一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基和培养方法
【专利摘要】本发明涉及一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基和培养方法，本发明确认了活跃链霉菌发酵生产那西肽的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例。利用本发明中提供的培养基配方和发酵控制工艺，能够提高那西肽发酵单位，降低发酵成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现那西肽稳定、高效的生产。
【专利说明】
一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基和培养方法
技术领域
[0001]本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基和培养方法。
【背景技术】
[0002]那西肽又称诺西肽，是一种抗生素，采用活跃链霉菌发酵模式生产，目前那西肽已被列入欧洲药典以及日本饲料安全法，许多国家和地区都在使用那西肽。我国农业部将那西肽列为可在饲料中长期添加的饲料添加剂。
[0003]目前，国内相关文献报道了那西肽生产工艺，其发酵模式分别为二级发酵或三级发酵。存在的问题是:
I工业化大生产发酵水平较低，其发酵水平维持在1500-1800ug/L左右。
[0004]2国内缺少那西肽完整的发酵工艺文献报道，并且相关的文献报道以试验为主，不能够为大生产模式提供有效地技术支持。
[0005]3那西肽大生产发酵周期长，一般在240h左右，能耗高。
[0006]4那西肽发酵综合生产成本较高，产品缺乏市场竞争力。
【发明内容】
[0007]本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种发酵工艺简单，有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现那西肽稳定、高效生产的活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基。
[0008]本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产那西肽的培养方法。
[0009]为实现上述目的所采取的技术方案为:
一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中
所述种子培养基的组成为:
葡聚糖4?8g/L、糖原8?12g/L、麦芽汁6?10ml/L、鱼粉9?13g/L、棉籽饼粉11?15g/L、玉米蛋白粉13?17g/L、硫酸钱0.04?0.088凡、轻质碳酸|丐1?58凡；
所述发酵培养基的组成为:
葡聚糖6?10g/L、糖原10?14g/L、麦芽汁8?12ml/L、鱼粉11?15g/L、棉籽饼粉13?17g/L、玉米蛋白粉14?18g/L、蚕蛹蛋白胨7?1]^凡、海藻粉4?88/1、硫酸钱0.06?0.8区/L、轻质碳酸钙I?5g/L、磷酸二氢钾0.05?0.09g/L、硫酸镁0.03?0.07g/L、硫酸镍0.006?0.01g/L、氯化钠0.02?0.06g/L、聚醚改性硅油0.5?0.9ml/L、液态烷烃0.3?0.7ml/L。
[0010]所述液态烷烃是指正十二烷和正十三烷油的混合物，其中正十二烷的含量为85-90%。
[0011]—种利用上述培养基发酵生产那西肽的培养方法，其特征在于其工艺步骤为: 1)种子培养:首先将种子培养基灭菌并冷却至20?25°C，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照2?3L/m3的接种量接入种子培养基中进行培养，至菌体浓度26?30%、培养时间40?45h移种；
2)发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却至20?25°C，并用无菌空气保压，然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度38?42%、发酵周期不超过220h，化学效价>2300ug/ml终止发酵。
[0012]所述种子培养基灭菌后的质量要求为:氨基氮>30mg/L、溶磷100?140ug/ml、月旨肪6?10g/L;
所述发酵培养基灭菌后的质量要求为:氨基氮>50mg/L、溶磷40?80ug/ml、脂肪12?16g/L0
[0013]所述培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液质量要求为:菌体浓度20?30%;镜检无杂菌。
[0014]所述种子培养条件为:罐压0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ；空气流量:30?50m3/h;搅拌转速60?80r/min。
[0015]所述发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在5?7; b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在100-120r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:300?400m3/h， h溶氧控制:
发酵前80h内，不控制溶氧，
81?160h，溶氧控制在40%以上，
16 Ih?发酵结束:溶氧控制在30%以上。
[0016]所述发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补甘蔗糖蜜、补水、补硫酸铵，其中
a补甘鹿糖蜜工艺控制:
分别在发酵90h、150h补入甘蔗糖蜜，其加量为发酵液体积的0.2-0.3%; b补水工艺控制:
发酵前SOh不用进行补水，
发酵时间在81?100h，当菌体浓度高于45%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40?45%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度，
发酵时间在1lh?发酵结束，当菌体浓度高于42%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在38?42%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度；c补硫酸钱:
在发酵80h和120h时补入10%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的0.01?0.03%。本发明的技术优势体现在:
I本发明确认了活跃链霉菌发酵生产那西肽的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例。
[0017]2本发明对种子培养、发酵培养的工艺进行了详细的阐述，确认了那西肽最佳的发酵工艺和控制参数。通过本发明发酵生产那西肽，其发酵单位达到2300ug/ml以上，同国内技术相比，发酵单位提高了27%以上;发酵周期控制在220h以内，降低了发酵能耗。
[0018]3本发明适用于工业化规模化发酵生产那西肽。
[0019]具体实施方法
下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0020]下述实施例的菌种选用活跃链霉菌:生产使用的菌种来源为母瓶发酵液。母瓶发酵液质量要求为:菌体浓度20?30%;镜检无杂菌。
[0021]实施例1
种子培养:培养基体积I Om3。
[0022]葡聚糖40kg、糖原80kg、麦芽汁60L、鱼粉90kg、棉籽饼粉110kg、玉米蛋白粉130kg、硫酸钱0.4kg、轻质碳酸|丐I Okg ；
首先将种子培养基灭菌并冷却至20 V，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮32mg/L、溶磷lOlug/ml、脂肪6.2g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照20L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为:罐压0.03?
0.06MPa ；罐温28?29 °C ；空气流量:30m3/h ；搅拌转速60r/min，至菌体浓度26%、培养时间40h移种。
[0023]发酵培养:培养基体积100m3。
[0024]葡聚糖600kg、糖原1000kg、麦芽汁800L、鱼粉1100kg、棉籽饼粉1300kg、玉米蛋白粉1400kg、蚕蛹蛋白胨700kg、海藻粉400kg、硫酸钱6kg、轻质碳酸I1^lOOkg、磷酸二氢钾5kg、硫酸镁3kg、硫酸镍0.6kg、氯化钠2kg、聚醚改性硅油50L、液态烷烃30L。
[0025]先将发酵培养基灭菌，冷却至20°C，并用无菌空气保压，发酵培养基灭菌后的质量为:氨基氮53mg/L、溶磷42ug/ml、脂肪12g/L。然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
[0026]发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在5.0; b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在100r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:300m3/h， h溶氧控制:
发酵前80h内，不控制溶氧，
81?160h，溶氧控制在40%以上，
161?发酵结束:溶氧控制在30%以上。
[0027]发酵培养结束，菌体浓度38%、发酵周期210h，化学效价2308ug/ml。
[0028]实施例2 种子培养:培养基体积I Om3 ο
[0029]葡聚糖50kg、糖原90kg、麦芽汁70L、鱼粉100kg、棉籽饼粉140kg、玉米蛋白粉140kg、硫酸钱0.5kg、轻质碳酸I3^Okg;
首先将种子培养基灭菌并冷却至22 V，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮35mg/L、溶磷lllug/ml、脂肪7g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照22L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为:罐压0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ；空气流量:35m3/h ；搅拌转速65r/min，至菌体浓度27%、培养时间41h移种。
[0030]发酵培养:培养基体积100m3。
[0031]葡聚糖700kg、糖原1100kg、麦芽汁900L、鱼粉1200kg、棉籽饼粉1400kg、玉米蛋白粉1500kg、蚕蛹蛋白胨800kg、海藻粉500kg、硫酸钱7kg、轻质碳酸I3^OOkg、磷酸二氢钾6kg、硫酸镁4kg、硫酸镍0.7kg、氯化钠3kg、聚醚改性硅油60L、液态烷烃40L。
[0032]先将发酵培养基灭菌，冷却至22°C，并用无菌空气保压，发酵培养基灭菌后的质量为:氨基氮57mg/L、溶磷51ug/ml、脂肪13g/L。然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
[0033]发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在5.5; b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在105r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:320m3/h， h溶氧控制:
发酵前80h内，不控制溶氧，
81?160h，溶氧控制在40%以上，
161?发酵结束:溶氧控制在30%以上。
[0034]发酵培养结束，菌体浓度39%、发酵周期212h，化学效价2374ug/ml。
[0035]实施例3
种子培养:培养基体积I Om3。
[0036]葡聚糖60kg、糖原100kg、麦芽汁80L、鱼粉110kg、棉籽饼粉150kg、玉米蛋白粉150kg、硫酸钱0.6kg、轻质碳酸I3^Okg;
首先将种子培养基灭菌并冷却至23 V，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮39mg/L、溶磷122ug/ml、脂肪8g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照25L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为:罐压0.03?
0.06MPa ；罐温28?29 °C ；空气流量:40m3/h ；搅拌转速70r/min，至菌体浓度28%、培养时间42h移种。
[0037]发酵培养:培养基体积100m3。
[0038]葡聚糖800kg、糖原1200kg、麦芽汁1000L、鱼粉1300kg、棉籽饼粉1500kg、玉米蛋白粉1600kg、蚕蛹蛋白胨900kg、海藻粉600kg、硫酸钱8kg、轻质碳酸I3^OOkg、磷酸二氢钾7kg、硫酸镁5kg、硫酸镍0.8kg、氯化钠4kg、聚醚改性硅油70L、液态烷烃50L。
[0039]先将发酵培养基灭菌，冷却至23°C，并用无菌空气保压，发酵培养基灭菌后的质量为:氨基氮62mg/L、溶磷60ug/ml、脂肪14g/L。然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
[0040]发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6; b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在110r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:350m3/h， h溶氧控制:
发酵前80h内，不控制溶氧，
81?160h，溶氧控制在40%以上，
161?发酵结束:溶氧控制在30%以上。
[0041 ]发酵培养结束，菌体浓度40%、发酵周期215h，化学效价2468ug/ml。
[0042]实施例4
种子培养:培养基体积I Om3。
[0043]葡聚糖70kg、糖原110kg、麦芽汁90L、鱼粉120kg、棉籽饼粉160kg、玉米蛋白粉160kg、硫酸钱0.7kg、轻质碳酸I3HOkg。
[0044]首先将种子培养基灭菌并冷却至24°C，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮43mg/L、溶磷131ug/ml、脂肪9g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照28L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为:罐压0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ；空气流量:45m3/h ；搅拌转速75r/min，至菌体浓度29%、培养时间43h移种。
[0045]发酵培养:培养基体积100m3。
[0046]葡聚糖900kg、糖原1300kg、麦芽汁1100L、鱼粉1400kg、棉籽饼粉1600kg、玉米蛋白粉1700kg、蚕蛹蛋白胨1000kg、海藻粉700kg、硫酸钱9kg、轻质碳酸I11HOOkg、磷酸二氢钾8kg、硫酸镁6kg、硫酸镍0.9kg、氯化钠5kg、聚醚改性硅油80L、液态烷烃60L。
[0047]先将发酵培养基灭菌，冷却至24°C，并用无菌空气保压，发酵培养基灭菌后的质量为:氨基氮66mg/L、溶磷71ug/ml、脂肪15g/L。然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
[0048]发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6.5; b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在115r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:370m3/h， h溶氧控制:
发酵前80h内，不控制溶氧，
81?160h，溶氧控制在40%以上，
161?发酵结束:溶氧控制在30%以上。
[0049]发酵培养结束，菌体浓度41%、发酵周期217h，化学效价2390ug/ml。
[0050]实施例5
种子培养:培养基体积I Om3。
[0051 ]葡聚糖80kg、糖原120kg、麦芽汁100L、鱼粉130kg、棉籽饼粉150 kg、玉米蛋白粉170kg、硫酸钱0.8kg、轻质碳酸I3^Okg。
[0052]首先将种子培养基灭菌并冷却至25°C，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮47mg/L、溶磷140ug/ml、脂肪10g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照30L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为:罐压
0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ；空气流量:50m3/h ；搅拌转速80r/min，至菌体浓度30%、培养时间44h移种。
[0053]发酵培养:培养基体积100m3。
[0054]葡聚糖1000kg、糖原1400kg、麦芽汁1200L、鱼粉1500kg、棉籽饼粉1700kg、玉米蛋白粉1800kg、蚕蛹蛋白胨1100kg、海藻粉800kg、硫酸钱10kg、轻质碳酸I丐500kg、磷酸二氢钾9kg、硫酸镁7kg、硫酸镍I kg、氯化钠6kg、聚醚改性娃油90L、液态烧经7OL。
[0055]先将发酵培养基灭菌，冷却至25°C，并用无菌空气保压，发酵培养基灭菌后的质量为:氨基氮70mg/L、溶磷80ug/ml、脂肪16g/L。然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
[0056]发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在7 b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在120r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:400m3/h， h溶氧控制:
发酵前80h内，不控制溶氧，
81?160h，溶氧控制在40%以上，
161?发酵结束:溶氧控制在30%以上。
[0057]发酵培养结束，菌体浓度42%、发酵周期220h，化学效价2327ug/ml。
[0058]上述实施例1-5的发酵过程中，根据检测情况，采用流加法进行补料，补料包括补甘蔗糖蜜、补水、补硫酸铵。
[0059]a补甘蔗糖蜜工艺控制:
分别在90h、150h补入甘蔗糖蜜，其加量为发酵液体积的0.2-0.3%。
[0060]b补水工艺控制:
发酵前SOh不用进行补水， 发酵时间在81?100h，当菌体浓度高于45%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40?45%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度，
发酵时间在1lh?发酵结束，当菌体浓度高于42%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在38?42%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度；c补硫酸钱:
在发酵80h和120h时补入10%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的0.01?0.03% ο[0061 ]对比实施例1(三级发酵模式)
一级种子培养:培养基体积为Im3
可溶性淀粉7kg、葡萄糖10kg、黄豆粉12kg、蛋白胨I lkg、玉米楽；15kg、硫酸钱0.05kg、轻质碳酸I11Hkgc3
[0062]首先将一级种子培养基灭菌并冷却至25°C，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮3.4mg/L、溶磷12ug/ml、脂肪0.9g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照2L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为:罐压0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ；空气流量:1m3A;搅拌转速80r/min，至菌体浓度20%、培养时间40h移种。
[0063]二级种子培养:培养基体积10m3。
[0064]可溶性淀粉80kg、葡萄糖120kg、黄豆粉130kg、蛋白胨150 kg、玉米楽170kg、酵母膏120kg、130硫酸钱0.8kg、轻质碳酸I3^Okg。
[0065]首先将种子培养基灭菌并冷却至25°C，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮42mg/L、溶磷129ug/ml、脂肪8g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的一级种子液接入二级种子培养基中进行培养。二级种子培养条件为:罐压0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ;空气流量:50m3/h ；搅拌转速80r/min，至菌体浓度30%、培养时间45h移种。
[0066]发酵培养:培养基体积100m3。
[0067 ] 可溶性1200kg、葡萄糖1600kg、、黄豆粉1700kg、蛋白胨900kg、玉米楽1400kg、酵母膏1100kg、甘氨酸100kg、硫酸铵9kg、轻质碳酸钙500kg、磷酸二氢钾9kg、硫酸镁7kg、硫酸亚铁6kg、硫酸猛lkg、氯化钠6kg。
[0068]发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6-6.5， b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在120r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:500m3/h，
发酵培养结束，菌体浓度38%、发酵周期240h，化学效价1735ug/ml。
[0069]对比实施例2(二级发酵模式)
种子培养:培养基体积I Om3。
[0070]液化淀粉100kg、葡萄糖100kg、乳糖60kg、黄豆饼粉120kg、蛋白胨130 kg、玉米浆160kg、糊精120kg、硫酸钱0.9kg、轻质碳酸I3Hokg。
[0071]首先将种子培养基灭菌并冷却至25°C，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量:氨基氮36mg/L、溶磷131ug/ml、脂肪9g/L;然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照30L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为:罐压0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ；空气流量:40m3/h ；搅拌转速80r/min，至菌体浓度35%、培养时间48h移种。
[0072]发酵培养:培养基体积100m3。
[0073]液化淀粉1100kg、葡萄糖1300kg、乳糖400kg、黄豆饼粉1400kg、蛋白胨1000kg、玉米楽1300kg、糊精1300kg、谷氨酸80kg、甘氨酸100kg、半胱氨酸75kg、硫酸钱8kg、轻质碳酸
I丐400kg、磷酸二氢钾I Okg、硫酸镁6kg、硫酸亚铁7kg、硫酸猛0.8kg、氯化钠5kg。
[0074]发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6-6.5 b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在120r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ； f空气流量:500m3/h，
发酵培养结束，菌体浓度40%、发酵周期240h，化学效价1513ug/ml。
【主权项】
1.一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中 所述种子培养基的组成为: 葡聚糖4?8g/L、糖原8?12g/L、麦芽汁6?10ml/L、鱼粉9?13g/L、棉籽饼粉11?15g/L、玉米蛋白粉13?17g/L、硫酸钱0.04?0.088凡、轻质碳酸|丐1?58凡； 所述发酵培养基的组成为: 葡聚糖6?10g/L、糖原10?14g/L、麦芽汁8?12ml/L、鱼粉11?15g/L、棉籽饼粉13?17g/L、玉米蛋白粉14?18g/L、蚕蛹蛋白胨7?llg/L、海藻粉4?8g/L、硫酸钱0.06?0.8g/L、轻质碳酸钙I?5g/L、磷酸二氢钾0.05?0.09g/L、硫酸镁0.03?0.07g/L、硫酸镍0.006?0.01g/L、氯化钠0.02?0.06g/L、聚醚改性硅油0.5?0.9ml/L、液态烷烃0.3?0.7ml/L。2.按照权利要求1所述的培养基，其特征在于所述液态烷烃是指正十二烷和正十三烷油的混合物，其中正十二烷的含量为85-90%。3.—种利用权利要求1或2所述培养基发酵生产那西肽的培养方法，其特征在于其工艺步骤为: 1)种子培养:首先将种子培养基灭菌并冷却至20?25°C，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照2?3L/m3的接种量接入种子培养基中进行培养，至菌体浓度26?30%、培养时间40?45h移种； 2)发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却至20?25°C，并用无菌空气保压，然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度38?42%、发酵周期不超过220h，化学效价>2300ug/ml终止发酵。4.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述种子培养基灭菌后的质量要求为:氨基氮>30mg/L、溶磷100?140ug/ml、脂肪6?10g/L; 所述发酵培养基灭菌后的质量要求为:氨基氮>50mg/L、溶磷40?80ug/ml、脂肪12?16g/L05.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液质量要求为:菌体浓度20?30%;镜检无杂菌。6.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述种子培养条件为:罐压0.03?0.06MPa ；罐温28?29°C ；空气流量:30?50m3/h ；搅拌转速60?80r/min。7.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述发酵培养条件为: a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在5?7; b温度:培养温度28?29 °C， c搅拌转速:转速控制在100-120r/min， d压力控制:罐压0.05?0.06MPa; e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7； f空气流量:300?400m3/h， h溶氧控制: 发酵前80h内，不控制溶氧， 81?160h，溶氧控制在40%以上， 161h?发酵结束:溶氧控制在30%以上。8.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补甘蔗糖蜜、补水、补硫酸铵，其中a补甘鹿糖蜜工艺控制: 分别在发酵90h、150h补入甘蔗糖蜜，其加量为发酵液体积的0.2-0.3%; b补水工艺控制: 发酵前SOh不用进行补水， 发酵时间在81?10h，当菌体浓度高于45%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40?45%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度， 发酵时间在1lh?发酵结束，当菌体浓度高于42%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在38?42%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度；c补硫酸钱: 在发酵80h和120h时补入10%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的0.01?0.03% ο
【文档编号】C12P21/02GK106047967SQ201610701929
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年8月23日
【发明人】任勇
【申请人】宁夏泰瑞制药股份有限公司