一种Vadimezan工艺杂质化合物、制备方法及应用

一种vadimezan工艺杂质化合物、制备方法及应用
技术领域
1.本发明属于vadimezan质量控制技术领域，具体涉及一种肿瘤血管破坏剂vadimezan的工艺杂质，所述化合物的制备方法及其在vadimezan质量控制领域的应用。


背景技术：

2.按照《化学药物杂质研究技术指导原则》的定义，原料药中所含的杂质是指任何影响药物纯度的物质，是药物中存在的无治疗作用、影响药物的稳定性和疗效、对人体健康有害的物质，从其化学结构来分析是与原料药存在差异的某种成分。按照来源，杂质可能包括工艺杂质(包括合成中未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等)、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质等。药物质量标准的制定中，关于杂质限度的研究对药物的安全性具有重要的意义。
3.vadimezan的化学结构式如式1所示，是黄酮类小分子肿瘤血管破坏剂，该化合物可导致肿瘤内皮细胞选择性凋亡，其作用机制包括直接机制和间接机制。vadimezan的直接机制是诱导内皮细胞凋亡，vadimezan可激活多种促炎细胞因子的分泌，如白细胞介素6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)和粒细胞集落刺激因子(gcsf)。vadimezan血管破坏特性部分由tnfα信号传导介导。tnfα和其他几种促炎细胞因子改变内皮细胞的细胞骨架组织，从而改变这些细胞的形状并刺激其凋亡，内皮细胞凋亡导致肿瘤血管的不可逆破坏和肿瘤内血流的迅速减少，最终导致肿瘤出血性坏死和缺血的形成。vadimezan给药后发生血管破坏，这种效应在正常组织中未观察到，因为肿瘤内皮细胞比正常组织中的内皮细胞对vadimezan更敏感。vadimezan作用的间接机制是刺激免疫系统，通过激活线粒体和内质网相关蛋白，即干扰素基因刺激因子(sting)，刺激小鼠免疫系统，这种蛋白质负责细胞对病毒dna或死亡细胞信号的反应。
[0004][0005]
vadimezan的临床前i、ii期试验均获得了令人欣喜的结果，其最终成为药品上市的可能性较大，因此针对vadimezan的质量控制研究对于保障公众用药安全及药企生产具有重要的意义。


技术实现要素：

[0006]
本发明公开了一种vadimezan的工艺杂质，其结构式如式2所示，其化学名称为2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸，该工艺杂质是一种vadimezan生产过程
中产生的副产物，目前未见报道。基于本发明的上述发现，本发明还公开了该工艺杂质的制备方法及该工艺杂质在药品质量控制方面的应用。本发明对于vadimezan的原料药及其制剂的质量控制具有重要意义。
[0007][0008]
基于上述技术内容，本发明提供以下技术方案：
[0009]
本发明公开了一种vadimezan工艺杂质，该工艺杂质的名称为2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸，其分子式为：c
17h14
o7s，分子量362.05，该工艺杂质的毒性数据通过protox-ii软件预测，ld50为435mg/kg，允许日暴露量(pde)为7.83mg/天/kg，预测毒性等级为4，该工艺杂质可能具有致突变性。
[0010]
本发明还提供了一种该工艺杂质的制备方法，所述制备方法包括：以2-氨基-3，4-二甲基苯甲酸为起始原料，经过碘取代反应得到2-碘-3，4-二甲基苯甲酸，再碱化得到2-碘-3，4-二甲基苯甲酸钾，2-碘-3，4-二甲基苯甲酸钾与2-羟基苯乙酸醚化得到2-(2-羧基甲基)苯氧基-3，4-二甲基苯甲酸，2-(2-羧基甲基)苯氧基-3，4-二甲基苯甲酸经过环合反应得到vadimezan粗品，将vadimezan粗品的重结晶母液经过硅胶柱层析分离得到该工艺杂质的粗品，粗品经过硅胶板层析进一步分离提纯得到高纯度vadimezan工艺杂质2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸。所述制备方法的路线如式3：
[0011][0012]
(i)h2so4，水(1∶5.9)；nano2，0-2℃，1h；ki，75℃，2.5h；(ii)koh；(iii)na，ch3oh，2-羟基苯乙酸，dmso，dmap，(iv)h2so4，水(1∶8)，40℃，55min.
[0013]
式3
[0014]
所述vadimezan工艺杂质的制备方法中，工艺杂质来源于vadimezan粗品的重结晶母液，其重结晶溶剂为甲醇、二甲亚砜或n-甲基吡咯烷酮中的任意一种；制备所述重结晶母液时，vadimezan粗品与溶剂的质量比为1∶1～1∶5；制备所述重结晶母液时，vadimezan粗品在60～100℃温度下溶解于溶剂中，降温到0～10℃以析出vadimezan，随后将重结晶母液减压浓缩，得浓缩物干品，将浓缩物干品进行柱层析分离，硅胶柱层析时，洗脱剂为乙酸乙酯/甲醇组合或者二氯甲烷/甲醇组合中的任意一种，待分离样品与硅胶的质量比为1∶20～1∶40，经过硅胶柱层析分离后，得到所述工艺杂质的粗品，再将该粗品进行硅胶层析板分离，硅胶层析板分离时的展开剂为乙酸乙酯/甲醇组合，其比例为10∶1～1∶1(v/v)。分离得到的
vadimezan工艺杂质可作为杂质对照品用于vadimezan原料药及其制剂的质量控制。
附图说明
[0015]
图1：2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸的质谱图。
[0016]
图2：2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸的核磁共振氢谱图。
[0017]
图3：2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸的核磁共振碳谱图。
[0018]
图4：2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸的核磁共振dept谱图。
具体实施方式
[0019]
以下通过实施例对本发明进行进一步的说明，需要指出的是，实施例中所提供的温度、比例、范围等参数是为了更好的对本发明内容进行说明，而非是对本发明的限制。
[0020]
实施例1
[0021]
vadimezan工艺杂质，即：2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸的制备
[0022]
将12g 2-氨基-3，4-二甲基苯甲酸溶解于10g浓硫酸与59g水配置的溶液中，冷却至0℃，缓慢滴加5.6g亚硝酸钠与10ml水配制的溶液，保持滴加温度在0～2℃之间，滴加完毕，继续搅拌反应1小时，将36g碘化钾固体投入反应瓶中，升温到75℃反应2.5小时，冷却到室温，过滤得到红色固体12.6g，即为2-碘-3，4-二甲基苯甲酸。
[0023]
将上述固体溶解于4.3g氢氧化钾与100ml水配置的溶液中，减压浓缩干，得到2-碘-3，4-二甲基苯甲酸钾。
[0024]
将2.3g金属钠溶解于60ml甲醇中，加入15.2g 2-羟基苯乙酸，减压浓缩干，加入150ml dmso溶解固体，随后将上述2-碘-3，4-二甲基苯甲酸钾以及12g 4-二甲氨基吡啶加入反应瓶，加热到50℃搅拌反应2小时，冷却至室温后加入500ml水，析出固体，过滤得到黄色固体16.9g，即为2-(2-羧基甲基)苯氧基-3，4-二甲基苯甲酸。
[0025]
将上述2-(2-羧基甲基)苯氧基-3，4-二甲基苯甲酸加入到25g浓硫酸以及200g水配置的溶液中，加热到40℃反应55分钟，随后缓慢滴加10％的碳酸钠溶液至ph5～6，析出固体，过滤，即为vadimezan粗品。
[0026]
取vadimezan粗品4.0g，加入三倍重量的n-甲基吡咯烷酮，75℃振荡溶解。放置在0～10℃，析出结晶，24h后收集母液，将得到的母液在40～50℃减压浓缩，得到浓缩物2.0g。取浓缩物1.0g加入到装有20g硅胶的色谱柱中，干法上样。洗脱剂选择乙酸乙酯/甲醇，洗脱剂比例为乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1～1∶1(v/v)，梯度洗脱。收集浓缩1∶1梯度下的洗脱液并在40～50℃下减压浓缩得到杂质粗品0.1g。取杂质粗品20mg用硅胶层析板进一步分离纯化，展开剂为乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1～1∶1(v/v)，梯度展开，选取rf值0.4的色谱带，刮取上述色谱带，用甲醇进行洗脱，并在40～50℃减压浓缩，得到14.8mg杂质，纯度：98.73％。
[0027]
实施例2
[0028]
vadimezan工艺杂质，即：2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸在vadimezan原料药及其制剂质量控制中的应用：
[0029]
1.供试品溶液制备：精密称取vadimezan原料药或制剂适量，加甲醇超声溶解，制得每1ml中含vadimezan 0.4mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。
[0030]
2.对照品溶液的制备：精密称取2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸适量于量瓶中，加入甲醇超声溶解后，制得每1ml中含2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸4μg的溶液，摇匀，作为杂质对照品溶液。
[0031]
3.色谱条件：以agilent zorbax eclipse xdb-c8(4.6
×
250mm，5μm)为色谱柱，检测波长为243nm，柱温40℃，进样量为10μl，流速为0.8ml/min，以0.08％磷酸溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按照式4所示进行梯度洗脱。
[0032][0033]
式4
[0034]
4.取2-(5，6-二甲基-9-氧代-2-磺基-9h-呫吨-4-基)乙酸对照品溶液，供试品溶液分别按上述色谱条件进样测定，记录峰面积，采用外标法计算样品中杂质的含量。
[0035]
杂质含量％＝(供试品溶液中杂质峰面积
×
杂质对照品溶液浓度)/(杂质对照品溶液峰面积
×
供试品溶液浓度)
×
100％，样品平行2份测定，取平均值。
[0036]
5.限度：杂质的量不得过0.05％。