多凹面细胞培养片及三维细胞球的培养方法与流程

本发明涉及一种多凹面细胞培养片及三维细胞球的培养方法。

背景技术：

常规细胞培养为贴壁二维培养方式，但由于细胞间通讯很少，使得细胞群无法具备类似于体内的结构及生理生化特征；举例说明，肝脏细胞在进行贴壁培养下，数天后即丢失了肝脏胆小管结构以及分泌白蛋白/尿素的功能，或者癌细胞在二维培养下缺乏体内的生物标志物。相比之下，细胞的三维培养能够有效的提高并模拟体内环境，比如肝细胞三维培养具有天然肝脏的三维结构与肝功能，获得更为准确的肝毒性数据；癌细胞在三维培养下，可重现一些生物标志物以及一定的转移与浸润功能。因此，细胞三维培养的重要性不言而喻。

然而，目前的三维培养的方法过于复杂，经济成本高昂(比如支架法)，使得三维培养无法让普通科研人员广泛接受。或者缺乏高通量特点，比如在96孔板中使用琼脂糖法或者超低吸附板的方法，一个孔内只能形成一个细胞三维球；由于每个细胞球仅有1000个左右的细胞量，无法满足蛋白检测、mrna的qpcr定量、细胞球染色、以及大部分试剂盒的最低细胞数量的标准(一般需要五万个细胞才能获得较可靠的数据)。因此在一个细胞培养孔内，较为简便、快速的获得多个细胞球，才能使细胞三维培养获得研究人员的青睐。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种多凹面细胞培养片及三维细胞球的培养方法，其结构简单且操作方便。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案一种多凹面细胞培养片，用以放置在细胞培养用具内，其特征在于，所述多凹面细胞培养片包括培养片本体及若干个自所述培养片本体的表面向内凹陷形成的凹面。

进一步地，所述凹面具有凹面末端，所述凹面末端的横截面的形状为弧形或矩形或锥形。

进一步地，所述凹面末端的直径范围为0.4-5mm，所述凹面末端的深度范围为0.2-2.5mm。

进一步地，所述凹面还包括用以增加所述凹面深度的柱状空腔或锥状空腔，于多凹面细胞培养片的高度方向上，所述凹面末端位于所述柱状空腔或锥状空腔的下方且与所述柱状空腔或锥状空腔连接。

进一步地，所述柱状空腔或锥状空腔的深度范围为0-2mm。

进一步地，所述多凹面细胞培养片一体注塑形成，所述多凹面细胞培养片的光滑度为纳米级。

本发明还提供了一种三维细胞球的培养方法，采用如上所述的多凹面细胞培养片，所述方法包括：

将多凹面细胞培养片放置于细胞培养用具内；

向细胞培养用具内加入乙醇溶液，以对所述多凹面细胞培养片进行浸润及灭菌处理；

吸去乙醇溶液后加入磷酸缓冲液，并重复此操作一次；

加入细胞培养基以使得细胞培养基浸润所述多凹面细胞培养片；

向细胞培养用具内加入细胞悬液，细胞在重力作用下沉降在凹面内以形成细胞球。

进一步地，所述“向细胞培养用具内加入乙醇溶液，以对所述多凹面细胞培养片进行浸润及灭菌处理”具体为：

向细胞培养用具内加入乙醇溶液，使得乙醇溶液没过所述多凹面细胞培养片，并保持15分钟，使得乙醇溶液对所述多凹面细胞培养片浸润和灭菌。

进一步地，所述“加入细胞培养基以使得细胞培养基浸润所述多凹面细胞培养片”具体为：

加入细胞培养基以浸没所述多凹面细胞培养片，并预留0.2-2ml的细胞培养基。

本发明的有益效果在于：多凹面细胞培养片设置有若干个凹面，每个凹面具有凹面末端以获取细胞球；将多凹面细胞培养片放置于细胞培养用具内，即可在细胞培养用具的单个孔洞内获得大量细胞球；

多凹面细胞培养片通过一体注塑成型，成本低且结构简单，使用方便快捷，并具有高通量的优点。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1为本发明的多凹面细胞培养片的结构示意图。

图2为本发明的多凹面细胞培养片的剖面示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

请参见图1及图2，本发明的一较佳实施例中的多凹面细胞培养片，可放置在细胞培养用具内。所述细胞培养用具为24孔板，12孔板，6孔板，以及35mm细胞培养皿、60mm细胞培养皿中的任一种，诚然，在其他实施例中，该细胞培养用具也可为其他，根据实际情况而定，在此不做具体限定。所述多凹面细胞培养片的直径大小根据所述细胞培养用具的规格而定，例如当所述细胞培养用具为6孔板时，所述多凹面细胞培养片的直径范围为30-33.3mm，优选为33.3mm；当所述细胞培养用具为24孔板时，所述多凹面细胞培养片的直径范围为13-14.3mm，优选为14.3mm。诚然，在其他实施例中，所述多凹面细胞培养片的直径也可为其他，在此不做具体限定，根据实际情况而定。

所述多凹面细胞培养片包括培养片本体1及若干个自所述培养片本体1的表面向内凹陷形成的凹面2，每个所述凹面2具有凹面末端21。其中，所述凹面末端21的横截面的形状为弧形或矩形或锥形或其他，在此不做具体限定，根据实际情况而定。当凹面末端21的横截面的形状为弧形时，其形成细胞球的效果最好。所述凹面末端21的直径范围为0.4-5mm，所述凹面末端21的深度范围为0.2-2.5mm。诚然，在其他实施例中，所述凹面末端21的直径范围和深度范围也可为其他，根据实际情况而定，在此不做具体限定。所述凹面2还包括用以增加所述凹面2深度的柱状空腔22或锥状空腔22，于多凹面细胞培养片的高度方向上，所述凹面21末端位于所述柱状空腔22或锥状空腔22的下方且与所述柱状空腔22或锥状空腔22连接。其中，所述柱状空腔22或锥状空腔22的深度范围为0-2mm，即所述柱状空腔22或锥状空腔22可设置有也可设置无，根据实际需求而定。柱状空腔22或锥状空腔也可以为其他形状的空腔，在此不做具体限定，根据实际情况而定。

所述多凹面细胞培养片一体注塑形成，快捷简单且方便，简化了制造工艺，且降低了生产成本。所述多凹面细胞培养片的光滑度为纳米级，大大降低细胞在多凹面细胞培养片表面的吸附性，因此能够顺利的滑向凹面末端21，提高细胞成球的效率和质量。

本发明还提供了一种三维细胞球的培养方法，采用如上所述的多凹面细胞培养片，所述方法包括：

将多凹面细胞培养片放置于细胞培养用具内；

向细胞培养用具内加入乙醇溶液，以对所述多凹面细胞培养片进行浸润及灭菌处理；

吸去乙醇溶液后加入磷酸缓冲液，并重复此操作一次；

加入细胞培养基以使得细胞培养基浸润所述多凹面细胞培养片，并预留0.2-2ml的细胞培养基；

向细胞培养用具内加入细胞悬液，细胞在重力作用下沉降在凹面内以形成细胞球。

其中，所述“向细胞培养用具内加入乙醇溶液，以对所述多凹面细胞培养片进行浸润及灭菌处理”具体为：

向细胞培养用具内加入乙醇溶液，使得乙醇溶液没过所述多凹面细胞培养片，并保持15分钟，使得乙醇溶液对所述多凹面细胞培养片浸润和灭菌。诚然，在其他实施例中，也可用其他溶液进行浸润及灭菌效果，根据实际情况而定，在此不做具体限定。

所述乙醇溶液的浓度范围为75％-100％，所述乙醇溶液的体积范围为0.2ml-2ml。诚然，在其他实施例中，所述乙醇的浓度及体积也可为其他，在此不做具体限定，根据实际情况而定。使用乙醇溶液的目的在于：既可灭菌也可浸润所述凹面21，以移除可能存在所述凹面21中的气泡防止影响细胞成球。

综上所述：多凹面细胞培养片设置有若干个凹面2，每个凹面2具有凹面末端以获取细胞球；将多凹面细胞培养片放置于细胞培养用具内，即可在细胞培养用具的单个孔洞内获得大量细胞球；

多凹面细胞培养片通过一体注塑成型，成本低且结构简单，使用方便快捷，并具有高通量的优点。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。