具有经过工程化的Fc结构域的抗CD40结合分子及其治疗用途的制作方法

背景技术：

1、分化簇40(cd40)是抗原呈递细胞(apc)激活所需的 apc共刺激蛋白。cd40是肿瘤坏死因子(tnf)-受体超家族的成员，并且对于各种免疫和炎症反应是必需的，所述免疫和炎症反应包含t细胞依赖性免疫球蛋白类别转换、记忆b细胞发育和生发中心形成。另外，cd40发现于肿瘤细胞，如b淋巴瘤的表面上，并且占所有实体瘤的约70％。已经显示，其激活逆转对肿瘤特异性抗原的耐受性，从而导致抗原特异性抗肿瘤免疫。

2、fc受体(fcr)是能够与抗体的fc部分结合的免疫细胞表面蛋白的家族。存在若干种不同类型的fc受体，包含fcγ受体、fcα受体、fcε受体和新生儿fc受体(fcrn)，所述受体与igg、iga、ige和igg抗体分别有不同的结合活性。fcγ受体亚家族包含fcγri(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriib(cd32b)、fcγriib(cd32c)、fcγriiia(cd16a)和fcγriiib(cd16b)。fcγri与igg1抗体和igg3抗体具有高结合亲和力，而其它fcγr与igg抗体具有低结合亲和力。

3、不同类型的fc受体在免疫系统中发挥不同的作用。例如，表达在nk细胞和巨噬细胞上的fcγriii受体与附着于受感染细胞或入侵病原体的抗体结合并且触发免疫细胞的抗体介导的吞噬作用(adcp)或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)，从而导致消除受感染细胞或入侵病原体。另一方面，表达在b细胞和树突细胞上的fcγriib受体可以在与igg抗体结合时下调免疫细胞的活性。

4、涉及激活的免疫细胞的疗法是用于消除如癌细胞等患病细胞的有前景的方法。然而，这种治疗方法常常会引起安全问题。例如，过度激活的免疫细胞将会导致不期望的细胞毒性，从而造成组织损伤。因此，开发有效且安全的新免疫疗法具有重大意义。

技术实现思路

1、本公开至少部分地基于cd40结合分子(例如，cd40激动剂或cd40拮抗剂)的设计，其包括表现出所期望的铰链柔性和优选的fc受体结合活性和/或选择性的经过工程化的(变体)fc区(例如，igg1、igg2或igg4分子的经过工程化的fc区)，例如对fcγriib具有增强的结合亲和力和/或选择性或对一种或多种fcγr受体具有显著降低的结合亲和力。此类cd40结合分子可以用于调节需要治疗的受试者的免疫应答(例如，选择性增强或选择性抑制免疫应答)。

2、因此，本公开的一个方面提供了cd40结合分子(例如，cd40激动剂或cd40拮抗剂)，与野生型fc区对应物相比，所述cd40结合分子包括cd40结合部分；以及抗体重链恒定区，所述抗体重链恒定区包括经过工程化的fc区，其包括位置220-331中的任何位置处，例如位置228-329中的任何位置处的至少一个突变。编号系统是根据eu索引。

3、在一些实施例中，cd40结合部分是cd40l的胞外结构域，其可以包括seq id no:140的氨基酸序列。包括这种cd40结合部分的cd40结合分子可以是cd40激动剂。

4、在其它实施例中，cd40结合部分可以是抗cd40抗体片段。在一个实施例中，抗cd40抗体片段包括重链和轻链，所述重链包括与本文所述的任何经过工程化的fc区连接的重链可变区，所述轻链包括轻链可变区和轻链恒定区。

5、在一些情况下，所述变体fc区相对于野生型对应物可以对fcγriib具有增强的结合亲和力和/或选择性。在其它情况下，所述变体fc区可以对一种或多种fcγr受体具有显著降低的结合亲和力。在一些实例中，所述变体fc区对所有fcγr受体具有低结合活性或不具有结合活性。

6、在一些实施例中，cd40结合分子可以包括igg1分子(例如，人igg1分子)的变体fc区，其可以包括包含以下中的一种或多种的突变：(a)位置233-238(例如，234-238)内的氨基酸取代或缺失；(b)位置265处的取代；(c)位置267处的取代；(d)位置297处的取代；(e)位置328处的取代、位置329处的取代；或其组合。可替代地或另外，igg1分子的fc变体可以包括位置220、226、229、238、273、327、330和/或331处的一个或多个突变。在一个实例中，突变包括位置233-236中的任何位置处的取代、位置236-238中的一个或多个位置处的缺失或其组合。例如，位置233-235处的所述取代可以包括e233p、l234v、l234f、l234a、l235a和/或l235e。在一个实例中，突变包括位置236-238中的一个或多个位置处的缺失。在另一个实例中，位置238处的所述取代可以是p238s，位置265处的所述取代可以是d265a或其组合。在又另一个实例中，所述取代位于位置267处并且是s267e。在另外的实例中，所述取代位于位置329处并且是p329g。在另外的实例中，所述突变可以包括位置265处的取代、位置297处的取代或其组合。例如，位置265处的所述取代可以是d265a，并且位置297处的所述取代可以是n297a。进一步地，位置220、226、229、327、330和331处的所述一个或多个取代可以是c220s、c226s、c229s、a327g、a330s和p331s。源自人igg1的示例性变体fc区可以是g1m1、g1m2、g1m17、g1m27、g1maa、g1maag、g1n297a、g1m240和g1m40之一。

7、在其它实施例中，cd40结合分子可以包括igg2分子(例如，人igg2分子)的fc区，其可以包括包含以下中的一种或多种的突变：(a)位置237和238中的一个或多个位置的缺失；(b)位置265处的取代；(b)位置267处的取代；(c)位置297处的取代；(d)位置328处的取代；或其组合。在一些实例中，所述缺失位于位置237处或位于位置237和238两者处。可替代地或另外，igg2分子的fc变体可以包括至少一个突变，所述至少一个突变包括位置233-235、237、238、268、273、330和331中的一个或多个位置处的取代。例如，位置233-235、237、238、268、273、330和331中的一个或多个位置处的所述取代可以是p233e、v234a、v234l、a235l、a235s、g237a、p238s、h268a、h268q、v273e、a330s和p331s。在一个实例中，所述取代位于位置267处并且是s267e。在另一个实例中，所述取代位于位置328处并且是l328f。在另外的实例中，所述突变可以包括位置265处的取代、位置297处的取代或其组合。例如，位置265处的所述取代可以是d265a，并且位置297处的所述取代可以是n297a。在一些特定实例中，源自igg2的变体fc区可以是g2m1、g2m17、g2m18、g2m19、g2m20、g2m27、g2m28、g2m29、g2m2040、g2m43、g2g4、g2maa和g2m40之一。

8、在又其它实施例中，cd40结合分子可以包括igg4分子(例如，人igg4分子)的fc区，其可以包括(a)位置228处的氨基酸残基取代；(b)任何一个位置235-238处的取代或缺失；(c)位置265处的取代；(d)位置267处的取代；(e)位置297处的取代；(e)位置328处的取代；或其组合。在一个实例中，位置228处的取代是s228p。在另一个实例中，所述缺失位于位置236、237和238中的一个或多个位置处(例如，位于位置236和237两者处)。可替代地或另外，igg4分子的fc变体可以包括位置233-235、237和273中的一个或多个位置处的取代。例如，一个或多个位置233-235、237和273处的取代可以是e233p、f234v、f234a、l235s、l235e、l235a、g237a和v273e。在另一个实例中，位置267处的所述取代是s267e。在另外的实例中，位置328处的所述取代是l328f。在另外的实例中，所述突变可以包括位置265处的取代、位置297处的取代或其组合。例如，位置265处的所述取代可以是d265a，并且位置297处的所述取代可以是n297a。在一些特定实例中，所述变体fc区是g4m1、g4m2、g4m20、g4m28、g4m30、g4m41、g4m42、g4m46、g4mpe、g4maa和g4m40之一。

9、与野生型fc区相比，本文所述的变体fc区中的任何变体fc区可以对fcγriib表现出增强的结合活性和/或增强的选择性。可替代地，本文所述的变体fc区可以对任何fcγr受体具有低结合活性或不具有结合活性。在一些情况下，所述变体fc区可以对fcγriib表现出降低的结合亲和力。可替代地或另外，所述变体fc区与fcrn结合。

10、本文所述的cd40结合分子中的任何cd40结合分子中的抗cd40抗体片段可以属于人抗体或人源化抗体。在一些实施例中，抗cd40抗体是激动剂抗体。在一些实例中，抗cd40抗体可以包括与seq id no:128中或19g6d6、36g7b8、13f1a7、9f12d9和17c5c2中的任何一个中的重链互补决定区(hc cdr)相同的hc cdr，和/或与seq id no:129中或19g6d6、36g7b8、13f1a7、9f12d9和17c5c2中的任何一个中的轻链互补决定区(lc cdr)相同的lccdr。在一个实例中，抗体片段可以包括seq id no:128的重链可变区，和/或seq id no:129的轻链可变区。在其它实例中，抗体片段可以包括与19g6d6、36g7b8、13f1a7、9f12d9和17c5c2之一相同的重链可变区和/或相同的轻链可变区。

11、另外，本文提供了一种药物组合物，其包括本文所述的cd40结合分子中的任何cd40结合分子和药学上可接受的载体。此类药物组合物可以用于选择性调节(例如，选择性激活或选择性抑制)受试者的免疫应答。

12、在又另一方面，本公开提供了一种用于选择性调节(例如，选择性激活或选择性抑制)受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文所述的cd40结合分子。

13、在本文所述的任何方法中，所述受试者可以是患有或疑似患有癌症的人类患者，并且所述cd40结合分子可以是cd40激动剂。示例性癌症包含肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、皮肤癌、胰腺癌、脑癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、肉瘤、骨癌、淋巴瘤和血液癌。

14、可替代地，所述受试者可以是患有或疑似患有免疫相关病症的人类患者，并且所述cd40结合分子可以是cd40拮抗剂。示例性免疫病症包含自身免疫性疾病、免疫缺陷或过敏症。在一些实施例中，用于治疗的靶疾病是自身免疫性疾病。

15、在又另一方面，本公开提供了一种分离的抗cd40抗体，其和选自由以下组成的组的参考抗体与cd40的同一表位结合：19g6d6、36g7b8、13f1a7、9f12d9和17c5c2，或者与所述参考抗体竞争与所述表位结合。

16、在一些实施例中，所述抗体包括重链互补决定区1(cdr1)、重链互补决定区2(cdr2)和重链互补决定区3(cdr3)，所述重链cdr1、所述重链cdr2和所述重链cdr3共同与所述参考抗体的相应重链cdr至少85％相同；和/或其中所述抗体包括轻链cdr1、轻链cdr2和轻链cdr3，所述轻链cdr1、所述轻链cdr2和所述轻链cdr3共同与所述参考抗体的相应轻链cdr至少85％相同。

17、在另一个实施例中，相对于参考抗体的相应重链cdr，重链cdr1、重链cdr2和重链cdr3共同包括10个或更少氨基酸突变；和/或其中相对于参考抗体的相应轻链cdr，轻链cdr1、轻链cdr2和轻链cdr3共同包括10个或更少氨基酸突变。

18、在一个实施例中，所述抗体包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区与所述参考抗体的重链可变区至少85％相同，所述轻链可变区与所述参考抗体的轻链可变区至少85％相同。

19、在一些实施例中，重链可变区相对于参考抗体的重链可变区包括10个或更少氨基酸残基突变；和/或并且相对于参考抗体的轻链可变区包括10个或更少氨基酸突变的轻链可变区。

20、在一些实例中，本文公开的抗cd40抗体可以与所述参考抗体包括相同的重链可变区cdr和/或与所述参考抗体包括轻链可变区cdr。

21、本文所述的任何抗cd40抗体可以是人抗体或人源化抗体。本文还提供了一种药物组合物，其包括本文所述的任何抗cd40抗体和药学上可接受的载体。

22、进一步地，本公开的特征在于一种分离的核酸或核酸组，其编码或共同编码本文所述的任何cd40结合分子或任何抗cd40抗体。所述核酸或核酸组可以位于一个或两个载体，例如表达载体上。本文还提供了包括一种或多种此类载体的宿主细胞。

23、本公开的特征还在于包括一种或多种本文所述的cd40结合分子和/或一种或多种本文公开的抗cd40抗体的药物组合物用于治疗本文所述的靶病症，或此类cd40结合分子和/或抗cd40抗体在制造用于治疗靶病症的药物中的用途。

24、在以下描述中阐述了本发明的一个或多个实施例的细节。本发明的其它特征或优点将根据以下附图和对若干个实施例的详细描述并且还根据所附权利要求书变得显而易见。