一种从芹菜中提取芹菜素的新方法与流程

本发明属于食品及药品技术领域，具体涉及一种从芹菜中提取芹菜素的新方法。

背景技术：

芹菜素，又称芹黄素，是一种黄酮类化合物，在自然界中广泛分布，其中以芹菜中含量最高，分子式为c15h10o5，其分子结构中含有三个羟基，因此具有非常良好的抗氧化作用。此外，经国内外大量研究发现，芹菜素还可以降低血管脆性及异常的通透性、降血脂，有舒张血管及降血压的作用，有助于诱导血管生成。

目前国内外提取芹菜素的方法一般有以下几种：

a.溶剂提取法。该方法应用范围最广，但是得到的芹菜素纯度并不高，且溶剂消耗量大，有时甚至需要有毒溶剂，不适合食品及药品生产；

b.大孔树脂纯化法。该方法可以有效地提高芹菜素的纯度，但是产率低，不适合大规模工业生产。

技术实现要素：

针对上述问题，本发明提出了一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界co2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经制备型液相色谱分离得芹菜素，既可以提高芹菜素的产率，又可以提高芹菜素的纯度。

其中，本发明所述乙醇优选体积分数为95％的乙醇，即乙醇与水的体积比为95:5。本发明所述的一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其具体步骤为：

a.将原料干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；

b.取上述芹菜粉x1g置于超临界萃取釜中，萃取温度25～40℃，萃取压力为25～40mpa，萃取时间2.5小时；

c.从超临界萃取釜的分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液，主要为黄酮类化合物；

d.使用制备型液相色谱对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；

e.将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素。

本发明中，原料优选芹菜叶，可以在一定程度上实现废物利用。

为了最大程度的实现芹菜素等有效成分的充分萃取，步骤b中，乙醇与超临界co2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。本申请中，超临界co2流体和乙醇采用实时泵入的方式进行萃取，新鲜溶剂可明显提高萃取能力。超临界co2流体以x2g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以x3ml/min的速度泵入萃取釜，其中，x1/x2＝5，x1/x3＝78-79。

经萃取浓缩后，获得浓缩提取液。步骤d中，液相色谱条件为：分析管柱kromasil100-5-c18，250mm×4.6mm，5μm，分析波长设定为343nm，流速为1ml/min；以甲醇为流动相a，以1％(质量分数)的乙酸水溶液为流动相b，采用梯度洗脱。

表1hplc分析之洗脱梯度

本发明首次采用利用超临界co2流体与乙醇共同萃取芹菜素，并且采用液相色谱分离得单一的芹菜素纯品，本发明的提取方法简单易行，芹菜素纯度高，得率高，而且整个提取过程中不涉及有毒溶剂，安全无毒，适用于食品及药品生产领域。

附图说明

图1为芹菜素标准品的hplc谱图；

图2为比较例3获得的浓缩提取液的hplc谱图；

图3为比较例2获得的浓缩提取液的hplc谱图；

图4为实施例1获得的浓缩提取液的hplc谱图。

具体实施方式

实施例1

一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界co2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。

其具体步骤为：

取新鲜马家沟芹菜，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度30℃，萃取压力为30mpa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为53.36μg/g，纯度97.5％。

所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。

步骤b中，乙醇与超临界co2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界co2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。

步骤d中，液相色谱条件为使用kromasil100-5-c18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1ml/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。

实施例2

一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界co2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。

其具体步骤为：

取新鲜西芹，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度25℃，萃取压力为25mpa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为52.49μg/g，纯度95.3％。

所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。

步骤b中，乙醇与超临界co2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界co2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。

步骤d中，液相色谱条件为：使用kromasil100-5-c18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1ml/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。

实施例3

一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界co2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。

其具体步骤为：

取新鲜金口芹菜，将芹菜叶干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度40℃，萃取压力为35mpa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为52.35μg/g，纯度95.7％。

所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。

步骤b中，乙醇与超临界co2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界co2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。

步骤d中，液相色谱条件为：使用kromasil100-5-c18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1ml/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。

实施例4

一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界co2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。

其具体步骤为：

取新鲜金口芹菜，将芹菜叶干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度35℃，萃取压力为40mpa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为53.32μg/g，纯度97.5％。

所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。

步骤b中，乙醇与超临界co2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界co2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。

步骤d中，液相色谱条件为：使用kromasil100-5-c18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1ml/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。

实施例5

一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界co2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。

其具体步骤为：

取新鲜马家沟芹菜，将芹菜叶干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度40℃，萃取压力为25mpa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为53.25μg/g，纯度97.3％。

所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。

步骤b中，乙醇与超临界co2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界co2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。

步骤d中，液相色谱条件为：使用kromasil100-5-c18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1ml/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。

比较例1

一种从芹菜中提取芹菜素的方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界co2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。

其具体步骤为：

取新鲜马家沟芹菜，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度30℃，萃取压力为30mpa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为41.96μg/g，纯度95.4％。

所述乙醇为体积分数为99％的乙醇。

步骤b中，乙醇与超临界co2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界co2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。

步骤d中，液相色谱条件为：使用kromasil100-5-c18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1ml/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。

比较例2

一种从芹菜中提取芹菜素的方法，以芹菜/芹菜叶为原料，以超临界co2流体为溶剂萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。

其具体步骤为：

取新鲜马家沟芹菜，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度30℃，萃取压力为30mpa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，经处理，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为5.86μg/g，纯度96.4％。

超临界co2流体以50g/min的流速泵入萃取釜。

比较例3

采用现有技术中常用的溶剂提取法进行提取，溶剂采用甲醇

根据实施例1以及对比例1、对比例2及对比例3的对比可知，对比例3仅仅采用95％的乙醇进行萃取，萃取得到的成分复杂，且芹菜素含量低；对比例2超临界co2流体为溶剂萃取，萃取得到的成分相对简单，但是芹菜素含量较低；对比例1采用99％乙醇和超临界co2流体，芹菜素的得率以及纯度有所提高；实施例1采用超临界co2流体和95％的乙醇共同萃取，萃取得到的成分相对简单，而且芹菜素含量较高，采用本发明所述的液相条件能够实现各种成分的完全分离，最终芹菜素得率高，纯度高。