超唾液酸化细胞的制作方法

文档序号:36459827发布日期:2023-12-21 18:28阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种哺乳动物细胞,所述哺乳动物细胞被工程化以用于增加α-2,6-唾液酰基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶和cmp-唾液酸转运体的表达。

2.根据权利要求1所述的哺乳动物细胞,所述哺乳动物细胞包含

3.根据权利要求2所述的哺乳动物细胞,所述哺乳动物细胞包含

4.根据权利要求1所述的哺乳动物细胞,其中所述哺乳动物细胞的编码α-2,6-唾液酰基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶和cmp-唾液酸转运体的内源基因被工程化以用于增加表达。

5.根据权利要求4所述的哺乳动物细胞,所述哺乳动物细胞包含

6.根据权利要求3或5所述的哺乳动物细胞,其中所述第一启动子是强启动子。

7.根据权利要求3、5和6中任一项所述的哺乳动物细胞,其中所述第一启动子是巨细胞病毒(cmv)启动子。

8.根据权利要求3和5至7中任一项所述的哺乳动物细胞,其中所述第二启动子和/或所述第三启动子选自下组,该组由以下组成:猿猴病毒40(sv40)启动子、cmv启动子、泛素c(ubc)启动子、延伸因子1α(ef1a)启动子、磷酸甘油酸激酶(pgk)启动子和与cmv早期增强子偶联的β-肌动蛋白启动子(cagg),特别是sv40启动子。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的哺乳动物细胞,其中所述α-2,6-唾液酰基转移酶是β-半乳糖苷α-2,6-唾液酰基转移酶1(st6gal1),特别地衍生自中国地鼠或人;所述β-1,4-半乳糖基转移酶是β-1,4-半乳糖基转移酶1(b4galt1),特别地衍生自中国地鼠或人;并且所述cmp-唾液酸转运体是cmp-唾液酸转运体(slc35a1),特别地衍生自中国地鼠或人。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的哺乳动物细胞,其中所述哺乳动物细胞是啮齿动物细胞或人细胞,特别是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的哺乳动物细胞,所述哺乳动物细胞进一步包含用于重组表达糖基化多肽的外源表达盒。

12.一种用于产生糖基化多肽的方法,所述方法包括以下步骤:

13.根据权利要求12所述的方法,其中在所述哺乳动物细胞的培养期间的培养条件不包括超过2℃的温度变化,特别地不包括超过1℃的温度变化。

14.根据权利要求12或13所述的方法,其中在所述哺乳动物细胞的培养期间,温度保持在35℃至38℃的范围内。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法,其中步骤(d)包括提供包含所述糖基化多肽的药物配制品。

16.根据权利要求12至15中任一项所述的方法,其中所述方法用于产生具有降低的免疫原性的糖基化多肽,并且其中所述糖基化多肽是治疗性抗体或其片段、衍生物或移植物。

17.一种载体核酸或一种至少两种载体核酸的组合,所述载体核酸或所述至少两种载体核酸的组合包含

18.根据权利要求17所述的载体核酸或至少两种载体核酸的组合,所述载体核酸或所述至少两种载体核酸的组合包含

19.根据权利要求18所述的载体核酸或至少两种载体核酸的组合,其中

20.根据权利要求17至19中任一项所述的载体核酸或至少两种载体核酸的组合,其中所述α-2,6-唾液酰基转移酶是β-半乳糖苷α-2,6-唾液酰基转移酶1(st6gal1),特别地衍生自中国地鼠或人;所述β-1,4-半乳糖基转移酶是β-1,4-半乳糖基转移酶1(b4galt1),特别地衍生自中国地鼠或人;并且所述cmp-唾液酸转运体是cmp-唾液酸转运体(slc35a1),特别地衍生自中国地鼠或人。

21.根据权利要求17至20中任一项所述的载体核酸或至少两种载体核酸的组合用于转染哺乳动物细胞,特别是中国仓鼠卵巢(cho)细胞的用途。

22.一种用于增加α-2,6-唾液酰基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶和cmp-唾液酸转运体在哺乳动物细胞中的表达的方法,所述方法包括用根据权利要求17至20中任一项所述的载体核酸或至少两种载体核酸的组合转染所述哺乳动物细胞的步骤,和/或对所述哺乳动物细胞的编码α-2,6-唾液酰基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶和cmp-唾液酸转运体的内源基因进行工程化以用于增加表达的步骤。

23.一种用于降低抗体或其片段、衍生物或移植物的免疫原性的方法,所述方法包括增加所述抗体或其片段、衍生物或移植物的糖基化模式中的唾液酸化量的步骤。

24.根据权利要求23所述的方法,其中所述增加唾液酸化量的步骤包括以下中的一种或多种:

25.根据权利要求23或24所述的方法,其中与具有相同氨基酸序列和5%或更少的相对唾液酸化量的参考抗体或其片段、衍生物或移植物相比,所述抗体或其片段、衍生物或移植物的免疫原性降低,并且其中所述增加唾液酸化量的步骤包括在根据权利要求1至11中任一项所述的哺乳动物细胞中和/或使用根据权利要求12至16中任一项所述的方法产生所述抗体或其片段、衍生物或移植物。


技术总结
本发明涉及具有增加的唾液酸化活性的哺乳动物细胞。用唾液酰基转移酶、半乳糖基转移酶和唾液酸转运体的编码序列转染哺乳动物细胞,导致重组表达的糖蛋白的超唾液酸化。

技术研发人员:D·布里斯,S·弗雷斯,M·卡穆勒,H·劳克斯,B·C·拉恩,B·沃尔夫
受保护的技术使用者:诺华股份有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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