一种滇黄精多糖的脱色纯化方法与流程

本发明属于生物医药
技术领域：
，特别涉及一种滇黄精多糖的脱色纯化方法。
背景技术：
：滇黄精(polygonatumkingianumcoll.ethemsl)为百合科黄精属多年生草本植物，以根茎入药，是我国常用的传统中药，具有补气养阴、健脾益肾等功效；现代药理学研究表明，滇黄精多糖是其主要活性成分之一，具有免疫调节、抗疲劳、降血糖、抗衰老等多重药理作用，在医药、保健品、化妆品等行业均有广泛应用。多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成的一类分子结构复杂且庞大的糖类物质。目前提取黄精多糖的方法主要包括水提法、醇析分离、微波辅助提取、超声提取等，存在提取成分复杂且颜色较深等问题。植物色素去除多采用活性碳脱色、纤维素阴离子交换树脂脱色等，存在脱色效果较差、破坏多糖成分，多糖损失较大，脱色后难过滤等问题；此外多糖具有很强的吸湿性、存在不易保存、易分解等问题。因此，开发一种富集高多糖、颜色外观俱佳又易于保存的制备方法是目前急需解决的问题。技术实现要素：针对上述问题，本发明的目的是提供一种能有效富集多糖的滇黄精多糖的脱色纯化方法。为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种滇黄精多糖的脱色纯化方法，包括以下步骤：(1)水提；取蒸制滇黄精加水煎煮，得水提取物；(2)脱色；取所述水提取物上样于型号为ls-109d的大孔吸附树脂，用水洗脱，收集洗脱液；(3)浓缩干燥；取所述洗脱液进行浓缩、干燥，即得。优选的，所述步骤(1)中，水煎煮的次数为1～5次，每次水煎煮的时间为0.5～3小时。优选的，所述步骤(2)中，水洗脱的流速为1～3bv/h。优选的，所述步骤(2)中，型号为ls-109d的大孔吸附树脂的预处理包括以下步骤：取ls-109d大孔吸附树脂，用体积百分比浓度为95％的乙醇浸泡36～72小时，再用纯化水冲洗至无醇味，备用。优选的，所述步骤(3)中，浓缩采用敞口煮沸浓缩的方式来进行。优选的，所述步骤(3)中，干燥采用冷冻干燥的方式来进行。优选的，为了减少产品的吸湿性、易保存，待需冷冻干燥的浓缩液加入麦芽糊精混匀后，再进行冷冻干燥。优选的，所述麦芽糊精的添加量占所述浓缩液重量的20％～40％。本发明还提供了一种利用所述方法制备得到的滇黄精多糖。优选的，所述滇黄精多糖呈白色，多糖含量高于60％。本发明具有以下有益效果：经过水提、脱色后所得的滇黄精多糖，颜色呈白色，多糖含量不低于60％，取得了显著的技术效果。附图说明图1为本发明滇黄精多糖脱色纯化的工艺流程图；图2为不同型号的大孔吸附树脂对蒸制滇黄精水提取物的脱色效果照片；图3为实施例1-3所得产品的照片；图4为本发明产品多糖检测结果图。具体实施方式下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。实施例1如图1所示，一种滇黄精多糖的脱色纯化方法，包括以下步骤：(1)水提；取蒸制滇黄精加水煎煮两次，第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时，合并两次煎煮液，300目筛网过滤，收集滤液，浓缩，得水提取物(粗提浸膏)；(2)脱色；取ls-109d大孔吸附树脂，用体积百分比浓度为95％的乙醇浸泡48小时，湿法装柱，再用纯化水冲洗至无醇味。取水提取物上样于型号为ls-109d的大孔吸附树脂，收集上样流出液；加入纯化水进行洗脱，水洗流速为2bv/h，收集洗脱液；(3)浓缩干燥；合并上样流出液和洗脱液，敞口煮沸浓缩成为浓缩液(脱色浸膏)。将脱色浸膏用适量水溶解后，加入麦芽糊精，混匀后冷冻干燥，粉碎，过80目筛网，即得(见图3)。其中，麦芽糊精的加入量占脱色浸膏重量的30％。实施例2如图1所示，一种滇黄精多糖的脱色纯化方法，包括以下步骤：(1)水提；取蒸制滇黄精加水煎煮5次，每次煎煮1小时，合并5次煎煮液，300目筛网过滤，收集滤液，浓缩，得水提取物(粗提浸膏)；(2)脱色；取ls-109d大孔吸附树脂，用体积百分比浓度为95％的乙醇浸泡72小时，湿法装柱，再用纯化水冲洗至无醇味。取水提取物上样于型号为ls-109d的大孔吸附树脂，收集上样流出液；加入纯化水进行洗脱，水洗流速为3bv/h，收集洗脱液；(3)浓缩干燥；合并上样流出液和洗脱液，敞口煮沸浓缩成为浓缩液(脱色浸膏)。将脱色浸膏用适量水溶解后，加入麦芽糊精，混匀后冷冻干燥，粉碎，过80目筛网，即得(见图3)。其中，麦芽糊精的加入量占脱色浸膏重量的20％。实施例3如图1所示，一种滇黄精多糖的脱色纯化方法，包括以下步骤：(1)水提；取蒸制滇黄精加水煎煮3小时，所得煎煮液经300目筛网过滤，收集滤液，浓缩，得水提取物(粗提浸膏)；(2)脱色；取ls-109d大孔吸附树脂，用体积百分比浓度为95％的乙醇浸泡36小时，湿法装柱，再用纯化水冲洗至无醇味。取水提取物上样于型号为ls-109d的大孔吸附树脂，收集上样流出液；加入纯化水进行洗脱，水洗流速为1bv/h，收集洗脱液；(3)浓缩干燥；合并上样流出液和洗脱液，敞口煮沸浓缩成为浓缩液(脱色浸膏)。将脱色浸膏用适量水溶解后，加入麦芽糊精，混匀后冷冻干燥，粉碎，过80目筛网，即得(见图3)。其中，麦芽糊精的加入量占脱色浸膏重量的40％。对比例1-4分别将实施例1中的型号为ls-109d的大孔吸附树脂替换为ab-8、d101、ls-305和ls-160b。其余步骤一样，分别得到对比例1、对比例2、对比例3和对比例4。其脱色效果详见图2。从图2可以看出，所得脱色滤液颜色外观，从左到右依次是未脱色处理和经ab-8、d101、ls-305、ls-109d和ls-160b5种大孔树脂进行脱色处理后所得滤液。如图2所示，ls-109d和ls-160脱色效果较佳。为验证本发明的技术效果，对不同型号处理的产品进行多糖得率和多糖损失率进行测定，结果见表1。表15种不同型号大孔吸附树脂脱色后多糖得率和多糖损失率对比表树脂型号多糖得率(％)多糖损失率(％)ab-867.9932.01d10180.0619.94ls-30578.5921.41ls-109d95.664.34ls-160b55.0444.96由表1可以看出，型号为ls-109d的大孔吸附树脂多糖得率最高，多糖损失率最小。其中，多糖得率(％)＝脱色浸膏多糖含量/未脱色浸膏多糖含量×100％多糖损失率(％)＝100％-多糖得率％本发明中，多糖含量采用硫酸-蒽酮法测定，具体方法如下：对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的标准葡萄糖100mg，置100ml容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，配成浓度为1mg/ml的标准葡萄糖母液(4℃保存)。精密量取10.0ml母液，置50ml容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，即得浓度为0.1mg/ml的标准葡萄糖使用液。显色液的配制：精密称取蒽酮试剂0.2g，移入烧杯，缓缓加入100ml浓硫酸，用玻璃棒小心搅拌，避光保存1小时后使用。每次试验现配现用。供试品溶液的制备：1)供试品：精密称取实施例1所得产品10.0mg于50ml比色管中，加水溶解并定容至刻度，摇匀后精密移取1.0ml至10ml比色管中，加水定容至刻度，摇匀即得。2)糊精样品：精密称取麦芽糊精(供试品中所添加糊精，型号glucidex19d)5.0mg于50ml比色管中，加水溶解并定容至刻度，摇匀后精密移取2.0ml至10ml比色管中，加水定容至刻度，摇匀即得。检测按表2将各试管编号后加入相应溶液，并按步骤操作。0-5号为标准曲线，s1、s2分别为检测样品及麦芽糊精待测品。表2以0号管为空白参比，于波长620nm处检测其它各管的吸光度值。标准曲线的绘制：以葡萄糖的浓度(μg/ml)为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线(此处葡萄糖浓度为配制的对照品溶液加入“表2”中所列纯化水、显色液后的最终浓度)。计算：样品总多糖含量(％)＝(c1×2500×10-3/m1-c2×1250×10-3/m2×50％)×100％c1——检测样品溶液的含量(μg/ml)，通过标准曲线计算得来c2——糊精样品溶液的含量(μg/ml)，通过标准曲线计算得来m1——供试品质量(mg)m2——糊精样品质量(mg)检测结果见图4；原始数据见表3。表3由原始数据可知，c1＝6.2640ug/ml，c2＝6.9270ug/ml，代入滇黄精总多糖含量计算公式，得滇黄精总多糖含量为65.38％。总结：经水提取、ls-109d树脂脱色和加麦芽糊精冻干3个步骤，即可得到富含多糖、颜色较浅且易保存的滇黄精提取物冻干粉，制备工艺简单易操作、提取成本较低，很好地解决了生产工艺复杂、多糖损失、脱色困难、易吸潮等问题，更适合工业化生产。以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。当前第1页12