一种木瓜生物酶的制备方法及其应用与流程

1.本发明涉及生物酶制剂生产技术领域，具体为一种木瓜生物酶的制备方 法及其应用。


背景技术：

2.研究发现，sars病毒是通过病毒包膜表面的s蛋白与人体的血管紧张素转 化酶ⅱ(aceⅱ)相互作用而入侵人体。而研究人员将新型冠状病毒的序列与sars 冠状病毒进行比对，发现两者十分相似；通过对比2019-ncov的s蛋白与sars 冠状病毒的s蛋白，再通过计算机建立模型，发现虽然相互作用的五个氨基酸 中有四个都发生了突变，但是新型冠状病毒的s蛋白与人体的aceⅱ蛋白整体上 依旧存在相互作用的可能。这说明，新型冠状病毒很有可能也是通过s蛋白与 人aceⅱ相互作用的分子机制完成感染。
3.目前临床上应用的溶菌酶很多是鸡蛋清溶菌酶，是采用鸡蛋壳中残留的蛋 清为原料生产的。动物来源的溶菌酶因其纯化工艺复杂，常常有热源物质的引 入，同时由于它是一种异源蛋白，在动物体内会产生免疫原性和副作用，所以 开发植物来源的具有高效溶菌活性的溶菌酶非常必要。
[0004][0005][0006][0007][0008]


技术实现要素：

[0009]
本发明的目的在于提供一种木瓜生物酶的制备方法及其应用，具备采用 冻熔与等电点、超滤与保护技术等多项技术进行木瓜溶菌酶的分离及生产， 通过科学配伍试验，开发出新型生物酶的消毒剂产品，具有抗病毒与细菌作 用，其体外灭菌有效率达90％以上，并兼有消毒杀菌作用等功效；又具有食品 级安全等特点，具有很广泛的应用，解决了市场上销售的一般都是化学消毒 剂，但其使用效果是很有缺陷的问题。
[0010]
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种木瓜生物酶的制备方 法及其应用生产工艺采用冻溶提取、超滤窄分离、等电点纯化、酶活保护及 科学配伍技术进行生产，将番木瓜果浆进行冻溶提取，提取后的浆液经过微 滤后再次进行超滤窄分离，经过超滤窄分离后的浆液进行等电点纯化，经过 酶活保护，然后冻干成固体并送入到粉碎装置中粉碎，经检验后得到木瓜溶 菌酶半成品，木瓜溶菌酶半成品包装后出厂销售；木瓜溶菌酶半成品加入菠 萝提取物和溶葡萄球菌酶，按照生物消毒剂配方设计配比，称量后加入到混 合装置中混合，混合后的产品经过均质溶解并进行检测合格后分装。
[0011]
作为本发明的进一步工艺，生物酶消毒剂产品主要原料成分为：木瓜溶 菌酶10％、菠萝提取物10％、溶葡萄球菌酶2％、其他78％，按上述比例称重、 混合、溶解及分装得到成品。
[0012]
作为本发明的进一步工艺，木瓜溶菌酶的生产工艺：
[0013]
s1、采摘经过生物调控技术种植的番木瓜，将番木瓜制成番木瓜果浆， 备用；
[0014]
s2、将番木瓜果浆缓慢搅拌，添加ca与l-半胱氨酸酶保护剂混合制取得 到高活力木瓜浆，备用；
[0015]
s3、将高活力木瓜浆送入-18℃的冰库中冷冻60天，等到60天后从冷库 中取出并解冻；
[0016]
s4、将解冻后的高活力木瓜浆加入到搅拌装置内，搅拌装置设置成3500 转/分，高速搅拌15分钟；
[0017]
s5、搅拌后的高活力木瓜浆中按照1：3的比例加入纯水，将搅拌装置设 置到10hz进行搅拌3小时；
[0018]
s6、搅拌完成后的浆液经过卧式螺旋设备进行沉降分离，并进行管离工 序；
[0019]
s7、分离后的产品进行0.25μm微滤工序，然后进行1.2-1.6万分子量超 滤窄分离，得到过滤分离后的产品；
[0020]
s8、过滤分离后的产品进行等电点纯化工序，等电点纯化的ph设置在5.6 到6.0；
[0021]
s9、经过等电点纯化后的产品进行真空冷冻干燥，之后送入到粉碎装置 中进行粉碎，对粉碎后的产品进行检测，检测合格后得到木瓜溶菌酶半成品。
[0022]
作为本发明的进一步工艺，新型生物酶消毒剂产品的生产工艺：
[0023]
s1、将木瓜溶菌酶半成品、菠萝提取物和溶葡萄球菌酶按照按照生物消 毒剂配方设计配比，称量后加入到混合装置中混合，得到混合物；
[0024]
s2、混合物加入到粉碎装置进行粉碎，粉碎后进行三维混合，并加入溶 剂均质溶解，得到制剂；
[0025]
s3、对得到的制剂进行检测，检测合格后包装出厂。
[0026]
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：首次采用番木瓜水果浆中工 业化生产溶菌酶即木瓜溶菌酶产品，是一种可再生、环保、生态及安全的溶 菌酶生产方法。现有溶菌酶工业化生产方法有鸡蛋清提取法及工程菌发酵法， 鸡蛋清生产法由于原料含量低，需要大量原料才能生产1公斤产品，而且还 有动物源问题，鸡蛋价格波动大，只有与鸡蛋一起综合利用才能使生产与成 本降低；而工程菌发酵生产由于菌种活性低及酶活不高，其产品的酶活只为 蛋清法的30-50％，工程菌还有食品安全性问题。
[0027]
冻溶低温提取与分离生物酶生产工艺技术，通过超滤窄分离装置使木瓜 溶菌酶的收率85％以上，木瓜溶菌酶与蛋清提取的溶菌酶相比，无动物源，使 用更安全、成本也低。木瓜溶菌酶酶活2万u/mg，生产成本仅为国外同类产 品的50％，极具竞争力。
[0028]
木瓜溶菌酶对金黄色葡萄球菌的抑菌作用效果及抑菌作用机理。木瓜提 取的溶菌酶能够分解冠状病毒表壳的糖蛋白，同时兼具溶菌酶及水解酶的特 点，通过木瓜溶菌酶生产出的生物酶消毒剂产品，具有抗病毒与细菌的作用， 其体外灭菌有效率达90％以上，既有消毒杀菌作用功效，又有食品级安全等特 点。
附图说明
[0029]
图1为本发明的生产工艺流程图；
[0030]
图2为本发明的木瓜溶菌酶的生产工艺流程图；
[0031]
图3为本发明新型生物酶消毒剂产品的生产工艺流程图。
具体实施方式
[0032]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行 清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而 不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做 出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0033]
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“内”、“外”“前 端”、“后端”、“两端”、“一端”、“另一端”等指示的方位或位置关系为基于 附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是 指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操 作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅用于 描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
[0034]
在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语
ꢀ“
安装”、“设置有”、“连接”等，应做广义理解，例如“连接”，可以是固定 连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电 连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内 部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在 本发明中的具体含义。
[0035]
实施例1
[0036]
请参阅图1，本发明提供的一种实施例：一种木瓜生物酶的制备方法及其 应用的生产工艺采用冻溶提取、超滤窄分离、等电点纯化、酶活保护及科学 配伍技术进行生产，将番木瓜果浆进行冻溶提取，提取后的浆液经过微滤后 再次进行超滤窄分离，经过超滤窄分离后的浆液进行等电点纯化，经过酶活 保护，然后冻干成固体并送入到粉碎装置中粉碎，经检验后得到木瓜溶菌酶 半成品，木瓜溶菌酶半成品包装后出厂销售；木瓜溶菌酶半成品加入菠萝提 取物和溶葡萄球菌酶，生物酶消毒剂产品主要原料成分为：木瓜溶菌酶10％、 菠萝提取物10％、溶葡萄球菌酶2％、其他78％，按照生物消毒剂配方设计配比， 称量后加入到混合装置中混合，混合后的产品经过均质溶解并进行检测合格 后分装。
[0037]
现有溶菌酶工业化生产方法有鸡蛋清提取法及工程菌发酵法。鸡蛋清生 产法由于原料含量低，需要大量原料才能生产1公斤产品，而且还有动物源 问题，鸡蛋价格波动大，只有与鸡蛋一起综合利用才能使生产与成本降低； 而工程菌发酵生产由于菌种活性低及酶活不高，其产品的酶活只为蛋清法的 30-50％，工程菌还有食品安全性问题。采用番木瓜水果浆中工业化生产溶菌 酶即木瓜溶菌酶产品，是一种可再生、环保、生态及安全的溶菌酶生产方法。
[0038]
实施例2
[0039]
请参阅图2，本发明提供的一种实施例：一种木瓜生物酶的制备方法及其 应用生产工艺，木瓜溶菌酶的生产工艺：
[0040]
s1、采摘经过生物调控技术种植的番木瓜，将番木瓜制成番木瓜果浆， 备用；
[0041]
s2、将番木瓜果浆缓慢搅拌，添加ca与l-半胱氨酸酶保护剂混合制取得 到高活力木瓜浆，备用；
[0042]
s3、将高活力木瓜浆送入-18℃的冰库中冷冻60天，等到60天后从冷库 中取出并
解冻；
[0043]
s4、将解冻后的高活力木瓜浆加入到搅拌装置内，搅拌装置设置成3500 转/分，高速搅拌15分钟；
[0044]
s5、搅拌后的高活力木瓜浆中按照1∶3的比例加入纯水，将搅拌装置设 置到10hz进行搅拌3小时；
[0045]
s6、搅拌完成后的浆液经过卧式螺旋设备进行沉降分离，并进行管离工 序；
[0046]
s7、分离后的产品进行0.25μm微滤工序，然后进行1.2-1.6万分子量超 滤窄分离，得到过滤分离后的产品；
[0047]
s8、过滤分离后的产品进行等电点纯化工序，等电点纯化的ph设置在5.6 到6.0；
[0048]
s9、经过等电点纯化后的产品进行真空冷冻干燥，之后送入到粉碎装置 中进行粉碎，对粉碎后的产品进行检测，检测合格后得到木瓜溶菌酶半成品。
[0049]
冻溶低温提取与分离生物酶生产工艺技术，通过超滤窄分离装置使木瓜 溶菌酶的收率85％以上，木瓜溶菌酶与蛋清提取的溶菌酶相比，无动物源，使 用更安全、成本也低。木瓜溶菌酶酶活2万u/mg，生产成本仅为国外同类产 品的50％，极具竞争力。
[0050]
实施例3
[0051]
请参阅图3，本发明提供的一种实施例：一种木瓜生物酶的制备方法及其 应用生产工艺，新型生物酶消毒剂产品的生产工艺：
[0052]
s1、将木瓜溶菌酶半成品、菠萝提取物和溶葡萄球菌酶按照按照生物消 毒剂配方设计配比，称量后加入到混合装置中混合，得到混合物；
[0053]
s2、混合物加入到粉碎装置进行粉碎，粉碎后进行三维混合，并加入溶 剂均质溶解，得到制剂；
[0054]
s3、对得到的制剂进行检测，检测合格后包装出厂。
[0055]
从细菌的超微结构、毒力因子的表达、生物膜的形成以及蛋白质组的角 度研究木瓜溶菌酶对金黄色葡萄球菌的抑菌作用效果及抑菌作用机理。木瓜 提取的溶菌酶能够分解冠状病毒表壳的糖蛋白，同时兼具溶菌酶及水解酶的 特点。
[0056]
采用等电点、超滤窄分离等多项技术的组合进行木瓜溶菌酶的生产基础 上，通过科学配伍试验，开发一种新型的生物酶消毒剂产品，具有抗病毒与 细菌的作用，其体外灭菌有效率达90％以上，既有消毒杀菌作用功效，又有食 品级安全等特点。
[0057]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节， 而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实 现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且 是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨 在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。 不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。