鉴定鲟鱼性别的microRNA血清标志物、引物组、试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:20916695发布日期:2020-05-29 13:37阅读:来源:国知局

技术特征:

1.鉴定鲟鱼性别的microrna血清标志物,其特征在于,所述的标志物为asc-mir-133-3p、asc-mir-133a-3p、asc-mir-130a-3p和dre-mir-34c;

asc-mir-133-3p的序列如seqidno.2所示;

asc-mir-133a-3p的序列如seqidno.3所示;

asc-mir-130a-3p的序列如seqidno.8所示;

dre-mir-34c的序列如seqidno.11所示。

2.一种鉴定鲟鱼性别的检测引物组,其特征在于,包括用于检测权利要求1所述的asc-mir-133-3p、asc-mir-133a-3p、asc-mir-130a-3p和dre-mir-34c的检测引物;所述的asc-mir-133-3p、asc-mir-133a-3p、asc-mir-130a-3p和dre-mir-34c的检测引物为:

asc-mir-133-3p的正向引物如seqidno.16所示;

asc-mir-133a-3p的正向引物如seqidno.17所示;

asc-mir-130a-3p的正向引物如seqidno.18所示;

dre-mir-34c的正向引物如seqidno.19所示;

反向引物为通用反向引物,序列如seqidno.20所示。

3.权利要求1所述的microrna血清标志物作为检测靶标在制备鉴定鲟鱼性别的试剂盒中的应用。

4.权利要求2所述的检测引物组在制备鉴定鲟鱼性别的试剂盒中的应用。

5.一种鉴定鲟鱼性别的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包括用于检测权利要求1所述的鉴定鲟鱼性别的microrna血清标志物含量的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,包括权利要求2所述的检测引物组。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒,其特征在于,还包括逆转录茎环引物,具体为:

asc-mir-133-3p的逆转录茎环引物如seqidno.12所示;

asc-mir-133a-3p的逆转录茎环引物如seqidno.13所示;

asc-mir-130a-3p的逆转录茎环引物如seqidno.14所示;

dre-mir-34c的逆转录茎环引物如seqidno.15所示。


技术总结
本发明提供了鉴定鲟鱼性别的microRNA血清标志物、引物组、试剂盒及其应用。本发明利用高通量小RNA测序技术和microRNA芯片技术,筛选出3龄施氏鲟性腺(精巢和卵巢)差异表达miRNA种类和表达量,筛选其中36条miRNA用于筛选施氏鲟性别的血清miRNA标记物,通过常规的血清RNA抽提、cDNA的获得以及实时定量PCR等技术集合,建立了鲟鱼性别鉴定的血清miRNA标记物新方法,并在低龄的施氏鲟和西杂杂交鲟中验证,本发明方法操作简单,重复性好,是鲟鱼性别高效早期鉴定技术领域的新突破,适合推广应用,从根本上解决鲟鱼养殖产业中生产成本高、效率低等严重制约产业发展的问题。

技术研发人员:张秀娟;陈金平;吴文化;周佳滨;李林妙;江海英
受保护的技术使用者:广东省生物资源应用研究所
技术研发日:2020.04.21
技术公布日:2020.05.29
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