一种四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物及其在医药上的应用的制作方法

[0001]
本发明涉及一种通式(i)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，及其中间体和制备方法，以及在制备治疗与kras-g12c活性或表达量相关疾病的药物中的应用。


背景技术：

[0002]
ras蛋白由ras基因(rat sarcoma viral oncogene)表达，是细胞内鸟嘌呤核苷酸结合蛋白，属于gtp酶(水解活性较弱)。ras蛋白存在于两种不同的状态：非活性的的gdp结合状态和活性的gtp结合状态。激活态的ras蛋白通过与不同下游效应器相互作用进行信号传导，对细胞的生长、分化、细胞骨架、蛋白质运输和分泌等都具有影响。ras信号传导的激活受鸟嘌呤核苷酸交换因子(gef，可导致gdp-gtp交换)或者gtp酶活化蛋白(gap，可导致ras蛋白由活化态转变为失活态)的调节，突变型ras蛋白可致对gap的抵抗导致ras蛋白处于持续激活状态，引起细胞不受控制的生长，最终发展为癌变组织(molecular cancer,2018,17:33)。
[0003]
ras基因突变是癌症患者中常见的基因突变类型(nat.rev.drug discov.2014,13,828-851)，例如ras基因突变在胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤及nslcl中分别占到了97.7％，52.2％，42.6％及32.2％。kars基因(kristen rat sarcoma viral oncogene)突变是ras突变中影响最大的突变，占到所有ras突变的86％。kras基因被激活最常见的方式是点突变，95％的kras突变主要发生在2号外显子的第12号密码子和13号密码子上，常见的突变形式有kras g12c突变(39％)，kras g12v(18-21％)和kras g12d(17-18％)突变。
[0004]
自发现癌症中的kras突变蛋白并且观察到抑制这些突变蛋白能抑制肿瘤增殖以来，kras突变蛋白抑制剂就受到了广泛关注。kras长期以来被认为是一个“不可成药靶点”：ras对gtp/gdp具有很高的亲和力(皮摩尔级别)，整个蛋白也缺少其他的“配体结合口袋”(clin.cancer res.2015,21,1810
–
1818)。在kras g12c突变蛋白中，鉴定发现紧邻gtp/gdp-ras结合口袋处出现了一个“结合口袋ii”(nature.2013,503,548-551)，可以作为kras g12c突变蛋白抑制剂的结合位点。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的就是提供一种能够抑制kras g12c蛋白的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，及其中间体和制备方法，以及在制备治疗与kras-g12c活性或表达量相关疾病的药物中的应用。
[0006]
本发明提供一种通式(i)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
[0007][0008]
在某些实施方案中，r1选自-c(＝o)-c(r
1a
)＝c(r
1b
)2、-s(＝o)
2-c(r
1a
)＝c(r
1b
)2或
[0009]
在某些实施方案中，r1选自
[0010]
在某些实施方案中，r1选自
[0011]
在某些实施方案中，r1选自
[0012]
在某些实施方案中，r
1a
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基或-nhc(＝o)r
1d
，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0013]
在某些实施方案中，r
1a
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或-nhc(＝o)ch3，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0014]
在某些实施方案中，r
1a
与任意一个r
1b
形成c
5-10
碳环或5至12元杂环，所述的碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-10
碳环基或5至12元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0015]
在某些实施方案中，r
1a
与任意一个r
1b
形成c
5-8
碳环，所述的碳环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0016]
在某些实施方案中，r
1b
或r
1c
各自独立的选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、-c(＝o)n(r
1d
)2、-(ch2)
p-n(c
1-4
烷基)2、-(ch2)
p
nhc(＝o)-c
1-4
烷基、-(ch2)
p-c
3-10
碳环或-(ch2)
p-3至12元杂环，所述的烷基、烷氧基、杂环或碳环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-10
碳环或5至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0017]
在某些实施方案中，r
1b
各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-c(＝o)nh2、-(ch2)
p-nhc(＝o)-ch3、-(ch2)
p-n(甲基)2、-(ch2)
p-n(乙基)2、-(ch2)
p-氮杂环丁烷、-(ch2)
p-氧杂环丁烷、-(ch2)
p-四氢吡咯、-(ch2)
p-四氢噻吩、-(ch2)
p-四氢呋喃、-(ch2)
p-苯基、-(ch2)
p-萘基、-(ch2)
p-吡啶、-(ch2)
p-嘧啶、-(ch2)
p-吡嗪、-(ch2)
p-噻吩、-(ch2)
p-呋喃、-(ch2)
p-吡咯、-(ch2)
p-咪唑、-(ch2)
p-吡唑、-(ch2)
p-三氮唑、-(ch2)
p-四氮唑、-(ch2)
p-哌啶、-(ch2)
p-吗啉或-(ch2)
p-哌嗪，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0018]
在某些实施方案中，r
1c
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0019]
在某些实施方案中，r
1c
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基或丙氧基，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0020]
在某些实施方案中，r
1d
各自独立的选自h或c
1-4
烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0021]
在某些实施方案中，环a选自4至12元含氮杂环，所述的含氮杂环选自饱和或部分饱和单环、桥环或螺环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个r
a
取代基所取代；
[0022]
在某些实施方案中，环a选自4至9元含氮杂环，所述的含氮杂环选自饱和或部分饱和单环、桥环或螺环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个r
a
取代基所取代；
[0023]
在某些实施方案中，环a选自取代的或者未取代的当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基或ch2cn的取代基所取代；
[0024]
在某些实施方案中，环a选自在某些实施方案中，环a选自环a基团的上方与r1直接连接；
[0025]
在某些实施方案中，环a选自
[0026]
在某些实施方案中，环a选自
[0027]
在某些实施方案中，环a选自
[0028]
在某些实施方案中，r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0029]
在某些实施方案中，r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、甲基、乙基、丙基或异丙基，所述的甲基、乙基、丙基或异丙基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0030]
在某些实施方案中，r2各自独立的选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0031]
在某些实施方案中，x1选自键、-c(＝o)-或c
1-c4亚烷基；
[0032]
在某些实施方案中，x1选自键；
[0033]
在某些实施方案中，r3选自h、c
1-4
烷基、c
3-10
碳环或3至12元杂环，所述的烷基、碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
2-6
炔基、c
1-4
烷氧基、-c
1-4
亚烷基-羟基、c
3-10
碳环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0034]
在某些实施方案中，r3选自取代的或者未被取代的如下基团之一：h、苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、三氮唑基、四氮唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并吡咯基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、异喹唑啉基、吡啶[3,2-d]嘧啶或吡啶[4,3-d]嘧啶，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基或c
2-4
炔基的取代基所取代；
[0035]
在某些实施方案中，r3选自苯基或萘基，所述的苯基或萘基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代；
[0036]
在某些实施方案中，r3选自取代或者未取代的如下基团之一：当被取代时，任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙
基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代；
[0037]
在某些实施方案中，x2选自键、o、-och
2-、-ch2o-、s或nr
x
；
[0038]
在某些实施方案中，x2选自o、-och
2-或-ch2o-；
[0039]
r
x
选自h或c
1-4
烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0040]
在某些实施方案中，环b选自c
3-8
脂肪环烷基；
[0041]
在某些实施方案中，环b选自在某些实施方案中，环b选自
[0042]
在某些实施方案中，环b选自
[0043]
在某些实施方案中，r4各自独立的选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、n(r
4a
)2、-(ch2)
q-c(＝o)c
1-4
烷基、-(ch2)
q-c(＝o)-3至12元杂环、-(ch2)
q-c(＝o)-c
3-10
碳环、-(ch2)
q-c(＝o)-n(r
4a
)2、-(ch2)
q-n(r
4a
)-c(＝o)r
4b
、-(ch2)
q-3至12元杂环或-(ch2)
q-c
3-10
碳环，所述的烷基、烷氧基、碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、-c
1-4
亚烷基-oh、-ch
2-c
3-10
碳环、-ch
2-3至12元杂环、c
3-6
环烷基、c
1-4
烷氧基、-n(c
1-4
烷基)c(＝o)-3至12元杂环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0044]
在某些实施方案中，r4选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-n(ch3)2、-n(ch2ch3)2、-(ch2)
q-环丙烷、-(ch2)
q-环丁烷、-(ch2)
q-环戊烷、-(ch2)
q-环己烷、-(ch2)
q-氮杂环丁烷、-(ch2)
q-氧杂环丁烷、-(ch2)
q-四氢噻吩、-(ch2)
q-四氢呋喃、-(ch2)
q-四氢吡咯、-(ch2)
q-苯基、-(ch2)
q-萘基、-(ch2)
q-吡啶、-(ch2)
q-嘧啶、-(ch2)
q-吡嗪、-(ch2)
q-噻吩、-(ch2)
q-呋喃、-(ch2)
q-吡咯、-(ch2)
q-咪唑、-(ch2)
q-咪唑、-(ch2)
q-吡唑、-(ch2)
q-三氮唑、-(ch2)
q-四氮唑、-(ch2)
q-哌啶、-(ch2)
q-吗啉、-(ch2)
q-四氢吡喃、-(ch2)
q-吡咯双烷、-(ch2)
q-1,3-氧氮杂环庚、-(ch2)
q-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷、-(ch2)
q-哌嗪或-(ch2)
q-n(r
4a
)-c(＝o)r
4b
，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、-c
1-4
亚烷基-oh、-ch
2-c
3-6
碳环、-ch
2-3至6元杂环、c
3-6
环烷基、c
1-4
烷氧基、-n(c
1-4
烷基)c(＝o)-3至12元杂环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0045]
在某些实施方案中，r4选自取代的或者未取代的如下基团之一：甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-(ch2)
q-四氢吡咯、四氢吡咯、-n(ch3)2、-n(ch2ch3)2当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、n(ch3)2或n(ch2ch3)2的取代基所取代；
[0046]
在某些实施方案中，r4选自-ch2n(ch3)2、-ch2n(ch2ch3)2、-n(ch2ch3)2、-n(ch3)2、
[0047]
在某些实施方案中，r
4a
各自独立的选自h、c
1-4
烷基、-c
1-4
烷基-3至12元杂环，所述的烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0048]
在某些实施方案中，两个r
4a
与其直接相连的氮原子一起形成4至8元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0049]
在某些实施方案中，r
4a
选自h、甲基、乙基、丙基或异丙基，所述的甲基、乙基、丙基或异丙基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基取代基所取代；
[0050]
在某些实施方案中，r
4b
选自h、c
1-4
烷基、c
3-6
环烷基或3至12元杂环，所述的烷基、环烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0051]
在某些实施方案中，r
4b
选自h、甲基、乙基、丙基、异丙基、氮杂环丁烷或氧杂环丁烷，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、氮杂环丁烷或氧杂环丁烷任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基取代基所取代；
[0052]
在某些实施方案中，选自
[0053]
在某些实施方案中，选自
[0054]
在某些实施方案中，r5、r6各自独立的选自h、c
1-4
烷基、-c
1-4
烷基-3至8元杂环，所述的烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0055]
在某些实施方案中，r5、r6各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、丙基、异丙基、-ch
2-氮杂环丁烷、-ch
2-氧杂环丁烷、-ch2ch
2-四氢吡咯烷、-ch
2-四氢吡咯烷、-ch
2-四氢噻吩或-ch
2-四氢呋喃，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0056]
在某些实施方案中，r5、r6各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、-ch
2-四氢吡咯烷或-ch2ch
2-四氢吡咯烷，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(ch3)、-n(ch3)2、-nh(ch2ch3)、-n(ch2ch3)2、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代；
[0057]
在某些实施方案中，r5、r6各自独立的选自h、甲基、乙基、-ch2ch2n(ch3)2、
[0058]
在某些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至8元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0059]
在某些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至6元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0060]
在某些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至6元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(ch3)、-n
(ch3)2、-nh(ch2ch3)、-n(ch2ch3)2、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0061]
在某些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成与其直接相连的氮原子一起形成
[0062]
在某些实施方案中，m、n、p、q各自独立的选自0、1、2、3或4；
[0063]
在某些实施方案中，n选自1、2、3或4；
[0064]
任选地，本发明化合物不为
[0065]
作为本发明的第一种实施方案，前述通式(i)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
[0066]
r1选自-c(＝o)-c(r
1a
)＝c(r
1b
)2、-s(＝o)
2-c(r
1a
)＝c(r
1b
)2或
[0067]
r
1a
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基或-nhc(＝o)r
1d
，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0068]
r
1b
或r
1c
各自独立的选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、-c(＝o)n(r
1d
)2、-(ch2)
p-n(c
1-4
烷基)2、-(ch2)
p
nhc(＝o)-c
1-4
烷基、-(ch2)
p-c
3-10
碳环或-(ch2)
p-3至12元杂环，所述的烷基、烷氧基、杂环或碳环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-10
碳环或5至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0069]
作为选择，r
1a
与任意一个r
1b
形成c
5-10
碳环或5至12元杂环，所述的碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-10
碳环基或5至12元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0070]
r
1d
各自独立的选自h或c
1-4
烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0071]
r2各自独立的选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0072]
环a选自4至12元含氮杂环，所述的含氮杂环选自饱和或部分饱和单环、桥环或螺环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个r
a
取代基所取代；
[0073]
r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0074]
r3选自h、c
1-4
烷基、c
3-10
碳环或3至12元杂环，所述的烷基、碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
2-6
炔基、c
1-4
烷氧基、-c
1-4
亚烷基-羟基、c
3-10
碳环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0075]
x1选自键、-c(＝o)-或c
1-c4亚烷基；
[0076]
x2选自键、o、-och
2-、-ch2o-、s或nr
x
；
[0077]
r
x
选自h或c
1-4
烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0078]
环b选自c
3-8
脂肪环烷基；
[0079]
r4各自独立的选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、n(r
4a
)2、-(ch2)
q-c(＝o)c
1-4
烷基、-(ch2)
q-c(＝o)-3至12元杂环、-(ch2)
q-c(＝o)-c
3-10
碳环、-(ch2)
q-c(＝o)-n(r
4a
)2、-(ch2)
q-n(r
4a
)-c(＝o)r
4b
、-(ch2)
q-3至12元杂环或-(ch2)
q-c
3-10
碳环，所述的烷基、烷氧基、碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、-c
1-4
亚烷基-oh、-ch
2-c
3-10
碳环、-ch
2-3至12元杂环、c
3-6
环烷基、c
1-4
烷氧基、-n(c
1-4
烷基)c(＝o)-3至12元杂环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0080]
r
4a
各自独立的选自h、c
1-4
烷基、-c
1-4
烷基-3至12元杂环，所述的烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0081]
作为选择，两个r
4a
与其直接相连的氮原子一起形成4至8元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0082]
r
4b
选自h、c
1-4
烷基、c
3-6
环烷基或3至12元杂环，所述的烷基、环烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0083]
m、n、p、q各自独立的选自0、1、2、3或4。
[0084]
作为本发明的第二种实施方案，前述通式(i)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
[0085]
r
1c
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷
基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0086]
环a选自4至9元含氮杂环，所述的含氮杂环选自饱和或部分饱和单环、桥环或螺环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个r
a
取代基所取代；
[0087]
r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0088]
其余基团的定义与前述本发明的第一种实施方案一致。
[0089]
作为本发明的第三种实施方案，下述通式(ia)所示化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0090][0091]
其中，r1、r3、r4、环a、环b、x2和n的定义与前述本发明的第一或二中任意一种实施方案一致。
[0092]
作为本发明的第四种实施方案，前述通式(ia)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0093]
r
1a
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或-nhc(＝o)ch3，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0094]
r
1b
各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-c(＝o)nh2、-(ch2)
p-nhc(＝o)-ch3、-(ch2)
p-n(甲基)2、-(ch2)
p-n(乙基)2、-(ch2)
p-氮杂环丁烷、-(ch2)
p-氧杂环丁烷、-(ch2)
p-四氢吡咯、-(ch2)
p-四氢噻吩、-(ch2)
p-四氢呋喃、-(ch2)
p-苯基、-(ch2)
p-萘基、-(ch2)
p-吡啶、-(ch2)
p-嘧啶、-(ch2)
p-吡嗪、-(ch2)
p-噻吩、-(ch2)
p-呋喃、-(ch2)
p-吡咯、-(ch2)
p-咪唑、-(ch2)
p-吡唑、-(ch2)
p-三氮唑、-(ch2)
p-四氮唑、-(ch2)
p-哌啶、-(ch2)
p-吗啉或-(ch2)
p-哌嗪，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0095]
r
1c
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基或丙氧基，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0096]
作为选择，r
1a
与任意一个r
1b
形成c
5-8
碳环，所述的碳环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0097]
r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、甲基、乙基、丙基或异丙基，所述的甲基、乙基、丙
基或异丙基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0098]
r3选自取代的或者未被取代的如下基团之一：h、苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、三氮唑基、四氮唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并吡咯基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、异喹唑啉基、吡啶[3,2-d]嘧啶或吡啶[4,3-d]嘧啶，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基或c
2-4
炔基的取代基所取代；
[0099]
r4选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-n(ch3)2、-n(ch2ch3)2、-(ch2)
q-环丙烷、-(ch2)
q-环丁烷、-(ch2)
q-环戊烷、-(ch2)
q-环己烷、-(ch2)
q-氮杂环丁烷、-(ch2)
q-氧杂环丁烷、-(ch2)
q-四氢噻吩、-(ch2)
q-四氢呋喃、-(ch2)
q-四氢吡咯、-(ch2)
q-苯基、-(ch2)
q-萘基、-(ch2)
q-吡啶、-(ch2)
q-嘧啶、-(ch2)
q-吡嗪、-(ch2)
q-噻吩、-(ch2)
q-呋喃、-(ch2)
q-吡咯、-(ch2)
q-咪唑、-(ch2)
q-咪唑、-(ch2)
q-吡唑、-(ch2)
q-三氮唑、-(ch2)
q-四氮唑、-(ch2)
q-哌啶、-(ch2)
q-吗啉、-(ch2)
q-四氢吡喃、-(ch2)
q-吡咯双烷、-(ch2)
q-1,3-氧氮杂环庚、-(ch2)
q-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷、-(ch2)
q-哌嗪或-(ch2)
q-n(r
4a
)-c(＝o)r
4b
，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、-c
1-4
亚烷基-oh、-ch
2-c
3-6
碳环、-ch
2-3至6元杂环、c
3-6
环烷基、c
1-4
烷氧基、-n(c
1-4
烷基)c(＝o)-3至12元杂环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0100]
r
4a
选自h、甲基、乙基、丙基或异丙基，所述的甲基、乙基、丙基或异丙基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基取代基所取代；
[0101]
r
4b
选自h、甲基、乙基、丙基、异丙基、氮杂环丁烷或氧杂环丁烷，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、氮杂环丁烷或氧杂环丁烷任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基取代基所取代；
[0102]
其余基团的定义与前述本发明的第一、二或三中任意一种实施方案一致。
[0103]
作为本发明的第五种实施方案，前述通式(ia)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0104]
r1选自
[0105]
或者r1选自
[0106]
环a选自取代的或者未取代的当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基或ch2cn的取代基所取代；
[0107]
r3选自苯基或萘基，所述的苯基或萘基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的
取代基所取代；
[0108]
环b选自
[0109]
r4选自取代的或者未取代的如下基团之一：甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-(ch2)
q-四氢吡咯、四氢吡咯、-n(ch3)2、-n(ch2ch3)2或当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、n(ch3)2或n(ch2ch3)2的取代基所取代；
[0110]
n选自1、2、3或4；
[0111]
其余基团的定义与前述本发明的第一、二、三或四中任意一种实施方案一致。
[0112]
作为本发明的第六种实施方案，前述通式(ia)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0113]
r1选自
[0114]
或者r1选自
[0115]
r3选自苯基或萘基，所述的苯基或萘基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代；
[0116]
环a选自
[0117]
或者环a选自
[0118]
环b选自
[0119]
x2选自o、-och
2-或-ch2o-；
[0120]
r4选自-ch2n(ch3)2、-ch2n(ch2ch3)2、-n(ch2ch3)2、-n(ch3)2、、
[0121]
或者r4选自
[0122]
其余基团的定义与本发明第一、二、三、四或五中任意一种实施方案一致。
[0123]
作为本发明的第七种实施方案，前述通式(ia)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0124]
r1选自
[0125]
环a选自环a选自环a基团的上方与r1直接连接；
[0126]
选自选自
[0127]
或者选自选自
[0128]
r3选自取代或者未取代的如下基团之一：当被取代时，任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代；
[0129]
其余基团的定义与本发明第一、二、三、四、五或六中任意一种实施方案一致。
[0130]
作为本发明的第八种实施方案，下述通式(ib)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0131][0132]
r5、r6各自独立的选自h、c
1-4
烷基、-c
1-4
烷基-3至8元杂环，所述的烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0133]
作为选择，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至8元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0134]
其余基团的定义与本发明第一或二中任意一种实施方案一致。
[0135]
作为本发明的第九种实施方案，前述通式(ib)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0136]
r
1a
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或-nhc(＝o)ch3，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0137]
r
1b
各自独立的选自取代的或者未被取代的如下基团之一：h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-c(＝o)nh2、-(ch2)
p-nhc(＝o)-ch3、-(ch2)
p-n(甲基)2、-(ch2)
p-n(乙基)2、-(ch2)
p-氮杂环丁烷、-(ch2)
p-氧杂环丁烷、-(ch2)
p-四氢吡咯、-(ch2)
p-四氢噻吩、-(ch2)
p-四氢呋喃、-(ch2)
p-苯基、-(ch2)
p-萘基、-(ch2)
p-吡啶、-(ch2)
p-嘧啶、-(ch2)
p-吡嗪、-(ch2)
p-噻吩、-(ch2)
p-呋喃、-(ch2)
p-吡咯、-(ch2)
p-咪唑、-(ch2)
p-吡唑、-(ch2)
p-三氮唑、-(ch2)
p-四氮唑、-(ch2)
p-哌啶、-(ch2)
p-吗啉或-(ch2)
p-哌嗪，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0138]
r
1c
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基或丙氧基，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧
基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0139]
作为选择，r
1a
与任意一个r
1b
形成c
5-8
碳环，所述的碳环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0140]
r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、甲基、乙基、丙基或异丙基，所述的甲基、乙基、丙基或异丙基或任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0141]
r3选自取代的或者未被取代的如下基团之一：h、苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、三氮唑基、四氮唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并吡咯基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、异喹唑啉基、吡啶[3,2-d]嘧啶或吡啶[4,3-d]嘧啶，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基、c
2-4
乙炔基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0142]
r5、r6各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、丙基、异丙基、-ch
2-氮杂环丁烷、-ch
2-氧杂环丁烷、-ch2ch
2-四氢吡咯烷、-ch
2-四氢吡咯烷、-ch
2-四氢噻吩或-ch
2-四氢呋喃，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代；
[0143]
作为选择，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至6元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0144]
其余基团的定义与本发明第一、二或八中任意一种实施方案一致。
[0145]
作为本发明的第十种实施方案，前述通式(ib)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0146]
r1选自
[0147]
或者r1选自
[0148]
r3选自苯基或萘基、所述的苯基或萘基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基的取代基所取代；
[0149]
环a选自取代的或者未取代的当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基或ch2cn的取代基所取代；
[0150]
r5、r6各自独立的选自取代的或者未取代的h、甲基、乙基、-ch
2-四氢吡咯烷或-ch2ch
2-四氢吡咯烷，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(ch3)、-n(ch3)2、-nh(ch2ch3)、-n(ch2ch3)2、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧
基或丙氧基的取代基所取代；
[0151]
作为选择，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至6元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(ch3)、-n(ch3)2、-nh(ch2ch3)、-n(ch2ch3)2、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子；
[0152]
其余基团的定义与本发明第一、二、八或九中任意一种实施方案一致。
[0153]
作为本发明的第十一种实施方案，前述通式(ib)所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，
[0154]
r1选自
[0155]
或者r1选自
[0156]
r3选自苯基或萘基，所述的苯基或萘基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基的取代基所取代；
[0157]
环a选自
[0158]
或者环a选自
[0159]
r5、r6各自独立的选自h、甲基、乙基、-ch2ch2n(ch3)2、、
[0160]
作为选择，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成
[0161]
其余基团的定义与本发明第一、二、八、九或十中任意一种实施方案一致。
[0162]
本发明涉及如下所示的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物选自如下结构之一：
[0163]
[0164]
[0165]
[0166][0167]
本发明涉及通式(i)的一些实施方案中，x1选自键、-c(＝o)-或c
1-c4亚烷基。
[0168]
本发明涉及通式(i)的一些实施方案中，x1选自键。
[0169]
本发明涉及通式(i)的一些实施方案中，r2各自独立的选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0170]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r1选自-c(＝o)-c(r
1a
)＝c(r
1b
)2、-s(＝o)
2-c(r
1a
)＝c(r
1b
)2或
[0171]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r1选自
[0172]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r1选自
[0173]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r1选自
[0174]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1a
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基或-nhc(＝o)r
1d
，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0175]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1a
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或-nhc(＝o)ch3，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0176]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1a
与任意一个r
1b
形成c
5-10
碳环或5至12元杂环，所述的碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-10
碳环基或5至12元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0177]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1a
与任意一个r
1b
形成c
5-8
碳
环，所述的碳环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0178]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1b
或r
1c
各自独立的选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、-c(＝o)n(r
1d
)2、-(ch2)
p-n(c
1-4
烷基)2、-(ch2)
p
nhc(＝o)-c
1-4
烷基、-(ch2)
p-c
3-10
碳环或-(ch2)
p-3至12元杂环，所述的烷基、烷氧基、杂环或碳环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-10
碳环或5至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0179]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1b
各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-c(＝o)nh2、-(ch2)
p-nhc(＝o)-ch3、-(ch2)
p-n(甲基)2、-(ch2)
p-n(乙基)2、-(ch2)
p-氮杂环丁烷、-(ch2)
p-氧杂环丁烷、-(ch2)
p-四氢吡咯、-(ch2)
p-四氢噻吩、-(ch2)
p-四氢呋喃、-(ch2)
p-苯基、-(ch2)
p-萘基、-(ch2)
p-吡啶、-(ch2)
p-嘧啶、-(ch2)
p-吡嗪、-(ch2)
p-噻吩、-(ch2)
p-呋喃、-(ch2)
p-吡咯、-(ch2)
p-咪唑、-(ch2)
p-吡唑、-(ch2)
p-三氮唑、-(ch2)
p-四氮唑、-(ch2)
p-哌啶、-(ch2)
p-吗啉或-(ch2)
p-哌嗪，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0180]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1c
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0181]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1c
选自h、f、cl、br、i、氰基、cf3、chf2、ch2f、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基或丙氧基，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、羟甲基、甲氧基、乙氧基或丙氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0182]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
1d
各自独立的选自h或c
1-4
烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0183]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自4至12元含氮杂环，所述的含氮杂环选自饱和或部分饱和单环、桥环或螺环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个r
a
取代基所取代。
[0184]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自4至9元含氮杂环，所述的含氮杂环选自饱和或部分饱和单环、桥环或螺环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个r
a
取代基所取代。
[0185]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自取代的或者未取代的当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、cf3、甲基、乙基、丙基、异
丙基或ch2cn的取代基所取代。
[0186]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自环a基团的上方与r1直接连接。
[0187]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自
[0188]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自
[0189]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，环a选自
[0190]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0191]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r
a
选自h、oxo、f、cl、br、i、氰基、甲基、乙基、丙基或异丙基，所述的甲基、乙基、丙基或异丙基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0192]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r3选自h、c
1-4
烷基、c
3-10
碳环或3至12元杂环，所述的烷基、碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、c
2-6
炔基、c
1-4
烷氧基、-c
1-4
亚烷基-羟基、c
3-10
碳环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0193]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r3选自取代的或者未被取代的如下基团之一：h、苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、三氮唑基、四氮唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并吡咯基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、异喹唑啉基、吡啶[3,2-d]嘧啶或吡啶[4,3-d]嘧啶，当
被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基或c
2-4
炔基的取代基所取代。
[0194]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r3选自苯基或萘基，所述的苯基或萘基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代。
[0195]
本发明涉及通式(i)、(ia)或(ib)的一些实施方案中，r3选自取代或者未取代的如下基团之一：当被取代时，任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、炔丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代。
[0196]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，x2选自键、o、-och
2-、-ch2o-、s或nr
x
。
[0197]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，x2选自o、-och
2-或-ch2o-。
[0198]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r
x
选自h或c1-4烷基，所述的烷基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c1-4烷基或c1-4烷氧基的取代基所取代。
[0199]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，环b选自c
3-8
脂肪环烷基。
[0200]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，环b选自本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，环b选自
[0201]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，环b选自
[0202]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r4各自独立的选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、n(r
4a
)2、-(ch2)
q-c(＝o)c
1-4
烷基、-(ch2)
q-c(＝o)-3至12元杂环、-(ch2)
q-c(＝o)-c
3-10
碳环、-(ch2)
q-c(＝o)-n(r
4a
)2、-(ch2)
q-n(r
4a
)-c(＝o)r
4b
、-(ch2)
q-3至12元杂环或-(ch2)
q-c
3-10
碳环，所述的烷基、烷氧基、碳环或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、-c
1-4
亚烷基-oh、-ch
2-c
3-10
碳环、-ch
2-3至12元杂环、c
3-6
环烷基、c
1-4
烷氧基、-n(c
1-4
烷基)c(＝o)-3至12元杂环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0203]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r4选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-n(ch3)2、-n(ch2ch3)2、-(ch2)
q-环丙烷、-(ch2)
q-环丁烷、-(ch2)
q-环戊烷、-(ch2)
q-环己烷、-(ch2)
q-氮杂环丁烷、-(ch2)
q-氧杂环丁烷、-(ch2)
q-四氢噻吩、-(ch2)
q-四氢呋喃、-(ch2)
q-四氢吡咯、-(ch2)
q-苯基、-(ch2)
q-萘基、-(ch2)
q-吡啶、-(ch2)
q-嘧啶、-(ch2)
q-吡嗪、-(ch2)
q-噻吩、-(ch2)
q-呋喃、-(ch2)
q-吡咯、-(ch2)
q-咪唑、-(ch2)
q-咪唑、-(ch2)
q-吡唑、-(ch2)
q-三氮唑、-(ch2)
q-四
氮唑、-(ch2)
q-哌啶、-(ch2)
q-吗啉、-(ch2)
q-四氢吡喃、-(ch2)
q-吡咯双烷、-(ch2)
q-1,3-氧氮杂环庚、-(ch2)
q-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷、-(ch2)
q-哌嗪或-(ch2)
q-n(r
4a
)-c(＝o)r
4b
，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基、-c
1-4
亚烷基-oh、-ch
2-c
3-6
碳环、-ch
2-3至6元杂环、c
3-6
环烷基、c
1-4
烷氧基、-n(c
1-4
烷基)c(＝o)-3至12元杂环或3至12元杂环的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0204]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r4选自取代的或者未取代的如下基团之一：甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-(ch2)
q-四氢吡咯、四氢吡咯、-n(ch3)2、-n(ch2ch3)2或当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oxo、氰基、oh、cf3、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、n(ch3)2或n(ch2ch3)2的取代基所取代。
[0205]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r4选自-ch2n(ch3)2、-ch2n(ch2ch3)2、-n(ch2ch3)2、-n(ch3)2、、
[0206]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r
4a
各自独立的选自h、c
1-4
烷基、-c
1-4
烷基-3至12元杂环，所述的烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0207]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，两个r
4a
与其直接相连的氮原子一起形成4至8元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0208]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r
4a
选自h、甲基、乙基、丙基或异丙基，所述的甲基、乙基、丙基或异丙基任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基取代基所取代。
[0209]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r
4b
选自h、c
1-4
烷基、c
3-6
环烷基或3至12元杂环，所述的烷基、环烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0210]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，r
4b
选自h、甲基、乙基、丙基、异丙基、氮杂环丁烷或氧杂环丁烷，所述的甲基、乙基、丙基、异丙基、氮杂环丁烷或氧杂环丁烷任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、氰基、oh、cf3、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基取代基所取代。
[0211]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，选自选自
[0212]
本发明涉及通式(i)的一些实施方案中，选自
[0213]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6各自独立的选自h、c
1-4
烷基、-c
1-4
烷基-3至8元杂环，所述的烷基或杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0214]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、丙基、异丙基、-ch
2-氮杂环丁烷、-ch
2-氧杂环丁烷、-ch2ch
2-四氢吡咯烷、-ch
2-四氢吡咯烷、-ch
2-四氢噻吩或-ch
2-四氢呋喃，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代。
[0215]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：h、甲基、乙基、-ch
2-四氢吡咯烷或-ch2ch
2-四氢吡咯烷，当被取代时，任选被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(ch3)、-n(ch3)2、-nh(ch2ch3)、-n(ch2ch3)2、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代。
[0216]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6各自独立的选自h、甲基、乙基、-ch2ch2n(ch3)2、、
[0217]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至8元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、
cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0218]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至6元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)2、c
1-4
烷基或c
1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0219]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成4至6元含氮杂环，所述的含氮杂环任选进一步被0至4个选自h、f、cl、br、i、oh、氰基、cf3、cooh、nh2、-nh(ch3)、-n(ch3)2、-nh(ch2ch3)、-n(ch2ch3)2、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自o、s、n的杂原子。
[0220]
本发明涉及通式(i)或(ib)的一些实施方案中，r5、r6与其直接相连的氮原子一起形成
[0221]
本发明涉及通式(i)或(ia)的一些实施方案中，化合物不为
[0222]
本发明涉及一种药物组合物，包括本发明所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，以及要学上可接受的载体。
[0223]
本发明涉及一种本发明所述的化合物或者其立体异构体、氘代物、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶在用于制备治疗与kras-g12c活性或表达量相关疾病的药物中的应用，优选用于制备肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤优选血液学癌症、胰脏癌、myh相关息肉病、结肠直肠癌、非小细胞肺癌或小细胞肺癌。
[0224]
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0225]
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或f、cl、br、i均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括
12
c、
13
c和
14
c，氢的同位素包括氕(h)、氘(d，又叫重氢)、氚(t，又叫超重氢)，氧的同位素包括
16
o、
17
o和
18
o，硫的同位素包括
32
s、
33
s、
34
s和
36
s，氮的同位素包括
14
n和
15
n，氟的同位素包括
17
f和
19
f，氯的同位素包括
35
cl和
37
cl，溴的同位素包括
79
br和
81
br。
[0226]“烷基”是指1至20个碳原子的直链或支链饱和脂肪族烃基，优选为1至8个碳原子的烷基，更优选为1至6个碳原子的烷基，进一步优选为1至4个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、新丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基及其各种支链异构体；所述的烷基可以任选进一步被0至6个选自f、cl、br、i、羟
基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、酰胺基、烯基、炔基、c
1-6
烷基、c
1-6
羟基烷基、c
1-6
烷氧基、3至8元碳环基、3至8元杂环基、3至8元碳环基氧基、3至8元杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代，本文中出现的烷基，其定义与本定义一致。
[0227]“亚烷基”是指直链和支链的二价饱和烃基，包括-(ch2)
v-(v为1至10的整数)，亚烷基实施例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基等；所述的亚烷基可以任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、烯基、炔基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、碳环基氧基、杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出现的亚烷基，其定义与本定义一致。
[0228]“炔基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，炔基实施例包括但不限于乙炔基、炔丙基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-甲基-1-丁炔基、2-甲基-1-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基或5-己炔基等；所述的烷基可以任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、烯基、炔基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、碳环基氧基、杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出现的炔基，其定义与本定义一致。
[0229]“烷氧基”是指-o-烷基。非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、环丙氧基和环丁氧基。所述的烷氧基可以任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、烯基、炔基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、碳环基氧基、杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出现的烷氧基，其定义与本定义一致。
[0230]“碳环基”或“碳环”是指取代的或未取代的饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至8元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，芳香环或者非芳香环任选为单环、桥环或者螺环。非限制性实施例包括环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、苯环或萘环。所述的碳环可以任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、＝o、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、酰胺基、烯基、炔基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、碳环基氧基、杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出现的碳环或碳环基，其定义与本定义一致。
[0231]“杂环基”或“杂环”是指取代的或未取代的饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至8元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，且包含1至3个选自n、o或s的杂原子，优选3至8元杂环基，杂环基的环中选择性取代的n、s可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺
[3.3]庚烷基。所述的杂环基可以任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、＝o、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、酰胺基、烯基、炔基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、碳环基氧基、杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出现的杂环基，其定义与本定义一致。
[0232]“螺环”是指取代的或未取代的单环之间共用一个原子(称螺原子)的5至20元多环基团，其可以包含0至5个双键，且可以含有0至5个选自n、o或s(＝o)
n
的杂原子(其中n为0、1或2)。优选为6至14元，进一步优选为6至12元，更优选6至10元，其非限定性实例包括：
[0233][0233]
当被取代时，取代基可以为1至5个选自f、cl、br、i、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝o、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-o-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-(ch2)
m-c(＝o)-nr
b
r
c
、-(ch2)
m
s(＝o)nr
a
、-(ch2)
m-烯基-r
a
、-or
d
或-(ch2)
m-炔基-r
a
(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-nrbrc等基团，其中r
b
与r
c
独立选自包括h、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，r
b
与r
c
可形成五或六元环烷基或杂环基。r
a
与r
d
各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的螺环，其定义与本定义一致。
[0234]“并环”是指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环基团，其中一个或多个环可以含有0个或多个双键，且可以是取代的或未取代，并环体系中的各个环可以含0至5个选自n、s(＝o)
n
或o的杂原子(其中n为0、1或2)。优选为5至20元，进一步优选为5至14元，更有选5至12元，再进一步优选5至10元。非限定性实例包括：
[0235][0236]
当被取代时，取代基可以为1至5个选自f、cl、br、i、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝o、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-o-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-(ch2)
m-c(＝o)-nr
b
r
c
、-(ch2)
m
s(＝o)
n
r
a
、-(ch2)
m-烯基-r
a
、-or
d
或-(ch2)
m-炔基-r
a
(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-nr
b
r
c
等基团，其中r
b
与r
c
独立选自包括h、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，
r
b
与r
c
可形成五或六元环烷基或杂环基。r
a
与r
d
各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的并环，其定义与本定义一致。
[0237]“桥环”是指任意两个不直接连接的原子的多环基团，可以含有0个或多个双键，且可以是取代的或未取代的，并环体系中的任意环可以含0至5个选自n、s(＝o)
n
或o杂原子或基团(其中n为0、1、2)。环原子包含5至20个原子，优选为5至14个原子，进一步优选5至12个，在进一步优选5至10个。非限定性实例包括
[0238][0238]
和金刚烷。当被取代时，取代基可以为1至5个选自f、cl、br、i、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝o、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-o-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-(ch2)
m-c(＝o)-nr
b
r
c
、-(ch2)
m
s(＝o)
n
r
a
、-(ch2)
m-烯基-r
a
、-or
d
或-(ch2)
m-炔基-r
a
(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-nr
b
r
c
等基团，其中r
b
与r
c
独立选自包括h、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，r
b
与r
c
可形成五或六元环烷基或杂环基。r
a
与r
d
各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的桥环，其定义与本定义一致。
[0239]“杂单环”是指单环体系的“杂环基”或“杂环”，本文中出现的杂环基，其定义与本定义一致。
[0240]“杂并环”是指含有杂原子的“并环”。本文中出现的杂并环，其定义与本定义一致。
[0241]“杂螺环”是指含有杂原子的“螺环”。本文中出现的杂螺环，其定义与本定义一致。
[0242]“杂桥环”是指含有杂原子的“桥环”。本文中出现的杂桥环，其定义与本定义一致。
[0243]“芳基”或“芳环”是指具有单环或稠合环的一价芳香族烃基，通常有6至12个碳原子，且可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基可以为1至5个选自f、cl、br、i、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝o、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-o-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-(ch2)
m-c(＝o)-nr
b
r
c
、-(ch2)
m
s(＝o)
n
r
a
、-(ch2)
m-烯基-r
a
、or
d
或-(ch2)
m-炔基-r
a
(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-nr
b
r
c
等基团，其中r
b
与r
c
独立选自包括h、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，r
b
与r
c
可形成五或六元环烷基或杂环基。r
a
与r
d
各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的芳基或芳环，其定义与本定义一致。
[0244]“杂芳基”是指取代或未取代的5至15元芳香环，且含有1至5个选自n、o或s(＝o)
n
杂原子或基团(其中n为0、1或2)，优选5至10元杂芳香环，进一步优选5至6元。杂芳基的非限制性实施例包括但不限于吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉、硫代吗啉、1,3-二噻烷、苯并咪唑、哌叮基、苯并咪唑、苯并吡啶、吡咯并吡啶等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含
[0245][0246]
当被取代时，取代基可以为1至5个选自f、cl、br、i、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝o、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-o-(ch2)
m-c(＝o)-r
a
、-(ch2)
m-c(＝o)-nr
b
r
c
、-(ch2)
m
s(＝o)nr
a
、-(ch2)
m-烯基-r
a
、-or
d
或-(ch2)
m-炔基-r
a
(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-nr
b
r
c
等基团，其中r
b
与r
c
独立选自包括h、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，r
b
与r
c
可形成五或六元环烷基或杂环基。r
a
与r
d
各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的杂芳基，其定义与本定义一致。
[0247]“含有1至4个选自o、s、n的杂原子”是指含有1、2、3或4个选自o、s、n的杂原子。
[0248]“0至x个取代基所取代”是指被0、1、2、3
…
x个取代基所取代，x选自1至10之间的任意整数。如“0至4个取代基所取代”是指被0、1、2、3或4个取代基所取代。如“0至5个取代基所取代”是指被0、1、2、3、4或5个取代基所取代。如“杂桥环任选进一步被0至4个选自h或f的取代基所取代”是指杂桥环任选进一步被0、1、2、3或4个选自h或f的取代基所取代。
[0249]
x-y元的环(x选自小于y大于3的整数，y选自4至12之间的任意整数)包括了x+1、x+2、x+3、x+4
…
y元的环。环包括了杂环、碳环、芳环、芳基、杂芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环。如“4-7元杂单环”是指4元、5元、6元或7元的杂单环，“5-10元杂并环”是指5元、6元、7元、8元、9元或10元的杂并环。
[0250]“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被f取代的烷基”指烷基可以但不必须被f取代，说明包括烷基被f取代的情形和烷基不被f取代的情形。
[0251]“药学上可接受的盐”或者“其药学上可接受的盐”是指本发明化合物保持游离酸或者游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或者有机碱，所述的游离碱通过与无毒的无机酸或者有机酸反应获得的盐。
[0252]“药物组合物”是指一种或多种本发明所述化合物、其药学上可接受的盐或前药和其它化学组分形成的混合物，其中，“其它化学组分”是指药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。
[0253]“载体”是指不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的材料。
[0254]“赋形剂”是指加入到药物组合物中以促进化合物给药的惰性物质。非限制性实施例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇
类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
[0255]“前药”是指可经体内代谢转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰本发明化合物中的氨基或者羧基来制备，该修饰可以通过常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。当本发明的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂形成游离的氨基或者羧基。
[0256]“共晶”是指活性药物成分(api)和共晶形成物(ccf)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中api和ccf的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。
[0257]“动物”是指包括哺乳动物，例如人、陪伴动物、动物园动物和家畜，优选人、马或者犬。
[0258]“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
[0259]“任选”或“任选地”或“选择性的”或“选择性地”是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，该描述包括其中发生该事件或状况的情况及其中未发生的情况。例如，“选择性地被烷基取代的杂环基”是指该烷基可以但未必存在，该描述包括其中杂环基被烷基取代的情况，及其中杂环基未被烷基取代的情况。
[0260]
ic
50
(被测量的抑制剂的半抑制浓度)：通过测试受试化合物50％抑制gabapentin与钙离子通道结合所需的浓度。
具体实施方式
[0261]
以下实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
[0262]
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或(和)质谱(ms)来确定的。nmr位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。nmr的测定是用(bruker avance iii 400和bruker avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)，氘代氯仿(cdcl3)，氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)；
[0263]
ms的测定用(agilent 6120b(esi)和agilent 6120b(apci))；
[0264]
hplc的测定使用agilent 1260dad高压液相色谱仪(zorbax sb-c18 100
×
4.6mm,3.5μm)；
[0265]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm；
[0266]
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体；
[0267]
本发明的己知起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司；
[0268]
tf：三氟甲磺酰基；
[0269]
boc：叔丁氧基羰基；
[0270]
ts：对甲苯磺酰基；
[0271]
cbz：苄氧羰基；
[0272]
tms：三甲基硅基。
[0273]
实施例1：
[0274]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物1)
[0275]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0276][0277][0278]
第一步：4-羟基-2-甲硫基-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1b)
[0279]
tert-butyl 4-hydroxy-2-methylsulfanyl-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidine-7-carboxylate
[0280]
[0281]
氮气保护下，将甲醇钠(5.4g,100mmol)，s-甲基异硫脲硫酸盐(6.78g,36mmol)依次加入至化合物1-(叔丁基)-4-乙基3-氧代哌啶-1,4-二羧酸酯1a(5.42g,20mmol)的甲醇(100ml)溶液中，室温搅拌16h后，将盐酸(2n)加入反应体系，调节体系ph≈5，减压浓缩，残留物用乙酸乙酯和水(50ml：50ml)打浆，抽滤后固体减压干燥，得标题化合物4-羟基-2-甲硫基-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1b)(白色固体3.27g,产率：55％)。
[0282]
lcms m/z＝298.2[m+1]
+
[0283]
第二步：2-甲硫基-4-(三氟甲基磺酰氧基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1c)
[0284]
tert-butyl2-methylsulfanyl-4-(trifluoromethylsulfonyloxy)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidine-7-carboxylate
[0285][0286]
0℃下，氮气保护，将三氟甲磺酸酐(4.65g，16.5mmol)缓慢滴加至4-羟基-2-甲硫基-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1b)(3.27g,11mmol)和n,n-二异丙基乙胺(2.84g，22mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中，室温搅拌1h后，用饱和碳酸氢钠(50ml)淬灭，二氯甲烷(30ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物2-甲硫基-4-(三氟甲基磺酰氧基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1c)，白色固体(2.83g，产率60％)。
[0287]
第三步：1-苄基4-(叔丁基)(s)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(1e)
[0288]
1-benzyl 4-(tert-butyl)(s)-2-(cyanomethyl)piperazine-1,4-dicarboxylate
[0289][0290]
将(s)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.25g,10mmol)溶于15ml二氯甲烷中，室温下加入n,n-二异丙基乙胺(3.87g,30mmol)降温到0℃，滴加氯甲酸苄酯，低温反应2h。向反应液中加入25ml水，水相用二氯甲烷萃取(30ml
×
3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:20-1:5)，得到1-苄基4-(叔丁基)(s)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸酯(1e)(3.1g，产率：86％)。
[0291]
lcms m/z＝360.19[m+1]
+
[0292]
第四步：(s)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1f)
[0293]
benzyl(s)-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0294][0295]
将1e(3.1g,8.6mmol)溶于5ml乙酸乙酯中，室温下加入hcl/乙酸乙酯(10ml,3n)室温反应2h。抽滤得到固体，固体用饱和碳酸氢钠水溶液调节ph到9，水相用二氯甲烷萃取(30ml
×
3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，浓缩得到(s)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1f)(2g，产率：90％)。
[0296]
lcms m/z＝260.19[m+1]
+
[0297]
第五步：4-[(3s)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基硫烷基-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1g)
[0298]
tert-butyl4-[(3s)-4-benzyloxycarbonyl-3-(cyanomethyl)piperazin-1-yl]-2-methylsulfanyl-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidine-7-carboxylate
[0299][0300]
氮气保护下依次，在50ml反应瓶中依次加入2-甲硫基-4-(三氟甲基磺酰氧基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1c)((2.83g，6.6mmol)、(s)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1f)(1.71g，6.6mol)、n,n-二异丙基乙胺(2.56g，19.8mmol)和n，n-二甲基甲酰胺(50ml)，加完后在100℃下搅拌反应1h，然后反应体系以乙酸乙酯(150ml)稀释，用饱和氯化钠洗涤三次(50ml x 3)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱纯化得到标题化合物4-[(3s)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基硫烷基-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1g)，白色固体(3.01g，产率85％)。
[0301]
第六步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-(2-甲硫基-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1h)
[0302]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-(2-methylsulfanyl-5,6,7,8-tetrahydropyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate
[0303][0304]
将4-[(3s)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基硫烷基-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1g)(3.01g，5.6mmol)溶于50ml的二氯甲烷溶液中并加入10ml的三氟乙酸，室温反应2小时。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠(50ml)淬灭，乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用
无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-(2-甲硫基-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1h)，白色固体(2.45g，产率100％)。
[0305]
第七步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基硫烷基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸(1i)
[0306]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-methylsulfanyl-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0307][0308]
氮气保护下，在15ml封管中，依次将三(二亚苄基茚丙酮)二钯(18.3mg，0.02mmol),2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(9.3mg，0.02mmol)，碳酸铯(1.3g，4mmol)依次加入到苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-(2-甲硫基-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1h)(876mg，2mmol)的1，4-二氧六环(7ml)溶液中，80℃反应12h，反应体系用饱和碳酸氢钠(20ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:10-1:5)，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基硫烷基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸(1i)(白色固体823.8mg，产率73％)。
[0309]
lcms m/z＝565.3[m+1]
+
[0310]
第八步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亚磺酰基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸(1j)
[0311]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-methylsulfinyl-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0312][0313]
氮气保护，0℃下，将间氯过氧苯甲酸(302.3mg，1.75mmol)加入到苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基硫烷基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸(1i)(823.8mg，1.46mmol)的四氢呋喃(15ml)溶液中，0℃搅拌反应1h，饱和硫代硫酸钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(5ml
×
3)萃取，合并有机相，以饱和碳酸氢钠溶液(10ml)洗涤一
次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱纯化，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亚磺酰基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸，黄色固体(661.5mg，产率78％)。
[0314]
第九步：l-脯氨酸甲酯(1l)
[0315]
methyl l-prolinate
[0316][0317]
将l-脯氨酸(2g,17.4mmol)溶于15ml甲醇中，室温下加入二氯亚砜(2ml)搅拌反应2h。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调节到ph约为9，水相用二氯甲烷萃取(30ml
×
3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到l-脯氨酸甲酯(1l)直接用于下一步。
[0318]
lcms m/z＝130.1[m+1]
+
。
[0319]
第十步：1-(叔丁基)-2-甲基(s)-吡咯烷-1,2-二羧酸酯(1m)
[0320]
1-(tert-butyl)2-methyl(s)-pyrrolidine-1,2-dicarboxylate
[0321][0322]
将1l(2g,15.5mmol)溶于15mlthf中，加入10ml饱和碳酸氢钠水溶液，室温下加入二碳酸二叔丁酯(4.39g,20mmol)搅拌反应5h。水相用乙酸乙酯萃取(60ml
×
3)，合并有机相，有机相用水洗涤(40ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:50-1:25)得到1-(叔丁基)-2-甲基(s)-吡咯烷-1,2-二羧酸酯(1m)(2.55g，产率：71％)
[0323]
lcms m/z＝230.1[m+1]
+
[0324]
第十一步：(s)-2-(1-羟基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1n)
[0325]
tert-butyl(s)-2-(1-hydroxycyclopropyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0326][0327]
将1m(2.55g,11.1mmol)溶于15mlthf中，加入四异丙氧基氯化钛2ml，降温到0℃滴加乙基溴化镁的thf溶液(15ml,2m)，0℃搅拌反应3h。加入饱和氯化铵淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取(50ml
×
3)，合并有机相，有机相用水洗涤(40ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:10-1:5)得到(s)-2-(1-羟基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1n)(1.65g，产率：66％)。
[0328]
lcms m/z＝228.3[m+1]
+
。
[0329]
第十二步：苄基(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-叔丁氧基羰基-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1o)
[0330]
benzyl(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-tert-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl]
cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0331][0332]
氮气保护，0℃下，将叔丁醇钠(38.4mg,0.4mmol)加入到(2s)-2-(1-羟基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(136.3mg,0.6mmol)，苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亚磺酰基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸(116mg，0.2mmol)的甲苯(5ml)溶液中，0℃搅拌15min，饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到标题化合物苄基(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-叔丁氧基羰基-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1o)，(黄色固体,104mg，产率70％)。
[0333]
第十三步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[1-[(2s)-吡咯烷-2-基]环丙〕-6,8-二氢-5h-吡啶并并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1p)
[0334]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[7-(1-naphthyl)-2-[1-[(2s)-pyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0335][0336]
将苄基(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-叔丁氧基羰基-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1o)(104mg，0.14mmol)溶于二氯甲烷(5ml)溶液中并加入三氟乙酸(1.5ml)，室温反应2小时。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(20ml)稀释，用饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(5ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[1-[(2s)-吡咯烷-2-基]环丙〕-6,8-二氢-5h-吡啶并并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1p)，黄色固体(90mg，产率100％)。
[0337]
第十四步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h
--
吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1q)
[0338]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-[1-[(2s)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0339][0340]
在50ml反应瓶中，依次加入苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[1-[(2s)-吡咯烷-2-基]环丙〕-6,8-二氢-5h-吡啶并并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1p)(90mg，0.14mmol)、乙酸(42mg，0.7mmol)、37％甲醛水溶液(57μl，0.7mmol)、氰基硼氢化钠(44mg，0.7mmol)和甲醇(6ml)，加完后在室温下搅拌反应3h。饱和碳酸氢钠溶液(10ml)淬灭，二氯甲烷(10ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h
--
吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1q)，白色固体(55.2mg,60％)。
[0341]
第十五步：2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1r)
[0342]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazin-2-yl]acetonitrile
[0343][0344]
将苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h
--
吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1q)(55.2mg,0.084mmol)。加入反应瓶中，加入钯碳(11mg)和氨甲醇溶液(8ml)，氢气换气三次；室温搅拌反应4h。反应液通过硅藻土过滤，乙酸乙酯洗脱。减压浓缩干，得2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1r)，白色固体(44mg,产率100％)
[0345]
第十六步：2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化
合物1)
[0346]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0347][0348]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(7.56mg，0.084mmol)加入到2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1r)(44mg，0.084mmol)和n,n-二异丙基乙胺(16.3mg，0.126mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到2-[(2s)-4-[2-[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物1)黄色固体(11mg，产率：14.2％)。
[0349]
lcms m/z＝578.4[m+1]
+
.
[0350]1h nmr(400mhz,d2o)δ8.06-7.81(m,1h),7.55-7.30(m,2h),7.30-7.07(m,3h),6.99-6.80(m,1h),6.76-6.48(m,1h),6.31-6.11(m,1h),5.93-5.71(m,1h),4.94-3.80(m,6h),3.79-2.99(m,7h),2.91(s,3h),2.83-2.40(m,4h),2.40-2.12(m,2h),2.11-1.80(m,2h),1.70-1.00(m,5h).
[0351]
实施例2：
[0352]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物2)
[0353]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0354][0355][0356]
第一步：d-脯氨酸甲酯(2b)
[0357]
methyl d-prolinate
[0358][0359]
将2a(2g,17.4mmol)溶于15毫升甲醇中，室温下加入二氯亚砜(2ml)搅拌反应2h。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调节到ph约为9，水相用二氯甲烷萃取(30ml
×
3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到d-脯氨酸甲酯(2b)直接用于下一步反应。
[0360]
第二步：1-(叔丁基)-2-甲基(r)-吡咯烷-1,2-二羧酸酯(2c)
[0361]
1-(tert-butyl)2-methyl(r)-pyrrolidine-1,2-dicarboxylate
[0362]
yl]cyclopropoxy]-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0374][0375]
将苄基(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-叔丁氧基羰基-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2e)(104mg，0.14mmol)溶于二氯甲烷(5ml)溶液中并加入三氟乙酸(1.5ml)，室温反应2小时。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(20ml)稀释，用饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(5ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[1-[(2r)-吡咯烷-2-基]环丙〕-6,8-二氢-5h-吡啶并并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2f)，黄色固体(90mg，产率100％)。
[0376]
第六步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2g)
[0377]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0378][0379]
在50ml反应瓶中，依次加入苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[1-[(2r)-吡咯烷-2-基]环丙〕-6,8-二氢-5h-吡啶并并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2f)(90mg，0.14mmol)、乙酸(42mg，0.7mmol)、37％甲醛水溶液(57μl，0.7mmol)、氰基硼氢化钠(44mg，0.7mmol)和甲醇(6ml)，加完后在室温下搅拌反应3h。饱和碳酸氢钠溶液(10ml)淬灭，二氯甲烷(10ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2g)，白色固体(66.2mg,72％)。
[0380]
第七步：2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(2h)
[0381]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazin-2-yl]acetonitrile
[0382][0383]
将苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2g)(55.2mg,0.084mmol)。加入反应瓶中，加入钯碳(11mg)和氨甲醇溶液(8ml)，氢气换气三次；室温搅拌反应4h。反应液通过硅藻土过滤，乙酸乙酯洗脱。减压浓缩干，得2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(2h)，白色固体(44mg,0.084mmol，产率100％)
[0384]
第八步：2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物2)
[0385]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0386][0387]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(7.56mg，0.084mmol)加入到2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(2h)(44mg，0.084mmol)和n,n-二异丙基乙胺(16.3mg，0.126mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方
法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到2-[(2s)-4-[2-[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物2)黄色固体(9mg，产率：11.6％)。
[0388]
lcms m/z＝578.4[m+1]
+
[0389]1h nmr(400mhz,d2o)δ8.23
–
7.79(m,3h),7.78
–
7.39(m,4h),7.25-6.63(m,1h),6.34
–
6.12(m,1h),6.00
–
5.79(m,1h),5.18
–
4.80(m,3h),4.48
–
3.35(m,9h),3.35
–
3.06(m,3h),3.06
–
2.65(m,6h),2.43
–
1.49(m,4h),1.46
–
0.88(m,4h).
[0390]
实施例3
[0391]
2-[4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物3)
[0392]
2-[4-[2-[1-[(dimethylamino)methyl]cyclobutoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0393][0394][0395]
第一步：n-[(1-羟基环丁基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(3b)
[0396]
tert-butyl n-[(1-hydroxycyclobutyl)methyl]carbamate
[0397][0398]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将三乙胺(202mg,2mmol)滴加到二碳酸二叔丁酯(261.9mg,1.2mmol)、1-(氨甲基)环丁醇(101mg,1mmol)的四氢呋喃中(10ml)，室温搅拌
反应3h。饱和碳酸氢钠溶液(10ml)淬灭，二氯甲烷(10ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物n-[(1-羟基环丁基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(3b)，白色固体(200mg,99％)。
[0399]
第二步：苄基(2s)-4-[2-[1-[(叔丁氧基羰基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3c)
[0400]
benzyl(2s)-4-[2-[1-[(tert-butoxycarbonylamino)methyl]cyclobutoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0401][0402]
氮气保护，0℃下，将叔丁醇钠(38.4mg,0.4mmol)加入到(n-[(1-羟基环丁基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(120.7mg，0.6mmol)、化合物1j(116mg，0.2mmol)的甲苯(5ml)溶液中，0℃搅拌15min。饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到标题化合物苄基(2s)-4-[2-[1-[(叔丁氧基羰基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3c)，黄色固体(129mg,产率90％)。
[0403]
第三步：苄基(2s)-4-[2-[1-(氨基甲基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3d)
[0404]
benzyl(2s)-4-[2-[1-(aminomethyl)cyclobutoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0405][0406]
将苄基(2s)-4-[2-[1-[(叔丁氧基羰基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3c)(129mg，0.18mmol)溶于二氯甲烷(5ml)溶液中并加入三氟乙酸(1.5ml)，室温反应2小时。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(20ml)稀释，用饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯
[1-[(二甲基氨基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(3f)，白色固体(76.7mg，产率100％)
[0415]
第六步：2-[4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物3)
[0416]
2-[4-[2-[1-[(dimethylamino)methyl]cyclobutoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0417][0418]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(13.6mg，0.15mmol)加入到2-[(2s)-4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(3f)(76.7mg，0.15mmol)和n,n-二异丙基乙胺(29.7mg，0.23mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到2-[4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物3)黄白色固体(19.8mg，产率：14.5％)。
[0419]
lcms m/z＝566.3[m+1]
+
[0420]
1h nmr(400mhz,d2o)δ8.15(d,1h),8.11-7.86(m,1h),7.75-7.69(m,1h),7.67-7.60(m,1h),7.60-7.53(m,1h),7.49(t,1h),7.23-7.13(m,1h),6.85-6.66(m,1h),6.36-6.17(m,1h),6.00-5.84(m,1h),5.00-4.89(m,1h),4.87-4.75(m,1h),4.46-4.05(m,4h),4.00
–
3.90(m,2h),3.88
–
3.66(m,2h),3.65-3.44(m,2h),3.44-3.24(m,1h),3.21-2.83(m,9h),2.81
–
2.41(m,5h),2.16
–
1.75(m,2h).
[0421]
实施例4：
[0422]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丙基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；2,2,2-三氟乙酸盐(化合物4)。
[0423]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(dimethylamino)methyl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate.
[0424][0425]
第一步：苄基(2s)-4-[2-[1-[(叔丁氧基羰基氨基)甲基]环丙氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-哌啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4a)。
[0426]
benzyl(2s)-4-[2-[1-[(tert-butoxycarbonylamino)methyl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate.
[0427][0428]
氮气保护，0℃下，将叔丁醇钠(33.1mg,0.34mmol)加入到n-[(1-羟基环丙基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(193mg,1.03mmol)和化合物1j(200mg，0.34mmol)的甲苯(5ml)溶液中，0℃搅拌60min，饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱纯化(甲醇/二氯甲烷＝(v/v)1/100-1/30)，得到化合物4a，黄色固体(200mg，产率82％)。
[0429]
lcms m/z＝704.3[m+1]
+
[0430]
第二步：苄基(2s)-4-[2-[1-(氨基甲基)环丙氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4b)
[0431]
benzyl(2s)-4-[2-[1-(aminomethyl)cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0432][0433]
将化合物4a(200mg，0.28mmol)溶于二氯甲烷(6ml)溶液中并加入三氟乙酸(3ml)，室温反应2小时。将反应液直接浓缩，然后反应体系以二氯甲烷(20ml)稀释，用饱和碳酸氢钠(10ml)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物4b，黄色固体(170mg,产率99％)。
[0434]
lcms m/z＝604.3[m+1]
+
[0435]
第三步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丙氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-]d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4c)
[0436]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-[1-[(dimethylamino)methyl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0437][0438]
在50ml反应瓶中，依次加入化合物4b(170mg，0.28mmol)、乙酸(42mg，0.7mmol)、37％甲醛水溶液(0.1ml，1.5mmol)、氰基硼氢化钠(44mg，0.7mmol)和甲醇(6ml)，加完后在室温下搅拌反应3h。饱和碳酸氢钠溶液(10ml)淬灭，二氯甲烷(10ml x 3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，残留物硅胶柱纯化(甲醇/二氯甲烷＝(v/v)1/100-1/20)得到化合物4c，黄色固体(75mg,产率：42％)。
[0439]
lcms m/z＝632.3[m+1]
+
[0440]
第四步：
[0441]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丙基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(4d)
[0442]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(dimethylamino)methyl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazin-2-yl]acetonitrile
[0443][0444]
将化合物4c(75mg,0.12mmol)加入反应瓶中，加入钯碳(11mg)和氨甲醇溶液(8ml)，氢气换气三次，室温搅拌反应12h。反应液通过硅藻土过滤，减压浓缩，化合物4d，白色固体(52mg,产率52％)。
[0445]
lcms m/z＝498.3[m+1]
+
[0446]
第五步：2-[(2s)-4-[2-[1-[(二甲基氨基)甲基]环丙基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶哌啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；2,2,2-三氟乙酸盐(化合物4)
[0447]
2-[(2s)-4-[2-[1-[(dimethylamino)methyl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0448][0449]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(9.1mg，0.1mmol)加入到化合物4d(50mg，0.1mmol)和n,n-二异丙基乙胺(39mg，0.3mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到化合物4，白色固体(10mg，产率:15％)。
[0450]
lcms m/z＝552.3[m+1]
+
[0451]1h nmr(400mhz,d2o)δ8.06(d,1h),7.74(d,1h),7.55-7.45(m,2h),7.44-7.30(m,2h),7.06(d,1h),6.84-6.55(m,1h),6.34-6.15(m,1h),5.95-5.77(m,1h),4.95-4.83(m,1h),4.35-3.80(m,5h),3.78-3.17(m,6h),3.11-2.88(m,7h),2.85-2.40(m,4h),1.40-1.19(m,4h).
naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0463][0464]
氮气保护下，将顺式3-(二甲基氨基)环丁醇(0.18g，1.55mmol)，化合物1j(0.30g，0.52mmol)和甲苯(10ml)加入反应瓶中，冰水冷却下加入叔丁醇钠(0.15g，1.55mmol)，冰水冷却下反应15分钟。tlc检测反应完全，加入乙酸乙酯(20ml)和饱和碳酸氢钠溶液(30ml)，搅拌分层；有机层无水硫酸钠干，过滤，减压浓缩干，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[3-s-(二甲基氨基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯，黄棕色固体0.22g，收率：67.4％。
[0465]
第三步：2-[(2s)-4-[2-[3-(二甲基氨基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(5d)
[0466]
2-[(2s)-4-[2-[3-(dimethylamino)cyclobutoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazin-2-yl]acetonitrile
[0467][0468]
将苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[3-s-(二甲基氨基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.22g，0.35mmol)和甲醇氨溶液(10ml)加入反应瓶中，氢气换气两次，室温下氢化反应约30小时。tlc检测反应完全，铺适量硅藻土，减压过滤，滤液减压浓缩干，得2-[(2s)-4-[2-[3-(二甲基氨基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈，灰色固体0.12g，收率：69.3％。
[0469]
ms m/z(esi):498.4[m+h]
+
[0470]
第四步：2-[(2s)-4-[2-[3-(二甲基氨基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物5)
[0471]
2-[(2s)-4-[2-[3-(dimethylamino)cyclobutoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0472][0473]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(7.56mg，0.084mmol)加入到2-[(2s)-4-[2-[3-(二甲基氨基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(5d)(41.8mg，0.084mmol)和n,n-二异丙基乙胺(16.3mg，0.126mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到2-[(2s)-4-[2-[3-(二甲基氨基)环丁氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物5)白色固体(12.3mg，产率：16.4％)。
[0474]
lcms m/z＝552.3[m+1]
+
[0475]
1h nmr(400mhz,d2o)δ8.11(d,1h),7.92-7.84(m,1h),7.74
–
7.40(m,4h),7.18-7.10(m,1h),6.88
–
6.62(m,1h),6.33-6.19(m,1h),5.98-5.85(m,1h),5.20
–
5.10(m,1h),5.05
–
4.88(m,1h),4.86
–
4.72(m,2h),4.55
–
4.37(m,1h),4.34
–
3.91(m,4h),3.77
–
3.49(m,3h),3.46-3.35(m,1h),3.24
–
2.98(m,3h),2.95
–
2.78(m,8h),2.77-2.64(m,1h),2.55-2.43(m,2h).
[0476]
实施例6:
[0477]
1-[[4-[(3s)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-n-[2-(二甲基氨基)乙基]环丙烷甲酰胺；三氟乙酸盐(化合物6)
[0478]
1-[[4-[(3s)-3-(cyanomethyl)-4-prop-2-enoyl-piperazin-1-yl]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-2-yl]oxy]-n-[2-(dimethylamino)ethyl]cyclopropanecarboxamide；2,2,2-trifluoroacetate
[0479][0480]
第一步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-(1-甲氧基羰基环丙氧基)-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6a)
[0481]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-(1-methoxycarbonylcyclopropoxy)-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0482][0483]
氮气保护，0℃下，将叔丁醇钠(38.4mg,0.4mmol)加入到1-羟基环丙烷甲酸甲酯(69mg,0.6mmol)，苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亚磺酰基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸1j(116mg，0.2mmol)的甲苯(5ml)溶液中，0℃
搅拌15min，饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱纯化，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-(1-甲氧基羰基环丙氧基)-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6a)，黄色固体(94.8mg，产率73％)。
[0484]
第二步：1-[[4-[(3s)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]环丙烷羧酸(6b)
[0485]
1-[[4-[(3s)-4-benzyloxycarbonyl-3-(cyanomethyl)piperazin-1-yl]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-2-yl]oxy]cyclopropanecarboxylic acid
[0486][0487]
室温下，将4m氢氧化钠(1.8ml,7.2mmol)加入至化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-(1-甲氧基羰基环丙氧基)-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6a)(94.8mg，0.15mmol)的四氢呋喃(1.5ml)溶液中，室温搅拌16h后，体系以乙酸乙酯(20ml)稀释，将盐酸(2n)加入反应体系，调节体系ph～5，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得标题化合物1-[[4-[(3s)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]环丙烷羧酸(6b)，黄色固体92.7mg，产率：100％)
[0488]
第三步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[2-(二甲基氨基)乙基氨基甲酰基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6c)
[0489]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-[1-[2-(dimethylamino)ethylcarbamoyl]cyclopropoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0490][0491]
50ml茄型瓶中加入化合物1-[[4-[(3s)-4-苄氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]环丙烷羧酸(6b)(92.7mg，0.15mmol)、n，n-二甲基乙二胺(15.8mg，0.18mmol)、1-羟基苯并三唑(30mg，0.22mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(58mg，0.3mmol)和二氯甲烷15ml，室温反应1h。体系依次用nahco3(1ml
×
1)、饱和食盐水(1ml
×
1)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压
浓缩，硅胶柱纯化，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[2-(二甲基氨基)乙基氨基甲酰基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6c)(45.4mg，产率：44％)。
[0492]
第四步：1-[[4-[(3s)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-n-[2-(二甲基氨基)乙基]环丙烷甲酰胺(6d)
[0493]
1-[[4-[(3s)-3-(cyanomethyl)piperazin-1-yl]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-2-yl]oxy]-n-[2-(dimethylamino)ethyl]cyclopropanecarboxamide
[0494][0495]
将苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[1-[2-(二甲基氨基)乙基氨基甲酰基]环丙]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6c)(45.4mg，0.066mmol)加入反应瓶中，加入钯碳(5mg)和氨甲醇溶液(8ml)，氢气换气三次；室温搅拌反应12h。反应液通过硅藻土过滤，乙酸乙酯洗脱。减压浓缩干，得1-[[4-[(3s)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-n-[2-(二甲基氨基)乙基]环丙烷甲酰胺(6d)，白色固体(36.6mg,产率100％)
[0496]
第五步：1-[[4-[(3s)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-n-[2-(二甲基氨基)乙基]环丙烷甲酰胺；三氟乙酸盐(化合物6)
[0497]
1-[[4-[(3s)-3-(cyanomethyl)-4-prop-2-enoyl-piperazin-1-yl]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-2-yl]oxy]-n-[2-(dimethylamino)ethyl]cyclopropanecarboxamide；2,2,2-trifluoroacetate
[0498][0499]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(5.94mg，0.066mmol)加入到1-[[4-[(3s)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-n-[2-(二甲基氨基)乙基]环丙烷甲酰胺(6d)(36.6mg，0.066mmol)和n,n-二异丙基乙胺(12.8mg，0.099mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无
水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到1-[[4-[(3s)-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-n-[2-(二甲基氨基)乙基]环丙烷甲酰胺；三氟乙酸盐(化合物6)黄白色固体(13mg，产率：20.7％)。
[0500]
lcms m/z＝609.4[m+1]
+
[0501]
1h nmr(400mhz,d2o)δ8.36-7.87(m,2h),7.87-7.03(m,5h),6.91
–
6.57(m,1h),6.34-6.14(m,1h),6.04-5.78(m,1h),5.11
–
4.72(m,3h),4.49-3.90(m,4h),3.90
–
3.01(m,10h),2.99-2.56(m,8h),1.71-1.30(m,4h).
[0502]
实施例7:
[0503]
2-[(2s)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙基-2-烯醇基-哌嗪-2-基]乙腈；2,2,2-三氟乙酸(化合物7)
[0504]
2-[(2s)-4-[2-[[1-(dimethylaminomethyl)cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroaceticacid
[0505][0506]
第一步：苄基(2s)-4-[2-[[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(7a)
[0507]
benzyl(2s)-4-[2-[[1-[(tert-butoxycarbonylamino)methyl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0508][0509]
氮气保护，0℃下，将叔丁醇钠(38.4mg,0.4mmol)加入到1-羟基甲基-1-(叔丁氧基羰基氨基甲基)环丙烷(198mg,0.98mmol)，苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亚磺酰基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸1j(194mg，0.33mmol)
的甲苯(5ml)溶液中，0℃搅拌15min后饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱纯化，得到标题化合物苄基(2s)-4-[2-[[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(7a)，淡黄油状(226mg，产率94％)。
[0510]
第二步：苄基(2s)-4-[2-[[1-(氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(7b)
[0511]
benzyl(2s)-4-[2-[[1-(aminomethyl)cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0512][0513]
室温下，在50ml反应瓶中，加入苄基(2s)-4-[2-[[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(7a)(0.226g,0.31mmol)和二氯甲烷(15ml)，在室温下缓慢滴加三氟乙酸(10ml)，加完后在室温下搅拌反应一小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液(100ml)淬灭,加入氨水调ph约为12，然后用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩干得到标题化合物苄基(2s)-4-[2-[[1-(氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(7b),淡黄色固体粗品(0.1g，产率63.5％)。
[0514]
lcms m/z＝618.3[m+1]
+
[0515]
第三步：苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸酯(7c)
[0516]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-[[1-(dimethylaminomethyl)cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0517]
[0518]
在25ml反应瓶中，依次加入苄基(2s)-4-[2-[[1-(氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(7b)(0.1g,0.2mmol)、甲醛水溶液(37wt％,0.04ml)和甲醇(10ml)，然后滴加乙酸(49mg)，加完后分批加入氰基硼氢化钠(51mg，0.8mmol)，加完后在室温下搅拌反应过夜。反应液通过硅藻土抽滤，滤液减压浓缩，残留物通过柱层析分离纯化(dcm/meoh＝(v/v)25/1)得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸酯(7c)，淡黄色油状物(47mg，产率45％)。
[0519]
lcms m/z＝323.8[m+2]
+
/2
[0520]
第四步：2-[(2s)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(7d)
[0521]
2-[(2s)-4-[2-[[1-(dimethylaminomethyl)cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazin-2-yl]acetonitrile
[0522][0523]
将苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸酯(7c)(47mg，0.073mmol)加入反应瓶中，加入钯碳(20mg)和氨甲醇溶液(2ml)，氢气换气三次，室温搅拌反应12h。反应液通过硅藻土过滤，乙酸乙酯洗脱。减压浓缩干，得2-[(2s)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(7d)，淡黄油状物(29mg,产率78％)
[0524]
第五步：2-[(2s)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙基-2-烯醇基-哌嗪-2-基]乙腈；2,2,2-三氟乙酸(化合物7)
[0525]
2-[(2s)-4-[2-[[1-(dimethylaminomethyl)cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroaceticacid
[0526][0527]
氮气保护、室温下，于50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(5.35mg，0.059mmol)加入到2-[(2s)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(7d)(29mg，0.057mmol)和三乙胺(12mg，0.12mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)、饱和氯化钠溶液(5ml)、水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到2-[(2s)-4-[2-[[1-(二甲氨基甲基)环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙基-2-烯醇基-哌嗪-2-基]乙腈；2,2,2-三氟乙酸(化合物7)，淡黄色固体(19mg，产率：37％)。
[0528]
lcms m/z＝566.3[m+1]
+
[0529]1h nmr(400mhz,d2o)δ8.21(d,1h),8.00(d,1h),7.76(d,1h),7.73-7.60(m,2h),7.56(t,1h),7.27(d,1h),6.96-6.73(m,1h),6.33(t,1h),5.98(t,1h),5.14-4.94(m,2h),4.79-4.44(m,5h),4.42-4.08(m,4h),3.76
–
3.54(m,2h),3.51-3.40(m,1h),3.32-3.16(m,1h),3.14-2.76(m,10h),1.11-0.88(m,4h).
[0530]
实施例8：
[0531]
2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物8)
[0532]
2-[(2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0533][0534]
第一步：(2s)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8b)
[0535]
tert-butyl(2s)-2-(2-methoxy-2-oxo-ethyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0536][0537]
氮气保护，0℃下，将三甲基硅烷化重氮甲烷(9ml，2m)滴加到，2-[((2s)-1-叔丁氧羰基吡咯烷-2-基]乙酸(2.29g，10mmol)和n,n-二异丙基乙胺(1.78ml，10.7mmol)的甲醇(1.32ml)和乙腈(40ml)溶液中，滴毕，室温搅拌3h，饱和碳酸氢钠(40ml)淬灭，乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物(2s)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8b)，无色油状物(2.3g,产率94.7％)
[0538]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.21
–
3.95(m,1h),3.60(s,3h),3.40-3.19(m,2h),2.91-2.66(m,1h),2.24(q,1h),2.06-1.92(m,1h),1.88
–
1.60(m,3h),1.39(s,9h).
[0539]
第二步：(2s)-2-(2-羟乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8c)
[0540]
tert-butyl(2s)-2-(2-hydroxyethyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0541][0542]
氮气保护，0℃下，将(2s)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯8b(2.3g,9.5mmol)加入至四氢铝锂(456mg,12mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液中，室温搅拌3h，饱和碳酸氢钠(50ml)淬灭，乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物(2s)-2-(2-羟乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8c)，无色油状物(2.0g,产率98.5％)
[0543]
lcms m/z＝160.2[m-55]
+
[0544]
第三步：(2s)-2-(2-氧乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8d)
[0545]
tert-butyl(2s)-2-(2-oxoethyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0546][0547]
氮气保护，0℃下，将戴斯-马丁氧化剂(8.48g，20mmol)加入到(2s)-2-(2-羟乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8c)(2g，9.3mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中，室温搅拌1h,饱和硫代硫酸钠(100ml)淬灭，二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，合并有机相有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物(2s)-2-(2-氧乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8d)，无色油状物(1.9g，产率96％)
[0548]
第四步：(2s)-2-(1-甲酰基乙烯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8e)
[0549]
tert-butyl(2s)-2-(1-formylvinyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0550][0551]
在50ml反应瓶中，依次加入(2s)-2-(2-氧乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8d)(1.9g，8.9mmol)、四氢吡咯(63mg，0.89mmol)、37％甲醛水溶液(0.8ml，10.7mmol)、丙酸(65.9mg，0.89mmol)和甲醇(40ml)，加完后在55℃下搅拌过夜。饱和碳酸氢钠溶液(30ml)淬灭，二氯甲烷(30ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝8:1)，得到标题化合物(2s)-2-(1-甲酰基乙烯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8e)，白色固体(1.2g，产率60％)
[0552]
lcms m/z＝170.1[m-55]
+
[0553]
第五步：(2s)-2-(1-甲酰基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8f)
[0554]
tert-butyl(2s)-2-(1-formylcyclopropyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0555][0556]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将三甲基碘化亚砜(1.76g，8mmol)分批加入到叔丁醇钾(896mg,8mmol)的二甲基亚砜(20ml)溶液中，加毕于50℃反应10min，然后再将(2s)-2-(1-甲酰基乙烯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8e)(1.2g，5.3mmol)溶于10ml二甲亚砜中缓慢滴加到上述反应液中，滴毕，50℃反应10min，饱和碳酸氢钠溶液(30ml)淬灭，乙酸乙酯(100ml)稀释，分别以饱和氯化钠溶液(20ml)，水(20ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝8:1)，得到标题化合物(2s)-2-(1-甲酰基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8f)，白色固体(0.65g，产率51％)
[0557]
第六步：(2s)-2-[1-(羟甲基)环丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8g)
[0558]
tert-butyl(2s)-2-[1-(hydroxymethyl)cyclopropyl]pyrrolidine-1-carboxylate
[0559][0560]
氮气保护，0℃下，将硼氢化钠(204mg，5.4mmol)加入至(2s)-2-(1-甲酰基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8f)(0.65g，2.7mmol)的甲醇(15ml)溶液中，室温搅拌1h，饱和碳酸氢钠溶液(30ml)淬灭，二氯甲烷(20ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1)，得到标题化合物(2s)-2-[1-(羟甲基)环丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8g)，白色固体(0.6g，91.6％)
[0561]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.12(s,1h),3.67-3.52(m,1h),3.52-3.39(m,1h),3.29
–
3.19(m,1h),3.13(s,1h),2.00
–
1.71(m,3h),1.71-1.54(m,1h),1.46(s,9h),0.58
–
0.40(m,3h),0.38
–
0.28(m,1h).
[0562]
第七步：苄基(2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(8h)
[0563]
benzyl(2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-tert-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0564]
[0565]
氮气保护，0℃下，将叔丁醇钠(19.2mg,0.2mmol)加入到(2s)-2-[1-(羟甲基)环丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8g)(48.2mg,0.2mmol)，苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亚磺酰基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸(1j,116mg，0.2mmol)的甲苯(5ml)溶液中，0℃搅拌15min，饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到标题化合物苄基(2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(8h)，白色固体(116mg，产率76.8％)。
[0566]
lcms m/z＝758.3[m+1]
+
[0567]
第八步：苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[1-[(2s)-吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸(8i)
[0568]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[7-(1-naphthyl)-2-[[1-[(2s)-pyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0569][0570]
将苄基(2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(8h)(116mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5ml)溶液中并加入三氟乙酸(1.5ml)，室温反应2小时。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(20ml)稀释，用饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(5ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[1-[(2s)-吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸(8i)，黄色固体(100mg，产率100％)。
[0571]
lcms m/z＝658.3[m+1]
+
[0572]
第九步：苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[2-[[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯；(8j)
[0573]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-[[1-[(2s)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0583][0584]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(7.56mg，0.084mmol)加入到2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(8k)(45mg，0.084mmol)和n,n-二异丙基乙胺(16.3mg，0.126mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2s)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物8)，白色固体(18mg，产率：23％)。
[0585]
lcms m/z＝592.4[m+1]
+
[0586]1h nmr(400mhz,d2o)δ8.13(d,1h),7.92(d,1h),7.69(d,1h),7.62(t,1h),7.56(t,1h),7.48(t,1h),7.19(d,1h),6.85
–
6.65(m,1h),6.26(t,1h),5.91(t,1h),5.01(s,1h),4.79(d,2h),4.64
–
4.50(m,1h),4.48
–
4.01(m,5h),3.77-3.48(m,3h),3.47
–
3.08(m,4h),3.08-2.98(m,3h),2.98
–
2.74(m,4h),2.36
–
2.24(m,1h),2.18
–
1.96(m,3h),1.16
–
0.99(m,2h),0.97-0.88(m,1h),0.85
–
0.73(m,1h).
[0587]
实施例9：
[0588]
2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物9)
[0589]
2-[(2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0590][0591]
第一步：(2r)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9b)
[0592]
tert-butyl(2r)-2-(2-methoxy-2-oxo-ethyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0593][0594]
氮气保护，0℃下，将三甲基硅烷化重氮甲烷(9ml，2m)滴加到，2-[((2r)-1-叔丁氧羰基吡咯烷-2-基]乙酸(2.29g，10mmol)和n,n-二异丙基乙胺(1.78ml，10.7mmol)的甲醇(1.32ml)和乙腈(40ml)溶液中，滴毕，室温搅拌3h，饱和碳酸氢钠(40ml)淬灭，乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物(2r)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8b)，无色油状物(2.35g,产率96.7％)
[0595]
第二步：(2r)-2-(2-羟乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9c)
[0596]
tert-butyl(2r)-2-(2-hydroxyethyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0597][0598]
氮气保护，0℃下，将(2r)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯9b(2.3g，9.5mmol)加入至四氢铝锂(456mg，12mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液中，室温搅拌3h，饱和碳酸氢钠(50ml)淬灭，乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物(2r)-2-(2-羟乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9c)，无色油状物(2.01g,产率98.5％)
[0599]
第三步：(2r)-2-(2-氧乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9d)
[0600]
tert-butyl(2r)-2-(2-oxoethyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0601][0602]
氮气保护，0℃下，将戴斯-马丁氧化剂(8.48g，20mmol)加入到(2r)-2-(2-羟乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9c)(2g，9.3mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中，室温搅拌1h,饱和硫代硫酸钠(100ml)淬灭，二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，合并有机相有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)，得到标题化合物(2r)-2-(2-氧乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9d)，无色油状物(1.98g，产率100％)
[0603]
第四步：(2r)-2-(1-甲酰基乙烯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9e)
[0604]
tert-butyl(2r)-2-(1-formylvinyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0605][0606]
在50ml反应瓶中，依次加入(2r)-2-(2-氧乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9d)(1.9g，8.9mmol)、四氢吡咯(63mg，0.89mmol)、37％甲醛水溶液(0.8ml，10.7mmol)、丙酸(65.9mg，0.89mmol)和甲醇(40ml)，加完后在55℃下搅拌过夜。饱和碳酸氢钠溶液(30ml)淬灭，二氯甲烷(30ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝8:1)，得到标题化合物(2r)-2-(1-甲酰基乙烯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9e)，白色固体(1.4g，产率70％)
[0607]
第五步：(2r)-2-(1-甲酰基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9f)
[0608]
tert-butyl(2r)-2-(1-formylcyclopropyl)pyrrolidine-1-carboxylate
[0609][0610]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将三甲基碘化亚砜(1.76g，8mmol)分批加入到
叔丁醇钾(896mg,8mmol)的二甲基亚砜(20ml)溶液中，加毕于50℃反应10min，然后再将(2s)-2-(1-甲酰基乙烯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9e)(1.2g，5.3mmol)溶于10ml二甲亚砜中缓慢滴加到上述反应液中，滴毕，50℃反应10min，饱和碳酸氢钠溶液(30ml)淬灭，乙酸乙酯(100ml)稀释，分别以饱和氯化钠溶液(20ml)，水(20ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝8:1)，得到标题化合物(2s)-2-(1-甲酰基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9f)，白色固体(0.75g，产率59％)
[0611]
第六步：(2r)-2-[1-(羟甲基)环丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9g)
[0612]
tert-butyl(2r)-2-[1-(hydroxymethyl)cyclopropyl]pyrrolidine-1-carboxylate
[0613][0614]
氮气保护，0℃下，将硼氢化钠(204mg，5.4mmol)加入至(2r)-2-(1-甲酰基环丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9f)(0.65g，2.7mmol)的甲醇(15ml)溶液中，室温搅拌1h，饱和碳酸氢钠溶液(30ml)淬灭，二氯甲烷(20ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1)，得到标题化合物(2r)-2-[1-(羟甲基)环丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9g)，白色固体(0.6g，91.6％)
[0615]
第七步：苄基(2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(9h)
[0616]
benzyl(2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-tert-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-2-(cyanomethyl)piperazine-1-carboxylate
[0617][0618]
氮气保护，0℃下，将叔丁醇钠(19.2mg,0.2mmol)加入到(2r)-2-[1-(羟甲基)环丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9g)(48.2mg,0.2mmol)，苄基(2s)-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亚磺酰基-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪啶-1-羧酸(1j,116mg，0.2mmol)的甲苯(5ml)溶液中，0℃搅拌15min，饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到标题化合物苄基(2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(9h)，白色固体(124mg，产率80％)。
[0619]
第八步：苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[1-[(2r)-吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸(9i)
[0620]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[7-(1-naphthyl)-2-[[1-[(2r)-pyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate
[0621][0622]
将苄基(2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(9h)(116mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5ml)溶液中并加入三氟乙酸(1.5ml)，室温反应2小时。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(20ml)稀释，用饱和碳酸氢钠(10ml)淬灭，乙酸乙酯(5ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[1-[(2r)-吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸(9i)，黄色固体(100mg，产率100％)。
[0623]
第九步：苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(9j)
[0624]
benzyl(2s)-2-(cyanomethyl)-4-[2-[[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazine-1-carboxylate；
[0625][0626]
在50ml反应瓶中，依次加入苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[1-[(2r)-吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸(9i)(100mg，0.13mmol)、乙酸(42mg，0.7mmol)、37％甲醛水溶液(57μl，0.7mmol)、氰基硼氢化钠(44mg，0.7mmol)和甲醇(6ml)，加完后在室温下搅拌反应3h。饱和碳酸氢钠溶液(10ml)淬灭，二氯甲烷(10ml*3)萃取，合并有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到标题化合物苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡
咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(9j)，白色固体(72mg,70.6％)。
[0627]
第十步：2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(9k)
[0628]
2-[(2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]piperazin-2-yl]acetonitrile
[0629][0630]
将苄基(2s)-2-(氰甲基)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(9j)(60mg,0.089mmol)。加入反应瓶中，加入钯碳(12mg)和氨甲醇溶液(8ml)，氢气换气三次；室温搅拌反应4h。反应液通过硅藻土过滤，乙酸乙酯洗脱。减压浓缩干，得2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(9k)，白色固体(48mg,产率100％)
[0631]
第十一步：2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物9)
[0632]
2-[(2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-methylpyrrolidin-2-yl]cyclopropyl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5h-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile；2,2,2-trifluoroacetate
[0633][0634]
氮气保护，室温下，50ml三口瓶中，将丙烯酰氯(7.56mg，0.084mmol)加入到2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(9k)(45mg，0.084mmol)和n,n-二异丙基乙
胺(16.3mg，0.126mmol)的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应10min，二氯甲烷(20ml)稀释，分别以饱和碳酸氢钠溶液(5ml)，饱和氯化钠溶液(5ml)，水(5ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品过pre-hplc(仪器及制备柱：采用glison gx-281制备液相，制备柱型号是sunfire c18，5μm,内径*长度＝30mm*150mm)。制备方法：粗品用n,n-二甲基甲酰胺溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(0.1％tfa)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到2-[((2s)-4-[2-[[1-[(2r)-1-甲基吡咯烷-2-基]环丙基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氢-5h-吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈；三氟乙酸盐(化合物9)，白色固体(23mg，产率：29.5％)。
[0635]
lcms m/z＝592.4[m+1]
+
[0636]1h nmr(400mhz,d2o)δ8.15(d,1h),7.93(d,1h),7.69(d,1h),7.64(t,1h),7.57(t,1h),7.49(t,1h),7.20(d,1h),6.92
–
6.66(m,1h),6.26(t,1h),5.91(t,1h),5.03(s,1h),4.82(d,2h),4.66-4.58(m,1h),4.49-4.06(m,5h),3.77
–
3.55(m,3h),3.50-3.09(m,4h),3.05(s,3h),2.98-2.80(m,4h),2.36
–
2.24(m,1h),2.19
–
1.95(m,3h),1.20
–
1.00(m,2h),0.96
–
0.88(m,1h),0.81
–
0.76(m,1h).
[0637]
生物测试例
[0638]
方法1:nci-h358细胞购自于atcc，培养于rpmi1640，10％fbs，37℃,5％co2。第一天，收集处于指数生长期的nci-h358细胞，用vi-cell xr细胞计数仪(beckman coulter，tacel0030)进行活细胞计数。用培养基将细胞悬液调整到5000个/90μl。每孔加90μl细胞悬液于96-孔细胞培养板。第二天，化合物孵育。受试化合物起始浓度10μm，3倍稀释，9个浓度，每孔dmso终浓度为0.1％。于37℃，5％co2孵箱中培养72小时。药物处理72小时后，每孔加入50μl(1/2培养体积)预先融化并平衡到室温的ctg溶液(promega，g7572)，用微孔板震荡器混匀2分钟，于室温放置10分钟后用envision2104读板仪测定荧光信号值。
[0639]
细胞存活率用公式v
sample
/v
vehicle control x100％计算。其中v
sample
为药物处理组的读数，v
vehicle control
为溶剂对照组的平均值。应用graphpad prism 5.0软件,使用非线性回归模型绘制s型剂量-存活率曲线并计算ic
50
值。
[0640]
方法2:nci-h358细胞购自于atcc，培养于rpmi1640+10％fbs，于37℃,5％co2孵箱中培养。第一天，收集处于指数生长期的nci-h358细胞，用自动细胞分析仪(countstar)进行活细胞计数。用培养基将细胞悬液调整后铺板96孔细胞培养板，每孔1500个细胞。第二天，吸去培养基，每孔加入90μl新鲜培养基和10μl不同浓度化合物，每孔dmso终浓度为0.1％。于37℃，5％co2孵箱中培养72小时。药物处理72小时后，每孔加入100μl预先融化并平衡到室温的ctg溶液(promega，g7572)，用微孔板震荡器混匀2分钟，于室温放置10分钟后用酶标仪(pherastar fsx)测定荧光信号值。
[0641]
细胞存活率用公式v
sample
/v
vehicl
e control x100％计算。其中v
sample
为药物处理组的读数，v
vehicle control
为溶剂对照组的平均值。应用origen9.2软件,使用非线性回归模型绘制s型剂量-存活率曲线并计算ic
50
值。
[0642]
表1抑制nci-h358细胞增殖的ic
50
值
[0643]
序号测试方法化合物编号ic
50
(μm)1方法1化合物10.337
2方法1化合物40.7823方法1化合物70.1164方法2化合物80.3485方法2化合物90.105
[0644]
结论：本发明化合物具有良好的抑制nci-h358细胞增殖作用。