一种猴头菇液体发酵培养基以及制备三萜的方法与流程

1.本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种猴头菇液体发酵培养基以及制备三萜的方法。


背景技术：

2.猴头菇是猴头菇属，大型药食用真菌。子实体、较大肉质，外形像猴子的头，所以叫“猴头”。猴头菇是中国八大“山珍”之一，“山珍猴头，海味燕窝”，与熊掌、海参和鲨鱼翅并列为四大名菜，肉嫩味香，鲜美可口，营养丰富，色、香、味上乘。另外，猴头菇也是中国传统的贵重中药材，具有滋补健身、助消化、利五脏的功能。现代研究表明，其含有多肽、多糖、脂肪和蛋白质等活性成分，对消化道肿瘤、胃溃疡和十二指肠溃疡、胃炎、腹胀等有一定疗效。猴头菇的经济价值很高，比如猴头菇保健饮料，猴菇饼干，猴菇米稀等。
3.液体发酵技术是现代生物技术之一，它是指将食药用菌在生育过程中所必需的碳源、氮源、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在纯水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。得到的发酵液中含有菌体、被菌体分解及未分解的营养成分、菌体产生的代谢产物。相比于食用菌的固体平板培养，液体发酵有很多优点，比如菌丝体生长迅速，在液体培养中，液体培养基的营养成分分布均匀，有利于菌类营养体的充分接触和吸收。菌丝细胞能在培养基内处于最适温度、ph、氧气和碳氮比的条件下生长，能及时排放呼吸作用产生的代谢废气，因此新陈代谢旺盛，菌丝生长分裂迅速，能在短时间内积累大量的菌丝体和多糖、多肽等具有生理活性的代谢产物；生产周期短，通过食药用菌液体发酵培养获得大量的菌丝体和生理活性物质一般仅需要10天左右的时间，而固体培养需要20-30天。
4.碳源是猴头菇生长的碳素来源，也是其代谢活动的能源，是产生各种代谢物质的原料。葡萄糖是最主要的碳源，也是最常用的碳源。但是由于葡萄糖效应，葡萄糖量加入过多反而对菌丝生长不利。氮源是猴头菇菌丝体的重要营养组分，也是猴头菇合成蛋白质和核酸所不可缺少的原料。磷酸二氢钾和七水硫酸镁作为无机盐，起着维持培养液渗透压，维持细胞形态的作用。
5.温度对于猴头菇液体发酵的影响很大，且错综复杂。首先温度影响了猴头菇菌丝球的生长速度，随着温度的上升，由于猴头菇的生长代谢以及繁殖都有酶的参与，所以猴头菇生长繁殖速度加快。根据酶促反应的动力学来看，温度升高，酶促反应增强，呼吸强度增加，导致猴头菇生长速度加快。但是随着温度的升高，酶失活的速度加快，发酵周期缩短，菌体死亡；其次，温度影响猴头菇代谢物的产量；最后，温度影响液体发酵液的物理性质，通过改变发酵液的物理性质间接影响猴头菇的生物合成，也会影响猴头菇对发酵液中营养物质的吸收。
6.ph对于猴头菇液体发酵的影响也很大，首先ph也影响了猴头菇的酶促反应，强酸强碱容易使猴头菇失活，降低猴头菇的生长速度；其次，ph影响了猴头菇细胞膜的电荷状
态，引起细胞膜的渗透性变化，进而影响猴头菇对营养物质的吸收，影响猴头菇的生长速度，也影响了代谢产物的生成；还有，ph也影响猴头菇的形态；最后，ph对猴头菇某些生物合成途径有显著影响。有实验证明，猴头菇在中酸度环境下才能吸收发酵液中的有机成分。
7.摇床转速可以改变溶氧量，溶氧通过参与到猴头菇液体发酵的生理和生化和过程中来影响菌丝体的生长，转速过小会影响溶氧进而影响菌丝的生长，转速过大则会迫使菌丝成块，结团从而抑制菌丝生长。
8.三萜类成分是一类基本母核由30个碳原子所组成的萜类化合物，以游离形式或以与糖结合成苷或酯的形式存在，具有多方面的生化活性。三萜也是猴头菇中一类重要活性物质，可以抗癌，抗菌，抗炎，抗病毒，降低胆固醇，对人体好处很多。
9.因此，想要猴头菇快速发展，实现工厂化生产，研究出适合猴头菇的液体发酵培养基，找到最适合的发酵条件，可以加快猴头菇菌丝的生长。找到最优三萜提取方法，可以增加三萜产物的产量，提高猴头菇的经济效益。


技术实现要素：

10.发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种猴头菇液体发酵培养基，以有效加快菌的生长，加快菌代谢物的产生。
11.本发明还要解决的技术问题是提供一种猴头菇发酵产菌丝球体的方法。
12.本发明还要解决的技术问题是提供一种制备猴头菇三萜的方法。
13.为了解决上述第一个技术问题，本发明公开了一种猴头菇液体发酵培养基，包括如下质量百分比的组分：葡萄糖2％-4％，可溶性淀粉1％-3％，酵母膏0.5％-1.5％，磷酸二氢钾0.05％-0.15％，七水硫酸镁0.04％-0.1％，余量为水。在一些实施例中，所述猴头菇液体发酵培养基包括如下质量百分比的组分：葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，余量为水。
14.本发明中所述猴头菇液体发酵培养基适用于现有技术中所有的猴头菇，包括但不限于武汉周玉麟食用菌研究的猴头菇一级试管菌种(https://m.tb.cn/h.ft114le？sm＝b79355？tk＝xvjk29o0vbz)。
15.在一些实施例中，所述猴头菇液体发酵培养基于灭菌锅中，以115℃，保温20min灭菌。
16.为了解决上述第二个技术问题，本发明公开了一种猴头菇发酵产菌丝球体的方法将猴头菇活化后所得菌种接种到上述液体发酵培养基中发酵，即得猴头菇菌丝球体。
17.在一些实施例中，所述活化中的活化培养基包括如下重量百分的组分：葡萄糖2％，麸皮水10％，蛋白胨0.4％，酵母膏0.3％，琼脂2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维b10.001％，余量为水。在一些实施例中，所述麸皮水按照如下方法制备得到：将粗制麸皮以80-120g/500ml的用量加入水中，煮沸，保温10-50min，用一～七层纱布过滤，所得滤液即为麸皮水。在一些实施例中，所述麸皮水按照如下方法制备得到：将粗制麸皮以100g/500ml的用量加入水中，煮沸，保温30min，用四层纱布过滤，所得滤液即为麸皮水。
18.在一些实施例中，所述活化为将猴头菇在无菌环境下切下0.5cm*0.5cm*0.5cm的菌块接种于活化培养基中，放在26℃恒温箱下培养12-14天，作为活化后的菌种。
19.在一些实施例中，所述菌种以*1～5块/100ml的用量接种到液体发酵培养基中；在
一些实施例中，所述菌种以0.5*0.5*0.5cm3/块*3块/100ml的用量接种到液体发酵培养基中。
20.在一些实施例中，所述发酵的初始ph为5.0-6.0，所述发酵的温度为25-29℃，所述发酵中摇床的转速为150-210r/min。在一些实施例中，所述发酵的初始ph为5.5，所述发酵的温度为27℃，所述发酵中摇床的转速为180r/min。
21.在一些实施例中，所述发酵的时间为8-12天；在一些实施例中，所述发酵的时间为10天。
22.为了解决上述第三个技术问题，本发明公开了一种制备猴头菇三萜的方法，将上述方法制备得到的菌丝球体溶解于乙醇水溶液中，超声提取，离心，所得上清液即为含猴头菇三萜的提取液。
23.在一些实施例中，所述乙醇溶液中乙醇的体积浓度为40％-80％；在一些实施例中，所述乙醇溶液中乙醇的体积浓度为80％。
24.在一些实施例中，所述菌丝球体与乙醇水溶液的料液比为1g:15-30ml；在一些实施例中，所述菌丝球体与乙醇水溶液的料液比为1g:30ml。
25.在一些实施例中，所述超声提取的温度为40-80℃；在一些实施例中，所述超声提取的温度80℃。
26.在一些实施例中，所述超声提取的时间为10-50min；在一些实施例中，所述超声提取的时间为30min。
27.在一些实施例中，所述超声提取的频率为30-50khz；在一些实施例中，所述超声提取的频率为40khz。
28.在一些实施例中，所述离心的转速为3000-5000r/min；在一些实施例中，所述离心的转速为4000r/min。
29.在一些实施例中，所述离心的时间为5-15min；在一些实施例中，所述离心的时间为10min。
30.在一些实施例中，采用紫外分光光度法测定三萜含量，具体包括如下步骤：先将三萜标品齐墩果酸配制成浓度为0.2mg/ml的齐墩果酸溶液，分别吸取0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml与25ml的比色管中，沸水浴中蒸发去溶剂，加入0.5ml，浓度为50g/l的香草醛-冰乙酸溶液和1ml高氯酸溶液，混合后60℃水浴20min，冷水冷却15min后加入3ml冰乙酸。室温反应10min，最后于547nm处测定吸光值，以齐墩果酸质量为横坐标，吸光值为纵坐标，做标准曲线。将三萜提取液按照上述方法加入相应试剂，一样的条件测定，带入标准曲线，就可以知道三萜的含量。
31.有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：
32.本发明提供一种猴头菇液体发酵的培养基，并且通过对食用菌液体发酵条件的优化，找到使猴头菇生长速度最快的发酵条件。
33.本发明通过对三萜提取条件的优化，增加猴头菇的次级代谢产物三萜的含量，增加猴头菇的营养价值和经济价值。
附图说明
34.下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述
和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
35.图1为猴头菇在活化培养基上的生长情况。
36.图2为猴头菇在发酵培养基里的生长情况。
37.图3为猴头菇菌丝体烘干。
38.图4为猴头菇菌丝体磨碎。
39.图5为猴头菇三萜的提取液。
具体实施方式
40.下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
41.本发明中所述猴头菇斜面菌种(猴头菇)为购自武汉周玉麟食用菌研究的猴头菇一级试管菌种(https://m.tb.cn/h.ft114le？sm＝b79355？tk＝xvjk29o0vbz)。
42.实施例1～3中，各实施例中外界发酵条件一致，初始ph为5.5温度，在摇床上以27℃，180r/min的条件培养10天
43.实施例1：猴头菇液体酵制备菌丝球体
44.(1)母种菌种的活化：将在冰箱里保藏的猴头菇斜面菌种在无菌环境下切下0.5cm*0.5cm*0.5cm的菌块接种于活化培养基上，放在26℃恒温箱下培养12-14天，作为一级菌种(图1)。活化培养基中各组分的质量含量如下：葡萄糖2％，麸皮水10％，蛋白胨0.4％，酵母膏0.3％，琼脂2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维b10.001％，余量为水，其中麸皮水是由100g粗制麸皮加入约500ml的纯水煮沸，保温30min，然后再四层纱布上过滤制成。
45.(2)液体发酵培养基的灭菌：配制液体发酵培养基，其成分按重量百分比为葡萄糖2％，可溶性淀粉1％，酵母膏0.5％，磷酸二氢钾0.05％，七水硫酸镁0.04％，其余为纯水，ph为5.5。将液体发酵培养基以100ml的量置于250ml的三角瓶中，放入灭菌锅中115℃，保温20min灭菌，灭完菌后放入65℃烘箱中烘干。
46.(3)猴头菇的液体发酵：将步骤(1)所得的一级菌种切下0.5cm*0.5cm*0.5cm接种于步骤(2)中的液体发酵培养基中，在无菌条件下每瓶接种3块菌块，在摇床上以27℃，180r/min的条件培养10天(图2)，形成菌丝球体，得到含有菌丝球体的发酵液。
47.菌丝干重法测干重：将步骤(3)所得菌丝球用单层滤布过滤，将干净平板称重，过滤下来的菌丝球平铺在平板上，放入65℃烘箱中烘干(图3)，再次称重，总重量减去平板的重量就是菌丝干重，过滤下来的菌液保存在冰箱备用。
48.实施例2：猴头菇液体酵制备菌丝球体
49.(1)母种菌种的活化：将在冰箱里保藏的猴头菇斜面菌种在无菌环境下切下0.5cm*0.5cm*0.5cm的菌块接种于活化培养基上，放在26℃恒温箱下培养12-14天，作为一级菌种。活化培养基中各组分的质量含量如下：葡萄糖2％，麸皮水10％，蛋白胨0.4％，酵母膏0.3％，琼脂2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维b10.001％，余量为水，其中麸皮水是由100g粗制麸皮加入约500ml的纯水煮沸，保温30min，然后再四层纱布上过滤制成。
50.(2)液体发酵培养基的灭菌：配制液体发酵培养基，其成分按重量百分比为葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，其余为纯水，ph为
5.5。将液体发酵培养基以100ml的量置于250ml的三角瓶中，放入灭菌锅中115℃，保温20min灭菌，灭完菌后放入65℃烘箱中烘干。
51.(3)食用菌的液体发酵：将步骤(1)所得的一级菌种切下0.5cm*0.5cm*0.5cm接种于步骤(2)中的液体发酵培养基中，在无菌条件下每瓶接种3块菌块，在摇床上以27℃，180r/min的条件培养10天，形成菌丝球体，得到含有菌丝球体的发酵液。
52.菌丝干重法测干重：将步骤(3)所得菌丝球用单层滤布过滤，将干净平板称重，过滤下来的菌丝球平铺在平板上，放入65℃烘箱中烘干，再次称重，总重量减去平板的重量就是菌丝干重，过滤下来的菌液保存在冰箱备用。
53.实施例3：猴头菇液体酵制备菌丝球体
54.(1)母种菌种的活化：将在冰箱里保藏的猴头菇斜面菌种在无菌环境下切下0.5cm*0.5cm*0.5cm的菌块接种于活化培养基上，放在26℃恒温箱下培养12-14天，作为一级菌种。活化培养基中各组分的质量含量如下：葡萄糖2％，麸皮水10％，蛋白胨0.4％，酵母膏0.3％，琼脂2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维b10.001％，余量为水，其中麸皮水是由100g粗制麸皮加入约500ml的纯水煮沸，保温30min，然后再四层纱布上过滤制成。
55.(2)液体发酵培养基的灭菌：配制液体发酵培养基，其成分按重量百分比为葡萄糖4％，可溶性淀粉3％，酵母膏1.5％，磷酸二氢钾0.15％，七水硫酸镁0.1％，其余为纯水，ph为5.5。将液体发酵培养基以100ml的量置于250ml的三角瓶中，放入灭菌锅中115℃，保温20min灭菌，灭完菌后放入65℃烘箱中烘干。
56.(3)食用菌的液体发酵：将步骤(1)所得的一级菌种切下0.5cm*0.5cm*0.5cm接种于步骤(2)中的液体发酵培养基中，在无菌条件下每瓶接种3块菌块，在摇床上以27℃，180r/min的条件培养10天，形成菌丝球体，得到含有菌丝球体的发酵液。
57.菌丝干重法测干重：将步骤(3)所得菌丝球用单层滤布过滤，将干净平板称重，过滤下来的菌丝球平铺在平板上，放入65℃烘箱中烘干，再次称重，总重量减去平板的重量就是菌丝干重，过滤下来的菌液保存在冰箱备用。
58.实施例4～6中，各实施例中发酵培养基成分一致，培养基成分为葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，其余为纯水
59.实施例4：猴头菇液体酵制备菌丝球体
60.(1)母种菌种的活化：将在冰箱里保藏的猴头菇斜面菌种在无菌环境下切下0.5cm*0.5cm*0.5cm的菌块接种于活化培养基上，放在26℃恒温箱下培养12-14天，作为一级菌种。活化培养基中各组分的质量含量如下：葡萄糖2％，麸皮水10％，蛋白胨0.4％，酵母膏0.3％，琼脂2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维b10.001％，余量为水，其中麸皮水是由100g粗制麸皮加入约500ml的纯水煮沸，保温30min，然后再四层纱布上过滤制成。
61.(2)液体发酵培养基的灭菌：配制液体发酵培养基，其成分按重量百分比为葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，其余为纯水，ph为5.0。将液体发酵培养基以100ml的量置于250ml的三角瓶中，放入灭菌锅中115℃，保温20min灭菌，灭完菌后放入65℃烘箱中烘干。
62.(3)食用菌的液体发酵：将步骤(1)所得的一级菌种切下0.5cm*0.5cm*0.5cm接种于步骤(2)中的液体发酵培养基中，在无菌条件下每瓶接种3块菌块，在摇床上以25℃，150r/min的条件培养10天，形成菌丝球体，得到含有菌丝球体的发酵液。
63.菌丝干重法测干重：将步骤(3)所得菌丝球用单层滤布过滤，将干净平板称重，过滤下来的菌丝球平铺在平板上，放入65℃烘箱中烘干，再次称重，总重量减去平板的重量就是菌丝干重，过滤下来的菌液保存在冰箱备用。
64.实施例5：猴头菇液体酵制备菌丝球体
65.(1)母种菌种的活化：将在冰箱里保藏的猴头菇斜面菌种在无菌环境下切下0.5cm*0.5cm*0.5cm的菌块接种于活化培养基上，放在26℃恒温箱下培养12-14天，作为一级菌种。活化培养基中各组分的质量含量如下：葡萄糖2％，麸皮水10％，蛋白胨0.4％，酵母膏0.3％，琼脂2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维b10.001％，余量为水，其中麸皮水是由100g粗制麸皮加入约500ml的纯水煮沸，保温30min，然后再四层纱布上过滤制成。
66.(2)液体发酵培养基的灭菌：配制液体发酵培养基，其成分按重量百分比为葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，其余为纯水，ph为5.5。将液体发酵培养基以100ml的量置于250ml的三角瓶中，放入灭菌锅中115℃，保温20min灭菌，灭完菌后放入65℃烘箱中烘干。
67.(3)食用菌的液体发酵：将步骤(1)所得的一级菌种切下0.5cm*0.5cm*0.5cm接种于步骤(2)中的液体发酵培养基中，在无菌条件下每瓶接种3块菌块，在摇床上以27℃，180r/min的条件培养10天，形成菌丝球体，得到含有菌丝球体的发酵液。
68.菌丝干重法测干重：将步骤(3)所得菌丝球用单层滤布过滤，将干净平板称重，过滤下来的菌丝球平铺在平板上，放入65℃烘箱中烘干，再次称重，总重量减去平板的重量就是菌丝干重，过滤下来的菌液保存在冰箱备用。
69.实施例6：猴头菇液体酵制备菌丝球体
70.(1)母种菌种的活化：将在冰箱里保藏的猴头菇斜面菌种在无菌环境下切下0.5cm*0.5cm*0.5cm的菌块接种于活化培养基上，放在26℃恒温箱下培养12-14天，作为一级菌种。活化培养基中各组分的质量含量如下：葡萄糖2％，麸皮水10％，蛋白胨0.4％，酵母膏0.3％，琼脂2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维b10.001％，余量为水，其中麸皮水是由100g粗制麸皮加入约500ml的纯水煮沸，保温30min，然后再四层纱布上过滤制成。
71.(2)液体发酵培养基的灭菌：配制液体发酵培养基，其成分按重量百分比为葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，其余为纯水，ph为5.5。将液体发酵培养基以100ml的量置于250ml的三角瓶中，放入灭菌锅中115℃，保温20min灭菌，灭完菌后放入65℃烘箱中烘干。
72.(3)食用菌的液体发酵：将步骤(1)所得的一级菌种切下0.5cm*0.5cm*0.5cm接种于步骤(2)中的液体发酵培养基中，在无菌条件下每瓶接种3块菌块，在摇床上以29℃，210r/min的条件培养10天，形成菌丝球体，得到含有菌丝球体的发酵液。
73.菌丝干重法测干重：将步骤(3)所得菌丝球用单层滤布过滤，将干净平板称重，过滤下来的菌丝球平铺在平板上，放入65℃烘箱中烘干，再次称重，总重量减去平板的重量就是菌丝干重，过滤下来的菌液保存在冰箱备用。
74.实施例7～9为猴头菇三萜的制备，所采用的菌丝球为实施例2制备得到的菌丝球
75.下述实施例中采用紫外分光光度法测定三萜含量，具体为：先将三萜标品齐墩果酸配制成浓度为0.2mg/ml(0.2mg齐墩果酸溶于1ml的甲醇溶液中)的齐墩果酸溶液，分别吸取0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml与25ml的比色管中，沸水浴中蒸发去溶剂，加入0.5ml，浓度为
50g/l(50g的香草醛溶解于1l的冰乙酸溶液中)的香草醛-冰乙酸溶液和1ml高氯酸溶液，混合后60℃水浴20min，冷水冷却15min后加入3ml冰乙酸。室温反应10min，最后于547nm处测定吸光值，以齐墩果酸质量为横坐标，吸光值为纵坐标，做标准曲线。再将各实施例所提取的三萜提取液按照上述方法加入相应试剂，一样的条件测定，带入标准曲线，计算猴头菇三萜的含量。
76.实施例7：乙醇超声辅助提取三萜
77.将烘干的菌丝球磨碎(图4)，用40％乙醇溶解，溶解后的溶液在超声清洗仪上提取30min，超声频率为40khz，温度为40℃，菌丝球与乙醇的料液比为1g:10ml。然后将提取液在离心机上以4000r/min的转速离心10min，收集上清液，上清液就是三萜提取液(图5)。
78.实施例8：乙醇超声辅助提取三萜
79.将烘干的菌丝球磨碎，用60％乙醇溶解，溶解后的溶液在超声清洗仪上提取30min，超声频率为40khz，温度为60℃，菌丝球与乙醇的料液比为1g:15ml。然后将提取液在离心机上以4000r/min的转速离心10min，收集上清液，上清液就是三萜提取液。
80.实施例9：乙醇超声辅助提取三萜
81.将烘干的菌丝球磨碎，用80％乙醇溶解，溶解后的溶液在超声清洗仪上提取30min，超声频率为40khz，温度为80℃，菌丝球与乙醇的料液比为1g:30ml。然后将提取液在离心机上以4000r/min的转速离心10min，收集上清液，上清液就是三萜提取液。
82.上述各实施例的结果如表1～表3所示。
83.表1：猴头菇液体发酵结果(外界发酵条件一致)
[0084][0085]
表2：猴头菇液体发酵结果(培养基成分含量一致)
[0086]
[0087][0088]
表3：猴头菇代谢产物三萜制备情况
[0089] 三萜产量(mg/l发酵液)三萜得率(％)实施例721.270.19实施例831.360.28实施例933.570.30
[0090]
从表1可以看出，当培养基成分为葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，其余为纯水时(实施例2)，猴头菇生长速度最快；当营养成分进一步增加时(实施例3)，对猴头菇生长影响不大，有可能是因为葡萄糖含量过高，产生了葡萄糖效应。
[0091]
从表2可以看出，发酵条件为发酵培养基ph为5.5，摇床培养温度为27℃，转速为180r/min时(实施例5)，猴头菇液体发酵情况最好，菌丝体生长最快，菌丝干重也是最大，并且外界条件的变化对猴头菇生长影响很大。
[0092]
因此可得出结论，按照重量百分比包括葡萄糖3％，可溶性淀粉2％，酵母膏1％，磷酸二氢钾0.1％，七水硫酸镁0.06％，其余为纯水的液体发酵培养基，发酵条件为起始ph为5.5，发酵温度为27℃，摇床转速为180r/min，最适合猴头菇的液体发酵，菌丝干重最大。
[0093]
从表3可以看出，不同的三萜提取条件，三萜的产量也不同，得率也不一样。当乙醇浓度为80％，猴头菇菌丝球与乙醇的料液比为1:30g/ml，提取温度为80℃时(实施例9)，三萜产量最高，得率也最大。
[0094]
综上，本发明利用葡萄糖和可溶性淀粉为复合碳源，解除了葡萄糖效应，增加了液体发酵液的营养，增加了猴头菇生长速度；利用酵母膏作为氮源，营养丰富，富含猴头菇生长所需要的必需氨基酸以及核苷酸和微量元素等，可以大大加快猴头菇的生长。另外，本发明优化培养基各成分含量，找到最适合猴头菇液体发酵的条件；经过实验验定，对于猴头菇的液体发酵，温度控制在25-29℃，菌丝体生长速度较快；经过实验验定，对于猴头菇的液体发酵，ph控制在5.0-6.0，菌丝体生长速度较快；根据实验验定，摇床转速在150-210r/min，菌丝体生长最快。
[0095]
本发明提供了一种猴头菇液体发酵培养基以及制备三萜的方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。