根据权利要求16至18中任一项所述的方法,其中启动子序列是亚硝酸还原酶,并且其中所述藻类细胞在包含铵盐的培养基中生长,其中抑制所述目的dna的表达。

21.根据权利要求16至20中任一项所述的方法,其中所述目的dna编码(a)与脂质生物合成相关的蛋白质、(b)脂肪酶、(c)参与光合作用的蛋白质、(d)与碳固定相关的蛋白质、(e)转运蛋白、(f)脱氢酶、(g)转录因子、(h)转录激活剂、(i)细胞信号蛋白、(j)代谢酶、(k)报告蛋白、(l)选择标记、(m)重组酶、n)反义序列、(o)shrna、(p)sirna、(q)grna或(r)核酶。

22.根据权利要求16至21中任一项所述的方法,其中所述藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子包含与选自由seqidno:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49组成的群组中的序列的至少100个连续核苷酸具有至少80%同一性的核苷酸序列。

23.根据权利要求19至22中任一项所述的方法,其中所述dna分子包含与所述目的dna可操作地连接的终止子序列。

24.根据权利要求23所述的方法,其中终止子包含与选自由seqidno:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50组成的群组中的序列的至少75个连续核苷酸具有至少80%同一性的序列。

25.根据权利要求16至24中任一项所述的方法,其中所述编码目的dna的dna分子包含至少一个内含子,其中所述内含子与所述目的dna异源。

26.一种分离的dna分子,包含与编码多肽或功能性rna的目标dna可操作地连接的藻类硝酸还原酶或亚硝酸还原酶诱导型启动子,其中所述编码多肽或功能性rna的目的dna在自然界中不受启动子的调控。

27.根据权利要求26所述的分离的dna分子,包含终止子。

28.根据权利要求25至27中任一项所述的分离的dna分子,其中所述终止子与所述启动子来自相同物种。

29.根据权利要求28所述的分离的dna分子,其中所述终止子包含与选自由seqidno:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50组成的群组中的序列的至少75个连续核苷酸具有至少80%同一性的序列。

30.根据权利要求25至29中任一项所述的分离的dna分子,其中所述启动子包含与选自由seqidno:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47和49组成的群组中的序列的至少100个连续核苷酸具有至少80%同一性的核苷酸序列。

31.根据权利要求26至30中任一项所述的分离的dna分子,其中所述编码多肽或功能性rna的目的dna与所述启动子序列异源。

32.根据权利要求26至30中任一项所述的分离的dna分子,其中所述编码多肽或功能性rna的目的dna和启动子来自相同的藻类物种,其中所述目的dna和所述启动子在自然界中并不并置。

33.根据权利要求31所述的分离的dna分子,其中所述编码多肽或功能性rna的目的dna包含至少一个内含子,其中所述内含子与所述编码多肽或功能性rna的目的dna异源。

34.根据权利要求33所述的分离的dna分子,其中所述至少一个异源内含子衍生自与所述启动子相同的物种。

35.根权利要求33至34中任一项所述的分离的dna分子,包含至少三个异源内含子。

36.根权利要求35所述的分离的dna分子,包含至少五个异源内含子。

37.根据权利要求35所述的分离的dna分子,其中所述至少三个异源内含子来自与所述启动子相同的物种。

38.根据权利要求37所述的分离的dna分子,其中所述至少三个异源内含子衍生自同一基因。

39.根据权利要求38所述的分离的dna分子,其中所述至少三个异源内含子和所述启动子衍生自同一基因。

40.根据权利要求26至39中任一项所述的分离的dna分子,其中所述目的dna编码选自由反义序列、微小rna、shrna、sirna、grna和核酶组成的群组中的功能性rna。

41.根据权利要求26至39中任一项所述的分离的dna分子,其中所述启动子和所述终止子来自相同的的基因。

42.根据权利要求26至39中任一项所述的分离的dna分子,其中所述启动子和所述终止子来自不同基因。

43.根据权利要求41所述的分离的dna分子,其中所述目的dna编码(a)与脂质生物合成相关的蛋白质、(b)脂肪酶、(c)参与光合作用的蛋白质、(d)与碳固定相关的蛋白质、(e)转运蛋白、(f)脱氢酶、(g)转录因子、(h)转录激活剂、(i)细胞信号蛋白、(j)酶、(k)报告蛋白、(l)选择标记或(m)重组酶。

44.根据权利要求43所述的分离的dna分子,其中所述目的dna编码cre重组酶。


技术总结
本申请提供了新型藻类调控元件,包括硝酸盐/亚硝酸盐诱导型启动子序列和终止子序列。本申请还公开了包含这些新型调控元件的DNA构建体,和包含这些调控元件的重组微生物。还公开了修饰、制备和使用调控元件的方法。本申请公开的方法适用于基因诸如藻类物种中的转基因或天然基因的诱导表达。

技术研发人员:J·维鲁托;J·韦尔
受保护的技术使用者:合成基因组股份有限公司
技术研发日:2019.12.18
技术公布日:2021.07.23
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