1.一种防治太子参病害的假单胞菌,其特征在于,所述假单胞菌为假单胞菌bbh16-1,保藏在中国典型培养物保藏中心(cctcc),保藏编号为cctccno:m2020971。
2.根据权利要求1所述的假单胞菌的分离筛选方法,其特征在于,所述方法具体为:
1)收集新鲜的太子参叶片和块根用水冲洗干净;
2)用灭菌的剪刀切成碎片置于研钵中;
3)按照0.5~1.5g叶片和块根组织加入10mlpbs溶液,超声15~25min后收集悬液,采用10倍体积比例依次稀释至10-2,得到含菌稀释液;
4)取10-2稀释浓度的100μl含菌稀释液涂布于pda平板上,每个处理三个重复;
5)25~30℃培养1~3d后,挑取表型差异的单菌落划线于lb培养基进行纯化培养;
6)鉴定分离的菌株假单胞菌;
7)采用平皿对峙培养法筛选假单胞菌;
镰刀菌、链格孢菌、富克葡萄孢盘菌、米根霉菌接种于pda培养基平板表面,20~30℃培养2~4d制备新鲜菌丝;
8)用1ml枪头打孔挑取新鲜镰刀菌、链格孢菌、富克葡萄孢盘菌、米根霉菌丝块,接种于pda平板中央,同时在其四周3cm处等距的四点分别接种培养20~28h的细菌菌液,以接菌大肠杆菌dh5α为阴性对照,每个处理重复三次;
9)所有处理于20~30℃下培养2~4d,即得假单胞菌:假单胞菌bbh16-1。
3.根据权利要求2所述的分离筛选方法,其特征在于,所述方法具体为:
1)收集新鲜的太子参叶片和块根用水冲洗干净;
2)用灭菌的剪刀切成碎片置于研钵中;
3)按照1g叶片和块根组织加入10mlpbs溶液,超声20min后收集悬液,采用10倍体积比例依次稀释至10-2,得到含菌稀释液;
4)取10-2稀释浓度的100μl含菌稀释液涂布于pda平板上,每个处理三个重复;
5)28℃培养2d后,挑取表型差异的单菌落划线于lb培养基进行纯化培养;
6)鉴定分离的菌株假单胞菌;
7)采用平皿对峙培养法筛选假单胞菌;
镰刀菌、链格孢菌、富克葡萄孢盘菌、米根霉菌接种于pda培养基平板表面,25℃培养3d制备新鲜菌丝;
8)用1ml枪头打孔挑取新鲜镰刀菌、链格孢菌、富克葡萄孢盘菌、米根霉菌丝块,接种于pda平板中央,同时在其四周3cm处等距的四点分别接种培养24h的细菌菌液,以接菌大肠杆菌dh5α为阴性对照,每个处理重复三次;
9)所有处理于25℃下培养3d,即得假单胞菌:假单胞菌bbh16-1。
4.根据权利要求2-3任一项所述的分离筛选方法,其特征在于,所述pda培养基的配方如下:马铃薯160~230g,葡萄糖15~25g,磷酸二氢钾0.5~2.1g,七水硫酸镁0.3~0.7g,琼脂10~20g。
5.根据权利要求4所述的分离筛选方法,其特征在于,所述pda培养基的配方如下:马铃薯200g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾1.5g,七水硫酸镁0.5g,琼脂15g。
6.根据权利要求4或5所述的分离筛选方法,其特征在于,pda培养基如下:将马铃薯煮沸4~6min后用纱布过滤收集滤液,添加葡萄糖、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、琼脂,蒸馏水定容至0.5~1.5l。
7.根据权利要求2-3任一项所述的分离筛选方法,其特征在于,所述lb培养基的配方如下:胰蛋白胨5~15g,酵母提取物2~8g,氯化钠5~15g,琼脂10~20g,蒸馏水定容至0.5~1.5l。
8.根据权利要求1所述的假单胞菌的鉴定方法,其特征在于,所述鉴定方法包括形态学鉴定及生物学鉴定,具体如下:
1)形态学鉴定
将假单胞菌bbh16-1菌株接种到lb培养基培养48h后,可见lb培养基上菌落黄白色菌落,菌落圆形,边缘整齐透明。
2)分子生物学鉴定
将假单胞菌bbh16-1菌株于lb培养基培养48h后,采用ctab/nacl提取方法提取基因组dna,提取后先后用苯酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)和氯仿-异戊醇(24:1)抽提和无菌水溶解,利用特异性引物扩增v3v4rdna并测序,测序序列长度为408bp,序列编号为seqidno.1;
测序引物dna序列:
v3v4rdna(正向引物):ctacgggmsgcagcag;
v3v4rdna(反向引物):ggactachvgggtwtctaat;
在ncbi中genbank数据库中,将bbh16-1菌株的v3v4rdna序列采用blastn检索,鉴定。
9.一种如权利要求1所述的假单胞菌bbh16-1菌株在制备太子参病原菌拮抗剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于假单胞菌bbh16-1菌株在制备镰刀菌、链格孢菌、富克葡萄孢盘菌、米根霉菌、球毛壳菌、裂褶菌、鸡腿菇菌、黑外皮球菌、可可毛色二孢菌、微扁沃利雅炭皮菌拮抗剂中的应用。